章末綜合測評(三)(第3章)(時間：90分鐘滿分：100分)一、選擇題(14×2＝28分，每小題只有一個選項符合題目要求)1．下列關(guān)于限制酶的說法，正確的是()A．限制酶廣泛存在于各種生物中，其化學本質(zhì)是蛋白質(zhì)B．一種限制酶只能識別一種特定的核苷酸序列C．不同的限制酶切割DNA后都會形成黏性末端D．限制酶均特異性地識別含6個核苷酸的序列B[限制酶主要是從原核生物中分離純化出來的，A錯誤；限制酶具有專一性，即一種限制酶只能識別一種特定的核苷酸序列，B正確；限制酶切割DNA后會形成黏性末端或平末端，C錯誤；大多數(shù)限制酶的識別序列由6個核苷酸組成，也有少數(shù)限制酶的識別序列由4、5或8個核苷酸組成，D錯誤。]2．下圖是基因工程中基因表達載體的模式圖，若結(jié)構(gòu)X是表達載體所必需的，則X最可能是()A．目的基因插入位點B．啟動子C．標記基因D．DNA聚合酶識別位點B[基因表達載體由啟動子、終止子、標記基因和目的基因組成。圖中有終止子、標記基因(抗生素抗性基因)、目的基因、復制原點等，還缺少啟動子。啟動子位于目的基因的首端，所以X最可能是啟動子。B正確。]3．下列關(guān)于基因表達載體及其構(gòu)建的相關(guān)敘述，錯誤的是()A．基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子、標記基因等部分B．目的基因主要是指編碼所需蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因C．構(gòu)建基因表達載體需用限制酶和DNA連接酶D．構(gòu)建基因表達載體必須在細胞內(nèi)進行D[一個基因表達載體的組成除目的基因外還必須具有啟動子、終止子、標記基因等部分；目的基因主要是指編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因；基因表達載體的構(gòu)建是目的基因與載體結(jié)合，在此過程中需用同種限制酶切割目的基因與載體，用DNA連接酶將相同的末端連接起來；基因表達載體的構(gòu)建是在細胞外進行的。]4．下列關(guān)于PCR技術(shù)的敘述，正確的是()A．PCR技術(shù)建立在對擴增的目的基因序列完全已知的基礎(chǔ)上B．該技術(shù)需要解旋酶和耐高溫的DNA聚合酶C．該技術(shù)需要一對特異性的引物，要求一對引物的序列是互補的D．該技術(shù)的原理是DNA雙鏈復制原理，需要模板、原料、能量、酶等條件D[PCR技術(shù)擴增的目的基因序列不一定是已知的，A項錯誤；PCR技術(shù)是通過高溫來使DNA解旋的，不需要解旋酶，B項錯誤；該技術(shù)需要的一對引物，分別能與模板DNA的兩條鏈的末端進行堿基配對，其序列不是互補的，C項錯誤；PCR技術(shù)的原理是DNA雙鏈復制原理，需要模板、原料、酶、能量等條件，D項正確。]5．下列有關(guān)基因工程的工具的敘述，正確的是()A．基因工程的載體都是質(zhì)粒B．限制酶和其他酶一樣具有專一性，只能識別特定的核苷酸序列C．噬菌體可以作為動物基因工程的載體D．天然質(zhì)粒均可以直接用作載體將目的基因送入受體細胞B[基因工程中最常用的載體是質(zhì)粒，此外還有λ噬菌體的衍生物、動植物病毒等；λ噬菌體的衍生物不可作為動物基因工程的載體；天然質(zhì)粒往往不能直接作為載體，要根據(jù)不同的目的和需求進行人工改造。]6．基因工程是在DNA分子水平上進行設(shè)計施工的。在基因操作的基本步驟中，無需進行堿基互補配對的步驟是()A．PCR擴增目的基因B．基因表達載體的構(gòu)建C．將目的基因?qū)胧荏w細胞D．目的基因的檢測與鑒定C[將目的基因?qū)胧荏w細胞過程中沒有進行堿基互補配對。]7．某目的基因兩側(cè)的DNA序列所含限制酶的酶切位點如圖所示，則在進行基因工程操作中最好應(yīng)選用下列哪種質(zhì)粒作為載體()D[目的基因只有一側(cè)含有限制酶NheⅠ的識別序列，因此不能用該酶獲取目的基因，A錯誤；目的基因的兩側(cè)都含有限制酶AluⅠ的識別序列，可以用該酶獲取目的基因，但只用此酶切割可能會導致目的基因和質(zhì)粒反向連接或自身環(huán)化，B錯誤；目的基因的一側(cè)同時含有限制酶NheⅠ和AluⅠ的識別序列，故用這兩種酶切割可能會獲得不含目的基因的片段，C錯誤；目的基因兩側(cè)分別含有限制酶NheⅠ和SmaⅠ的識別序列，用這兩種酶切割能獲取目的基因，而且能防止目的基因和質(zhì)粒的自身環(huán)化和反向連接，D正確。]8．運用現(xiàn)代生物技術(shù)的育種方法，將抗菜青蟲的Bt基因轉(zhuǎn)移到優(yōu)質(zhì)油菜中，培育出轉(zhuǎn)基因抗蟲的油菜品種，這一品種在生長過程中能產(chǎn)生特異的殺蟲蛋白質(zhì)，對菜青蟲有顯著抗性，能大大減輕菜青蟲對油菜的危害，提高油菜產(chǎn)量，減少農(nóng)藥使用。據(jù)以上信息，下列敘述正確的是()A．Bt基因的化學成分是蛋白質(zhì)B．Bt基因中有菜青蟲的遺傳物質(zhì)C．轉(zhuǎn)基因抗蟲油菜能產(chǎn)生殺蟲蛋白是由于具有Bt基因D．轉(zhuǎn)基因抗蟲油菜產(chǎn)生的殺蟲蛋白是無機物C[基因是有遺傳效應(yīng)的DNA片段，因此Bt基因的化學成分不是蛋白質(zhì)，A錯誤；由題干信息“將抗菜青蟲的Bt基因轉(zhuǎn)移到優(yōu)質(zhì)油菜中，培育出轉(zhuǎn)基因抗蟲的油菜品種”，可知Bt基因不是來源于菜青蟲，不含有菜青蟲的遺傳物質(zhì)，B錯誤；轉(zhuǎn)基因抗蟲油菜能產(chǎn)生殺蟲蛋白是由于具有Bt基因，Bt基因能控制殺蟲蛋白的合成，C正確；轉(zhuǎn)基因抗蟲油菜產(chǎn)生的殺蟲蛋白屬于有機物，D錯誤。]9．下列有關(guān)動物基因工程的說法，錯誤的是()A．動物基因工程技術(shù)可以提高動物的生長速度B．將腸乳糖酶基因?qū)肽膛；蚪M中，獲得的轉(zhuǎn)基因牛分泌的乳汁中，乳糖的含量大大降低C．用轉(zhuǎn)基因動物作為器官移植的供體時，導入的是調(diào)節(jié)因子，不是目的基因，因此無法抑制抗原的合成D．利用基因工程技術(shù)，得到的乳腺生物反應(yīng)器可以解決很多重要藥品的生產(chǎn)問題C[轉(zhuǎn)基因動物作為器官移植的供體時，導入的調(diào)節(jié)因子也屬于目的基因，可抑制抗原的合成。]10．科學家運用轉(zhuǎn)基因技術(shù)，將蘇云金桿菌的抗蟲基因DXT轉(zhuǎn)移到大白菜細胞中，培育出抗蟲效果很好的優(yōu)質(zhì)大白菜，減少了農(nóng)藥的使用量，減輕了農(nóng)藥對環(huán)境的污染。下列說法正確的是()A．用蘇云金桿菌直接感染大白菜就可得到轉(zhuǎn)基因大白菜B．DXT基因能在大白菜細胞中正常表達C．轉(zhuǎn)基因大白菜培育的過程中，可以用滅活的病毒作為載體D．轉(zhuǎn)基因大白菜能抵抗各種病蟲害B[由于生物間存在生殖隔離，細菌感染時并不把遺傳物質(zhì)傳遞給受感染生物；抗蟲基因DXT轉(zhuǎn)移到大白菜細胞中，培育出抗蟲效果很好的優(yōu)質(zhì)大白菜，說明DXT基因在大白菜細胞中得到了正常表達；在轉(zhuǎn)基因植物培育過程中，載體常用土壤農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒；蘇云金桿菌的抗蟲基因編碼的蛋白質(zhì)具有毒殺鱗翅目、雙翅目、鞘翅目等昆蟲的特性，并不能抵抗各種病蟲害。]11．基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，便于重組和篩選。已知限制酶Ⅰ的識別序列和切點是；限制酶Ⅱ的識別序列和切點是。據(jù)圖判斷下列操作正確的是()A．質(zhì)粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割B．質(zhì)粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶I切割C．目的基因和質(zhì)粒均用限制酶I切割D．目的基因和質(zhì)粒均用限制酶Ⅱ切割A[由題圖信息可知，限制酶I只能切割，限制酶Ⅱ不僅能切割，也能切割。據(jù)題圖可知，目的基因兩端都有限制酶Ⅱ的識別序列(切點是)，可見只有用限制酶Ⅱ才能將目的基因切割下來。質(zhì)粒上GeneI和GeneⅡ表示兩種標記基因，分別有限制酶Ⅱ的識別序列和限制酶I、Ⅱ的識別序列；如果用限制酶Ⅱ切割，則GeneI和GeneⅡ都被破壞，造成重組質(zhì)粒無標記基因；用限制酶I切割，則破壞GeneⅡ，保留GeneI，其產(chǎn)生的黏性末端和切割后目的基因的黏性末端相同，可以連接形成重組DNA。A正確。]12．下列圍繞蛋白質(zhì)工程的敘述，錯誤的是()A．蛋白質(zhì)工程能定向改造蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)，使之更加符合人類的需要B．蛋白質(zhì)工程是在分子水平上對蛋白質(zhì)分子直接進行操作，定向改變分子的結(jié)構(gòu)C．蛋白質(zhì)工程能產(chǎn)生自然界中不曾存在的新型蛋白質(zhì)分子D．蛋白質(zhì)工程的操作起點是從預期蛋白質(zhì)功能出發(fā)，設(shè)計出相應(yīng)的基因，并借助基因工程實現(xiàn)的B[蛋白質(zhì)工程實際上是對基因進行操作，而不是對蛋白質(zhì)進行操作。]13．從某海洋動物中獲得一基因，其表達產(chǎn)物為一種抗菌性和溶血性均較強的多肽P1。目前在P1的基礎(chǔ)上研發(fā)抗菌性強但溶血性弱的多肽藥物，首先要做的是()A．合成編碼目的肽的DNA片段B．構(gòu)建含目的肽DNA片段的表達載體C．依據(jù)P1氨基酸序列設(shè)計多條模擬肽D．篩選出具有優(yōu)良活性的模擬肽作為目的肽C[緊扣蛋白質(zhì)工程的流程(基本途徑)進行分析。由題可知，多肽P1為抗菌性和溶血性均較強的多肽，要設(shè)計出抗菌性強但溶血性弱的多肽，即在P1的基礎(chǔ)上設(shè)計出自然界原本不存在的蛋白質(zhì)，用蛋白質(zhì)工程技術(shù)可以實現(xiàn)。蛋白質(zhì)工程的基本途徑是：從預期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)→設(shè)計預期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測應(yīng)有的氨基酸序列→找到并改變相對應(yīng)的脫氧核苷酸序列（基因）或合成新的基因→獲得所需要的蛋白質(zhì)。故要想在P1的基礎(chǔ)上研發(fā)抗菌性強但溶血性弱的多肽藥物，首先要做的是依據(jù)P1的氨基酸序列設(shè)計出多條模擬肽，然后進行改造，從而確定抗菌性強但溶血性弱的多肽的氨基酸序列。]14．下圖表示蛋白質(zhì)工程的操作流程，下列說法不正確的是()A．蛋白質(zhì)工程中對蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)的了解是非常關(guān)鍵的工作B．蛋白質(zhì)工程是完全擺脫基因工程技術(shù)的一項全新的生物工程技術(shù)C．a(chǎn)、b過程分別表示轉(zhuǎn)錄、翻譯D．通過蛋白質(zhì)工程可制造出一種新的蛋白質(zhì)B[蛋白質(zhì)工程中對蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)的了解是非常關(guān)鍵的工作，如蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)、氨基酸的排列順序等，這對于合成或改造基因至關(guān)重要，A正確；蛋白質(zhì)工程的進行離不開基因工程，因為對蛋白質(zhì)的改造要通過對基因的改造來完成，B錯誤；圖中a、b過程分別表示轉(zhuǎn)錄、翻譯，C正確；通過蛋白質(zhì)工程可對現(xiàn)有蛋白質(zhì)進行改造，也可制造出一種新的蛋白質(zhì)，D正確。]二、選擇題(6×3＝18分。每小題給出的四個選項中，有的只有一個選項正確，有的有多個選項正確，全部選對得3分，選對但不全對的得1分，有選錯的得0分)15．下列有關(guān)基因工程和蛋白質(zhì)工程的敘述中，正確的是()A．將基因表達載體導入小鼠的受精卵中常用顯微注射法B．設(shè)計擴增目的基因的引物時，不必考慮表達載體的序列C．蛋白質(zhì)工程是通過基因改造或基因合成，對現(xiàn)有蛋白質(zhì)進行改造，或制造一種新蛋白質(zhì)的技術(shù)D．蛋白質(zhì)工程可合成自然界中不存在的蛋白質(zhì)ACD[將基因表達載體導入小鼠的受精卵中常用顯微注射法，A項正確；設(shè)計引物時應(yīng)當考慮表達載體的序列，以保證擴增后，目的基因能與切割后的表達載體相連接，B項不正確；蛋白質(zhì)工程是指以分子生物學相關(guān)理論為基礎(chǔ)，通過改造或合成基因來改造現(xiàn)有的蛋白質(zhì)，或制造一種新的蛋白質(zhì)的技術(shù)，C項正確；通過蛋白質(zhì)工程可合成自然界不存在的蛋白質(zhì)，D項正確。]16．番茄營養(yǎng)豐富，是人們喜愛的蔬菜。普通番茄細胞中含有多聚半乳糖醛酸酶的控制基因，控制細胞產(chǎn)生多聚半乳糖醛酸酶，該酶能破壞細胞壁，使番茄軟化，不耐貯藏?？茖W家通過基因工程將一種抗多聚半乳糖醛酸酶的基因?qū)敕鸭毎?，獲得了抗軟化番茄。下列關(guān)于培育抗軟化番茄的敘述，正確的是()A．運載工具可以是質(zhì)粒B．受體細胞是番茄細胞C．目的基因為多聚半乳糖醛酸酶基因D．目的基因的表達延緩了番茄的軟化ABD[根據(jù)題干信息可知，運載工具可以是Ti質(zhì)粒，則此時抗軟化番茄的培育過程如下：以質(zhì)粒作為載體，將目的基因(抗多聚半乳糖醛酸酶基因)與質(zhì)粒結(jié)合形成重組DNA，利用含重組DNA的農(nóng)桿菌去感染普通番茄，使目的基因進入普通番茄細胞中的染色體DNA上，目的基因的表達可抑制多聚半乳糖醛酸酶的作用。]17．利用基因工程技術(shù)將魚的抗凍蛋白基因?qū)敕?，試圖培育出耐寒能力強的番茄。下列相關(guān)說法正確的是()A．可用PCR技術(shù)獲得抗凍蛋白基因B．將抗凍蛋白基因與相應(yīng)載體連接構(gòu)建基因表達載體C．利用顯微注射法將基因表達載體導入受體細胞D．檢測到番茄細胞中具有抗凍蛋白基因，則培育出的番茄一定具有抗寒能力AB[基因工程中獲取目的基因的方法包括：采用PCR技術(shù)體外擴增、人工化學合成(如反轉(zhuǎn)錄法)，A正確；在培育耐寒轉(zhuǎn)基因番茄的過程中，需要將抗凍蛋白基因與相應(yīng)載體連接構(gòu)建基因表達載體，再導入受體細胞，B正確；將目的基因?qū)胫参锸荏w細胞最常用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，C錯誤；番茄細胞中具有抗凍蛋白基因，但該基因在受體細胞中不一定表達，因而培育出的番茄不一定具有抗寒能力，D錯誤。]18．下圖表示利用基因工程生產(chǎn)胰島素的三種途徑，據(jù)圖判斷下列說法正確的是()A．過程①需要限制酶和DNA連接酶B．受體細胞A一般選用乳腺細胞C．受體細胞B通常為萵苣的體細胞D．三種方法得到的胰島素結(jié)構(gòu)不完全相同ACD[過程①為形成重組質(zhì)粒的過程，需要限制酶和DNA連接酶，A正確；將目的基因?qū)雱游锛毎玫睫D(zhuǎn)基因動物時，受體細胞應(yīng)選擇動物的受精卵，B錯誤；受體細胞B通常是萵苣的體細胞，目的基因?qū)朐摷毎螅鑼υ摷毎M行組織培養(yǎng)，形成轉(zhuǎn)基因植株，C正確；大腸桿菌因無內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體等細胞器，無法對核糖體合成的多肽鏈進行相關(guān)加工，形成的胰島素結(jié)構(gòu)與另外兩種方法得到的不同，D正確。]19．下圖是將人的生長激素基因?qū)爰毦鶥細胞內(nèi)制造“工程菌”的示意圖。已知細菌B細胞內(nèi)不含質(zhì)粒A，也不含質(zhì)粒A上的基因。判斷下列說法正確的是()A．將重組質(zhì)粒導入細菌B常用的方法是用Ca2＋處理細菌B．將完成導入過程后的細菌涂布在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上，能生長的只是導入了重組質(zhì)粒的細菌C．將完成導入過程后的細菌涂布在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上，能生長的就是導入了質(zhì)粒A的細菌D．目的基因成功表達的標志是受體細胞能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生長AC[將基因表達載體導入細菌B之前，一般要先用Ca2＋處理細菌，使之處于感受態(tài)，從而能夠吸收重組質(zhì)粒，顯微注射法是將目的基因?qū)雱游锛毎Ｓ玫姆椒?，A正確；質(zhì)粒A中含有抗四環(huán)素基因和抗氨芐青霉素基因，而重組質(zhì)粒中抗四環(huán)素基因被破壞，只含抗氨芐青霉素基因，則在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上能生長的是導入質(zhì)粒A或重組質(zhì)粒的細菌，能在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長的是導入了質(zhì)粒A的細菌，B錯誤，C正確；根據(jù)題干信息分析，目的基因(人的生長激素基因)成功表達的標志是受體細胞能產(chǎn)生人的生長激素，D錯誤。]20．圖甲、乙中的箭頭表示三種限制性內(nèi)切核酸酶的酶切位點，表示氨芐青霉素抗性基因，neo表示新霉素抗性基因。下列敘述正確的是()A．圖甲中的質(zhì)粒用BamHI切割后，含有4個游離的磷酸基團B．在構(gòu)建重組質(zhì)粒時，可用PstI和BamHI切割質(zhì)粒和外源DNAC．導入目的基因的大腸桿菌可在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基中生長D．用PstI和HindⅢ酶切，可以保證重組DNA序列的唯一性D[圖甲中的質(zhì)粒用BamHI切割后，會打開一個切口，故有2個游離的磷酸基團，A錯誤；在構(gòu)建重組質(zhì)粒時，不能用BamHI切割外源DNA，因為BamHI會破壞目的基因，B錯誤；操作中獲取目的基因時會用到PstI，但甲中該酶會破壞氨芐青霉素抗性基因，因此導入目的基因的大腸桿菌不能在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基中生長，C錯誤；用PstI和HindⅢ酶切，可以避免自身環(huán)化，保證重組DNA序列的唯一性，D正確。]三、非選擇題(本題包括5小題，共54分)21．(11分)科學家利用植物生產(chǎn)藥用蛋白，研究出了用轉(zhuǎn)基因馬鈴薯生產(chǎn)人的血清白蛋白的方法。下圖表示EcoRⅠ、BamHⅠ兩種限制酶在質(zhì)粒上的切割位點，兩種酶識別和切割位點見表?；卮鹣嚓P(guān)問題：限制酶識別序列和切割位點EcoRⅠeq\o(\s\up9(↓),\s\do5(GAATTC))BamHⅠeq\o(\s\up9(↓),\s\do5(GGATCC))(1)該工程中適宜用來切割質(zhì)粒的限制酶是________，原因是_______。(2)利用PCR技術(shù)擴增血清白蛋白基因，設(shè)計引物序列的主要依據(jù)是________________________，還需要在引物的一端加上________序列，以便于后續(xù)的剪切和連接。(3)將目的基因和質(zhì)粒進行連接后，需先用________處理農(nóng)桿菌以便將基因表達載體導入馬鈴薯細胞，篩選含有目的基因的細胞需在培養(yǎng)基中添加________。(4)從含有血清白蛋白基因的馬鈴薯細胞中提取血清白蛋白，需通過________過程培養(yǎng)到愈傷組織，從其中提取有效成分。[解析](1)限制酶切割質(zhì)粒時必須保證至少一個標記基因的完整性，若用EcoRⅠ切割會將質(zhì)粒上的兩個抗性基因都破壞，故不能選擇EcoRⅠ切割，只能選擇BamHⅠ切割目的基因和載體。(2)PCR擴增的原理是DNA雙鏈復制，需要根據(jù)目的(血清白蛋白)基因兩端的部分核苷酸序列合成2種引物，還需要在引物一端加上BamHⅠ的識別序列GGATCC，以便于后續(xù)的剪切和連接。(3)構(gòu)建基因表達載體后，首先要把基因表達載體導入農(nóng)桿菌細胞中，導入之前需要用Ca2＋處理農(nóng)桿菌細胞，使其處于感受態(tài)，然后再讓含目的基因的農(nóng)桿菌去感染馬鈴薯細胞，進而把目的基因轉(zhuǎn)入馬鈴薯細胞中，因為基因表達載體中含有抗氨芐青霉素基因，故可以在培養(yǎng)基中加入氨芐青霉素進行篩選。(4)馬鈴薯細胞需要經(jīng)過脫分化培養(yǎng)至愈傷組織階段，即可提取細胞產(chǎn)物血清白蛋白。[答案](1)BamHⅠ用EcoRⅠ切割會將質(zhì)粒上的兩個抗性基因都破壞(2)目的(血清白蛋白)基因兩端的部分核苷酸序列GGATCC(3)Ca2＋氨芐青霉素(4)脫分化22．(10分)為生產(chǎn)具有特定性能的α-淀粉酶，研究人員從某種海洋細菌中克隆了α-淀粉酶基因(1656個堿基對)，利用基因工程大量制備α-淀粉酶，實驗流程見下圖。請回答下列問題：(1)利用PCR技術(shù)擴增α-淀粉酶基因前，需先獲得細菌的________________。(2)為了便于擴增的DNA片段與表達載體連接，需在引物的________端加上限制性酶切位點，且常在兩條引物上設(shè)計加入不同的限制性酶切位點，主要目的是________________。(3)進行擴增時，反應(yīng)的溫度和時間需根據(jù)具體情況進行設(shè)定，下列選項中________的設(shè)定與引物有關(guān)，________的設(shè)定與擴增片段的長度有關(guān)。(填序號)①變性溫度②退火溫度③延伸溫度④變性時間⑤退火時間⑥延伸時間[解析](1)α-淀粉酶基因來自海洋細菌，因此為了利用PCR技術(shù)擴增α-淀粉酶基因，必須先獲得細菌的基因組DNA。(2)目的基因與載體結(jié)合前需要用限制酶對兩者進行切割，延伸是在引物的3′端延伸，為了保證目的基因的完整性，因此需在引物的5′端加上限制性酶切位點，且為了使DNA片段能定向插入表達載體，減少自連，常在兩條引物上設(shè)計加入不同的限制性酶切位點。(3)進行擴增時，退火溫度的設(shè)定與引物有關(guān)，延伸時間的設(shè)定與擴增片段的長度有關(guān)。[答案](1)基因組DNA(2)5′使DNA片段能定向插入表達載體，減少自連(3)②⑥23．(10分)某研究小組進行了甲型H1N1流感病毒的疫苗研制工作，下圖為他們前期研究工作的簡要操作流程圖，回答下列問題：(1)實驗步驟①所代表的反應(yīng)過程是____________；在步驟②之前擴增H基因常采用的方法是____________。(2)步驟②構(gòu)建基因表達載體A和基因表達載體B必須使用的酶是_______________________________________________________________。(3)構(gòu)建基因表達載體時，一般需要將H基因與載體結(jié)合，常用作基因工程載體的是________；在檢測受體細胞中是否已經(jīng)導入目的基因時，常常要借助載體上________的表達。[解析](1)實驗步驟①RNA→DNA所代表的反應(yīng)過程是逆轉(zhuǎn)錄；在步驟②之前擴增H基因常采用的方法是PCR技術(shù)(或多聚酶鏈式反應(yīng)技術(shù))。(2)構(gòu)建基因表達載體時，首先需要限制酶來切割含目的基因的DNA片段以獲取目的基因，同時需要用相同的限制酶切割載體以獲取與目的基因相同的黏性末端，再通過DNA連接酶連接目的基因和載體，故步驟②構(gòu)建基因表達載體A和基因表達載體B必須使用的酶是限制酶和DNA連接酶。(3)構(gòu)建基因表達載體時，一般需要將H基因與載體結(jié)合，常用作基因工程載體的是質(zhì)粒；在檢測受體細胞中是否已經(jīng)導入目的基因時，常常要借助載體上標記基因的表達。[答案](1)逆轉(zhuǎn)錄PCR(或多聚酶鏈式反應(yīng))技術(shù)(2)限制酶和DNA連接酶(3)質(zhì)粒標記基因24．(11分)人的T細胞可以產(chǎn)生某種具有臨床價值的蛋白質(zhì)(Y)，該蛋白質(zhì)由一條多肽鏈組成。目前可以利用現(xiàn)代生物技術(shù)生產(chǎn)Y?；卮鹣铝袉栴}。(1)若要獲得Y的基因，可從人的T細胞中提取__________作為模板，在________催化下合成cDNA，再利用________技術(shù)在體外擴增獲得大量Y的基因。(2)將目的基因?qū)胫参锛毎Ｓ玫姆椒ㄊ寝r(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。若將上述所得Y的基因插入農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒上的________中，得到含目的基因的重組Ti質(zhì)粒，則可用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將該基因?qū)肽撤N植物的葉肉細胞中。若該葉肉細胞經(jīng)培養(yǎng)、篩選等得到了能穩(wěn)定表達Y的愈傷組織，則說明Y的基因已經(jīng)________。(3)天然的Y通常需要在低溫條件下保存。假設(shè)將Y的第6位氨基酸甲改變?yōu)榘被嵋铱商岣咂錈岱€(wěn)定性，若要根據(jù)蛋白質(zhì)工程的原理對Y進行改造以提高其熱穩(wěn)定性，具體思路是___________________________________________。[解析](1)由于人的T細胞可以產(chǎn)生蛋白質(zhì)Y，要獲得Y的基因，可從人的T細胞中提取mRNA作為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶催化下，利用四種游離的脫氧核苷酸合成cDNA，再利用PCR技術(shù)(體外擴增DNA的技術(shù))在體外擴增獲得大量Y的基因。(2)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法中，T-DNA可以攜帶目的基因轉(zhuǎn)移至受體細胞，并整合到受體細胞的染色體DNA上，故需要Y的基因插入農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒上的T-DNA中得到含目的基因的重組Ti質(zhì)粒，把含目的基因的重組Ti質(zhì)粒導入農(nóng)桿菌中，再讓含目的基因的農(nóng)桿菌侵染植物的葉肉細胞。若該葉肉細胞經(jīng)培養(yǎng)、篩選等得到了能穩(wěn)定表達Y的愈傷組織，則說明Y的基因已經(jīng)整合到葉肉細胞染色體DNA上。(3)蛋白質(zhì)工程需要從預期的蛋白質(zhì)的功能出發(fā)，設(shè)計預期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)