紫外可見分光光度計(jì)紫外可見分光光度計(jì)1主要內(nèi)容1、工作原理及儀器組成2、分光光度計(jì)的使用

波長掃描

定量測定3、注意事項(xiàng)主要內(nèi)容1、工作原理及儀器組成2紫外可見分光光度計(jì)的使用課件3物質(zhì)的顏色與吸收光的關(guān)系：當(dāng)白光照射到物質(zhì)上時，如果物質(zhì)對白光中某種顏色的光產(chǎn)生了選擇性的吸收，則物質(zhì)就會顯示出一定的顏色。物質(zhì)所顯示的顏色是吸收光的互補(bǔ)色。一、工作原理及儀器組成物質(zhì)的顏色與吸收光的關(guān)系：一、工作原理及儀器組成4互補(bǔ)色原理植物葉子呈現(xiàn)綠色是因?yàn)橹参镏写嬖谝环N吸收藍(lán)紫光和紅光的載體——葉綠素顏色的產(chǎn)生互植物葉子呈現(xiàn)綠色是因?yàn)橹参镏写嬖谝环N吸收藍(lán)紫光和紅光的載體5完全吸收完全透過吸收黃色光光譜示意表觀現(xiàn)象示意復(fù)合光完全吸收完全透過吸收黃色光光譜示意表觀現(xiàn)象示意復(fù)合光6利用一定頻率的紫外--可見光照射分析物，它將有選擇地被吸收。吸收光譜可以反映出物質(zhì)的特征。

溶液對光的作用示意圖物質(zhì)對光的選擇性吸收－溶液對光的作用

利用一定頻率的紫外--可見光照射分析物，它將有選擇地7I0入射光輻射強(qiáng)度I透射光輻射強(qiáng)度T透射比a吸光系數(shù)ε摩爾吸光系數(shù)光吸收遵循朗伯-比爾定律：溶液對光吸收過程I0入射光輻射強(qiáng)度光吸收遵循朗伯-比爾定律：溶液對光吸收過80.575光源單色器吸收池檢測器顯示儀器組成-單光束分光光度計(jì)0.575光源單色器吸收池檢測器顯示儀器組成-9雙光束分光光度計(jì)比值光源單色器吸收池檢測器顯示光束分裂器雙光束分光光度計(jì)比值光源單色器吸收池檢測器顯示光束分裂器10組成：光源、單色器、樣品池、檢測器1．光源：①能提供連續(xù)的輻射；②光強(qiáng)度足夠大；③在整個光譜區(qū)內(nèi)光譜強(qiáng)度不隨波長有明顯變化；④光譜范圍寬；⑤使用壽命長，價(jià)格低。

鎢燈——可見光區(qū)320～2500nm

氫燈或氘燈——紫外光區(qū)195－375nmU3010（碘鎢燈、氘燈）波長范圍190-900nm

組成：光源、單色器、樣品池、檢測器112．單色器：包括狹縫、準(zhǔn)直鏡、色散元件單色器是分光光度計(jì)的心臟部分，它的作用是把來自光源的混合光分解為單色光并能隨意改變波長。它的主要組成部件和作用是：①入射狹縫——限制雜散光進(jìn)入。②色散元件——即棱鏡或光柵，是核心部件，可將混合光分解為單色光。

③準(zhǔn)直鏡——把來自入射狹縫的光束轉(zhuǎn)化為平等光，并把來自色散元件的平等光聚焦于出射狹縫上。④出射狹縫——只讓特定波長的光射出單色器。

2．單色器：包括狹縫、準(zhǔn)直鏡、色散元件123.吸收池玻璃——由于吸收紫外UV光，僅適用于可見光區(qū)；

石英——適用于紫外和可見光區(qū)4．檢測器：將光信號轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘柕难b置光電管光電倍增管二極管陣列檢測器5．記錄裝置：訊號處理和顯示系統(tǒng)3.吸收池13紫外可見分光光度計(jì)的使用課件14Slit1不存在，Mirror取代了光柵grating1Grating2variable-pitchaberration-correcteddiffractiongrating旋轉(zhuǎn)鏡將光分成兩束，分別通過參比池和樣品池，然后聚集在PMTSlit1不存在，Mirror取代了光柵grating115紫外可見分光光度計(jì)的使用課件16開始程序啟動按方法設(shè)定按鈕掃描范圍讀數(shù)方式掃描速度按樣品名輸入按鈕或?qū)⒖瞻讟悠贩謩e放入?yún)⒈瘸睾蜆悠烦剡M(jìn)行用戶基線校正按按鈕將樣品放入樣品池開始測量按按鈕開始測量打印數(shù)據(jù)按按鈕打開數(shù)據(jù)處理界面數(shù)據(jù)檢索峰值檢出圖譜平滑、求導(dǎo)二分光光度計(jì)的使用-波長掃描開始程序啟動按方法設(shè)定按鈕掃描范圍讀數(shù)方式掃描速度按樣品名輸17啟動UVSolution軟件

打開儀器主機(jī)電源。用鼠標(biāo)點(diǎn)擊Windows開始菜單中的[HitachiApplications]選項(xiàng)中的[UVSolutions2.0]選項(xiàng)?；蛘咧苯釉谧烂嫔想p擊UVSolution圖標(biāo)。啟動UVSolution軟件

打開儀器主機(jī)電源。用鼠標(biāo)點(diǎn)擊18

2運(yùn)行UVSolution軟件。軟件將自動配置計(jì)算機(jī)的串行口（RS232Port）見圖2運(yùn)行UVSolution軟件。軟件將自動配置計(jì)算機(jī)的19儀器在初始化過程中進(jìn)行如下自檢工作：ROM檢測RAM檢測波長步進(jìn)電機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn)檢測氘燈點(diǎn)亮檢測鎢燈點(diǎn)亮檢測儀器波長校正儀器在初始化過程中進(jìn)行如下自檢工作：203儀器主機(jī)開始初始化。見圖3儀器主機(jī)開始初始化。見圖214儀器主機(jī)初始化完畢，進(jìn)入工作狀態(tài)。4儀器主機(jī)初始化完畢，進(jìn)入工作狀態(tài)。225測量參數(shù)設(shè)置1在[Edit]菜單中選擇[Method…]選項(xiàng)，或按按鈕。出現(xiàn)下列窗口。

5測量參數(shù)設(shè)置1在[Edit]菜單中選擇[Method23General:總體設(shè)置頁面Measurement測量:

Wavelengthscan波長掃描

Timescan時間掃描

Photometry定波長測量Operator操作者:輸入操作者的姓名Instrument儀器:儀器型號由軟件自動從儀器主機(jī)獲得。

UseSampleTable使用樣品表:選擇是否使用樣品表。Comments備注:填寫一些備注信息。[Load]按鈕:用于裝載原來保存的方法文件。[Save]按鈕:保存當(dāng)前的設(shè)置參數(shù)。[SaveAs]按鈕:將當(dāng)前設(shè)置參數(shù)另存為一個方法文件。General:總體設(shè)置頁面24Instrument儀器參數(shù)設(shè)置頁面Instrument儀器參數(shù)設(shè)置頁面25Datamode讀數(shù)顯示方式，選擇Abs吸光度，波長掃描的起止范圍一般為190-800，狹縫值一般為2Light一般選擇“Auto”Datamode讀數(shù)顯示方式，選擇Abs吸光度，波長掃描的26Monitor顯示頁面

Monitor顯示頁面

27Processing數(shù)據(jù)處理頁面

Processing數(shù)據(jù)處理頁面28Report報(bào)告結(jié)果頁面

Report報(bào)告結(jié)果頁面29樣品名設(shè)置，備注信息及文件名輸入樣品名設(shè)置，備注信息及文件名輸入30基線校正用戶基線校正方法：可將scanspeed設(shè)小一些；進(jìn)行樣品掃描時，可設(shè)大一些。將空白樣品分別放入樣品室的參比光路和樣品光路。按按鈕系統(tǒng)基線校正方法。使用空氣作為參比和樣品。按按鈕出對話框見圖，選擇System后按[OK]按鈕，進(jìn)行系統(tǒng)基線校正。基線校正用戶基線校正方法：可將scanspeed設(shè)小一些31測量有兩種方法可以開始測量：使用菜單方式選擇[Spectrophotometer]菜單下Start]選項(xiàng)開始測量使用按鈕方式：按按鈕開始測量如果要終止掃描按按鈕。測量有兩種方法可以開始測量：32開始程序啟動按方法設(shè)定按鈕按樣品名輸入按鈕或?qū)⒖瞻讟悠贩謩e放入?yún)⒈瘸睾蜆悠烦貙悠贩湃霕悠烦亻_始測量按按鈕開始測量打印數(shù)據(jù)按按鈕打開數(shù)據(jù)處理界面進(jìn)行用戶基線校正按按鈕定量測量設(shè)置波長輸入標(biāo)樣二分光光度計(jì)的使用-光度法開始程序啟動按方法設(shè)定按鈕按樣品名輸入按鈕或?qū)⒖瞻讟悠贩謩e放33測量參數(shù)設(shè)置

在[Edit]菜單中選擇[Method…]選項(xiàng)。出現(xiàn)下列設(shè)置窗口.測量參數(shù)設(shè)置在[Edit]菜單中選擇[Met34具體操作程序Method:general:

Measurement測量方式選擇Photometry（光度計(jì)測量）

Quantitation定量參數(shù)設(shè)置頁面：具體操作程序Method:35

在measure中選擇波長wavelength，在Calibration中選擇“1storder”，“2storder”，“3storder”，也可以不校準(zhǔn)。在concertration中鍵入標(biāo)準(zhǔn)濃度單位。3.Instrument在measure中選擇波長wavelength，364

standards標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)設(shè)置

鍵入標(biāo)系的樣品濃度及名稱4standards標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)設(shè)置375吸光度自動校零在開始測試前，需要進(jìn)行吸光度校零。在樣品室參比和樣品光路中分別放入空白樣品。按按鈕進(jìn)行吸光度校零。

6在wavelength中設(shè)定掃描的最大吸收波長，

7放入標(biāo)樣，選中第一個標(biāo)樣，點(diǎn)measure依次測定完成后自動給出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

8選擇SAMPLE進(jìn)行樣品測定，全部測定完后點(diǎn)擊END，此時自動生成一個文件，打開此文件，另存為所需的文件名。

9關(guān)機(jī)時，先退出UVsolution，再關(guān)電腦，最后關(guān)光度計(jì)上的power。5吸光度自動校零38三注意事項(xiàng)1.開機(jī)預(yù)熱15分鐘左右。2.測定時應(yīng)注意：參照池和吸收池應(yīng)是一對經(jīng)校正好的匹配的吸收池，材料和規(guī)格一致。使用前后應(yīng)將洗手池洗凈，測量時不能用手接觸窗口。已匹配好的比色皿不能用爐子和火焰干燥，不能加熱，以免引起光程長度上的改變。三注意事項(xiàng)1.開機(jī)預(yù)熱15分鐘左右。393.測量條件的選擇：選擇適宜波長的入射光:由于有色物質(zhì)對光有選擇性吸收,為了使測定結(jié)果有較高的靈敏度,必須選擇溶液最大吸收波長的入射光?？刂莆舛華的準(zhǔn)確的讀數(shù)范圍:由朗伯-比耳定律可知,吸光度只有控制在0.2~0.7讀數(shù)范圍內(nèi)時,測量的準(zhǔn)確度較高.選擇參比溶液：參比溶液是用來調(diào)節(jié)儀器工作零點(diǎn)的。若樣品溶液，試劑，顯色劑無色可用蒸餾水作參比溶液；反之應(yīng)采用不加顯色劑的樣品液作參比溶液。4.用完后先關(guān)程序，再關(guān)儀器開關(guān)，關(guān)電源，關(guān)閉計(jì)算機(jī)。5.正確登記，將儀器及實(shí)驗(yàn)臺擦干凈。3.測量條件的選擇：40思考題分光光度計(jì)由哪幾部分組成？設(shè)計(jì)其光路圖。紫外可見分光光度計(jì)對光源的要求是什么？一般采用哪幾種光源，各光源的波長范圍是什么？比色皿一般由什么材料制成？有哪幾種規(guī)格？做實(shí)驗(yàn)時，你是如何選擇比色杯的規(guī)格及材料的？為什么測定時使用參比池？參比溶液怎么選擇？在進(jìn)行波長掃描與光度測定時需要設(shè)置哪些參數(shù)？思考題分光光度計(jì)由哪幾部分組成？設(shè)計(jì)其光路圖。41謝謝大家謝謝大家42紫外可見分光光度計(jì)紫外可見分光光度計(jì)43主要內(nèi)容1、工作原理及儀器組成2、分光光度計(jì)的使用

波長掃描

定量測定3、注意事項(xiàng)主要內(nèi)容1、工作原理及儀器組成44紫外可見分光光度計(jì)的使用課件45物質(zhì)的顏色與吸收光的關(guān)系：當(dāng)白光照射到物質(zhì)上時，如果物質(zhì)對白光中某種顏色的光產(chǎn)生了選擇性的吸收，則物質(zhì)就會顯示出一定的顏色。物質(zhì)所顯示的顏色是吸收光的互補(bǔ)色。一、工作原理及儀器組成物質(zhì)的顏色與吸收光的關(guān)系：一、工作原理及儀器組成46互補(bǔ)色原理植物葉子呈現(xiàn)綠色是因?yàn)橹参镏写嬖谝环N吸收藍(lán)紫光和紅光的載體——葉綠素顏色的產(chǎn)生互植物葉子呈現(xiàn)綠色是因?yàn)橹参镏写嬖谝环N吸收藍(lán)紫光和紅光的載體47完全吸收完全透過吸收黃色光光譜示意表觀現(xiàn)象示意復(fù)合光完全吸收完全透過吸收黃色光光譜示意表觀現(xiàn)象示意復(fù)合光48利用一定頻率的紫外--可見光照射分析物，它將有選擇地被吸收。吸收光譜可以反映出物質(zhì)的特征。

溶液對光的作用示意圖物質(zhì)對光的選擇性吸收－溶液對光的作用

利用一定頻率的紫外--可見光照射分析物，它將有選擇地49I0入射光輻射強(qiáng)度I透射光輻射強(qiáng)度T透射比a吸光系數(shù)ε摩爾吸光系數(shù)光吸收遵循朗伯-比爾定律：溶液對光吸收過程I0入射光輻射強(qiáng)度光吸收遵循朗伯-比爾定律：溶液對光吸收過500.575光源單色器吸收池檢測器顯示儀器組成-單光束分光光度計(jì)0.575光源單色器吸收池檢測器顯示儀器組成-51雙光束分光光度計(jì)比值光源單色器吸收池檢測器顯示光束分裂器雙光束分光光度計(jì)比值光源單色器吸收池檢測器顯示光束分裂器52組成：光源、單色器、樣品池、檢測器1．光源：①能提供連續(xù)的輻射；②光強(qiáng)度足夠大；③在整個光譜區(qū)內(nèi)光譜強(qiáng)度不隨波長有明顯變化；④光譜范圍寬；⑤使用壽命長，價(jià)格低。

鎢燈——可見光區(qū)320～2500nm

氫燈或氘燈——紫外光區(qū)195－375nmU3010（碘鎢燈、氘燈）波長范圍190-900nm

組成：光源、單色器、樣品池、檢測器532．單色器：包括狹縫、準(zhǔn)直鏡、色散元件單色器是分光光度計(jì)的心臟部分，它的作用是把來自光源的混合光分解為單色光并能隨意改變波長。它的主要組成部件和作用是：①入射狹縫——限制雜散光進(jìn)入。②色散元件——即棱鏡或光柵，是核心部件，可將混合光分解為單色光。

③準(zhǔn)直鏡——把來自入射狹縫的光束轉(zhuǎn)化為平等光，并把來自色散元件的平等光聚焦于出射狹縫上。④出射狹縫——只讓特定波長的光射出單色器。

2．單色器：包括狹縫、準(zhǔn)直鏡、色散元件543.吸收池玻璃——由于吸收紫外UV光，僅適用于可見光區(qū)；

石英——適用于紫外和可見光區(qū)4．檢測器：將光信號轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘柕难b置光電管光電倍增管二極管陣列檢測器5．記錄裝置：訊號處理和顯示系統(tǒng)3.吸收池55紫外可見分光光度計(jì)的使用課件56Slit1不存在，Mirror取代了光柵grating1Grating2variable-pitchaberration-correcteddiffractiongrating旋轉(zhuǎn)鏡將光分成兩束，分別通過參比池和樣品池，然后聚集在PMTSlit1不存在，Mirror取代了光柵grating157紫外可見分光光度計(jì)的使用課件58開始程序啟動按方法設(shè)定按鈕掃描范圍讀數(shù)方式掃描速度按樣品名輸入按鈕或?qū)⒖瞻讟悠贩謩e放入?yún)⒈瘸睾蜆悠烦剡M(jìn)行用戶基線校正按按鈕將樣品放入樣品池開始測量按按鈕開始測量打印數(shù)據(jù)按按鈕打開數(shù)據(jù)處理界面數(shù)據(jù)檢索峰值檢出圖譜平滑、求導(dǎo)二分光光度計(jì)的使用-波長掃描開始程序啟動按方法設(shè)定按鈕掃描范圍讀數(shù)方式掃描速度按樣品名輸59啟動UVSolution軟件

打開儀器主機(jī)電源。用鼠標(biāo)點(diǎn)擊Windows開始菜單中的[HitachiApplications]選項(xiàng)中的[UVSolutions2.0]選項(xiàng)?；蛘咧苯釉谧烂嫔想p擊UVSolution圖標(biāo)。啟動UVSolution軟件

打開儀器主機(jī)電源。用鼠標(biāo)點(diǎn)擊60

2運(yùn)行UVSolution軟件。軟件將自動配置計(jì)算機(jī)的串行口（RS232Port）見圖2運(yùn)行UVSolution軟件。軟件將自動配置計(jì)算機(jī)的61儀器在初始化過程中進(jìn)行如下自檢工作：ROM檢測RAM檢測波長步進(jìn)電機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn)檢測氘燈點(diǎn)亮檢測鎢燈點(diǎn)亮檢測儀器波長校正儀器在初始化過程中進(jìn)行如下自檢工作：623儀器主機(jī)開始初始化。見圖3儀器主機(jī)開始初始化。見圖634儀器主機(jī)初始化完畢，進(jìn)入工作狀態(tài)。4儀器主機(jī)初始化完畢，進(jìn)入工作狀態(tài)。645測量參數(shù)設(shè)置1在[Edit]菜單中選擇[Method…]選項(xiàng)，或按按鈕。出現(xiàn)下列窗口。

5測量參數(shù)設(shè)置1在[Edit]菜單中選擇[Method65General:總體設(shè)置頁面Measurement測量:

Wavelengthscan波長掃描

Timescan時間掃描

Photometry定波長測量Operator操作者:輸入操作者的姓名Instrument儀器:儀器型號由軟件自動從儀器主機(jī)獲得。

UseSampleTable使用樣品表:選擇是否使用樣品表。Comments備注:填寫一些備注信息。[Load]按鈕:用于裝載原來保存的方法文件。[Save]按鈕:保存當(dāng)前的設(shè)置參數(shù)。[SaveAs]按鈕:將當(dāng)前設(shè)置參數(shù)另存為一個方法文件。General:總體設(shè)置頁面66Instrument儀器參數(shù)設(shè)置頁面Instrument儀器參數(shù)設(shè)置頁面67Datamode讀數(shù)顯示方式，選擇Abs吸光度，波長掃描的起止范圍一般為190-800，狹縫值一般為2Light一般選擇“Auto”Datamode讀數(shù)顯示方式，選擇Abs吸光度，波長掃描的68Monitor顯示頁面

Monitor顯示頁面

69Processing數(shù)據(jù)處理頁面

Processing數(shù)據(jù)處理頁面70Report報(bào)告結(jié)果頁面

Report報(bào)告結(jié)果頁面71樣品名設(shè)置，備注信息及文件名輸入樣品名設(shè)置，備注信息及文件名輸入72基線校正用戶基線校正方法：可將scanspeed設(shè)小一些；進(jìn)行樣品掃描時，可設(shè)大一些。將空白樣品分別放入樣品室的參比光路和樣品光路。按按鈕系統(tǒng)基線校正方法。使用空氣作為參比和樣品。按按鈕出對話框見圖，選擇System后按[OK]按鈕，進(jìn)行系統(tǒng)基線校正。基線校正用戶基線校正方法：可將scanspeed設(shè)小一些73測量有兩種方法可以開始測量：使用菜單方式選擇[Spectrophotometer]菜單下Start]選項(xiàng)開始測量使用按鈕方式：按按鈕開始測量如果要終止掃描按按鈕。測量有兩種方法可以開始測量：74開始程序啟動按方法設(shè)定按鈕按樣品名輸入按鈕或?qū)⒖瞻讟悠贩謩e放入?yún)⒈瘸睾蜆悠烦貙悠贩湃霕悠烦亻_始測量按按鈕開始測量打印數(shù)據(jù)按按鈕打開數(shù)據(jù)處理界面進(jìn)行用戶基線校正按按鈕定量測量設(shè)置波長輸入標(biāo)樣二分光光度計(jì)的使用-光度法開始程序啟動按方法設(shè)定按鈕按樣品名輸入按鈕或?qū)⒖瞻讟悠贩謩e放75測量參數(shù)設(shè)置

在[Edit]菜單中選擇[Method…]選項(xiàng)。出現(xiàn)下列設(shè)置窗口.測量參數(shù)設(shè)置在[Edit]菜單中選擇[Met76具體操作程序Method:general:

Measurement測量方式選擇Photometry（光度計(jì)測量）

Quantitation定量參數(shù)設(shè)置頁面：具體操作程序Method:77

在measure中選擇波長wavelength，在Calibration中選擇“1storder”，“2storder”，“3storder”，也可以不校準(zhǔn)。在concertration中鍵入標(biāo)準(zhǔn)濃度單位。3.Instrument在measure中選擇波長wavelength，784

standards標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)設(shè)置

鍵入標(biāo)系的樣品濃度及名稱4standards標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)設(shè)置795吸光度自動校零在開始