細(xì)菌感染的檢查方法與防治原則演示文稿第一頁，共四十一頁。優(yōu)選細(xì)菌感染的檢查方法與防治原則第二頁，共四十一頁。

檢查方法

微生物學(xué)(細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查、分離培養(yǎng)和鑒定）

免疫學(xué)（查Ag或Ab）

分子生物學(xué)（查核酸）

第三頁，共四十一頁。

一、標(biāo)本的采集和送檢原則無菌操作適當(dāng)?shù)臉?biāo)本（注意病程）早期采集采集雙份血清做好標(biāo)記盡快送檢（標(biāo)本必須新鮮）

第一節(jié)

細(xì)菌感染的實驗室診斷第四頁，共四十一頁。第五頁，共四十一頁。（一）細(xì)菌形態(tài)學(xué)檢查

針對一些在形態(tài)與染色上具有特征的病原菌。

1）光學(xué)顯微鏡

2）染色法檢查

第六頁，共四十一頁。（二）細(xì)菌分離培養(yǎng)與鑒定主要內(nèi)容：1、細(xì)菌分離培養(yǎng)—菌落大小、色素、溶血；2、涂片、染色、鏡檢。尤其用于在形態(tài)、排列和染色性方面無特征的某些病原菌的檢查。陽性率高于直接鏡檢，但時間長。

第七頁，共四十一頁。革蘭染色原理：細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)不同。

G+結(jié)構(gòu)致密、肽聚糖層厚、乙醇不易透入；乙醇使胞壁脫水形成一道屏障，短暫阻止結(jié)晶紫-碘復(fù)合物從胞內(nèi)滲出；G-疏松、肽聚糖層薄、外膜均含大量脂質(zhì)，易被乙醇溶解，使胞壁通透性增高，胞內(nèi)結(jié)晶紫-碘復(fù)合物被溶解脫出而脫色。

第八頁，共四十一頁。革蘭染色實際意義---鑒別細(xì)菌選擇用藥研究細(xì)菌致病性其它染色有：單染色、抗酸染色、特殊染色等。第九頁，共四十一頁。

抗酸染色法第十頁，共四十一頁。特殊染色法：鞭毛染色

莢膜染色

負(fù)染色法第十一頁，共四十一頁。2、生化反應(yīng)

現(xiàn)有“程序控制的自動分析儀”。3、血清學(xué)鑒定：用已知Ab鑒定從標(biāo)本中分離培養(yǎng)出的未知菌（玻片法簡便易行）。分群、分型第十二頁，共四十一頁。4、動物試驗用于：①分離鑒定病原菌；②測定細(xì)菌的毒力及產(chǎn)毒性

選用高度易感、健康等條件的動物。

第十三頁，共四十一頁。如：毒素-抗毒素中和試驗---小白鼠；鉤端螺旋體---幼齡豚鼠、金地鼠。

第十四頁，共四十一頁。5、藥物敏感試驗

指導(dǎo)臨床選擇用藥，及時治療和控制感染有重要意義。

藥敏試驗（紙片法）第十五頁，共四十一頁。

第十六頁，共四十一頁。6、自動微生物鑒定和藥敏分析系統(tǒng)：微生物編碼鑒定技術(shù)---數(shù)據(jù)庫微量培養(yǎng)自動監(jiān)測分析自動記錄藥敏結(jié)果第十七頁，共四十一頁。（三）細(xì)菌抗原的檢測

用已知Ab檢測未知抗原（Ag-Ab反應(yīng)）。優(yōu)點--特異、靈敏、簡便方法：玻片凝集、協(xié)同凝集、間接血凝試驗、乳膠凝集、對流免疫、酶免疫技術(shù)、免疫熒光技術(shù)。第十八頁，共四十一頁。載體顆粒SPA、乳膠特異性Ab待檢Ag凝集協(xié)同凝集試驗示意圖常用的免疫學(xué)技術(shù)有—--協(xié)同凝集試驗乳膠凝集試驗第十九頁，共四十一頁。酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA,間接法)

enzymessuchasperoxidasereactwithappropriatesubstratessuchas3,3’,5,5’-Tetramethylbenzidine),thiscausesachangeincolor.第二十頁，共四十一頁。對流免疫電泳第二十一頁，共四十一頁。免疫擴散試驗第二十二頁，共四十一頁。（四）細(xì)菌核酸的檢測核酸雜交、PCR、16SrRNA基因測序、基因芯片等技術(shù)。

更特異、敏感、快速第二十三頁，共四十一頁。5’3’5’3’PCR3’5’3’5’5’5’3’5’3’5’3’3’5’3’5’5’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’第二十四頁，共四十一頁。檢測PCR產(chǎn)物

第二十五頁，共四十一頁。三、細(xì)菌感染的血清學(xué)診斷(serologicaldiagnosis)查Ab：檢測病人血液中由于細(xì)菌感染而產(chǎn)生的特異性抗體，輔助臨床診斷。

廣泛用于多種病原體的微生物診斷和流行病學(xué)調(diào)查。第二十六頁，共四十一頁。

雙份血清：早期（急性期）晚期（恢復(fù)期）結(jié)果：根據(jù)雙份血清中測到的抗體效價，若升高4倍或以上，有輔助診斷價值。

方法：凝集試驗，中和試驗，ELISA等。

第二十七頁，共四十一頁。第二十八頁，共四十一頁。致病菌的檢驗程序藥物敏感試驗標(biāo)本直接涂片染色分離培養(yǎng)生化試驗血清學(xué)試驗動物試驗明確診斷初步診斷分子生物學(xué)技術(shù)其他檢測技術(shù)第二十九頁，共四十一頁。第二節(jié)細(xì)菌感染的特異性預(yù)防

一、人工主動免疫(artificialactiveimmunization)

（一）疫苗、類毒素

1、死疫苗—傷寒、霍亂等。

2、活疫苗—BCG、鼠疫等。

第三十頁，共四十一頁。

疫苗接種第三十一頁，共四十一頁。第三十二頁，共四十一頁。區(qū)別點死疫苗活疫苗制劑特點死，強毒株活，減毒株接種劑量與特點量大，2~3次量較小，1次保存及有效期易保存，約1年不易保存免疫效果較低，維持?jǐn)?shù)月~2年較高，維持3~5年甚至更長死疫苗與活疫苗的比較第三十三頁，共四十一頁。3、亞單位疫苗(subunitvaccine)利用現(xiàn)代生物技術(shù)，除去細(xì)菌或病毒無關(guān)有害成分，分離提取純化對人體有保護性的抗原。如：肺炎鏈球菌、腦膜炎球菌的莢膜多糖疫苗，+佐劑即成。接種少量抗原可使人體產(chǎn)生良好免疫應(yīng)答，且接種反應(yīng)輕微。

第三十四頁，共四十一頁。優(yōu)點

a、去除引起副反應(yīng)的物質(zhì)；

b、因不含核酸可免去減毒活疫苗回復(fù)突變及滅活全疫苗發(fā)生感染性復(fù)活的可能；c、消除腫瘤病毒潛在的致癌作用；

d、可利用化學(xué)試劑分解病毒體。

第三十五頁，共四十一頁。4、基因工程疫苗本質(zhì)上是亞單位疫苗如：含宋內(nèi)志賀菌表面抗原質(zhì)粒的傷寒沙門菌Ty21a優(yōu)點：安全、經(jīng)濟、可批量生產(chǎn)；缺點：抗原的回收純化困難。第三十六頁，共四十一頁。5、重組載體疫苗將抗原表位的目的基因片段轉(zhuǎn)入減毒的病毒或細(xì)菌。形式：整合于病毒、細(xì)菌基因組或質(zhì)粒本質(zhì)：活疫苗第三十七頁，共四十一頁。6、核酸疫苗（DNAVaccine）第三十八頁，共四十一頁。核酸疫苗原理：將病原體的保護性抗原基因與質(zhì)粒重組，重組體注入機體，使機體持續(xù)表達該抗原，誘導(dǎo)體液和細(xì)胞免疫。優(yōu)點：

a、制備簡便、成本低；

b、便于貯藏和運輸；

c、免疫應(yīng)答持久。

第三十九頁，共四十一頁。核酸疫苗缺點：安全性問題a、人們擔(dān)心外源