第一章發(fā)酵工程第一節(jié)

微生物的培養(yǎng)需要條件微生物:人們對(duì)所有形體微小、肉眼不可見的生物的統(tǒng)稱。大腸桿菌菌落電鏡下新冠病毒高倍光學(xué)顯微鏡下的酵母菌培養(yǎng)基:人們?yōu)闈M足微生物生長繁殖或積累代謝產(chǎn)物的需求而配置的混合養(yǎng)料。無菌技術(shù):只培養(yǎng)目標(biāo)微生物,排除非目標(biāo)微生物的干擾。雜菌病毒原核生物(細(xì)菌)真菌原生生物培養(yǎng)基為目標(biāo)微生物提供適宜的生長環(huán)境一、成分成分作用主要來源碳源主要作能源物質(zhì)無機(jī)碳(CO2)或有機(jī)碳(糖類)氮源合成蛋白質(zhì)等有機(jī)物N2,NH3,銨,硝酸鹽,尿素,牛肉膏,蛋白胨無機(jī)鹽調(diào)節(jié)滲透壓等NaCl,CaCl2等水作為溶劑生長因子調(diào)節(jié)促生長維生素,氨基酸,堿基等二、理化性質(zhì)不同微生物生長所需的培養(yǎng)基成分有差別。細(xì)菌培養(yǎng)基：含有較高的有機(jī)氮，常用蛋白胨和酵母提取物等配制；中性偏堿霉菌培養(yǎng)基：常用可溶性淀粉加無機(jī)物配制，或用添加蔗糖的豆芽汁等配制；中性偏酸細(xì)菌喜葷，霉菌喜素細(xì)菌喜堿，霉菌喜酸配置100mlLB培養(yǎng)基的配方配置1L馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基的配方細(xì)菌通用真菌(霉菌)通用三、分類根據(jù)物理特性分為液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基：培養(yǎng)基液體狀，沒加凝固劑，常用于

大規(guī)模快速繁殖某種微生物。固體培養(yǎng)基：培養(yǎng)基固體狀，加了凝固劑（一般是瓊脂）。包括“平板”和“斜面”。為什么？“平板”可用于分離、鑒定、活菌計(jì)數(shù)“斜面”常用于菌種保存什么作用？液體培養(yǎng)基能與微生物充分接觸菌落菌落單個(gè)或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，就會(huì)形成一個(gè)肉眼可見的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌落。不同的細(xì)菌的菌落特征不同菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。如菌落的大小、形狀、邊緣、光澤度、顏色、透明度等。大腸桿菌菌落乳白色，光滑，濕潤白色，粗糙，干燥放線菌菌落紅色，光滑，濕潤根據(jù)化學(xué)成分分為合成培養(yǎng)基和天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基：化學(xué)成分完全清楚的培養(yǎng)基，一般用于實(shí)驗(yàn)室天然培養(yǎng)基：成分還不十分清楚或成分不恒定的天然有機(jī)物制成的培養(yǎng)基。成本較低，多被用于大規(guī)模的生物發(fā)酵工業(yè)。如：馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基、麥芽汁蔗糖培養(yǎng)基、LB培養(yǎng)基（蛋白胨，酵母浸膏）等滅菌和無菌操作技術(shù)可以排除非目標(biāo)微生物的干擾消毒定義：利用較為溫和的化學(xué)或物理方法，殺死大部份致病微生物（不包括芽孢和孢子）的過程。滅菌的定義：

以強(qiáng)烈的化學(xué)劑或物理方法消滅所有微生物，包括所有細(xì)菌的繁殖體、芽孢、霉菌及病毒，而達(dá)到完全無菌之過程。

滅菌消毒技術(shù)是微生物有關(guān)工作中最普通也是最重要的技術(shù)。芽孢有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個(gè)橢圓形的休眠體，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，對(duì)干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強(qiáng)的抵抗力。例如，有的細(xì)菌的芽孢，煮沸3小時(shí)以后才死亡。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的時(shí)候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個(gè)細(xì)菌.消毒方法如：煮沸消毒、紫外線消毒、酒精消毒滅菌的方法如：灼燒滅菌法、干熱滅菌法、高壓蒸汽滅菌法、過濾滅菌法干熱滅菌法常用溫度是160℃，持續(xù)2h。高壓蒸汽滅菌鍋使用前將實(shí)驗(yàn)工具放到超凈工作臺(tái)上，打開紫外燈和過濾風(fēng)，滅菌30min。超凈工作臺(tái)G6玻璃砂漏斗過濾滅菌法孔徑最小，細(xì)菌不能濾過，用于滅菌加熱以分解的成分移液槍槍頭移液管無菌技術(shù)涂布器接種環(huán)1.培養(yǎng)基的配置過程？分裝液體培養(yǎng)基：確定配方及用量

計(jì)算、稱量、溶解調(diào)pH滅菌平板培養(yǎng)基：確定配方及用量

計(jì)算、稱量、加熱溶解調(diào)pH分裝滅菌倒平板斜面培養(yǎng)基：確定配方及用量

計(jì)算、稱量、加熱溶解調(diào)pH值分裝滅菌斜放冷卻2.培養(yǎng)基用什么方法滅菌？高壓蒸汽滅菌法、G6玻璃砂漏斗過濾滅菌法加熱會(huì)分解的物質(zhì)如尿素3.實(shí)驗(yàn)器具用什么方法滅菌？高壓蒸汽滅菌法(主要)、灼燒滅菌法、干熱滅菌法4.雙手用什么方法消毒？5.為保證無雜菌，實(shí)驗(yàn)操作（接種和培養(yǎng)基的轉(zhuǎn)移）都在哪里進(jìn)行？6.如何制備無菌水？75%酒精擦拭消毒超凈工作臺(tái)的酒精燈火焰外焰旁用三角瓶裝水，高壓蒸汽滅菌法滅菌7.培養(yǎng)基分裝時(shí)，不能將培養(yǎng)基黏附在三角瓶口、試管口、培養(yǎng)皿內(nèi)壁上，容器口或壁，否則會(huì)發(fā)生污染。因此轉(zhuǎn)移培養(yǎng)基到三角瓶口、試管口時(shí)應(yīng)用三角漏斗操作。8.操作完成后，儀器要高壓蒸汽滅菌后再保存，使用過的培養(yǎng)基要高壓蒸汽滅菌后再倒掉?；顒?dòng):配制可用于培養(yǎng)酵母菌的馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基1.目的要求:配制液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。2.材料用具:馬鈴薯、蔗糖、瓊脂、天平、試管、燒杯、三角瓶、培養(yǎng)皿、封口膜(或紗布)、牛皮紙或報(bào)紙、橡皮筋、小刀、高壓滅菌鍋、玻璃漏斗、移液器等。3.方法步驟計(jì)算：根據(jù)配方計(jì)算出所需的馬鈴薯、蔗糖和瓊脂的用量配制20%馬鈴薯浸汁：去皮→稱重→切塊→加水→煮沸→過濾加入蔗糖→定容制備斜面、固體、液體培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基：將馬鈴薯浸汁分裝→滅菌斜面培養(yǎng)基：在馬鈴薯浸汁中加入瓊脂→加熱溶化→分裝到試管→滅菌后擺成斜面固體培養(yǎng)基：將剩余的培養(yǎng)基分裝到三角瓶中，封口→滅菌→倒平板（平板培養(yǎng)基）4.注意事項(xiàng)①制作斜面培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基時(shí)要注意控制好溫度，防止培養(yǎng)基提前凝固。②斜面培養(yǎng)基試管中的液體量約為試管長度1/4(5-8mL)③培養(yǎng)基需要經(jīng)高壓蒸汽滅菌(1kg/