柱層析根據(jù)被分離組分對(duì)固定相（硅膠）吸附能力的差異，以及洗脫劑（PE:EA)洗脫能力的差異來(lái)進(jìn)行分離的選擇洗脫劑讓所要的點(diǎn)在板的1/3到1/2之間，比如這種情況，一般的洗脫劑選擇是:先用少量10:1與5:1的,主要用3:1的過(guò)，若第二個(gè)點(diǎn)出來(lái)后，可接著用2:1或1:1的過(guò)。PE:EA=3:1SMP柱層析過(guò)程洗滌，吹干裝硅膠，敲平潤(rùn)柱子制樣，上樣，壓樣，加洗脫劑加壓，接試管點(diǎn)板，收集旋干裝硅膠，敲平

裝硅膠時(shí)，抽氣，敲實(shí)，倒硅膠同時(shí)進(jìn)行。敲打時(shí)要敲擊柱子正面，否則會(huì)把柱子敲彎。裝一定高度后，敲平表面。*重要事項(xiàng)：裝柱一定要在抽風(fēng)良好的通風(fēng)櫥中進(jìn)行，并帶好口罩，以防吸入過(guò)多的硅膠或氧化鋁粉塵而對(duì)身體產(chǎn)生致命傷害。

潤(rùn)柱子

沿柱子內(nèi)壁加入石油醚，要防止把硅膠表面沖出坑。石油醚高出硅膠表面一定高度后，漸漸放出液體，至溶劑液面和硅膠層表面相齊。上樣

液體上樣：把要分離的試樣配制成適當(dāng)濃度的溶液。將硅膠上多余的溶劑放出，直到柱內(nèi)液體表面到達(dá)表面時(shí)，停止放出溶劑。用干凈的滴管沿管壁加入試樣溶液，注意不要使溶液把硅膠層沖松浮起，試祥溶液加完后，開(kāi)啟下端旋塞，使液體漸漸放出，至溶劑液面和硅膠層表面相齊。固體上樣：當(dāng)待分離樣品為固體時(shí)不能直接上樣，一般采用拌硅膠上樣法。將固體樣品溶于溶劑中，加入一定量的粗硅膠，充分搖勻，然后旋干溶劑，得到的細(xì)粉狀固體后小心倒入準(zhǔn)備好的層析柱中，并敲平表面。壓樣，加洗脫劑

壓樣：上樣后加入一層石英砂以防加入洗脫劑破壞其表面。鏈接溶劑球，用卡子卡住，否則加壓時(shí)會(huì)蹦開(kāi)。選擇柱子的選擇柱子尺寸的選擇：根據(jù)被分離物質(zhì)的多少來(lái)選擇柱子的粗細(xì)，量多選擇的柱子越粗。硅膠高度的選擇：根據(jù)被分離組分的多少以及點(diǎn)在板上的分布情況，一般量多裝的高，點(diǎn)在板上分離的不明顯裝的越高洗脫劑的選擇

通過(guò)爬板來(lái)選擇洗脫劑的極性，選擇的洗脫劑的極性要使所要的點(diǎn)在板的1/3到1/2之間，剛開(kāi)始加的洗脫劑要低于這個(gè)極性。然后慢慢提高到此極性。選擇洗脫溶劑種類(lèi)時(shí)應(yīng)考慮到被分離各物質(zhì)的極性和溶解度。非極性化合物用非極性溶劑，而極性溶劑對(duì)于洗脫極性化合物是有效的。被分離各物質(zhì)應(yīng)在洗脫溶劑中有非常好的溶解性，否則會(huì)嚴(yán)重影響分離效果。單一溶劑往往不能達(dá)到有效的分離，通?？梢赃x用混合溶劑作洗脫劑。

常用石油醚陪乙酸乙酯，二氯甲烷陪甲醇。注意事項(xiàng)1、繼續(xù)不斷地加入洗脫劑，應(yīng)保持一定高度的液面，在整個(gè)操作中勿使硅膠層表面的溶液流干，一旦流干，再加溶劑，易使硅膠柱產(chǎn)生氣泡和裂縫，影響分離效果。2、控制洗脫液的流出速度，一般不宜太快，太快了柱中交換來(lái)不及達(dá)到平衡，因而影響分離效果。3、由于硅膠表面活性較大且顯弱酸性，有時(shí)可能促使某些成分破壞，所以應(yīng)盡量在一定時(shí)間內(nèi)完成一個(gè)柱色譜的分離，以免試樣在柱上停留的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，發(fā)生變化或擴(kuò)散而影響分離效果斑點(diǎn)的檢出展開(kāi)后的薄層板，常用紫外光燈照射或用顯色劑顯色檢出斑點(diǎn)。紫外光燈的功率越大，暗室越暗，檢出效果就越好。立刻用鉛筆標(biāo)出紫外燈下顯出的斑點(diǎn)。若點(diǎn)樣太濃，易造成斑點(diǎn)太大，相互交叉或拖尾，不能達(dá)到很好的分離效果。若點(diǎn)樣太稀，不易比較斑點(diǎn)的位置。若斑點(diǎn)拖尾，酸性物質(zhì)加酸，堿性物質(zhì)加堿。（可以嘗試，但不一定管用）重結(jié)晶重結(jié)晶的原理是利用混合物中各組分在某種溶劑中的溶解度不同，而使它們互相分離。它可用于固體物質(zhì)（一般1克以上）的分離、純化處理。一般步驟選擇適宜的溶劑；將粗產(chǎn)品溶于適宜的熱的溶液中制成飽和溶液；乘熱過(guò)濾除去不溶性雜質(zhì)。如溶液的顏色深，則應(yīng)先

脫色，后過(guò)濾；冷卻溶液，使之慢慢析出結(jié)晶而雜質(zhì)則留在母液中，或者雜質(zhì)析出，而欲提純的化合物則留在溶液中；抽氣過(guò)濾分離母液，分出結(jié)晶體或雜質(zhì)；洗滌結(jié)晶，除去附著的母液；干燥結(jié)晶。容劑的選擇與被提純的有機(jī)物不起化學(xué)反應(yīng)，對(duì)被提純的有機(jī)物應(yīng)在熱溶液中易溶，而在冷溶液中幾乎不溶，如果雜質(zhì)在熱溶液中不溶的，宜乘熱過(guò)濾去雜質(zhì)，溶劑的沸點(diǎn)，不宜太低，也不宜過(guò)高。太低，溶解度改變不大；過(guò)高，附于晶體表面的溶劑不易除去。常用的溶劑有苯、乙酸乙酯、石油醚、丙酮、乙醇等?；旌先軇┮步?jīng)常被采用，如乙醇與水，乙醇與乙醚，乙醇與丙酮，石油醚與乙醚，苯與石油醚等。溶劑的用量一般是溶質(zhì)用量的10-30倍量。重結(jié)晶經(jīng)驗(yàn)含羥基，氨基而且熔點(diǎn)不太高的物質(zhì)盡量不選擇含氧溶劑，因?yàn)槿苜|(zhì)和溶劑形成分子間氫鍵后很難析出。過(guò)柱預(yù)純化，粗分離后再結(jié)晶，這樣的話重結(jié)晶成功率會(huì)大大提高。不要輕易冷凍，自然降溫得到固體純度會(huì)大大提高。晶種的取得，用玻璃棒沾一滴溶液，揮干。實(shí)驗(yàn)裝置蒸餾瓶克氏蒸餾頭毛細(xì)管抽氣部分水泵或油泵接受器溫度計(jì)冷凝管某些有機(jī)化合物壓力與沸點(diǎn)的關(guān)系

沸點(diǎn)/℃壓力/Pa(mmHg)

水氯苯

苯甲醛

水楊乙酯甘油

蒽101325(760)1001321792342903546665(50)3854951392042253999(30)3043841271922073332(25)2639791241882012666(20)2234.5751191821941999(15)17.529691131751861333(10)11