多肽疫苗生產(chǎn)及質(zhì)控技術(shù)指導(dǎo)原則前言多肽疫苗是依據(jù)病原體抗原基因中已知或猜測的某段抗原表位的氨基酸序列,經(jīng)過化學(xué)合成技術(shù)制備的疫苗。傳統(tǒng)疫苗一般由兩種方式制備,一種為能誘發(fā)免疫活疫苗(例如百日咳桿菌、狂犬病毒、傷寒桿菌)。多肽疫苗由于徹底是合成的,不的抗原的微生物病原體。有些雖能進(jìn)行體外培育,但這些病原體有潛在致病性和免成的免疫原,將成為一種新型的疫苗,但還有許多理論和技術(shù)問題要繼續(xù)研究,目前尚無多肽疫苗獲準(zhǔn)上市。因此,應(yīng)實行適當(dāng)可行的途徑對這種潛能疫苗進(jìn)行生產(chǎn)及有效而又適宜實際的申報資料。同時,對每個方案中各個階段的操作經(jīng)過、中間及最后產(chǎn)品的制備,務(wù)必制定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程和質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn),并予嚴(yán)格實施。一、多肽疫苗的化學(xué)合成該肽段所針對的抗原決定簇。其次應(yīng)選擇合適的合成方式。合成中等大小的多肽也會涉及眾多反應(yīng),每加入α鏈之前,必需使其中一個形成高反應(yīng)的活化狀態(tài),這個選擇自然落到羧基上,合成因CNACBN2A-B,ANBC保護(hù)起來,才能轉(zhuǎn)化成在A-B之間形成特異性肽的形式。此外,氨基肽的側(cè)鏈基團(tuán)也能與活化羧基反應(yīng),因此也必需保護(hù)起來。這些側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)必需能耐受除去的反應(yīng),每一循環(huán)生成一個新肽鍵。主要有兩個合成策略:片段濃縮法和固相合成法(merrifield法)。片段濃縮法是經(jīng)典的所需的序列。N-末端逐步加上氨基酸的方式合成肽段。另外也引入一些新進(jìn)展包括改良的保護(hù)基因、新的固相載體、脫保護(hù)及側(cè)鏈(TADPs)(MAPs)所用技術(shù)的引進(jìn),加上肽鏈經(jīng)脂質(zhì)或碳水化合物的修飾作用,使得合成問題變得更加復(fù)雜。目前多應(yīng)用固相法,格外是在選擇和確定有效抗原表位研究方面,是合成多肽疫苗的一條可供選擇的途徑。二、多肽疫苗的生產(chǎn)工藝及質(zhì)控原決定簇的檢定,以及對載體、表位連接、結(jié)合劑、肽的呈遞方式及佐劑等的選擇理由及其相應(yīng)證據(jù)。(二)應(yīng)說明每條肽段所針對的抗原表位。內(nèi)容包括對每個表位來源的說明,當(dāng)表位的類型(B、Th、Tc學(xué)、氨基酸的連接和脫保護(hù),進(jìn)入下一步連接的推斷標(biāo)準(zhǔn),任何加入的修飾基團(tuán)有格外說明的流程圖。(四)假若肽單體為中間產(chǎn)物,應(yīng)當(dāng)對其分離鑒定并提供下述確證依據(jù)。(脂化及糖基化)情況;對肽單體中的主要雜質(zhì)(可能情況下對次要雜質(zhì))應(yīng)分離鑒定。驗證純度時可能加入的物質(zhì);連續(xù)多批產(chǎn)品的肽質(zhì)量應(yīng)保持全都。要及次要雜質(zhì)都應(yīng)規(guī)定限度要求。(七)應(yīng)對肽的穩(wěn)定性進(jìn)行評價,并制定適當(dāng)?shù)馁A存期。(八)偶聯(lián)物偶聯(lián)物中多肽及其它成分除了達(dá)到適當(dāng)?shù)囊笸?還應(yīng)符合下列規(guī)定:載體上時,應(yīng)對每一種肽所占比例進(jìn)行控制并能重復(fù)制備;聯(lián),載體表面濃縮的未結(jié)合的偶聯(lián)劑,以及對未參加結(jié)合的偶聯(lián)劑的滅活等;有證據(jù)表明偶聯(lián)物未轉(zhuǎn)變抗原序列;應(yīng)當(dāng)考慮機(jī)體對載體蛋白或其誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的潛在臨床影響;抑制的可能性,并進(jìn)行調(diào)查;應(yīng)當(dāng)最大限度地降低殘余溶劑或副產(chǎn)品的含量,并設(shè)定相應(yīng)限定要求;(九)載體肽能夠聯(lián)接或結(jié)合到載體上,選擇載體時應(yīng)謹(jǐn)慎,由于對載體的免疫應(yīng)答可能載體有刺激自身免疫的危急,應(yīng)避開選擇這些載體。載體應(yīng)有自已的檔案材料及相多糖、多聚體、脂質(zhì)體等相關(guān)的一些特征試驗。例如,聚合體和脂多糖應(yīng)當(dāng)具有可保檢測不出感染因子。(十)聚合、烷化或載體合成肽MAP)結(jié)合的肽,或肽單體合成后再進(jìn)一步形成的聚鏈的聚合,都應(yīng)有相應(yīng)的證據(jù),表明反應(yīng)經(jīng)過達(dá)到了最后可重復(fù)的階段。(十一)佐劑、防腐劑及其他添加成分為便利操作、增強(qiáng)穩(wěn)定性、延長保存期以及修飾免疫原的類型和免疫原性,原則上可在免疫原中選擇添加許多成分。這些作為非特異免疫增強(qiáng)劑的成分,特異性免疫激活作用的成分及直接作用于不同免疫細(xì)胞的成分。其中許多會產(chǎn)生自身的毒性,而且可能因與抗原聯(lián)合使用而顯著轉(zhuǎn)變化鋁、磷酸鋁或磷酸鈣,到目前為止批準(zhǔn)使用的佐劑鮮為他類。對已獲批準(zhǔn)的以鋁鹽及鈣鹽為基礎(chǔ)的佐劑,其標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)達(dá)到藥用等級(不含重金屬離子,質(zhì)量恒定,具有恒定的結(jié)合特征)。由于滅菌可能會轉(zhuǎn)變佐劑的結(jié)合特征,對不同批次佐劑應(yīng)以可重復(fù)、持續(xù)的方式處理。對待添加劑,應(yīng)提供所有成分的明確說明,闡述使用的理由。每種成分應(yīng)具有適當(dāng)?shù)姆治鰳?biāo)準(zhǔn)要求,終配方中應(yīng)限定不同成分混合物的含量。此外,應(yīng)全面評價配方的抗原及毒性特征,格外著重不同成分的混合可能會導(dǎo)致抗原發(fā)生不良的修飾作用。產(chǎn)生不良作用,也不應(yīng)引起人體副反應(yīng)。單劑量制劑不應(yīng)添加防腐劑。(十二)穩(wěn)定性進(jìn)行充分的穩(wěn)定性研究是研制疫苗的一項重要內(nèi)容。因此應(yīng)確定配方的穩(wěn)定產(chǎn)品的免疫原性及安全性進(jìn)行實時穩(wěn)定性研究。三、產(chǎn)品的質(zhì)量與檢定要求各個環(huán)節(jié)和步驟的各種成分(無論以單獨或偶聯(lián)方式)均應(yīng)建立相應(yīng)的監(jiān)控標(biāo)準(zhǔn),包括原材料質(zhì)控,加工經(jīng)過的質(zhì)控和終產(chǎn)品的質(zhì)控,以保證終產(chǎn)品安全有效。的特點應(yīng)考慮:(HPLC)、毛細(xì)管電泳(CE)、陽離子或陰離子色譜、等SDS電泳),依據(jù)疏水性的鑒別技術(shù)(反相或疏水作用層析)等相應(yīng)分析的技術(shù)。(N/CMS酸組成(AAA)分析。(三)產(chǎn)品相關(guān)的雜質(zhì)(五)人為修飾的檢測(六)效力試驗下應(yīng)包括有關(guān)疫苗功能的適宜試驗。效力試驗的主要目的是經(jīng)過測定生物活性的方式,確試驗應(yīng)將制品同時與參考品做比較,而且試驗結(jié)果經(jīng)過統(tǒng)計學(xué)檢驗。由于疫苗的作度,并由此確定接受的標(biāo)準(zhǔn)及限值,為此應(yīng)建立適宜的參考制劑。(七)生物效價測定(八)建立內(nèi)部參考品:建立適當(dāng)?shù)膮⒖计穼崿F(xiàn)這些標(biāo)準(zhǔn)也是必要的。此外,選取合適的一批中間產(chǎn)品及終產(chǎn)品(最好是選擇經(jīng)過臨床評價的制品),就其化學(xué)成制定每批產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)要求。1.25mg,鈣佐劑含量1.3mg)。對保護(hù)劑及其他添加劑應(yīng)確定相應(yīng)的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。四、臨床前安全評價臨床前安全評價的主要目的是確定新藥制品是否引起意外或不良的效應(yīng)。但實行靈活的方式評價合成肽疫苗的臨床前安全性,應(yīng)當(dāng)充分考慮使用合成肽疫苗所產(chǎn)生不良免疫病理反應(yīng)的各種可能性。必需確保使用的肽序列不具有明顯的不良藥理活性。因此,應(yīng)篩查單體肽固有有意想不到的次要活性,而這一活性可能會由于上述反應(yīng)而得到放大并產(chǎn)生危害。因此,應(yīng)全面檢查多肽及其偶合物的藥理活性?？闺目贵w可能與人體組織產(chǎn)