PAGEPAGE12貴州大學(xué)高等教育自學(xué)考試《作物栽培生理》實驗指導(dǎo)書課程代碼：02676(農(nóng)學(xué)本科專業(yè))繼續(xù)教育學(xué)院2015前言故要求同學(xué)們認真對待.通過實驗,增強學(xué)生獨立工作、解決問題的能力。目錄44441??????????????????????????????????????????????????????????????????????4????????????????????????????????????????????????????????????8991011一、實驗的性質(zhì)與目的技能及動手能力的實踐過程。通過該以實驗教學(xué)作為理論聯(lián)做到理論聯(lián)系實際，提高畢業(yè)生的素質(zhì)，更好地服務(wù)于我國的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和發(fā)展，為今后學(xué)習(xí)和工作奠定良好基礎(chǔ)。二、實驗的時間分配序?qū)嵙?xí)教學(xué)工作內(nèi)容序?qū)嵙?xí)教學(xué)工作內(nèi)容起止時間教學(xué)工作目標、要求號1實驗準備工作準備好有關(guān)實驗的一切材料、工具。2學(xué)生分組在實驗室實驗完成具體安排的有關(guān)實驗任務(wù)3實習(xí)成績評定結(jié)束評定并上交成績。合計6學(xué)時四、實驗內(nèi)容安排與要求實驗一植物組織水勢的測定（長度法和小液流法）一、實驗?zāi)康?、了解水勢的概念及其對植物吸收外界水分的作用。2、熟練掌握長度法和小液流法測定植物組織水勢的原理和方法。二、實驗內(nèi)容液發(fā)生濃度的變化，進而判斷出等滲溶液，計算出水勢。三、實驗原理、方法和手段從而得知植物組織水勢。四、實驗組織形式在教師指導(dǎo)下，以學(xué)生為主的開放性運行模式五、實驗條件1、儀器和試劑試管、毛細滴管、刀片、移液管、鑷子、米尺、甲烯藍、溫度計、1mol/L蔗糖溶液2、參考文獻（第三版，高等教育出版社。六、實驗步驟（一）長度法11mol/L的蔗糖溶液為母液分別在大試管中配制0.50.40.30.20.1M蔗糖液15ml，混勻，編號（實驗組。2、取5只中試管，編號，從對應(yīng)的大試管中各取5ml溶液為對照組。123、每只試管取準確度量的4～5cm0.09cm24為L，置于大試管中，放置30分鐘后（搖動數(shù)次，取出各管內(nèi)的土豆條測定總長度，記L。124、比較實驗前后土豆條總長度的變化，判斷與確定等滲濃度。（二）小液流法1、向每一只實驗組大試管中加入甲烯藍粉末少許，振蕩，使溶液變藍。2、用毛細滴管從實驗組各大試管中吸入少許著色液，然后伸入到對應(yīng)的對照組試管中相等的外界溶液的濃度。s3、計算植物組織水勢。ψ＝－RtiCs七、思考題1、試比較兩種方法測定的結(jié)果是否相同。2、為什么本實驗測定的是植物組織的水勢而不是植物細胞的滲透勢？實驗二種子發(fā)芽率的快速測定一、實驗?zāi)康耐ㄟ^本實驗讓學(xué)生掌握基本的測定種子發(fā)芽率的方法。二、實驗內(nèi)容種子發(fā)芽率是指在最適宜的條件下，在規(guī)定的天數(shù)內(nèi)，發(fā)芽的種子占供試種子總數(shù)的百購買種子，則更是無法知道?？焖贉y定法將在很短時間內(nèi)獲得結(jié)果。三、組織運行形式在教師指導(dǎo)下，以學(xué)生為主的開放性運行模式。I：氯化三苯四氮唑法（TTC法）一、實驗原理凡有生命活力的細胞均具有呼吸作用從而都有氧化還原反映，而死細胞則無此反應(yīng)。TTC可滲入種胚的活細胞內(nèi)，并作為氫受體被脫氫輔酶或NADPH）上的氫還原，此時無色的TTC便轉(zhuǎn)變?yōu)榧t色的三苯基甲TT，并吸附在活細胞的表面，根據(jù)活細胞著色的深淺可定性的判斷種子活力的有無與大小二、儀器和試劑恒溫箱、燒杯、培養(yǎng)皿、鑷子、刀片、天平0.5％的TTC0.5gTTC95100ml，棕色瓶中保存。若溶液變?yōu)榧t色，表示已被氧化不能再用。三、實驗步驟1、浸種：將待測的種子在30℃溫水中浸種數(shù)小時，以增強種胚的呼吸強度，使顯色迅速。2、顯色：取吸漲的種子100粒，用刀片沿著胚的中心線縱切為兩半，將一半置于1只培養(yǎng)皿中，加入適量的0.5％的TTC溶液（以浸沒種子為度）后，置于30℃恒溫箱內(nèi)。0.5～1小時后，觀察現(xiàn)象，判斷種子活力的有無與大小。將另一半種子在沸水中煮5min殺死胚，或用微波爐烤死胚，作同樣染色，保溫處理，作為對照。觀察并與活種子比較看現(xiàn)象有何不同。3、計算活種子的百分率。II、溴麝香草酚藍法（BTB法）一、實驗原理酸，碳酸解離成H＋和BTB來測定酸BTB的變色范圍為pH6.0～7.6，酸性成黃色，堿性成藍色，中間經(jīng)過綠色（色點為pH7.。顏色變化越明顯則表明種子活力越強。死細胞沒有呼吸作用，也沒有BTB的顏色變化。二、儀器和試劑恒溫箱、燒杯、培養(yǎng)皿、鑷子、天平、漏斗、濾紙、瓊脂％的BTB溶液：稱取BTB0.1g，溶解于煮沸過后的100ml自來水中，然后用濾紙濾去殘渣。溶液若為黃色，可滴加數(shù)滴稀氨水或稀NaOH溶液，使之變?yōu)樗{色或藍綠色，棕色瓶中保存。1％BTB0.1％BTB溶液100ml1g層，冷卻后備用。三、實驗步驟1、浸種：同上述TTC法、顯色：吸取吸張的種子1001cm左右。然后將培養(yǎng)皿置于恒溫培養(yǎng)箱中30～352h后，觀察試驗現(xiàn)3、記數(shù)種胚附近出現(xiàn)的黃色暈圈的活種子數(shù)，計算活種子的百分率。III、紅墨水染色法一、實驗原理活細胞的原生質(zhì)膜具有選擇性吸收物質(zhì)的能力，紅墨水不能進入細胞；而死的種胚細胞原生質(zhì)膜失去這種能力，紅墨水進入死細胞并染色。二、儀器試劑培養(yǎng)皿、鑷子、刀片5％紅墨水：以市購紅墨水為原液，用自來水配置成5％的紅墨水溶液。三、實驗步驟1、浸種：同上述TTC法。2、顯色：取吸脹的種子1001只培養(yǎng)皿中，加入適量的5％紅墨水（以浸沒種子為度）10～15min后倒去紅墨水，烤死的種子作同樣的染色處理。進行對比觀察。3、記數(shù)種胚不著色或著色淺的活種子數(shù)，計算活種子的百分率。四、思考題1、試比較用三種方法測定的種子的發(fā)芽率是否一致？并與種子的實際萌發(fā)率是否一致？如若有偏差，理論上應(yīng)為偏高還是偏低？為什么？2、BTB法測定種子發(fā)芽率，配置BTB么？用蒸餾水可否配置？3BTB暈圈，為什么？實驗三吲哚乙酸氧化酶活性的測定一、實驗?zāi)康耐ㄟ^本實驗讓學(xué)生了解基本的酶液提取方法，掌握吲哚乙酸氧化酶反應(yīng)的基本原理。二、實驗內(nèi)容氧化酶通過調(diào)節(jié)體內(nèi)吲哚乙酸的水平，間接對植物體產(chǎn)生影響。1、掌握酶的基本提取方法：酶從植物體內(nèi)提取后很快容易失活，因而需要一定的外界因而需要著重注意，如：冰浴研磨，冷凍離心，離心機的使用和調(diào)控等等。2性很低；而含量低的地方，酶活性高。本實驗材料運用的是豆芽3、掌握吲哚乙酸氧化酶反應(yīng)的基本條件（1M22、反應(yīng)33失去活性，其產(chǎn)物多種多樣，因而不能以產(chǎn)物的增加表示。4、新進UV9100分光光度計的使用方法。三、實驗原理、方法和手段乙酸減少的速度表示。吲哚乙酸在無機酸存在條件下能與FeCl3

反應(yīng)生成紅色的螯合物，可用分光光度法測定其含量來反應(yīng)吲哚乙酸的含量。四、實驗組織形式在教師指導(dǎo)下，以學(xué)生為主的開放性運行模式。五、實驗條件1、儀器和試劑分光光度計、離心機、恒溫水浴鍋、天平、研缽、試管、移液管、燒杯0.02M的磷酸緩沖液，pH6.1。1mM2，4-二氯酚：16.3mg定容至100ml。1mMMnCl：19.8mgMnCl.4HO定容至100ml。2 2 21mM吲哚乙酸：17.5mg用少量乙醇溶解，定容至100ml。吲哚乙酸B試劑：0.5M的FeCl3

溶液：1.35g定容至10ml35%過氯酸：250ml過氯酸原液（70％）到500ml，棕色瓶保存。使用前將10mlFeCl3

溶液和500ml35%過氯酸混合，最好現(xiàn)用現(xiàn)配。2、參考文獻（第三版，高等教育出版社。六、實驗步驟12g，置研缽中，加入5ml磷酸緩沖液，冰浴中研磨，再加15ml的緩沖液混勻后，離心管中離心所得上清液即為粗酶液。2、取試管兩只，一只為實驗組，加入1mlMnCl，1ml二氯酚，2ml吲哚乙酸，4ml酶22ml磷酸緩沖液（M2和酚，一般是單元酚；另一只為對照組，除了酶液換成磷酸緩沖液外，其余都相同。兩只試管一起2530min。31ml2mlB3030min。觀察顏色變化，分光光度計測OD值。530420ppmIAA20151050ppm。1ml，按照步驟OD值。以O(shè)D5、以被氧化的吲哚乙酸的量表示吲哚乙酸氧化酶活性。七、思考題1、本實驗為何取材時除去子葉和胚根，留取下胚軸?2NR活性時我們以產(chǎn)物NO－2的增加來表示酶的活性呢?五、注意事項1、嚴格按照實驗的要求，服從實驗指導(dǎo)老師的安排，認真完成各項實驗任務(wù)。2、嚴格考勤制度，生病或有事外出需經(jīng)實驗指導(dǎo)人員批準后方能有效，否則按缺曠處理。組長負責(zé)考勤，進行登記，如未參加實驗要注明原因。3、每人必須作實驗日記，記載當(dāng)日的實驗內(nèi)容及其他有關(guān)事項，實驗結(jié)束后交實驗指導(dǎo)老師。4、同學(xué)間要團結(jié)互助，互相體諒，講文明禮貌。5、實驗經(jīng)費要節(jié)約使用，購置物品限于實驗所必須，并要有國家正式發(fā)票方能報銷。購置的實驗用品凡屬非消耗品，實驗結(jié)束后要交回。6、實驗結(jié)束時寫出實驗總結(jié)交指導(dǎo)實驗人員，再根據(jù)實驗期間的表現(xiàn)由實驗負責(zé)人作出實驗鑒定。7、實驗組長是實驗具體負責(zé)人，對該組實驗要全面負責(zé)。在指導(dǎo)實驗人員的安排下認心協(xié)力共同完成實驗任務(wù)。六、實驗方式與基本要求本課程以實驗為主，為單獨設(shè)課，所以開課后，任課教師需向?qū)W生講清驗守則及實驗室安全制度等。驗室進行實驗。21引導(dǎo)學(xué)生