免疫學(xué)技術(shù)在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用組員：小組成員分工資料搜索：PPT制作：后期審閱：所選論文：《免疫學(xué)技術(shù)在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用》論文作者：郎需龍劉文森王興龍作者所在單位：解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院軍事獸醫(yī)研究所動(dòng)物性食品安全研究室論文發(fā)表日期：2009年5月25日2

本小組所選的論文中一共提到8種免疫學(xué)技術(shù)，但其中只有4種是我們學(xué)過的，因此本次的PPT匯報(bào)中僅列出了學(xué)過的4項(xiàng)。3酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)

酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)，是將可溶性抗原（抗體）吸附到某種固相載體表面，并保持抗原（抗體）免疫活性，這樣在與標(biāo)本中的抗體（抗原）反應(yīng)后，只需經(jīng)過固相洗滌的洗滌，就可以達(dá)到抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分離，最后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺刊物定性或定量分析。5試驗(yàn)操作圖和試驗(yàn)專用儀器6試驗(yàn)所需試劑固相抗原或抗體酶標(biāo)記的抗原或抗體酶作用的底物ELISA方法中78單擊此處添加標(biāo)題ELISA常用技術(shù)類型間接法雙抗體夾心法競(jìng)爭(zhēng)法捕獲法10雙抗體夾心法

雙抗體夾心法常用于測(cè)定大分子及顆粒多價(jià)抗原。將已知抗體A吸附于固相載體上，加入待檢標(biāo)本（喊相應(yīng)抗原）與之結(jié)合形成固相抗體-A-抗原復(fù)合物。溫育后洗滌，加入酶標(biāo)抗體B形成固相抗體-A-抗原-酶標(biāo)抗體B夾心式復(fù)合物，固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)量成正比。最后加入底物，夾心式復(fù)合物的酶催化底物成為有色產(chǎn)物，顏色的深度與抗原的量成正比。12捕獲法

捕獲法（亦稱反向間接法）ELISA，主要用于血清中某種抗體亞型成分（如IgM）的測(cè)定。先將針對(duì)IgM的第二抗體（如羊抗人IgMμ鏈抗體）連接于固相載體，用以結(jié)合（“捕獲”）樣品中所有IgM（特異或非特異），洗滌出去IgG等無關(guān)物質(zhì)，然后加入特異抗原與待檢IgM結(jié)合；再加入抗原特異的酶標(biāo)抗體，最后形成固相二抗-IgM-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，加酶底物作用顯色后，即可對(duì)樣品中待檢IgM是否存在及其含量進(jìn)行測(cè)定。14免疫熒光技術(shù)15免疫熒光技術(shù)基本原理：

免疫熒光技術(shù)是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理，先將已知的抗原或抗體標(biāo)記上熒光素，制成熒光抗體，再用這種熒光抗體（或抗原）作為探針檢測(cè)組織或細(xì)胞內(nèi)的相應(yīng)抗原（或抗體）。在組織或細(xì)胞內(nèi)形成的抗原抗體復(fù)合物上含有標(biāo)記的熒光素，利用熒光顯微鏡觀察標(biāo)本，熒光素受外來激發(fā)光的照射而發(fā)生明亮的熒光（黃綠色或橘紅色），可以看見熒光所在的組織細(xì)胞，從而確定抗原或抗體的性質(zhì)、定位，以及利用定量技術(shù)測(cè)定含量。1617方法分類直接法間接法補(bǔ)體法182021

免疫傳感器技術(shù)是將免疫測(cè)定技術(shù)和傳感器技術(shù)相結(jié)合的一類新型生物傳感器，該技術(shù)具有精確度、靈敏度高、特異性強(qiáng)、樣品前處理簡(jiǎn)單的特點(diǎn)。其選擇性好、操作簡(jiǎn)單、攜帶方便、能重復(fù)利用，并能實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)盒在線檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)，有望成為食品安全檢測(cè)中最有效的新技術(shù)。23

免疫傳感器是以抗原抗體作為分子感應(yīng)器的生物傳感器，利用抗原與抗體專一性結(jié)合引起的直接或間接物理化學(xué)變化，通過一定的信號(hào)轉(zhuǎn)化，大多轉(zhuǎn)化為光信號(hào)，再經(jīng)過放大處理即可檢測(cè)出反應(yīng)物量的變化，通過相關(guān)儀器可以進(jìn)行某些物質(zhì)的分析檢測(cè)。免疫傳感器一般有三部分組成：分子感應(yīng)器、轉(zhuǎn)導(dǎo)體、電子濾波放大器免疫傳感器類型：非標(biāo)記免疫傳感器和標(biāo)記免疫傳感器24標(biāo)記免疫傳感器

標(biāo)記免疫傳感器不是直接檢測(cè)抗原抗體反應(yīng)，而是檢測(cè)免疫復(fù)合物上標(biāo)記物的信號(hào)（如熒光、放射性、酶催化反應(yīng)），因?yàn)槭褂昧司哂谢瘜W(xué)放大作用作用的標(biāo)記物，因此，其靈敏度比非標(biāo)記免疫傳感器有顯著提高。26免疫傳感器在食品中的應(yīng)用

免疫傳感器在食品中的應(yīng)用，主要體現(xiàn)在對(duì)食品中的有毒有害物質(zhì)的檢測(cè)。食品中的有毒有害物質(zhì)有生物性物質(zhì)，如細(xì)菌、真菌、有毒動(dòng)植物和病毒及其產(chǎn)生的毒素或特征蛋白質(zhì)。目前已成功運(yùn)用于測(cè)定污染食品的大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和鼠傷寒沙門菌，利用光纖傳感器與核酸放大系統(tǒng)相偶聯(lián)，可檢測(cè)食品中的少量病原菌、非生物性有毒有害物質(zhì)（包括農(nóng)藥、激素等小分子半抗原物質(zhì)）。27免疫芯片28免疫芯片構(gòu)建步驟一、確定檢測(cè)目標(biāo)，建立抗原抗體庫(kù)二、載體及抗原或抗體的固定三、抗原抗體反應(yīng)與分析檢測(cè)30免疫芯片技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)只需要少量的樣品，最突出的優(yōu)點(diǎn)是通過一次檢測(cè)