病毒的檢測方法病毒性疾病的臨床診斷主要是利用建立在抗原和抗體特異性反應基礎(chǔ)上的免疫學方法，這些方法或者是以已知抗原來檢測抗體，或者是以已知抗體來檢測抗原，免疫學方法所進行的病毒診斷準確、靈敏、快速、簡便、成本低。用于病毒學的免疫學方法免疫學檢測技術(shù)原理病毒中和抗體中和病毒的感染性，CPE抑制，蝕斑減數(shù)或動物被保護血凝抑制抗體抑制病毒的血細胞凝集作用酶免疫試驗酶標記抗原(或抗體)與抗體(或抗原)結(jié)合底物改變顏色放射免疫測定放射性標記的抗體(或抗原)與抗原(或抗體)結(jié)合，放射性同位素計數(shù)器或放射自顯影檢查免疫熒光熒光素標記的抗體與細胞內(nèi)抗原結(jié)合用熒光或紫外顯微鏡檢查免疫過氧化物酶染色過氧化物酶標記的抗體與細胞內(nèi)抗原結(jié)合；在底物作用下，產(chǎn)生有色的沉淀物免疫電鏡抗體聚集的病毒體在電鏡下可見免疫膠體金膠體金標記的鏈酶親和素與DNA上的生物素特異性結(jié)合，通過信號放大，直接目視化檢測病毒種類免疫毛細管區(qū)帶電泳空毛細管兩端加一個外加電壓，通過電泳遷移和電滲流的作用，樣品中的不同組分由于遷移率的不同而分開免疫PCR用抗體來捕獲抗原，提取核酸后，再用PCR擴增DNA片段，從而放大抗原抗體反應快速免疫濾紙測定法把待測病毒的抗體吸附在乳膠顆粒上，通過大顆粒乳膠間接反應小顆粒病毒的存在補體結(jié)合抗原-抗體復合物與補體結(jié)合，使得對溶血素敏感的綿羊紅血球細胞不再溶血免疫粘連血凝抗原-抗體復合物結(jié)合凝集紅血球細胞的C3免疫雙擴散抗體與抗原在凝膠中產(chǎn)生可見的沉淀線單向擴散抗體從孔中擴散，與凝膠中的抗原形成沉淀帶單向溶血抗體擴散到凝膠中，加入的補體溶解吸附有病毒的紅血球細胞反向被動血凝抗原凝集被抗體致敏的紅血球細胞乳膠凝集抗體凝集結(jié)合有抗原的乳膠顆粒1.

血凝抑制試驗血凝抑制試驗是于有血細胞凝集活性的病毒懸液中，加入特異性的病毒抗菌素血清，再加入適宜種類運動的紅血球細胞，并在適宜溫度和pH條件下孵育。由于特異性的病毒抗體與病毒的有血細胞凝集活性的表面蛋白質(zhì)（如流感病毒的血凝素），可抑制血細胞凝集反應發(fā)生，這是血凝抑制（HemagglutinationInhibition）現(xiàn)象。利用這一現(xiàn)象所設(shè)計的血凝抑制試驗是鑒定血細胞凝集性病毒的常用方法。這種方法靈敏，除披膜病毒（Togavirus）以外，對于其它的病毒都有很高的特異性，而且方法簡單、迅速、實驗成本低。在試驗時，抗血清必須經(jīng)56℃、30分鐘預處理，以除去非特異性抑制物。2.

中和試驗中和試驗是病毒免疫學中一個非常重要的試驗。在病毒的中和作用（neutralization）性質(zhì)上建立，即某些特異性的病毒抗體與病毒作用后，能夠使其失去感染性，抑制病毒的繁殖。這類病毒抗體叫作中和抗體（neutralizingAbs）。病毒的中和作用不但表現(xiàn)在質(zhì)的方面，即一種病毒的感染性只能被特異性的抗體中和，而且還表現(xiàn)在量的方面，即中和一定量病毒的感染性必須有一定效價的病毒抗血清。中和試驗仍是以測定病毒感染性的方法進行，因此又有不同的方法。3．補體結(jié)合試驗（Complementfixationassay）補體結(jié)合試驗可用于檢測血清中病毒抗體的存在。補體的作用為能與抗原—抗體復合物結(jié)合，但不能與抗原單獨結(jié)合，也不易與抗體單獨結(jié)合；補體的作用沒有特異性，能與任何一組抗原抗體復合物結(jié)合，它也能與紅細胞和溶血素的復合物結(jié)合，引起紅細胞破壞（溶血）。病毒抗原與相應抗體結(jié)合后，其抗原抗體復合物可以結(jié)合補體，如再加入紅細胞和溶血素，則不會產(chǎn)生溶血現(xiàn)象；若血清中無病毒抗體，補體與紅細胞結(jié)合則會引起溶血。此反應即為補體結(jié)合反應。補體結(jié)合實驗操作繁雜，且需十分細致，反應的各個因子的量必須有恰當?shù)谋壤?.

酶聯(lián)免疫吸附測定（Enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）酶聯(lián)免疫吸附測定是一種采用固相（主要為聚苯乙烯酶聯(lián)板）吸附，將免疫反應和酶的高效催化反應有機結(jié)合的方法，其基本原理是以酶催化的顏色反應指示抗原抗體的結(jié)合。ELISA

方法簡單，靈敏度高，特異性強，適于大量樣品的檢測，目前該方法已被廣泛用于植物病毒檢測。在此基礎(chǔ)上加以改進又發(fā)展了一些新的檢測方法，如A

蛋白酶聯(lián)吸附（SPA-ELISA）、斑點免疫吸附（DIBA）、直接組織斑免疫測定（IDDTB）、伏安酶聯(lián)免疫分析、快速ELISA

等。5.免疫沉淀(Immunoprecipation)和免疫印跡(Immunoblotting)免疫沉淀反應主要用于抗原或者抗體的定性檢測。其原理是指可溶性抗原與相應抗體在有電解質(zhì)存在的情況下，按適當比例所形成的可見沉淀物現(xiàn)象。據(jù)此現(xiàn)象設(shè)計的沉淀實驗主要包括絮狀沉淀試驗，環(huán)狀沉淀試驗和凝膠內(nèi)的沉淀試驗。凝膠內(nèi)的沉淀試驗依所用的實驗方法又可分為免疫擴散實驗和免疫電泳技術(shù)2類。免疫印跡(Immunoblotting)又稱蛋白質(zhì)印跡(Westernblotting)，是一種借助特異性抗體鑒定抗原的有效方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新的免疫生化技術(shù)。將含有目標蛋白(抗原)的樣品首先用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS)或非變性電泳(Native)等分離后，通過轉(zhuǎn)移電泳原位轉(zhuǎn)印至硝酸纖維素膜或其它膜的表面，然后將膜表面的蛋白質(zhì)再用抗原抗體反應進行特異性檢測。例如，將經(jīng)SDS分離的蛋白質(zhì)帶轉(zhuǎn)移到膜上后，膜用封閉液處理，然后與第一抗體反應，膜經(jīng)漂洗后再與偶有辣根過氧化物酶(HRP)或堿性磷酸酶(AP)的第二抗體反應，加人生色底物反應之后，即可顯示出目標蛋白的位置。由于免疫印跡具有SDS的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性，其優(yōu)點是方法簡便、標本可長期保存、結(jié)果便于比較。6.

免疫膠體金技術(shù)（Immunogold-labelassay）免疫膠體金技術(shù)最早起源于電鏡方面的研究，由于金在生物學上是惰性的，且有良好的電荷分布，可以和蛋白質(zhì)（如抗體、A

蛋白等）緊密結(jié)合，因此廣泛應用于生物學和微生物學的各個領(lǐng)域。其原理是用檸蒙酸鈉將氯金酸金離子還原為膠體金。膠體金顆粒在適當?shù)臈l件下，以靜電、非共價鍵方式吸附抗體IgG（或A

蛋白）分子，從而形成穩(wěn)定的IgG（或A

蛋白）-

膠體金復合物。通過抗原抗體特異性結(jié)合，抗體（或A

蛋白）膠體金復合物就可以結(jié)合在抗原上。金顆粒吸附在病毒粒體周圍，從而得到明顯的鑒別性和可見度。免疫金-銀染色技術(shù)（Immunogold-silverstaining），也稱作金標銀染技術(shù)（GoldLabelSilverStain,GLSS）。其基本原理是標記有納米金顆粒的鏈霉親和素與靶分子上的生物素特異性結(jié)合，再以銀顆粒包裹在納米金周圍，從而實現(xiàn)目視化檢測。由于金標銀染技術(shù)具有方便，快捷，經(jīng)濟的優(yōu)點，因此是一項非常有前景的病毒檢測技術(shù)。20世紀80年代發(fā)展起來的斑點免疫金滲濾試驗（Gotimmunogoldfitrationassay）是一種快速免疫膠體金診斷技術(shù)，該技術(shù)以硝酸纖維素膜為載體，利用微孔濾膜的滲濾濃縮和毛細管作用，使抗體抗原反應和洗滌在一特殊的滲濾裝置中迅速完成，從而大大縮短了檢測時間。在此基礎(chǔ)上，又建立了更為簡易快速的膠體金免疫層析試驗（Goldimmunochromatographyassay），該技術(shù)以硝酸纖維素膜為載體，利用微孔膜的毛細管作用，使滴加在膜條一端的液體慢慢向另一端滲透移動，在移動的過程中，抗體抗原發(fā)生反應，并通過免疫金的顏色顯示出來。上述兩種快速檢測技術(shù)的優(yōu)點是簡便、快速、直接，不需要酶促反應底物，除試劑外不需任何特殊儀器設(shè)備，特別適于田間快速診斷和口岸檢疫。但不能準確定量，靈敏度與酶聯(lián)免疫相當。7.

快速免疫濾紙測定法（Rapidimmuno-filterpaperassay，RIPA）快速免疫濾紙測定類似乳膠凝集反應，其原理是把待測病毒的抗體吸附在乳膠顆粒上，通過大顆粒乳膠間接反應小顆粒病毒的存在。所不同的是RIPA使用了一種紅色乳膠，從而使檢測更加簡單和直觀。RIPA目測檢測提純TMV的靈敏度分別可達5ng/ml～50ng/ml。8.免疫毛細管區(qū)帶電泳（Immuno-capillaryzoneelectrophoresis，I-CZE）毛細管區(qū)帶電泳是在裝有一種電解液的空毛細管兩端加一個外加電壓，在外加電壓作用下，通過電泳遷移和電滲流的作用，樣品中的不同組分由于遷移率的不同而分開。I-CZE將血清學反應?；院兔毠軈^(qū)帶電泳靈敏、快速、可自動檢測的特點結(jié)合起來，實時檢測抗原-抗體復合體。I-CZE靈敏度高，且可快速分析多個樣品，因而在無病毒苗木檢測、抗病品種選育、植物檢疫、種質(zhì)篩選等方面可發(fā)揮巨大作用，有廣闊的應用前景。9.

免疫PCR

（Immuno-PCR

）近年來出現(xiàn)的免疫PCR

是一種將抗原抗體反應的高特異性與PCR

的高靈敏度有機結(jié)合的檢測技術(shù)，與酶聯(lián)檢測技術(shù)相比，免疫PCR

是先用抗體來捕獲抗原，提取核酸后，再用PCR擴增DNA片段，從而放大抗原抗體反應，大大提高了檢測靈敏度。10.

固相放射免疫測定

(solid-phaseradioimmunoassay,SPRIA)標記抗原和非標記抗原對特異性抗體進行競爭反應，由于標記抗原和非特異抗體是固定的，所以標記抗原抗體復合物形成的量隨非標記抗原的量而改變。非標記抗原量增加，標記抗原體復合物相應減少，游離的標記抗原相應增加，即受檢標本中抗原濃度與抗原-抗體中的放射性強度呈反比。測定其放射性即可推算出未知抗原的量。其優(yōu)點是靈敏度高、特異性強，準確度好。但存在著放射性損傷的危險。如此諸多的免疫學方法在病毒鑒定中主要用于兩個方面的工作：第一，將待鑒定的病毒與已知病毒的抗血清，或者是待鑒定病毒的抗血清學試驗，對其進行分類鑒定；第二，在病毒性疾病的臨床診斷中，將所分離到的病毒與患病宿主的急性期和恢復期的雙份血清分別進行血凝抑制、酶聯(lián)免疫吸附等免疫學試驗，若恢復期的病毒抗體效價較急性期有4倍增高，可基本確認這種病毒是引起疾病的病原病毒。如果病毒已經(jīng)鑒定，更可明確疾病的性質(zhì)。除了這些免疫學方法外，已有一些分子生物學技術(shù)用于病毒的臨床診斷：（1）多聚酶鏈式反應（PCR）多聚酶鏈反應（PCR）是一種在體外高效擴增特異性DNA的方法。其原理是用一對與雙鏈DNA互補的人工合成寡核苷酸作引物，使靶DNA在試管內(nèi)特異地反復復制，直到能夠用標準的核酸雜交方法檢測出來。此復制過程可導致靶DNA上百萬倍擴增，擴增產(chǎn)物的由兩個引物與DNA模板結(jié)合部位之間的距離決定。其方法是靶DNA首先在90~95℃加熱變性，冷卻至37~50℃退火，使引物與靶DNA的特異序列互補配對，在67~70℃由大腸桿菌Taq聚合酶進行每一條鏈的復制。新合成的DNA鏈含引物的互補序列，可作為下一輪聚合反應的模板。如此變性、退火、聚合，在溫度91、50、67℃調(diào)節(jié)下反復進行，使靶DNA大量擴增，擴增的DNA拷貝數(shù)（Y）、放大效率（X）和循環(huán)次數(shù)（n）有以下關(guān)系：Y=（1+X）n。由于多聚酶鏈反應能夠直接高效擴增核酸，所以即使只要有極微量的病毒核酸存在，經(jīng)擴增后都可以方便地檢出，對其進行克隆和序列測定，或以其它方法進行分析。通過選擇特異性的寡核苷酸引物，也可以確定病毒的類型。原則上，只要有一個病毒基因存在，就可以利用這一技術(shù)檢測出來，故大大提高了病毒檢測方法的靈敏性。第一例人免疫缺陷病毒2型（HIV-2）就是用這種方法發(fā)現(xiàn)的。對于DNA病毒可以直接進行擴增，而對于大多數(shù)的RNA病毒，則需先將RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA再進行PCR擴增，此方法稱RT-PCR（Reversetranscription-PCR）。用PCR檢測植物病毒所需時間短，靈敏度特別高。近年來，在此基礎(chǔ)上又發(fā)展了多種方法用于植物病毒檢測。如復合PT-PCR是在同一RT-PCR反應體系中用幾對不同的引物同時檢測多個目的片段；PCR-ELISA是用ELISA代替瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物，靈敏度高。（2）分子信標（Molecularbeacon）分子信標是具有莖環(huán)結(jié)構(gòu)的一段單鏈核酸分子，5'-端和3'-端序列互補形成“莖”，與目標序列互補的探針序列為“環(huán)”，在5'-端連接熒光組分，3'-端連接猝滅組分。反應開始時先將反應液加熱到80℃，這時分子信標變性，無莖環(huán)結(jié)構(gòu)，不管有無目標序列均有熒光。當溫度逐漸降到20℃時，連續(xù)檢測其熒光強度。如果反應中產(chǎn)生與分子信標互補的目標序列，當溫度降到解鏈溫度時，分子信標和目標序列雜交，熒光部分從猝滅部分移開，從而發(fā)出熒光。如果反應中沒有目標序列，分子信標的兩臂相遇形成莖環(huán)結(jié)構(gòu)，不會產(chǎn)生熒光。由于只有與互補序列雜交后分子信標才發(fā)出熒光，未雜交的信標不發(fā)熒光，因此不需要從反應混合物中除去未雜交的分子信標，可實時定量檢測，靈敏度高。（3）實時定量PCR（Real-timeQuantitativePCR）實時定量PCR

是將RT-PCR

和熒光檢測相結(jié)合，利用TaqDNA

聚合酶的5'-端核酸酶活性來切割在擴增過程中與目標序列退火的熒光探針。探針-端連接熒光組分，3'-端連接猝滅組分，當探針完整時，無熒光出現(xiàn)。在PCR過程中，熒光探針?；缘嘏c兩引物擴增產(chǎn)物間的一段序列退火后被TaqDNA聚合酶切割，熒光組分與猝滅組分分開，產(chǎn)生熒光信號，熒光信號的強度與目標序列濃度或拷貝數(shù)成比例。在每一循環(huán)中，都會有更多的分子被切割下來，熒光強度呈指數(shù)增長。實時RT-PCR

不僅可避免假陽性的出現(xiàn)、提高檢測靈敏度、實時定量檢測，并且可在一個反應管內(nèi)完成，減少了污染，反應自動完成，易定量。（4）核酸雜交技術(shù)（Nucleicacidhybridization）核酸雜交是兩段具有一定的同源性、來源不同的核酸分子在去掉變性條件后，互補的區(qū)段退火形成異質(zhì)雙鏈分子的過程。核酸雜交是先將待測核酸固定在膜上，然后用核酸探針與其進行雜交，使雜交體帶上標記而被顯示出來。一般采用核酸點雜交法來檢測植物病毒，直接把病毒核酸點到NC膜上再使之與探針雜交；也有的直接把病毒樣品點到NC膜上。檢測的專化性程度取決于探針與病毒核酸序列的互補程度。核酸雜交技術(shù)適用于DNA病毒、RNA病毒及類病毒的檢測，靈敏度高、特異性強。核酸雜交還可和RT-PCR

結(jié)合使用，用于病毒檢測的有斑點雜交、細胞內(nèi)原位雜交、DNA印跡雜交、RNA印跡雜交等。（5）基因芯片技術(shù)基因芯片技術(shù)又稱DNA芯片、生物芯片（biochip）、微陣列（microarray）。其原理是：將已知的生物分子探針或基因探針，大規(guī)?；蛴行蚺挪加谛K硅片等載體上，與待測樣品中的生物分子或基因序列相互作用和并行反應，在激光的激發(fā)下，產(chǎn)生的熒光譜信號被接受器收集，計算機自動分析處理數(shù)據(jù)并報告結(jié)果。其優(yōu)點是：可以一次性完成大量樣品DNA序列的檢測和分析，解決了傳統(tǒng)核酸雜交技術(shù)的許多不足?；蛐酒鶕?jù)所用探針的類型不同分為cDNA微陣列(或cDNA微陣列芯片)和寡核苷酸陣列(或芯片)，根據(jù)應用領(lǐng)域不同而制備的專用芯片如毒理學芯片(Toxchip)、病毒檢測芯片(如肝炎病毒檢測芯片)、P53基因檢測芯片等。芯片技術(shù)在病毒等微生物學診斷和流行病學調(diào)查方面有著廣闊的應用前景?；蛐酒夹g(shù)不僅避免了繁瑣而費時的病原微生物培養(yǎng)，而且不需要等到抗體的出現(xiàn)，為病原微生物診斷提供了強有力的技術(shù)手段。Hauser等應用DNA芯片技術(shù)在艾滋病患者出現(xiàn)抗體反應之前檢測到艾滋病病毒，對該病的早期診斷意義重大。此外，基因芯片技術(shù)對人巨細胞病毒、肝炎病毒、結(jié)核分枝桿菌的診斷及致病微生物的鑒別亦發(fā)揮一定作用。練習：一、單項選擇題1．今年3月12日，國家藥監(jiān)局發(fā)布通告，五款新冠抗原自測產(chǎn)品正式上市，居民可購買試劑盒自測新冠病毒抗原。新冠病毒抗原檢測試劑盒利用了人工標記的抗體，檢測新冠病毒表面的特定抗原。與核酸檢測相比，抗原檢測因為沒有擴增，敏感性要略微低一點，但一旦檢測出陽性，就會具有很強的價值。以下關(guān)于抗原和抗原檢測的敘述，正確的是（）A．抗原是由漿細胞產(chǎn)生的免疫活性物質(zhì)B．抗原檢測陰性的人一定不會是感染者C．抗原檢測可以逐步取代核酸檢測作為確診依據(jù)D．抗原檢測利用了抗原抗體特異性結(jié)合的原理2．導致新冠肺炎的病原體是“2019﹣nCoV”病毒，該病毒為RNA病毒，其序列中具有RNA聚合酶基因，無逆轉(zhuǎn)錄酶基因?？焖贉蚀_的檢測對疫情防控起著至關(guān)重要的作用。病毒的檢測方法有：用“新冠病毒核酸檢測試劑盒”，檢測病毒的遺傳物質(zhì)RNA；特異性抗原蛋白檢測，即檢測病毒表面的一種糖蛋白；特異性抗體檢測，即檢測感染者體內(nèi)通過免疫反應所產(chǎn)生的某種抗體。下列有關(guān)說法不正確的是（）A．方法都需要從患者體內(nèi)采集病毒樣本B．方法都需要用到抗原﹣抗體雜交的方法C．某人有可能為陽性為陰性，也可能為陽性為陰性D．由于RNA相比DNA穩(wěn)定性差，往往將病毒樣本的RNA進行RT﹣PCR，即以病毒RNA為模板反轉(zhuǎn)錄成cDNA，再PCR擴增，然后進行分段測序，在該過程中需要用到的工具酶有逆轉(zhuǎn)錄酶、DNA聚合酶3．導致新冠肺炎的病原體是“2019﹣nCoV”病毒，該病毒為RNA病毒，其序列中具有RNA聚合酶基因，無逆轉(zhuǎn)錄酶基因?？焖贉蚀_的檢測對疫情防控起著至關(guān)重要的作用。病毒的檢測方法有：用“新冠病毒核酸檢測試劑盒”，檢測病毒的遺傳物質(zhì)RNA；特異性抗原蛋白檢測，即檢測病毒表面的一種糖蛋白；特異性抗體檢測，即檢測感染者體內(nèi)通過免疫反應所產(chǎn)生的某種抗體。下列有關(guān)說法不正確的是（）A．方法都需要從患者體內(nèi)采集病毒樣本B．方法都需要用到抗原﹣抗體雜交的方法C．某人有可能為陽性為陰性，也可能為陽性為陰性D．由于RNA相比DNA穩(wěn)定性差，往往將病毒樣本的RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA，擴增之后進行分段測序，在該過程中需要用到的酶有逆轉(zhuǎn)錄酶、DNA聚合酶二、非選擇題4．通過咽拭子取樣進行RT﹣PCR技術(shù)檢測是目前臨床上診斷新型冠狀病毒感染疑似患者的常用方法，用于核酸檢測的RT﹣PCR試劑盒的部分工作原理簡圖如圖。請回答問題。（1）RT﹣PCR是指以病毒的RNA為模板通過逆轉(zhuǎn)錄過程合成，并對該產(chǎn)物進行PCR擴增的過程。PCR擴增時，退火溫度的設(shè)定是成敗的關(guān)鍵。退火溫度過高會破壞與的堿基配對。（2）利用RT﹣PCR試劑盒對新型冠狀病毒進行檢測時，除借助上述RT﹣PCR技術(shù)外，還需要有特異性探針。探針是指以放射性同位素、生物素或熒光染料等進行標記的已知核苷酸序列的核酸片段，核酸探針與目標核苷酸序列間的分子雜交遵循。（3）為研制抗病毒A的單克隆抗體，某科研團隊以小鼠為實驗材料，進行了圖2相關(guān)實驗。下表為部分實驗步驟，請完成表格。實驗步驟的目的簡要操作過程誘導小鼠產(chǎn)生能夠分泌特定抗體的B淋巴細胞實驗前必須給小鼠甲注射制成單細胞懸液取小鼠脾臟剪碎，用處理使其分散成單個細胞，加入培養(yǎng)液用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交細胞將B淋巴細胞和骨髓瘤細胞用試劑處理后，將多種細胞在HAT培養(yǎng)基上中培養(yǎng)篩選出克隆化培養(yǎng)和專一抗體檢測進行二次篩選使能產(chǎn)生目標抗體的雜交細胞大量將二次篩選出的能產(chǎn)生目標抗體的雜交細胞注射到小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)或在體外培養(yǎng)5．新冠病毒的流行給人類生活造成極大的影響。研發(fā)疫苗是防控新冠肺炎疫情的有效措施。3月初，我國自主研發(fā)的新冠病毒抗原檢測試劑盒上市，適用于三類人群自行篩查，有利于提高“早發(fā)現(xiàn)”能力?；卮鹣铝袉栴}：（1）人接種疫苗后，疫苗中的有效成分作為刺激機體產(chǎn)生特異性抗體。一旦新冠病毒侵入已免疫的機體，會迅速繁殖、分化，產(chǎn)生大量抗體?？贵w在患者體內(nèi)的作用是。（2）侵入機體的新冠病毒會激活T細胞增殖分化為，直接攻擊被病毒入侵的細胞，釋放出的病毒被吞噬、消滅。（3）新冠病毒抗原檢測試劑盒檢測新冠病毒的原理是。6．新冠肺炎是由新冠病毒感染引起的呼吸道傳染病。某些患者早期病情較輕，后期因發(fā)生細胞因子風暴病情突然加重。圖示為細胞因子風暴造成肺損傷的機制?；卮鹣铝袉栴}：（1）為及時確診，科學家研制了基因檢測試劑盒，其機理為：分離待測個體細胞的總RNA，在酶的作用下得到相應的DNA，該DNA擴增后將樣本中微量的病毒信息放大，最后以熒光的方式讀取信號。這種方法也會出現(xiàn)假陰性現(xiàn)象，請分析其中的原因（答出一點即可）。（2）預防新冠肺炎的有效措施是接種新型冠狀病毒滅活疫苗，滅活的含義是。（3）據(jù)圖可知，細胞因子風暴造成肺損傷的機制是。利用的受體免疫實驗動物后，制備的單克隆抗體可用于新冠肺炎細胞因子風暴的治療。相較于從動物血清中分離所需抗體，單克隆抗體具有特點。生產(chǎn)單克隆抗體的過程，需要用到的動物細胞工程技術(shù)有（4）我國醫(yī)療工作者用臍帶間充質(zhì)干細胞靜脈輸入法對4例新冠肺炎重癥患者進行了治療，效果良好。干細胞的特點是，臍帶間充質(zhì)干細胞除有干細胞特點外，還可以分泌多種營養(yǎng)因子和調(diào)節(jié)物質(zhì)，其表面抗原不明顯，不會引起患者免疫排斥。由此分析，在治療過程中間充質(zhì)干細胞發(fā)揮的作用可能是。（至少答出兩點）7．研究人員基于新型冠狀病毒（2019﹣nCoV）表面抗原研發(fā)出靈敏性高的抗體診斷試劑盒，采一滴血僅十分鐘就可以得出檢測結(jié)果。如圖是新型冠狀病毒（2019﹣nCoV）引發(fā)機體免疫反應的部分示意圖。請分析回答：（1）2019﹣nCoV侵入人體后，大多數(shù)病毒會被吞噬細胞吞噬，該過程屬于人體第道防線。除防御功能之外，免疫系統(tǒng)還具有功能。圖中Ⅰ～Ⅶ表示不同種類的細胞，其中不能特異性識別抗原的有（填序號）。（2）細胞Ⅰ（填細胞名稱）把病毒特有的抗原暴露出來，呈遞給輔助性T細胞，使該細胞開始增殖、分化并分泌，進而產(chǎn)生體液免疫和細胞免疫。（3）研究人員研發(fā)的靈敏性高的抗體診斷試劑盒能檢測出抗原利用的免疫學原理是。（4）免疫預防，一般要進行預防接種。疫苗研制成為抗2019﹣nCoV的首選，多次注射疫苗的目的是使人體內(nèi)產(chǎn)生。8．EB病毒又稱人類皰疹病毒4型（HHV﹣4）。它主要感染人類口咽部的上皮細胞和B淋巴細胞。臨床表現(xiàn)多樣，但有三個典型癥狀為發(fā)熱、咽炎和頸淋巴結(jié)腫大。隨著疾病的發(fā)展，病毒可播散至其他淋巴結(jié)。病毒攜帶者和病人是本病的傳染源。（1）EB病毒侵入人體后，臨床表現(xiàn)發(fā)熱的現(xiàn)象，若某患者的體溫維持在39.5度的高溫，此時患者體內(nèi)的產(chǎn)熱量（填大于、等于或小于）散熱量。（2）EB病毒侵入人體后，吞噬細胞一方面可以吞噬消滅病毒，另一方面將處理后的抗原呈遞給T細胞，上述過程是人體的第道防線在發(fā)揮作用。當EB病毒侵入宿主細胞后，主要通過免疫來清除病毒。（3）預防傳染病的重要措施是接種疫苗，目前市場上已經(jīng)有針對EB病毒的疫苗問世，接種疫苗預防疾病的原理是。（4）在EB病毒的臨床檢測中，利用靈敏度高的抗體診斷試劑盒檢測血清中相應的EB抗原，其免疫學原理是利用了抗體與抗原結(jié)合的具有性。9．根據(jù)材料回答問題：材料一：科學家研究發(fā)現(xiàn)新型冠狀病毒S蛋白（Spikeprotein，刺突蛋白）可與宿主細胞的病毒受體結(jié)合，是決定病毒入侵易感細胞的關(guān)鍵蛋白。（1）以S蛋白作為可制備單克隆抗體生產(chǎn)快速檢測新冠病毒的試劑盒。單克隆抗體制備過程中有兩次篩選，第一次篩選的目的是得到的雜交瘤細胞，該雜交瘤細胞還需進行，經(jīng)過多次篩選，就可獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的雜交瘤細胞。材料二：新型冠狀病毒核酸檢測采用熒光定量PCR儀，通過檢測熒光信號的累積（以Ct值表示）來確定樣本中是否有病毒核酸。新冠病毒的遺傳物質(zhì)為RNA，科學家先將病毒RNA逆轉(zhuǎn)錄，再將得到的cDNA進行多聚酶鏈式反應擴增得到了大量DNA片段（如圖所示）。（2）在上述技術(shù)中，用到的酶有（至少寫出兩種）。（3）科學家已測出新冠病毒的核酸序列，據(jù)圖分析，Ⅰ、Ⅱ過程需要根據(jù)病毒的核苷酸序列設(shè)計。過程Ⅱ中以cDNA為模板經(jīng)過三步循環(huán)擴增得到多個DNA片段，第次復制后就能獲得兩條鏈等長的DNA序列。（4）采集新冠肺炎疑似患者的咽部細胞樣本提取核酸進行上述PCR過程，每一個擴增出來的DNA序列，都可與預先加入的一段熒光標記探針結(jié)合，產(chǎn)生熒光信號，擴增出來的靶基因越多，觀察到的Ct值就越。10．新型冠