觀察哺乳動物胃腸平滑肌的一般(yībān)生理特性。學(xué)習(xí)哺乳類動物離體器官灌流的一種方法。實驗(shíyàn)目的第一頁，共二十五頁。實驗(shíyàn)原理哺乳動物消化管平滑肌具有肌組織共有的特性，如興奮性、傳導(dǎo)性和收縮性等。但是消化道平滑肌肉有其特點，即興奮性較低，收縮緩慢，富有伸展性，具有緊張性、自動節(jié)律性，對化學(xué)、溫度和機械(jīxiè)牽張刺激較敏感等。將離體組織器官至于模擬體內(nèi)環(huán)境的溶液中，可以在一定時間內(nèi)保持其功能。本實驗以臺氏液作灌流液，在體外觀察及記錄家兔離體腸段的一般生理特性。第二頁，共二十五頁。生理學(xué)實驗中，常用的生理溶液(róngyè)有生理鹽水、任氏液(Rinne)、樂氏液(Locke)及臺氏液(Tyrode)。這些生理溶液(róngyè)是為了在進行離體器官或組織實驗時，使標本盡可能處于近似在體內(nèi)的環(huán)境中，以保證其正常的功能活動。而用于灌流組織的液體，其電解質(zhì)成分、晶體滲透壓、pH、緩沖能力、溫度及營養(yǎng)物質(zhì)應(yīng)與組織液相近。第三頁，共二十五頁。實驗(shíyàn)材料實驗動物：家兔器械、藥品：電熱恒溫水浴鍋、浴槽、張力換能器、生物機能實驗系統(tǒng)、注射器、培養(yǎng)皿、溫度計、燒杯、螺絲(luósī)夾、臺氏液、0.01%去甲腎上腺素、0.01%乙酰膽堿、阿托品。第四頁，共二十五頁。方法(fāngfǎ)和步驟1、標本制備流程

擊昏家兔：用木槌猛擊兔頭枕部，使其昏迷。立即剖開腹腔，找出胃幽門與十二指腸交界處，快速取長20~30cm的腸管(chángguǎn)，先將與該腸管(chángguǎn)相連的腸系膜沿腸緣剪去，置于供氧臺氏液中輕輕漂洗，把腸內(nèi)容物基本洗凈。將腸管(chángguǎn)分成數(shù)段，每段長2-3cm，兩端各系一條線，保存于供氧的38℃左右的臺氏液中。第五頁，共二十五頁。2、儀器安裝與調(diào)試實驗安裝恒溫水浴鍋控制加熱，恒溫工作點定(diǎndìnɡ)在38℃。將充滿氧氣的道氏袋與通氣鉤相連接，將腸段一端系在通氣管鉤上，另一端與張力換能器相連。控制通氣量，使氧氣從通氣管前端呈單個而不是成串逸出。儀器調(diào)試：選擇“實驗項目”中的“消化實驗”選中“消化道平滑肌生理特性”。第六頁，共二十五頁。第七頁，共二十五頁。3、觀察項目(xiàngmù)(附部分參考實驗結(jié)果）待標本穩(wěn)定后，記錄小腸平滑肌收縮的對照曲線。停止供氣1min，記錄曲線變化(biànhuà)。出現(xiàn)明顯變化(biànhuà)后立即供氣。第八頁，共二十五頁。第九頁，共二十五頁。將藥液管中的臺氏液全部換成25度的臺氏液，觀察變化(biànhuà)。再更換38度臺氏液，觀察有何反應(yīng)。第十頁，共二十五頁。第十一頁，共二十五頁。同法將藥液管中的臺氏液全部換成45度的臺氏液，觀察變化(biànhuà)。再更換38度臺氏液，觀察有何反應(yīng)。第十二頁，共二十五頁。第十三頁，共二十五頁。4）記錄對照腸段運動曲線后，加入(jiārù)2滴腎上腺素(1：10

000)，觀察并記錄曲線變化。第十四頁，共二十五頁。第十五頁，共二十五頁。5）記錄對照腸段運動曲線后加入1—2滴乙酰膽堿(1：100000)，觀察(guānchá)并記錄曲線變化。

第十六頁，共二十五頁。第十七頁，共二十五頁。6）記錄對照(duìzhào)腸段運動曲線后加入3滴阿脫品后立即加入與前面同樣劑量的乙酰膽堿，記錄并觀察曲線變化。第十八頁，共二十五頁。注意事項實驗過程中，臺氏液應(yīng)保持38℃，浴槽內(nèi)液面高度應(yīng)保持恒定。通氣管的氣泡逸出速度不可(bùkě)太快，以單個氣泡陸續(xù)出現(xiàn)為宜。否則會影響腸段運動的曲線記錄。每項實驗效果明顯后，立即更換新鮮臺氏液，一般應(yīng)沖洗2－3次，待腸段恢復(fù)正?；顒雍笤龠M行下一項目。放大器零點調(diào)好后不要再移動旋鈕，以免影響基線。第十九頁，共二十五頁。結(jié)論(jiélùn)消化道平滑肌具有自律性，但其收縮緩慢，節(jié)律性不規(guī)則。消化道平滑肌具有一定的緊張性。消化道平滑肌的活動易受溫度(wēndù)、pH值及其它化學(xué)因素、藥物因素的影響。第二十頁，共二十五頁。實驗討論(tǎolùn)（參考）正常情況下，我們觀察到離體小腸平滑肌在臺氏液中可以自動地、緩慢地收縮，但其節(jié)律性很不規(guī)則。小腸平滑肌自律性產(chǎn)生的離子基礎(chǔ)尚未完全清楚。目前認為，它的產(chǎn)生可能與細胞膜上生電性鈉泵的活動具有波動性有關(guān)，當(dāng)鈉泵的活動暫時受抑制時，膜便發(fā)生去極化(jíhuà)；當(dāng)鈉泵活動恢復(fù)時，膜的極化(jíhuà)加強，膜電位便又回到原來的水平。

第二十一頁，共二十五頁。在浴槽中加入0.01%乙酰膽堿（Ach）2滴（約0.2ml）后，可見離體腸管活動增強，描記曲線出現(xiàn)收縮頻率變快，幅度增加。出現(xiàn)上述現(xiàn)象(xiànxiàng)的機理，目前認為與消化道平滑肌細胞產(chǎn)生動作電位的離子基礎(chǔ)是Ca2+的內(nèi)流有關(guān)。乙酰膽堿可與肌膜上的M受體結(jié)合，使得兩類通道開放：一類為電位敏感性Ca2+專用通道，另一類為特異性受體活化Ca2+專用通道。前一類通道對Ach敏感，小劑量Ach即引起開放；后一類通道對Ach相對不敏感，只有大劑量Ach才會引起開放。這兩類通道開放都使得肌漿中Ca2+增高，進而激活肌纖蛋白—肌凝蛋白—ATP系統(tǒng)，使平滑肌收縮，肌張力增加。第二十二頁，共二十五頁。在浴槽中加入0.01%腎上腺素2滴（約0.2ml）后，可見離體腸管活動減弱，描記曲線出現(xiàn)收縮頻率變慢，幅度(fúdù)減小以及基線下移。出現(xiàn)上述現(xiàn)象的機理，目前認為與腸肌細胞膜上存在α和β兩種受體，α受體又分為α抑制型受體和α興奮型受體有關(guān)。腎上腺素作用于α抑制型受體，引起腸肌膜上一種特異性受體活化，使K+外流增多，細胞膜發(fā)生超極化，腸肌興奮性降低，肌張力下降。同時，腎上腺素還作用于β受體，①它的激活引起腸肌細胞膜中的cAMP合成增多，cAMP激活腸肌膜及肌漿網(wǎng)上Ca2+泵活動，使肌漿中Ca2+濃度降低，亦使肌張力降低；②β受體激活后還促使K+及Ca2+外流增加，加速膜的超極化，促進了腸肌肌張力的減低。第二十三頁，共二十五頁。浸浴小腸腸管的臺氏液溫度以38℃~40℃為宜，低于或高于這個溫度，都會影響結(jié)果。因為腸管平滑肌對溫度改變極為敏感，當(dāng)溫度降到30℃以下時，由于代謝水平的降低，興奮性減弱，可出現(xiàn)收縮曲線基線下移，頻率變慢，收縮幅度變小。有時可能會見到基線先上移后下降的現(xiàn)象。這是因為降溫本身對腸管是一種(yīzhǒnɡ)刺激，也可短暫地加強代謝活動，所以肌張力升高。當(dāng)溫度高于40℃時，由于酶活性提高，各離子通道活性增加，使得基線上移，收縮頻率增高，幅度增加。當(dāng)然，如果臺氏液溫度過高（50℃以上），可因蛋白變性，使腸管收縮功能消失。第二十四頁，共二十五頁。內(nèi)容(nèiróng)總結(jié)觀察哺乳動物胃腸平滑肌的一般生理特性。而用于灌流組織的液體，其電解質(zhì)成分、晶體滲透壓、pH、緩沖能力、溫度及營養(yǎng)