陰道微生態(tài)評(píng)價(jià)

及其適宜技術(shù)

1護(hù)理生殖道關(guān)注微生態(tài)最重要！2陰道粘膜陰道正常菌群陰道免疫系統(tǒng)陰道微生態(tài)概念陰道防御系統(tǒng)陰道微生態(tài)是陰道最重要的防御系統(tǒng)3陰道原籍菌(乳酸桿菌)數(shù)量:8x107cfu/ml5%95%123

正常育齡婦女陰道菌群由六種不同種類的細(xì)菌以及念珠菌、支原體等組成。正常陰道內(nèi)有100種微生物存在。這些微生物在陰道內(nèi)形成生態(tài)平衡。陰道菌群（陰道的微生態(tài)系統(tǒng)）陰道微生態(tài)概念4CFU(Colony-FormingUnits)經(jīng)培養(yǎng)所得菌簇形成單位的英文縮寫。

細(xì)菌（可見(jiàn)）和真菌的測(cè)量單位。cfu:colony-formingunit，菌落形成單位，將稀釋后的一定量的菌液通過(guò)澆注或涂布的方法，讓其內(nèi)的微生物單細(xì)胞一一分散在瓊脂平板上，待培養(yǎng)后，每一活細(xì)胞就形成一個(gè)菌落。與常規(guī)利用顯微鏡對(duì)微生物數(shù)量進(jìn)行測(cè)量不同，主要是對(duì)可見(jiàn)（即多數(shù)情況下形成菌落）的細(xì)菌數(shù)量進(jìn)行測(cè)量的單位。意思就是每毫升菌液中含有多少單細(xì)胞！5陰道粘膜上皮細(xì)胞縱切面示意圖（過(guò)路菌）乳桿菌（原籍菌）（條件致病菌）是由不同種屬的宿主傳來(lái)的是其自身宿主個(gè)體對(duì)其無(wú)免疫反應(yīng)或低免疫反應(yīng)，是宿主個(gè)體固有的菌群是由同種屬不同宿主個(gè)體傳來(lái)的陰道微生態(tài)概念6乳桿菌的作用機(jī)制分解糖原，維持陰道酸性環(huán)境。產(chǎn)生多種抑菌物質(zhì)：乙酸、16-18碳脂肪酸H202、乳酸菌素、硬脂酸等。競(jìng)爭(zhēng)粘附：也稱占位性保護(hù)。競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：大量定位于陰道中的乳桿菌處于競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)狀態(tài)，利用陰道上皮細(xì)胞中的糖原，減少其他細(xì)菌的碳源供應(yīng)，通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)而干擾一些厭氧菌如白色假絲酵母菌（白念）的生長(zhǎng)。7維持酸性環(huán)境形成保護(hù)性菌膜殺滅致病菌乳酸桿菌正常陰道菌群作用陰道微生態(tài)平衡的核心：維持乳酸菌特別是產(chǎn)H2O2乳酸菌在陰道菌群中的優(yōu)勢(shì)地位！

在陰道粘膜表面形成一層保護(hù)性菌膜，防止入侵微生物在陰道粘膜上定植

乳酸菌產(chǎn)生的乳酸使陰道分泌物維持酸性環(huán)境；乳酸菌產(chǎn)生的H2O2可殺滅入侵的致病菌。陰道微生態(tài)概念8

乳桿菌數(shù)量減少，生化指標(biāo)改變，陰道微生態(tài)破壞陰道菌群失調(diào)

各類陰道炎

加重陰道菌群失調(diào)各種誘因各類陰道炎的共性---源于或伴有微生態(tài)破壞！為什么要關(guān)注陰道微生態(tài)9菌群演變?cè)斐删航Y(jié)構(gòu)改變，特點(diǎn)：1、厭氧菌需氧菌、等條件致病菌大量增加2、乳酸菌特別是產(chǎn)過(guò)氧化氫乳酸菌減少或消失所有的陰道感染都源于或伴有陰道微生態(tài)改變10

乳酸菌%厭氧菌%加德納菌%支原體%LB-LB正常80-10070-100

10-400-3020-40宮頸炎10-4010-3030-5020-4060-80BV0-200-1040-7060-8040-60滴蟲陰道炎10-400-2010-300-3020-40霉菌陰道炎20-500-4020-3010-4020-30

老年性陰道炎0-200-1040-6020-4050-6011

通過(guò)形態(tài)學(xué)、生物化學(xué)、

免疫學(xué)和分子生物學(xué)等

方法所獲得的陰道菌群

數(shù)量和功能方面的信息

分析陰道菌群結(jié)構(gòu)的演替正常優(yōu)勢(shì)菌的菌群數(shù)量與功能變化條件致病微生物菌群數(shù)量與功能變化外來(lái)致病微生物菌群數(shù)量與功能變化機(jī)體反應(yīng)水平如何評(píng)價(jià)陰道微生態(tài)？--陰道微生態(tài)評(píng)價(jià)的內(nèi)涵為什么要關(guān)注陰道微生態(tài)12形態(tài)學(xué)＋生物標(biāo)志物菌群數(shù)量與功能的變化形態(tài)學(xué)評(píng)價(jià)---菌群數(shù)量的變化：

形態(tài)學(xué)的方法系統(tǒng)的方法----------陰道微生態(tài)評(píng)價(jià)內(nèi)容陰道微生態(tài)評(píng)價(jià)的內(nèi)容13

標(biāo)本中細(xì)菌分布、排列的密集程度，即每克或每毫升標(biāo)本中的菌落數(shù)。

分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)(放大倍10×100觀察每視野平均細(xì)菌數(shù))I級(jí)（記為“+”）1個(gè)～9個(gè)

II級(jí)（記為“++”）

10個(gè)～99個(gè)

III級(jí)（記為“+++”）

100個(gè)以上

IV級(jí)（記為“++++”）細(xì)菌聚集成團(tuán)

(涂片中所見(jiàn)細(xì)菌種類)

I級(jí)（記為“+”）能辨別1～3種細(xì)菌；

II級(jí)（記為“++”）

能辨別4～6種細(xì)菌；

III級(jí)（記為“+++”）能辨別7～10種細(xì)菌；

IV級(jí)（記為"++++"）能辨別11種以上細(xì)菌。(局部有無(wú)炎癥---菌群的致病性)有無(wú)白細(xì)胞、膿細(xì)胞滲出，有無(wú)吞噬現(xiàn)象等。？菌群的密集度機(jī)體炎性反應(yīng)菌群的多樣性優(yōu)勢(shì)菌陰道微生態(tài)形態(tài)學(xué)評(píng)價(jià)

存在的問(wèn)題

形態(tài)學(xué)評(píng)價(jià)結(jié)果的可靠性

與實(shí)驗(yàn)室人員的技能和責(zé)任有關(guān)

不能了解陰道菌群中正常優(yōu)勢(shì)菌和有害菌的功能陰道微生態(tài)評(píng)價(jià)的內(nèi)容14

A、正常優(yōu)勢(shì)菌功能生物學(xué)標(biāo)志B、致病微生物與條件致病微生物增殖的生物學(xué)標(biāo)志C、機(jī)體反應(yīng)性的生物學(xué)標(biāo)志了解菌群數(shù)量的變化形態(tài)學(xué)評(píng)價(jià)生物標(biāo)志物了解菌群數(shù)量與功能的變化陰道微生態(tài)系統(tǒng)評(píng)價(jià)陰道微生態(tài)評(píng)價(jià)的內(nèi)容15

唾液酸苷酶BV↑門冬酰胺蛋白酶霉菌性陰道炎↑胱胺酰蛋白酶滴蟲性陰道炎↑乳酸脫氫酶急性化膿性陰道炎↑透明質(zhì)酸酶BV、淋菌性陰道炎↑白細(xì)胞酯酶宮頸炎及各種陰道感染↑

短鏈脂肪酸（如乙酸、琥珀酸）增加單胺和多胺增加（胺試驗(yàn)陽(yáng)性）菌胞壁糖類（如阿拉伯醇糖）增加

陰道微生態(tài)評(píng)價(jià)的方法生物化學(xué)方法微生物學(xué)方法分子生物學(xué)方法免疫學(xué)方法1優(yōu)勢(shì)菌(乳酸菌)功能的生化標(biāo)志物2致病與條件致病微生物增殖的生化標(biāo)志物3機(jī)體反應(yīng)性的生化標(biāo)志物

乳酸菌代謝包括：過(guò)氧化氫、乳酸乳酸菌素微生物代謝產(chǎn)物

細(xì)菌、衣原體等病原體大量增殖→白細(xì)胞吞噬病原體過(guò)多→病原體釋放的水解酶和毒素分解白細(xì)胞壁→白細(xì)胞酯酶釋放到胞外→分泌物中白細(xì)胞酯酶活性增高。16過(guò)氧化氫濃度SNA活性LE活性生態(tài)優(yōu)勢(shì)菌指標(biāo)致病菌指標(biāo)宿主反應(yīng)指標(biāo)衛(wèi)生部十年百項(xiàng)計(jì)劃推廣項(xiàng)目江西省星火計(jì)劃項(xiàng)目浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生科技重點(diǎn)推廣項(xiàng)目

了解陰道菌群結(jié)構(gòu)和功能的變化，

評(píng)價(jià)陰道的微生態(tài)狀況陰道微生態(tài)評(píng)價(jià)適宜技術(shù)

陰道微生態(tài)評(píng)價(jià)適宜技術(shù)--------細(xì)菌性陰道病聯(lián)合測(cè)定技術(shù)介紹

17標(biāo)本采集要規(guī)范各種病原體的性質(zhì)和檢測(cè)要求的不同，決定了標(biāo)本的種類、取材部位、和保存條件標(biāo)本運(yùn)輸方式等都有不同，采集標(biāo)本上如有錯(cuò)誤或疏忽，都會(huì)影響檢驗(yàn)結(jié)果。標(biāo)本采集的規(guī)范18

一般陰道感染診斷的取材，須取陰道后穹隆部位的分泌物。取材前，要用一支棉簽揩去取材部位堆積的膿液，用另一支棉簽取材，為提高陽(yáng)性率，還可采用重復(fù)兩次取材或兩個(gè)部位的標(biāo)本混合后檢驗(yàn)的方法。

要盡量使用大一些的棉簽取樣，要將棉簽在取材部位旋轉(zhuǎn)并停留20秒

要使用試劑盒配套的保存液保存標(biāo)本。標(biāo)本在2-8℃保存不宜超過(guò)2天。取材之前24小時(shí)內(nèi)，應(yīng)無(wú)性交、無(wú)盆浴或陰道沖洗；在48小時(shí)內(nèi)未使用陰道潤(rùn)滑劑或陰道“興奮劑”等化學(xué)物質(zhì)一般要求取材部位要準(zhǔn)確取材方法要得當(dāng)標(biāo)本量要充足標(biāo)本要正確保存及時(shí)檢驗(yàn)正確取材要把握一下幾點(diǎn)標(biāo)本采集的規(guī)范19檢驗(yàn)原理H2O2——陰道乳酸桿菌標(biāo)志物唾液酸苷酶NAase——加德納菌、游動(dòng)彎曲桿

菌等BV致病菌的標(biāo)志物。白細(xì)胞酯酶——炎性細(xì)胞的標(biāo)志物。20H2O2（反應(yīng)裝置上部的反應(yīng)孔）陰道液中過(guò)氧化氫經(jīng)過(guò)過(guò)氧化物酶作用，釋放出新生態(tài)氧，后者在4-氨基安替吡啉存在下，使3,5-二氯-2-羥基苯磺酸氧化成紅色或紫色，在反應(yīng)系統(tǒng)中加入3,5-二氯-2-羥基苯磺酸的拮抗物，當(dāng)標(biāo)本中H2O2濃度≥2μmol/L，反應(yīng)結(jié)果呈紅色或紫色，呈色深度與H2O2

濃度成正比，標(biāo)本中H2O2濃度＜2μmol/L，反應(yīng)結(jié)果呈藍(lán)色。結(jié)果判讀：陰性：顯紅色、紫色或藍(lán)紫色陽(yáng)性：藍(lán)色參考范圍：≥2μmol/L為陰性21唾液酸苷酶活性測(cè)定

（反應(yīng)裝置中部的反應(yīng)孔）唾液酸苷酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚神經(jīng)氨酸鹽，釋放出溴吲哚基遇重氮鹽起反應(yīng)呈紅色或紫色，呈色深度與唾液酸苷酶活性呈正比。結(jié)果判讀：陰性：不顯色或黃色陽(yáng)性：紅色、紫色或藍(lán)色，顯藍(lán)色表示唾液酸苷酶活性濃度很高。參考范圍：＜7U/ml為陰性22白細(xì)胞酯酶（反應(yīng)裝置下部的反應(yīng)孔）白細(xì)胞酯酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸鹽，釋放出溴吲哚基，后者在氧的條件下呈藍(lán)色或綠色，呈色深度與白細(xì)胞酯酶活性成正比。結(jié)果判讀：參照比色板比色判讀結(jié)果陰性：“-”或“±”陽(yáng)性：“+”、“++”、“+++”參考范圍：白細(xì)胞酯酶＜7U/ml為陰性23

產(chǎn)過(guò)氧化氫乳酸菌占優(yōu)勢(shì)地位

粘膜修復(fù)炎癥消失

無(wú)引發(fā)BV的細(xì)菌繁殖正常正常陰性異常增

高陽(yáng)性過(guò)氧化氫濃度LE活性SNa活性乳酸菌減少或消失各種陰道感染致病菌、條件致病菌增加陰道微生態(tài)評(píng)價(jià)適宜技術(shù)24糾正了以白細(xì)胞升高才為“炎癥”的生殖道感染的概念陰道感染診斷治療思路的新突破臨床用途指導(dǎo)婦產(chǎn)科臨床醫(yī)師從微生態(tài)角度重新審視婦科感染性疾?。魂P(guān)注感染及治療后的陰道微生態(tài)狀況，樹(shù)立“將陰道微生態(tài)恢復(fù)正常作為陰道炎治療的最終目標(biāo)”的理念。A、彌補(bǔ)現(xiàn)有白帶常規(guī)檢查只做形態(tài)學(xué)檢查、不做生化檢查，不能準(zhǔn)確判斷感染的程度及陰道微生態(tài)、不能評(píng)價(jià)預(yù)后等不足；B、陰道微生態(tài)評(píng)價(jià)C、從微生態(tài)角度評(píng)價(jià)陰道炎是否治愈；D、陰道生態(tài)制劑的用藥指標(biāo)；E、了解產(chǎn)后陰道生態(tài)，確定是否恢復(fù)性生活；F、BV診斷與療效評(píng)價(jià)，需氧菌陰道炎、衣原體感染篩查。陰道微生態(tài)評(píng)價(jià)意義25機(jī)體反應(yīng)的生化標(biāo)志物

白細(xì)胞對(duì)細(xì)菌的吞噬過(guò)程陰道微生態(tài)評(píng)價(jià)的內(nèi)容26

白細(xì)胞數(shù)量與白細(xì)胞酯酶的關(guān)系

白細(xì)胞酯酶與被破壞的白細(xì)胞數(shù)量成正比而白細(xì)胞數(shù)量與采樣、涂片、月經(jīng)周期有關(guān)27檢測(cè)結(jié)果參考28序號(hào)過(guò)氧化氫濃度唾液酸苷酶白細(xì)胞酯酶臨床判讀1≥2μmol/L--正常、無(wú)致病菌感染2≥2μmol/L-+陰道清潔度下降，陰道炎癥3≥2μmol/L+-BV致病菌感染早期4≥2μmol/L++BV感染早期，并有可能伴有其他混合感染，如宮頸炎。5＜2