縮寫 中 英 前 實驗研 第一部分瓣臘材料浸提液的及毒性試 第二部分體外細胞培養(yǎng)細胞毒性試驗研 第三部分瓣膜材料組織穩(wěn)定性、力學(xué)性能實驗研 結(jié) 文獻回 參考文 附 附錄：在讀期間及撰寫的致 rheumaticheart風(fēng)濕性心bioprostheticheart生物心臟porcine豬牛心包戊二epoxy環(huán)氧氯polyepoxy環(huán)氧化AmericanSocietyof材料實驗最低基礎(chǔ)培導(dǎo) 易定華教心臟瓣膜病是一種常見病，心臟瓣膜置換為其主要治療，但目前無機瓣還生瓣未達理程度機械置后需凝，遠期血栓栓塞、、心肌梗死及腦血管意外等并發(fā)癥仍較高。與機械瓣相比，由豬主動脈瓣或牛心包瓣制成的生物瓣為中心血流型，無需終身抗凝，可享受較高生活質(zhì)量。但異種生物瓣存在遠期鈣化和衰壞的問題，而同種生物瓣來源。新型抗鈣化異種生物瓣移植后可明顯近年來，在國外無支架瓣的研制與臨床應(yīng)用引起了廣泛關(guān)注，無支架生物瓣的推廣應(yīng)用是瓣膜外科發(fā)展的一個重要方向。在以往生物瓣抗鈣化和研制方面的工作基礎(chǔ)上，改進抗鈣化方法，即把戊二醛處理的豬TritonX-100⑴.2.L-1TritonX-100磷酸緩沖液處理8天，然后3mL.L-1戊二醛溶液保存⑵.分 GA組：單純戊二醛處理的瓣EC組 戊二醛+環(huán)氧氯丙烷處理的瓣EC+Tr組:戊二醛+環(huán)氧氯丙烷+TritonX-100處理的瓣膜陽性對照：乳膠橡膠或4.5mL.L-1苯酚水溶液⑴.參考ASTM《醫(yī)用裝置標(biāo)準(zhǔn)》試驗方法和國際標(biāo)準(zhǔn)，對該生物瓣膜制⑵.參考ASTM《醫(yī)用裝置標(biāo)準(zhǔn)》試驗方法，對生物瓣膜采用直接接觸細胞培養(yǎng)法檢測其細胞毒性，并采用MTT法，對該材料的浸提液進行體外.組織穩(wěn)定性研究：利用熱皺縮溫度測定儀測定瓣膜組織的熱皺縮5℃2處理的瓣膜用Instron1122萬能拉力儀測量最大抗張強度。生物相容性試驗。溶血試驗：EC+Tr組溶血指數(shù)1.78%，GA數(shù)2.77%，EC組溶血指數(shù)1.98%，均低于《ASTM醫(yī)用裝置標(biāo)準(zhǔn)》及5%,EC組、EC+Tr組比GA組吸光度明顯減低，P值<0.0550ml/kg,小鼠尾靜脈注射后，72小時內(nèi)40只小鼠無論GA組、EC組、EC+Tr組以及對照組無一用裝置標(biāo)準(zhǔn)》EC組、EC+Tr組和GA組相比，生物毒性評分明顯降低，P值<0.05。直接接觸法細胞毒性試驗。陽性對照：材料下方及周圍8－12mm范圍內(nèi)出現(xiàn)大量細胞溶解、壞死，細胞及其碎片懸浮增加，殘留貼壁細胞形態(tài)畸形，透光度降低；對照：材料周圍及下方細胞生長良好，數(shù)量無減少，無畸形、壞死出現(xiàn)；GA組：瓣膜材料周圍出現(xiàn)少量細胞畸形、懸浮，細胞數(shù)量減少，有壞死、溶解，細胞碎片增加；EC組和EC+Tr組：瓣膜材料周圍細胞生長同對照材料相似，生長良好，數(shù)量無減少，無畸形、壞死出現(xiàn)。表明該種生物瓣膜對L-929小鼠成纖維細胞株的生長無明顯毒性作用，戊二醛處理的豬主動脈瓣，經(jīng)環(huán)氧氯丙烷和聯(lián)合化學(xué)改性后，毒性較單純戊二醛處理的豬主動脈瓣減輕。MTT法結(jié)果環(huán)氧氯丙烷的對體外細胞培養(yǎng)的毒性小與戊二醛，而TritonX-10070.2±0.5℃增加到89.78±1.33℃，差異顯著,P值<0.01,也優(yōu)于單純戊二醛處理的瓣膜熱皺縮溫度87.06±1.98℃，P值<0.05。組織濕度(%)EC+Tr組(89.78±1.33)和GA組(87.06±1.98)相比，明顯增加(P力學(xué)性能研究最大抗張強度和新鮮瓣膜相比，由504.7±23.46g/mm21273.4±142.56g/mm2，差異顯著,P值<0.01醛處理的瓣膜(988.7±48.65g/mm2P<0.01材料溶血實驗指數(shù)均低于國際和國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)，以環(huán)氧氯丙烷和TritonX-100聯(lián)合處理的無支架生物瓣材料為最低。TritonX-100聯(lián)合處理組小TritonX-100聯(lián)合處理的新型無支架生物瓣材料符合國際標(biāo)準(zhǔn)，明MTT法細胞毒性試驗應(yīng)用環(huán)氧氯丙烷和TritonX-100聯(lián)合處理的新型無支架生物瓣材料毒性明顯小于戊二醛TritonX-100聯(lián)合處理組的無支架生物瓣材料能保TritonX-100聯(lián)合處理的無支架生物瓣是一種：氯丙烷；TritonX-100ExperimentalStudyForBiomaterialofaNewType YiCardiacvalvulardiseaseisverycommoninhumanbeing.Themostpopulartherapeuticprocedureforthecardiacvalvulardiseaseisvalvereplacement.Althoughremarkableadvancestowardanoptimalvalvereplacementhavebeenmadeoverthepastmanyyears,theidealprosthesishasnotbeenachieved.Mechanicalprosthesisesare paniedbyahigherincidenceofthromboembolism,bleeding,myocardialinfarctionandcerebrovascularaccident.Biologicalvalvularprosthesises,constructedfromporcineaorticvalvesorbovinepericardium,canprovidecentralbloodflow,andfreedomfromlife-longanticoagulation.Howeverthedurabilityofbioprosthesisremainsunsatisfactory.Structuralvalvedeteriorationprimaryduetodystrophiccalcificationandstress-relatedtearsorperforationsisthemostseriousvalve-relatedcomplicationofbioprosthesis.Homograftvalvesalsohavealimitedresourcesanddurability.Biochemicalfixationorcross-linkedtreatmenthassignificantimpactsonvalvularcalcification.Calcificationofbioprosthesisisrelatedtocommissuralbendingstrains.Stentlessdesigncouldreducesuchtissuestress,andalsoimprovehemodynamicperformance.Soanticalcificationtreatmentandstentlessdesignaretwomainmethodsforimprovementofbioprosthesis.Basedonourproceedstudiesofbioprostheticvalveanticalcification,weusedepoxychloropropaneandTritonX-100treatporcineaorticvalvepretreatedbyglutaraldehyde,andalsoadoptedanewtypestentlessvalvedesign.Earlystudieshadconfirmedthatthisbioprosthesishadverygoodperformanceinanticalcification.Sointhisexperimentlacedemphasisonresearchingcytotoxicity,hemolysisandotherphysicalandchemicalpropertiesofthebioprosthesisbeforeclinicaluse.Materialand⑴.Thevalvularmaterialscamefromporcineaorticvalve,whichistreatedby3mL.L-1glutaraldehyde48hours,20mL.L-1epoxychloropropane48hoursand12mL.L-1TritonX-1008daysinorder,andperseveredby3mL.L-1glutaraldehyde.⑵.GroupGAgroup:MaterialonlytreatedbyECgroup:MaterialtreatedbyglutaraldehydeandepoxychloropropaneEC+Trgroup:Materialtreatedbyglutaraldehyde,epoxychloropropaneandTritonX-Positivecontrol:4.5mL.L-1hydroxyberzeneorlactepreneNegativecontrol:SalineorPolyethyleneAccordingtothemethodsofAmerican《ASTMstandardsformedicaldevicesandtheinternationalstandards,wemadeexperimentsofpracticesforevaluationtoxicityofthevalvesbyassessmentofhemolyticproperties,systemicinjectioninthemouse,andprimaryskinirritationinrabbitsthroughevaluatingmaterialextracts.AccordingtothemethodsoftheASTMstandards,wemadeexperimentsofdirectcontactcellcultureandMTTtestswithmaterialextractstoevaluatethecytotoxicityofthevalvematerial. patibilityresearch.Wemeasuredthevalvularshrinkagetemperaturewithourself-madeshrinkagetemperaturemeter,andmeasureddegreeoftissuewetnessbycomparingweightofvalvesofbeforeandafter105℃,2hourstreatment.Mechanicalpropertyresearch.Wemearsuredtheumofstrengthofthevalvematerialwithinstron1122tensileforcemetertoevaluatetheirmechanicalcharacteristics. patibilitystudies.HemolyticindexesofGAgroup,ECgroup,andEC+Trgroupare2.77%,1.98%and1.78%,respectively,lowerthanASTMstandardorourernmentstandard.Inthetestsofsystemicinjectioninthemouse,thereisnomousedeadandnosignificantabnormalreaction.PrimaryskinirritationtestsinrabbitsalsoindicatedthatthevalvematerialfittheASTMstandards.Directcontactcellculturetest.Inpositivecontrolgroup,therearemanyfragmentsandadecreaseinthenumberoftheL-929cells,whichindicatesseverecellnecrosis.Innegativecontrol,thegrowthofthecellisnormal.InECgroupandEC+Trgroup,therearenoapparentchangesofcellnecrosis,however,inGAgroup,thenumberofthecellshasdecreased,butnotsevereaspositivecontrolgroup.MTTcytotoxicitytestsalsoindicatedthatECgroupandEC+TrgrouphadlowercytotoxicitythanGAgroup,andalsoconfirmedthatGAhasthemostseverecytotoxicityinthethreechemicals. patibilityresearch.EpoxychloropropaneandTritonX-100chemicaltreatmentcanimprovethephysicalandchemicalpropertiesofthebioprosthesis.Shrinkagetemperature:EC+Trgroup(89.78±1.33℃)ishigherthanfreshvalvegroup(70.2±0.5℃),P<0.01andalsohigherthanGAgroup(87.06±1.98℃),P<0.05.Degreeoftissuewetness(%):EC+Trgroup(89.78±1.33)ishigherthanGAgroup(87.06±1.98),P<0.05.Physicalpropertyresearch.EpoxychloropropaneandTritonX-100chemicaltreatmentcanimprovethe umoftensilestrength:EC+Trgroup(273.4±142.56g/mm2)ishigherthanfreshvalvegroup(504.7±23.46g/mm2),P<0.01,andalsohigherthanGAgroup(988.7±48.65g/mm2),P<0.01.Inhemolysistests,thehemolysisindexesoftheporcinevalvestreatedby,epoxychloropropane,orepoxychloropropaneandTritonX-100arealllowerthanASTMstandardsandnationalstandards.ThematerialtreatedbyepoxychloropropaneandTritonX-100hasthelowesthemolysisindex.Inthetestsofsystemicinjectioninthemouse,thereisnomousedeadandnoabnormalreactionofallgroups.PrimaryskinirritationtestsinrabbitsalsoindicatedthattheprosthesistreatedbyepoxychloropropaneandTritonX-100haslowesttoxicity.DirectcontactcellculturetestandMTTcytotoxicitytestsindicatedthatthismaterialtreatedbyepoxychloropropaneandTritonX-100hasnoobviouscytotoxicity,andobviouslybetterthanthevalveonlytreatedbyThematerialtreatedbyepoxychloropropaneandTritonX-100canmaintaingoodshrinkagetemperature,degreeoftissuewetnessandtheumoftensilestrength,hasgoodphysicalproperties.ThenewtypestentlessbioprosthesiswhichtreatedbyepoxychloropropaneandTritonX-100isaverygoodbiomaterialforvivotransplantation.Thisstudyprovidedaimportantreferenceforthestentlessbioprosthesisclinicaluse.Keyword:heartvalvebioprosthesis;stentless;anticalcification;cytotoxicity;hemolysis;epoxychloropropane;TritonX-100前風(fēng)濕性心臟?。≧heumaticHeartDisease,RHD）是我國最常見的心血管系統(tǒng)疾病之一，心臟瓣膜置換已成為主要治療。但目前無論機械生物心臟瓣膜（bioprostheticHeartValve,BHV）由于其保持了自然血流動力學(xué)以及不需抗凝等優(yōu)點，使其臨床應(yīng)用和研究受到人們的關(guān)注。1962年Ross首先應(yīng)用新鮮的同種主動脈瓣（allogeneticBioprosthesisAorticValve）進行主動脈瓣置換并取得成功，從而開創(chuàng)了1968Carpentier首先提出用戊二醛（glutaraldehyde）處理生物瓣的新方法，使生物瓣的機械力學(xué)性能和得到了明顯的提高。1976年開始1530－40％，我國80年代的使用率曾高達70％。但是生物瓣膜衰壞而引起的耐久性問題TritonX-100CarpentierATritonX-100本實驗的目的是對本單位研制的新型抗鈣化無支架生物瓣按照美國材料試驗（ASTM）的醫(yī)用裝置及國際標(biāo)準(zhǔn)進行生物毒性、生物2小時以內(nèi)，依次經(jīng)L-1TritonX-1008天，然3mL.L-1戊二醛溶液保存。⑵分組GAEC組 戊二醛+環(huán)氧氯丙烷處理的瓣EC+Tr組:戊二醛+環(huán)氧氯丙烷+TritonX-100處理的瓣膜陽性對照材料：4.5mL.L-1苯酚水溶液⑴Hanks液：NaCl8.0g,KCl0.4g,CaCl20.14g,MgSO4·7H2O0.2g, 0.06g,KH2PO40.06g,NaHCO30.35g,葡萄糖1.0g,酚紅0.02g,加三蒸水至1000ml,高壓，-20℃保存0.06g,NaHCO30.35g,酚紅0.02g,加三蒸水至1000ml,高壓，Na2HPO4·12H2O11.9g,NaH2PO4·2H2O5.2g加入三蒸水至1000ml，高壓，-20℃保存。蒸餾水稀釋至1000ml。⑶水浴箱（蘇州儀器廠，中國，每個浸提容器中加入20ml的浸提介質(zhì)生理鹽水，用光電分析天平分別稱取4克的各組瓣膜樣品，每組4例，3例加入瓣膜材料，1例作空白對照。50℃下在烘箱內(nèi)持續(xù)72小時，去掉熱源，冷卻容器，但不能低于22℃，冷卻后，強有力地搖動容器30秒，然后把浸提液倒入過的干燥容器，24小時內(nèi)備用。用分光光度計測波長為540nm處的吸光度值①。入對照生理鹽水和陽性對照4.5mL.L-1苯酚水溶液，37℃下在標(biāo)準(zhǔn)血液混合器中振動1h，離心15min(100-200轉(zhuǎn))，血漿成份再離心5min(700-800轉(zhuǎn))，測懸浮液的540nm處吸光度值③。50只巴比斯小鼠，雌雄不限，隨機分為5AECE+Tr組、陽性對照組、對照組，注射前每個小鼠稱重、記錄并標(biāo)記，浸提液強烈搖勻，然后將各組材料浸提液以50mL/kg，小鼠尾靜脈注射，以生以4.5mL.1液照間隔721反 描 機能減退、腹瀉，體重下降15－17克之間。 呼吸等癥狀，體重迅速下降，低于15克。 每種材料5只兔子，脊柱一側(cè)10個部位注射0.2mL樣品浸提液或陽4.5mLL-150.2mL生理鹽水作對照，在間隔72小時內(nèi)觀察動物有無紅斑，水腫及壞死。2012343水腫癥 分級沒有水 EC+Tr1.78%，GA2.77%，EC組溶血指數(shù)1.98%，均低于《ASTM醫(yī)用裝置標(biāo)準(zhǔn)》及的5%,EC組、EC+Tr組比GA組吸光度明顯減低，P值<0.05。GAEC EC+Tr0.0394±0.8480.827 吸光吸光0GA EC GA+EC 血 全 陽性對 對 圖 72小時內(nèi)40只小鼠無論GA組、EC組、EC+Tr組以及對照組無一例，無不良反應(yīng)，符合標(biāo)準(zhǔn)。而陽性對照組7只小鼠出現(xiàn)明顯體重迅速下降，低于15克。ECEG+Tr組瓣膜材料浸提液的兔皮內(nèi)注射評價試驗紅斑均限于無或輕微紅斑，而GA組則分別有4例明顯或中度紅斑，經(jīng)等級資料的秩和檢驗，ECEG+TrGA組生物毒性明現(xiàn)2例輕度紅斑，均符合試驗要求。4兔皮內(nèi)注射評價試驗紅斑結(jié)果（例GAEG+Tr組 34000400000340004000000012340 2ECEG+Tr組瓣膜材料浸提液的兔皮內(nèi)注射毒性度水腫，經(jīng)等級資料的秩和檢驗，ECEG+TrGA組生物毒9例重度水腫，27例中度水腫，4例輕度水腫；對照僅出現(xiàn)2例很輕的水腫，均符合試驗要求。5兔皮內(nèi)注射評價試驗水腫結(jié)果（例GAEG+Tr組對照陽性對照37000400009GA組相比aP值0012340GA EC 陽性對 圖 兔皮內(nèi)注射評價試驗水腫結(jié)食品藥品管理局（FDA）把醫(yī)用裝置分為三類理．人工心臟瓣膜作為長期植入的裝置，屬于第Ⅲ類，這類材料要制定了對醫(yī)用裝置安全性評價的國際標(biāo)準(zhǔn)。心臟瓣膜植入后與ASTM標(biāo)準(zhǔn)方法對經(jīng)抗鈣化處理的豬主動脈機械破壞有關(guān)，也與瓣膜材料擴散于血液中的物質(zhì)對紅細胞的化學(xué)破壞有關(guān)，ASTM標(biāo)準(zhǔn)提供了一種的模擬體內(nèi)條件的實驗方法，即動態(tài)ASTM標(biāo)準(zhǔn)范圍之內(nèi)，符合標(biāo)準(zhǔn)要求。原聯(lián)膠原氨基端，增加機械強度，以及在瓣膜的保存過程中保持無菌等方面具有極其重要的作用，因此，仍然用戊二醛首先處理了（0.3%環(huán)氧氯丙烷、TritonX-100以不同的機制，對生物瓣膜進行抗鈣化處理效丙烷、TritonX-100聯(lián)合處理的無支架瓣膜符合該標(biāo)準(zhǔn)要求的生物毒性標(biāo)準(zhǔn)，而且，環(huán)氧氯丙烷、TritonX-100能明顯減輕戊二醛的生物毒性，為2小時以內(nèi)，依次經(jīng)L-1TritonX-1008天，然3mL.L-1戊二醛溶液保存。⑵分組GAEC組:戊二醛+陽性對照：乳膠橡膠和0.45%苯酚水溶液L-929TritonX-100：Sigma⑷10％小牛：保泰克公司，中LMTT：⑴Hanks液：NaCl8.0g,KCl0.4g,CaCl20.14g,MgSO4·7H2O0.2g,Na2HPO4·H2O0.06g,KH2PO40.06g,NaHCO30.35g,1.0g,酚紅0.02g,加三蒸水至1000ml,高壓，-20℃保存0.06g,NaHCO30.35g,酚紅0.02g,加三蒸水至1000ml,高壓：Na2HPO4·12H2O11.9g,NaH2PO4·2H2O5.2g加入三蒸水至1000ml。PBSNaCl8.0g,KCl0.2g,KH2PO40.02g,Na2HPO4·12H2O⑴孵箱：nuaire公司MPS60AEICA公司，⑷酶聯(lián)免疫檢測儀（ELISA儀：華東電子，中⑴樣品：把經(jīng)抗鈣化處理的瓣膜用模具刀切割成8×15mm2的平滑⑵含10％小牛的最低基礎(chǔ)培養(yǎng)基，培養(yǎng)小鼠L929成纖維細胞株，在150cm2的細胞培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)細胞融合形成單層，吸出0.5mlnk’5ml1％胰蛋白酶孵育5－10分鐘，將細胞懸液轉(zhuǎn)入離心管，1300轉(zhuǎn)下離6分鐘，拋掉上清液，用10ml新鮮培養(yǎng)基再次懸浮混合細胞，每個培養(yǎng)皿中加入2ml培養(yǎng)基和細胞懸液5－7滴，孵育3－5天直至近似融合⑶接觸培養(yǎng)：顯微鏡檢查細胞培養(yǎng)，舍棄任何融合不好或已顯示有顆四唑鹽（MTT）比色試⑴接種細胞：用含10％小牛的MEM培養(yǎng)液配成單個細胞懸液，以每孔103－104個細胞接種于96孔培養(yǎng)液中孔加材料浸提液或生理鹽水對照液體5ul，每孔總體積200ul。37℃、5%CO2150ulDMSO，10以時間為橫軸，OD值為縱軸，繪制細胞生長曲線。1－2）死出現(xiàn)。（3－4）死、溶解，細胞碎片增加。（5－6）良好，數(shù)量無減少，無畸形、壞死出現(xiàn)。（7－8）四唑鹽（MTT）比色試驗結(jié)1MTT（ODxGAECEC+TrEC+Tr值值0 8圖1MTT法體外細胞培養(yǎng)材料浸提液的毒性試表 MTT法體外細胞培養(yǎng)材料處理液的毒性試驗結(jié)果（OD值,x0.3‰GA2‰EC1.2‰Tr0.3‰GA1.2‰TrODOD0 Earle1948年分離出來的。具有繁殖迅速、傳代容易、體外培養(yǎng)條件低和易保存等優(yōu)點，1982年標(biāo)準(zhǔn)學(xué)會將該細胞為細胞毒為，瓊脂覆蓋具有試驗周期短、48小時可觀察結(jié)果，操作簡單，可同時ASTM標(biāo)準(zhǔn)，但即使是低濃度的戊二醛，長時間處理的生物生物心臟瓣膜植入后的耐久性問題迄今尚未解決，嚴重阻礙生能防止生物材料鈣化是生物心臟瓣膜研究的新思路。內(nèi)皮細胞具有加速血栓素滅活，前列環(huán)素，參與纖維蛋白溶解等重要功能。要使韓波等戊二醛與環(huán)氧交聯(lián)處理的牛心包材料和浸出液對培養(yǎng)L-929細胞無影響，材料的直接細胞脈徹底沖洗后每克24h仍13.8ppm戊二醛直至一個月。極微量的戊MTT比色法是一種檢測細胞生長、存活情況的新方法，主要原理是活細胞中的線粒體脫氫酶將MTT分子還原，產(chǎn)生紫色結(jié)晶物。所表達的信息類似于活細胞計數(shù)和同位素摻入等方法。用含試樣浸漬液的培養(yǎng)細胞，經(jīng)過一定時間后加入MTT，用二甲基亞砜溶解紫色結(jié)晶體，經(jīng)比色測定吸收值（OD，反映材料的浸漬液對細胞數(shù)量及活性的影響。此法與細胞增殖度不同之處是選用了酶的活性作為觀察指標(biāo)，因此其敏感性較以細胞計數(shù)作為觀察指標(biāo)之增殖法高。此法的特點是簡便、準(zhǔn)確、迅T10TT40riton0性極小。豬主動脈瓣的方法ASTM標(biāo)準(zhǔn)，且降低了戊二醛的細胞毒性，有第三部 瓣膜材料的組織穩(wěn)定性、力學(xué)性能實驗研1.TritonX-100：SigmaInstron1122：Instron.L-1TritonX-100磷酸緩沖液處理8天，然后3mL.L-1戊二醛溶液保存⑵分 GA組：單純戊二醛處理的瓣EC組 Tr組：戊二醛＋TritonX-100處理的瓣EC+Tr組 小燒杯于105℃烤箱內(nèi)恒重。各取8片，分別用濾紙吸干水份后放入燒杯稱重，得每片瓣葉濕重；105℃下2小時后再次恒重后稱量得瓣葉干重；新鮮瓣膜、GA組、EC組、EC+Tr組瓣膜各取8片，采的熱皺縮溫度測定儀，以蒸餾水為介質(zhì)，溫度每分鐘上升2℃，以指針開始將新鮮瓣膜、GA組、EC組、EC+Tr組的豬主動脈瓣按如下模式圖⑴瓣膜含水量（：新鮮瓣膜經(jīng)戊二醛處理后組織的含水量下降(<0.01)，再TritonX-100或環(huán)氧氯丙烷和TritonX-100處理后，含水量增加，即Tr組、EC+Tr組和EC組或GA組相比，瓣膜含水量增加(P<0.05)，和新鮮瓣膜組比組織含水量無明顯差異(P﹥0.05)。1瓣膜含水量12345678新鮮GAECTrEC+Tr熱皺熱皺縮溫度新鮮瓣 GA EC Tr EC+Tr 圖1瓣膜材料熱皺縮溫度（℃）<0.01)，TritonX-100皺縮溫度又有所增加，即GA組、Tr組、EC組以及EC+Tr組和新鮮瓣膜組相比，熱皺縮溫度明顯升高(P<0.01)；EC組、EC+TrGA組212345678均值新鮮 GA EC Tr EC+Tr 含水量含水量新鮮 GA EC Tr EC+Tr ⑴厚度：GA組、EC組、Tr組、EC+Tr（p>0.05（p<0.01），EC組、EC+Tr組比GA組瓣膜斷裂強度明顯增強組相比，亦無顯著差異(P﹥0.05)3（mm）和斷裂強度（g/mm2）測定(n=6，xGAECTrEC+Tr度斷裂強度（g/mm斷裂強度（g/mm0新鮮豬 GA EC Tr EC+Tr 圖 熱皺縮溫度(shrinkagetemperature（EC+Tr組）,以及環(huán)氧氯丙烷處理的瓣膜（EC組）的熱皺縮溫度和單純戊℃vs67.9℃,p>0.05TritonX-100顯著性差異，TrintonX-100TrintonX-100、環(huán)氧氯丙烷和戊二醛聯(lián)合處理的豬主動脈瓣其含水量有所增加，可能是Trinton處理后仍保持較好的抗張強度,有利于增加瓣膜的和保持良好的血部位所致的機械性磨損使膠原纖維露或，可能是瓣膜鈣化的不斷受到交變、彎曲、變形的應(yīng)力作用而形成瓣膜組織的疏松、、瓣葉失功有關(guān)：①瓣膜支架頂部巨大的張力；②支架下的擠壓力；③瓣架外組織的磨擦力；④瓣葉在開放時中的彎曲應(yīng)力（BendingStressThubriker（MembraneStress）與彎曲應(yīng)力的加和在形，常導(dǎo)致。因此目前無支架（stentless）的生物瓣的應(yīng)用正引起重 TritonX-100聯(lián)合處理組小TritonX-100聯(lián)合處理的新型無支架生物瓣材料符合國際標(biāo)準(zhǔn)，明顯優(yōu)于MTT法細胞毒性試驗應(yīng)用環(huán)氧氯丙烷和TritonX-100聯(lián)合處理的新型無支架生物瓣材料毒性明顯小于戊二醛對照TritonX-100聯(lián)合處理組的無支架生物瓣材料能保TritonX-100聯(lián)合處理的無支架生物瓣是一種Jorge-Herrero,Femandez,Gutierrez,etal.Studyofthecalcificationofbovinepericardium.Biomaterials,1991;12(9):683Granbenwoger,Grimm,Eybl,etal.Newaspectsofthedegenerationofbioprostheticheartvalvesafterlong-termimplantation.JThoracCardiovascSurg.1992;104(1):14San-Martin,Garcia-Paez,Millan,etal.Behaviourofthebovinepericardiumusedincardiacbioprostheseswhensubjectedtoarealfatigueassay.Biomaterials,1993;14(1):76Levy,Schoen,Anderson,etal.Cardiovascularimplantcalcification:asurveyandupdate.Biomaterials,1991;12(10):707Golomb,Ezra.alentbindingofprotaminebyglutaraldehydetobioprosthetictissue:characterizationandanticalcificationeffect.BiomatArtCells&lmmobBiotech,1992;20(1):31Song,Vesely,Boughner.Effectsofdynamicfixationonshearbehaviourofporcinexenograftvalves.Biomaterials,19910;11(4);191Roe,Milthorpe,Schindhelm,etal.Collagencrosslinkingandresorption:effectofglutaraldehydeconcentration.ArtificialOrgans,1990;14(6):443Dahm,Prufer,Dohmen,etal.Pathophysiologyofearlyfailureofautologousaorticheartvalves(ATCV).Thorac-Cardiovasc-Surg.1998Dec;46(6):344-7Dahm,Prufer,Krummenauer,etal.Invitroeffectsofanticalcificationtreatmentonthecalciumuptakeofbioprostheticmaterials.J-Heart-Valve-Dis.1998May;7(3):336-9Flameng,Ozaki,Yperman,etal.Calcificationcharacteristicsofporcinestentedvalvesinajuvenilesheepmodel.Ann-Thorac-Surg.2001May;7(5Suppl):Legarra,Llorens,Catalan,etal.Eighteen-yearfollowupafterHancockIIbioprosthesisinsertion.J-Heart-Valve-Dis.1999Jan;8(1):16-24DavidArmstrong,Sun.TheHancockIIbioprosthesisat12Ann-Thorac-Surg.1998Dec;66(6Suppl):S95-Carpentier,Dubost,Lane.Continuingimprovementsinvalvularbioprostheses.JThoracCardiovascSurg,1982,83:27金磊，朱，宋來鳳等。羥基鉻減緩生物瓣鈣化的實驗研究。中國胸心Duarte,MacDonald,Cooper,etal.Invivohemodynamic,histologic,andantimineralizationcharacteristicsoftheMosaicbioprosthesis.Ann-Thorac-Surg.2001Jan;71(1):92-9Gabbay.PossiblemechanismofcalcificationoftheBioCorstentlessmitralvalvetreatedwiththeNo-Reactformula.J-Thorac-Cardiovasc-Surg.1999Oct;118(4):771-3Herijgers,Ozaki,Verbeken,etal.Calcificationcharacteristicsofporcinestentlessvalvesinjuvenilesheep.Eur-J-Cardiothorac-Surg.1999Feb;15(2):134-42Vyavahare,Hirsch,Lerner.Preventionofcalcificationofglutaraldehyde-crosslinkedporcineaorticcuspsbyethanolpreincubation:mechanisticstudiesofproteinstructureWalther;Falk,Diegeler.Effectivenessofdifferentanticalcificationtreatmentsforstentlessaorticbioprostheses.Thorac-Cardiovasc-Surg.1999Feb;47(1):23-5Grabenwoger,Sider,Fitzal,etal.lmpactofglutaraldehydeoncalcificationofpericardialbioprostheticheartvalvematerial.AnnThoracSurg,1996;62(3):772Bengtsson,Phillips,Haegerstarand,etal.Invitroendotheliazationofphotooxidativelystabilizedxenogeneicpericardium.AnnThoracSurg,1995;（5，30-David,Feindel,Bos,etal.Aorticvalvereplacementwithastentlessporcineaorticvalve.JThor