實驗四（一）球菌病原學(xué)的檢測

實驗內(nèi)容1球菌形態(tài)觀察2血漿凝固酶試驗3抗“O”試驗實驗?zāi)康?/p>

1掌握葡萄球菌，鏈球菌，淋球菌形態(tài)特征

2熟悉血漿凝固酶實驗的原理，方法及臨床意義。

3掌握抗“O”實驗的原理，意義及方法。

4觸酶試驗試驗球菌和腸道桿菌病原學(xué)檢測共20頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第1頁!球菌的檢驗程序標本直接檢查（涂片、染色、鏡檢）分離培養(yǎng)可疑菌落菌落特點鑒定試驗次第二次生化結(jié)果觀察莢膜染色結(jié)果討論與分析第三次形態(tài)、色素、溶血血漿凝固酶、觸酶、菊糖發(fā)酵、甘露醇發(fā)酵、膽汁溶菌、小白鼠毒力試驗球菌和腸道桿菌病原學(xué)檢測共20頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第2頁!常見致病性球菌染色特點葡萄球菌鏈球菌雙球菌

革蘭陽性

革蘭陽性

革蘭陽性不規(guī)則成堆排列鏈狀排列矛頭狀成雙排列球菌和腸道桿菌病原學(xué)檢測共20頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第3頁!菌落可出現(xiàn)金黃色、白色或檸檬色等色素血平板上，金黃色葡萄球菌可形成-溶血環(huán)表皮葡萄球菌呈白色菌落葡萄球菌在血平板上菌落球菌和腸道桿菌病原學(xué)檢測共20頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第4頁!鏈球菌菌落形態(tài)血平板：灰白色圓形凸起的細小菌落，不同菌株溶血不一?；撔枣溓蚓菥G色鏈球菌球菌和腸道桿菌病原學(xué)檢測共20頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第5頁!1.血漿凝固酶試驗【原理】致病性葡萄球菌能產(chǎn)生血漿凝固酶，使血漿中纖維蛋白原變?yōu)椴蝗苄岳w維蛋白，附于細胞表面生成凝塊。【操作】取生理鹽水各1滴分別滴于載玻片上，用接種環(huán)挑取細菌，混合后觀察有無自凝現(xiàn)象。取1滴兔血漿混勻分別滴于載玻片上,觀察有凝固現(xiàn)象（3-5s）?！窘Y(jié)果】金黃色葡萄球菌為陽性，表皮葡萄球菌為陰性【意義】血漿凝固酶試驗可區(qū)分致病性和非致病性葡萄球菌生化反應(yīng)鑒定示教 球菌和腸道桿菌病原學(xué)檢測共20頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第6頁!3.甘露醇發(fā)酵試驗【原理】致病性葡萄球菌多含有分解甘露醇的酶類，能發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸，培養(yǎng)基由紫色變?yōu)辄S色?！静僮鳌考毦謩e接種甘露醇單糖發(fā)酵管，經(jīng)37℃孵育18-24h觀察結(jié)果?！窘Y(jié)果】金黃色葡萄球菌為陽性，表皮葡萄球菌為陰性血漿凝固酶試驗和甘露醇發(fā)酵試驗可區(qū)分致病性和非致病性葡萄球菌生化反應(yīng)鑒定球菌和腸道桿菌病原學(xué)檢測共20頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第7頁!5.膽汁溶菌試驗【原理】肺炎鏈球菌可產(chǎn)生一種自溶酶，膽鹽能活化自溶酶，加速自溶過程，引起細胞自溶。【操作】膽汁溶菌試驗可用以區(qū)分甲型鏈球菌和肺炎鏈球菌生化反應(yīng)鑒定37℃，24h+膽鹽（0.1ml）37℃，0.5h【結(jié)果】液體由混濁變透明為陽性，肺炎鏈球菌為陽性，甲型鏈球菌為陰性?！疽饬x】接種細菌球菌和腸道桿菌病原學(xué)檢測共20頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第8頁!【注意事項】無菌操作挑取細菌培養(yǎng)平板上的單個菌落進行生化鑒定。生化反應(yīng)鑒定球菌和腸道桿菌病原學(xué)檢測共20頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第9頁!常見腸道桿菌在伊紅美蘭瓊脂平板（EMB）及SS培養(yǎng)基上的菌落特點1.大腸桿菌菌落：較大、圓形、光滑、不透明，在EMB上形成深紫蘭色菌落（因分解乳糖產(chǎn)酸，與伊紅美蘭結(jié)合之故），在SS瓊脂平板上形成紅色菌落(因分解乳糖產(chǎn)酸，中性紅指示劑變紅)。2.傷寒桿菌和痢疾桿菌菌落：中等大、圓形、光滑、半透明、在EMB上無色（因不分解乳糖），在SS上無色或淡黃色。實驗四（二）腸道桿菌的病原學(xué)的檢測

球菌和腸道桿菌病原學(xué)檢測共20頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第10頁!

問題與討論1.如何鑒別致病性葡萄球菌與非致病性葡萄球菌？2.如何鑒別肺炎球菌與甲型鏈球菌？3.什么是抗“O”試驗，說明其臨床意義？4.怎樣鑒別致病性與非致病性腸道桿菌？球菌和腸道桿菌病原學(xué)檢測共20頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第11頁!腦膜炎奈瑟球菌

淋病奈瑟菌

革蘭陰性球菌奈瑟菌染色特點：腎形或豆形，成雙排列、凹面相對的革蘭陰性球菌球菌和腸道桿菌病原學(xué)檢測共20頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第12頁!鏈球菌屬（Streptococcus）

鏈球菌在血平板有三種溶血現(xiàn)象（1）甲型溶血（2）乙型溶血（3）丙型溶血132球菌和腸道桿菌病原學(xué)檢測共20頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第13頁!肺炎鏈球菌菌落球菌和腸道桿菌病原學(xué)檢測共20頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第14頁!2.觸酶試驗【原理】H2O2

H2O+O2【操作】取潔凈玻片一張，取生理鹽水各1滴分別滴于載玻片上，以接種環(huán)分別取待檢細菌培養(yǎng)物少許，滴加3％H202一滴（立刻），在H202中磨勻，立即觀察結(jié)果?！窘Y(jié)果】陽性為半分種內(nèi)產(chǎn)生大量氣泡。葡萄球菌為陽性，鏈球菌為陰性?！疽饬x】觸酶試驗可區(qū)分葡萄球菌和鏈球菌。生化反應(yīng)鑒定過氧化氫酶示教 球菌和腸道桿菌病原學(xué)檢測共20頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第15頁!4.菊糖發(fā)酵試驗【原理】大多數(shù)肺炎鏈球菌可以分解菊糖，菊糖發(fā)酵產(chǎn)酸，指示劑呈酸性反應(yīng)，發(fā)酵管由黃色變?yōu)樽霞t色?！静僮鳌考毦謩e接種菊糖發(fā)酵管，經(jīng)37℃孵育18-24h觀察結(jié)果?！窘Y(jié)果】用以區(qū)分肺炎鏈球菌和甲型鏈球菌，肺炎鏈球菌為陽性，甲型鏈球菌為陰性。生化反應(yīng)鑒定球菌和腸道桿菌病原學(xué)檢測共20頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第16頁!生化反應(yīng)鑒定6.抗鏈球菌溶血素“O”（ASO）試驗（快速膠乳法）【原理】本試劑膠乳液是由溶血素O和羥化聚苯乙烯膠乳共價交聯(lián)而成的抗原膠乳。ASO膠乳的靈敏度調(diào)整到200IU/ml，超過上述滴度即出現(xiàn)肉眼可見凝集顆粒，產(chǎn)生清晰凝集，為陽性；無凝集，為陰性?！静僮鳌吭噭╊A(yù)溫至室溫，并輕輕搖勻。在反應(yīng)板各格子上分別滴加1滴(約50μl)陰性、陽性和待測血清，再各滴加ASO膠乳試劑1滴，輕輕搖勻，2min后觀察結(jié)果?！窘Y(jié)果】有清晰凝聚者為陽性（ASO≥200IU/ml）不出現(xiàn)凝聚者為陰性（ASO＜200IU/ml）【意義】1.抗體滴度＞200IU/ml以上，新近有可能反復(fù)感染過乙型溶血型鏈球菌

2.作為風(fēng)濕活動期、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)心病、急性腎小球腎炎、的輔助診斷。示教 球菌和腸道桿菌病原學(xué)檢測共20頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第17頁!致病性球菌的主要生物學(xué)性狀鑒別要點革蘭染色觸酶金黃色葡萄球菌表面葡萄球菌乙型鏈球菌甲型鏈球菌肺炎鏈球菌血漿凝固酶膽汁溶菌試驗G+，球型葡萄狀排列G+，球型葡萄狀排列G+,球型長鏈狀排列G+,球型短鏈狀排列G+,球形成雙,矛頭相對β溶血環(huán)無溶血環(huán)β

溶血環(huán)α溶血環(huán)α溶血環(huán)顏色金黃灰白色草綠+—溶血菌落特征生化反應(yīng)白色+++——————————草綠甘露醇發(fā)酵試驗菊糖發(fā)酵試驗+————+————球菌和腸道桿菌病原學(xué)檢測共20頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第18頁!乳糖發(fā)酵試驗原理：腸道桿菌能分解乳糖產(chǎn)酸，指示劑溴甲酚紫(pH5．2為黃色，pH6．8為紫色)，當發(fā)酵產(chǎn)酸