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高效液相色譜儀的常用檢測(cè)器有哪幾種,有什么區(qū)別?高效液相色譜儀常用檢測(cè)器種類及分析檢測(cè)器的作用是將柱流出物中樣品組成和含量的變化轉(zhuǎn)化為可供檢測(cè)的信號(hào),常用檢測(cè)器有紫外吸收、熒光、示差折光、化學(xué)發(fā)光等。紫外可見吸收檢測(cè)器(ultraviolet_visibledetector,UVD)紫外可見吸收檢測(cè)器(UVD)是HPLC中應(yīng)用最廣泛的檢測(cè)器之一,幾乎所有的液相色譜儀都配有這種檢測(cè)器。其特點(diǎn)是靈敏度較高,線性范圍寬,噪聲低,適用于梯度洗脫,對(duì)強(qiáng)吸收物質(zhì)檢測(cè)限可達(dá)1ng,檢測(cè)后不破壞樣品,可用于制備,并能與任何檢測(cè)器串聯(lián)使用。紫外可見檢測(cè)器的工作原理與結(jié)構(gòu)同一般分光光度計(jì)相似,實(shí)際上就是裝有流動(dòng)地的紫外可見光度計(jì)。紫外吸收檢測(cè)器紫外吸收檢測(cè)器常用氘燈作光源,氘燈則發(fā)射出紫外-可見區(qū)范圍的連續(xù)波長(zhǎng),并安裝一個(gè)光柵型單色器,其波長(zhǎng)選擇范圍寬(190nm-800nm)。它有兩個(gè)流通池,一個(gè)作參比,一個(gè)作測(cè)量用,光源發(fā)出的紫外光照射到流通池上,若兩流通池都通過純的均勻溶劑,則它們?cè)谧贤獠ㄩL(zhǎng)下幾乎無吸收,光電管上接受到的輻射強(qiáng)度相等,無信號(hào)輸出。當(dāng)組分進(jìn)入測(cè)量池時(shí),吸收一定的紫外光,使兩光電管接受到的輻射強(qiáng)度不等,這時(shí)有信號(hào)輸出,輸出信號(hào)大小與組分濃度有關(guān)。局限:流動(dòng)相的選擇受到一定限制,即具有一定紫外吸收的溶劑不能做流動(dòng)相,每種溶劑都有截止波長(zhǎng),當(dāng)小于該截止波長(zhǎng)的紫外光通過溶劑時(shí),溶劑的透光率降至10%以下,因此,紫外吸收檢測(cè)器的工作波長(zhǎng)不能小于溶劑的截止波長(zhǎng)。光電二極管陣列檢測(cè)器(photodiodearraydetector,PDAD)也稱快速掃描紫外可見分光檢測(cè)器,是一種新型的光吸收式檢測(cè)器。它采用光電二極管陣列作為檢測(cè)元件,構(gòu)成多通道并行工作,同時(shí)檢測(cè)由光柵分光,再入射到陣列式接收器上的全部波長(zhǎng)的光信號(hào),然后對(duì)二極管陣列快速掃描采集數(shù)據(jù),得到吸收值(A)是保留時(shí)間(tR)和波長(zhǎng)(l)函數(shù)的三維色譜光譜圖。由此可及時(shí)觀察與每一組分的色譜圖相應(yīng)的光譜數(shù)據(jù),從而迅速?zèng)Q定具有最佳選擇性和靈敏度的波長(zhǎng)。單光束二極管陣列檢測(cè)器,光源發(fā)出的光先通過檢測(cè)池,透射光由全息光柵色散成多色光,射到陣列元件上,使所有波長(zhǎng)的光在接收器上同時(shí)被檢測(cè)。陣列式接收器上的光信號(hào)學(xué)的方法快速掃描提取出來,每幅圖象僅需要10ms,遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過色譜流出峰的速度,因此可隨峰掃描。熒光檢測(cè)器(fluorescencedetector,F(xiàn)D)熒光檢測(cè)器是一種高靈敏度、有選擇性的檢測(cè)器,可檢測(cè)能產(chǎn)生熒光的化合物。某些不發(fā)熒光的物質(zhì)可通過化學(xué)衍生化生成熒光衍生物,再進(jìn)行熒光檢測(cè)。其最小檢測(cè)濃度可達(dá)0.1ng/ml,適用于痕量分析;一般情況下熒光檢測(cè)器的靈敏度比紫外檢測(cè)器約高2個(gè)數(shù)量級(jí),但其線性范圍不如紫外檢測(cè)器寬。近年來,采用激光作為熒光檢測(cè)器的光源而產(chǎn)生的激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器極大地增強(qiáng)了熒光檢測(cè)的信噪比,因而具有很高的靈敏度,在痕量和超痕量分析中得到廣泛應(yīng)用。示差折光檢測(cè)器(differentialrefractivelndexdetector,RID)示差折光檢測(cè)器是一種濃度型通用檢測(cè)器,對(duì)所有溶質(zhì)都有響應(yīng),某些不能用選擇性檢測(cè)器檢測(cè)的組分,如高分子化合物、糖類、脂肪烷烴等,可用示差檢測(cè)器檢測(cè)。示差檢測(cè)器是基于連續(xù)測(cè)定樣品流路和參比流路之間折射率的變化來測(cè)定樣品含量的。光從一種介質(zhì)進(jìn)入另一種介質(zhì)時(shí),由于兩種物質(zhì)的折射率不同就會(huì)產(chǎn)生折射。只要樣品組分與流動(dòng)相的折光指數(shù)不同,就可被檢測(cè),二者相差愈大,靈敏度愈高,在一定濃度范圍內(nèi)檢測(cè)器的輸出與溶質(zhì)濃度成正比。電化學(xué)檢測(cè)器(elec)chemicaldetector,ED)電化學(xué)檢測(cè)器主要有安培、極譜、庫侖、電位、電導(dǎo)等檢測(cè)器,屬選擇性檢測(cè)器,可檢測(cè)具有電活性的化合物。目前它已在各種無機(jī)和有機(jī)陰陽離子、生物組織和體液的代謝物、食品添加劑、環(huán)境污染物、生化制品、農(nóng)藥及醫(yī)藥等的測(cè)定中獲得了廣泛的應(yīng)用。其中,電導(dǎo)檢測(cè)器在離子色譜中應(yīng)用最多。電化學(xué)檢測(cè)器的優(yōu)點(diǎn)是:靈敏度高,最小檢測(cè)量?般為ng級(jí),有目可達(dá)pg級(jí);選擇性好,可測(cè)定大量非電活性物質(zhì)中極痕量的電活性物質(zhì);線性范圍寬,一般為4?5個(gè)數(shù)量級(jí);設(shè)備簡(jiǎn)單,成本較低;易于自動(dòng)操作?;瘜W(xué)發(fā)光檢測(cè)器(c。iluminescencedetector,CD)化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器是近年來發(fā)展起來的一種快速、靈敏的新型檢測(cè)器,因其設(shè)備簡(jiǎn)單、價(jià)廉、線性范圍寬等優(yōu)點(diǎn)。其原理是基于某些物質(zhì)在常溫下進(jìn)行化學(xué)反應(yīng),生成處于激發(fā)態(tài)勢(shì)反應(yīng)中間體或反應(yīng)產(chǎn)物,當(dāng)它們從激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時(shí),就發(fā)射出光子。由于物質(zhì)激發(fā)態(tài)的能量是來自化學(xué)反應(yīng),故叫作化學(xué)發(fā)光。當(dāng)分離組分從色譜柱中洗脫出來后,立即與適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)發(fā)光試劑混合,引起化學(xué)反應(yīng),導(dǎo)致發(fā)光物質(zhì)產(chǎn)生輻射,其光強(qiáng)度與該物質(zhì)的濃度成正比。這種檢測(cè)器不需要光源,也不需要復(fù)雜的光學(xué)系統(tǒng),只要有恒流泵,將化學(xué)發(fā)光試劑以一定的流速泵入混合器中,使之與柱流出物迅速而又均勻地混合產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光,通過光電倍增管將光信號(hào)變成電信號(hào),就可進(jìn)行檢測(cè)。這種檢測(cè)器的最小檢出量可達(dá)10-12g。
檢測(cè)1器TWIMr/(jj/ml)歿性范圍選擇性梯度淋洗主要特點(diǎn)紫外-可見光HJlfl】『口『有訶"流速和溫度變化敏商;池體積可制作得很?。簩?duì)溶質(zhì)的響應(yīng)變化大。熒光io1有nJ選擇性和況敏度高;易受背景熒光、消光、溫度、pH和溶劑的影也10"ioM『有/、可是離子性物質(zhì)的通用檢測(cè)器:受溫度和流速影響:不能用于有機(jī)溶劑體系.電化學(xué)1TidID*有困贓選擇性高.易受流動(dòng)相畫1值和朵質(zhì)的影響;穩(wěn)定性較差n蒸發(fā)光散射1V-無~可可檢測(cè)所有物質(zhì)。示差砌10'r1儼無不可可檢測(cè)所有物質(zhì);不適合微量分析;對(duì)溫度變化敏
&沖檢貯M本原理及比較檢刑原理特點(diǎn)融點(diǎn)手打一汽<UV-VTS)檢測(cè)□g基于Lamberl-Beer定律,即涉則組分對(duì)紫外光成可見光具有吸曲,且咀收強(qiáng)度與組分濃度成正比,很多有機(jī)分子部具紫外或可見光眼收基團(tuán),有按強(qiáng)的紫外或可見光刪嘛力,因dtuv-vis測(cè)茬既有較高的靈敏度,也有很,一號(hào)『12中范叵,HFUV-VIS寸W垣曲腐、監(jiān)速、籃面相扣估等的壹化不是很敏底'所以還能用于梯度淋洗*1■對(duì)沒有紫外/■可見溫長(zhǎng)吸收的樣呂無法檢測(cè)2.流動(dòng)相的選擇受到?流動(dòng)相組分對(duì)紫外可見光的吸收影響,現(xiàn)有紫外可見檢測(cè)器在常用的流動(dòng)相「波長(zhǎng)保十210nm時(shí)檢那中果瑾差i3.不同他,孟正亙一松測(cè)'波長(zhǎng)下的響應(yīng)因子不沖丘二極管陣列檢瀏器';diode-arraydetector.DAD)以光電二極管陣列C^CCD陣外己靶攝傻詈季)任為檢測(cè)元件的UV-VIS檢測(cè)器。它可構(gòu)成多通謹(jǐn)并行工作,同時(shí)密測(cè)由光掀分亓,再入射到陣列式接受喜上的全部'波長(zhǎng)的信號(hào)「躲后,對(duì)二極言陣列快速掃描采集數(shù)據(jù),得到的是時(shí)間、光強(qiáng)度和波長(zhǎng)的三維譜圖,與者迫UV-VIS您地器KufTJ^,.欄通UV-VIS檢測(cè)器是先用單邑器分丑,-上「特產(chǎn)的$的開井."?濕寸池,而二極管陣列UV-VIS檢測(cè)器岳亓丁所仁成長(zhǎng)的亓都有訂暗寸'他,然后通過一系列分光"使所白歸長(zhǎng)5亓<L任群囂卜破律特點(diǎn)與紫外檢測(cè)器相同,同時(shí)可寸冗叩再汀一=1.口.書泗葉石的長(zhǎng)下的吸收,1.與J外可見家測(cè)起t=八.員敏度和1重現(xiàn)性低于紫外檢測(cè)備°「「目沖女日十吐位〒牛rptt?示差折光檢測(cè)[dizRrmtLalreiractorncters.RI〕壓埋:呈]樣品組分的折射率與?演動(dòng)相溶劑折射漆有差異,當(dāng)組分洗脫出來時(shí),會(huì)引起流動(dòng)相折射巾的變化,這神變化與樣品組分的濃度成正比。RI檢測(cè)器根據(jù)其設(shè)計(jì)原理可分為反射型(根據(jù)Frand定律)、折射型t很勿翎創(chuàng)定:律)A1§蘭二神類型.場(chǎng)差折之檢測(cè)法也稱折射指故檢測(cè)法■坦大多數(shù)物晨的折射率與流動(dòng)相都有差異,所以■RI是—種11用的檢測(cè)方法?雖陵歧靈地度比日他檢測(cè)方法相比要低1-3W量知對(duì)于那些無紫外吸收的有機(jī)物(如高分子化含構(gòu)、摧類、脂肪垸比:是比較適合的■在淑膠色譜中是必備檢測(cè)副在脆色唐中也經(jīng)常使用*1-靈敏度很低2.Tn;Ffl干岐廳沽眄系統(tǒng)老.在EfD〒.鼠T淳后工食前取’七*M挎沖咨匚由害11.器、加地璟移苜,、.'珞劑薈.發(fā)室、、滯!7t北浙和光農(nóng)沖、?、cva器,.七電妝度露;等部rrporati南裁,包諳li流M沌守>.零花若‘袪裁W〈Jf縮寶lisht=、點(diǎn)冠氣)夯優(yōu)H.枝.細(xì)港
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