5常見微生物標(biāo)本的采集、保存與送檢課件_第1頁
5常見微生物標(biāo)本的采集、保存與送檢課件_第2頁
5常見微生物標(biāo)本的采集、保存與送檢課件_第3頁
5常見微生物標(biāo)本的采集、保存與送檢課件_第4頁
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文檔簡介

常見微生物標(biāo)本的采集、保存與送檢茂名市CDC流行病學(xué)培訓(xùn)班麥充志2011、312/10/20221常見微生物標(biāo)本的采集、保存與送檢茂名市CDC流行病學(xué)培訓(xùn)班碗與筷子的關(guān)系12/10/20222碗與筷子的關(guān)系12/10/20222標(biāo)本采集采集時間----何時采采集種類----采什么采集方法----怎么采采集數(shù)量----采多少12/10/20223標(biāo)本采集采集時間----何時采12/10/20223怎么采樣品采集程序采樣用物品準(zhǔn)備采樣程序方法采樣記錄樣品編號樣品保存樣品送檢12/10/20224怎么采樣品采集程序12/10/20224采多少所有標(biāo)本在采集時立即分裝,一式N份(不同檢驗項目、重復(fù)實驗、其它實驗室復(fù)核、留樣)

12/10/20225采多少所有標(biāo)本在采集時立即分裝,一式N份(不同檢驗項目、樣本采集的一般需要量

樣品種類檢驗?zāi)康臉悠妨匡嬘盟治黾爸虏【?gt;5l液體食品致病菌或毒物分析可疑食物>200ml固體食品致病菌或毒物分析可疑食物>200g嘔吐物致病菌或毒物分析>50g(ml)洗胃液致病菌或毒物分析>200ml腹瀉物致病菌或毒物分析>50g(ml)血液病原分離、抗體分析>5ml腦脊液病原分離>2ml皮損分泌物病原分析滅菌生理鹽水浸泡棉簽涂取12/10/20226樣本采集的一般需要量

樣品種類標(biāo)本標(biāo)簽內(nèi)容最小包裝(每個標(biāo)本)每個包裝箱每批樣本后要附上一個樣本清單,詳細(xì)列出此批樣本的名稱、狀態(tài)和注意事項。12/10/20227標(biāo)本標(biāo)簽內(nèi)容最小包裝(每個標(biāo)本)12/10/20227樣本編號——唯一性樣本來源——從什么物質(zhì)、材料中采集的,如病理采集的肝臟就可標(biāo)注為某某患者肝臟樣本數(shù)量——包裝中樣本的數(shù)量,如:此包裝中同時采集了2塊肝臟樣本,就要標(biāo)注為2采樣時間:采樣地點:采樣人:樣本處理情況:抗凝劑、運送培養(yǎng)基、標(biāo)本狀況(開封食品)12/10/20228樣本編號——唯一性12/10/20228標(biāo)本的保存、包裝、運送樣品的保存—容器、介質(zhì)、溫度樣品的包裝—感染性樣本樣品的運送—標(biāo)本應(yīng)由專業(yè)人員專人運送,最好使用專車交接手續(xù)12/10/20229標(biāo)本的保存、包裝、運送樣品的保存—容器、介質(zhì)、溫度12/10怎么檢對重大事件的毒物鑒定或樣本檢測要同時送數(shù)家具有鑒定檢驗資質(zhì)的實驗室同步開展工作,避免因?qū)嶒炇夜芾砗图夹g(shù)因素對結(jié)果的影響。12/10/202210怎么檢對重大事件的毒物鑒定或樣本檢測要同時送數(shù)家具有鑒定檢驗要達到有效控制疫情的目的,必須做到早期發(fā)現(xiàn)和報告可疑病例;快速的流行病學(xué)調(diào)查;實驗室對病原體的快速確診;實施有效的控制措施。12/10/202211要達到有效控制疫情的目的,必須做到早期發(fā)現(xiàn)和報告可疑病例;1實驗室診斷的目的意義識別暴發(fā)、確定病因

確定傳染來源確定流行范圍確定傳播鏈發(fā)現(xiàn)特殊的毒株判斷院內(nèi)交叉感染疫苗實施項目的考核仲裁依據(jù)12/10/202212實驗室診斷的目的意義識別暴發(fā)、確定病因12/10/2022實驗室對病原體的快速確診依靠技術(shù)和試劑儲備充分收集適當(dāng)?shù)?、足夠的?biāo)本正確的包裝和快速運送到實驗室適當(dāng)?shù)纳锇踩拖敬胧詼p少疾病進一步擴散的可能。12/10/202213實驗室對病原體的快速確診依靠技術(shù)和試劑儲備充分12/10/2

圍繞病因假設(shè),確定檢驗項目,采集標(biāo)本專業(yè)知識、經(jīng)驗充分物質(zhì)準(zhǔn)備高度的責(zé)任心12/10/202214

圍繞病因假設(shè),確定檢驗項目,采集標(biāo)本專業(yè)知識、經(jīng)驗12/1在去現(xiàn)場之前,應(yīng)考慮到以下的問題在進行臨床和流行病學(xué)信息評估時,需考慮引起暴發(fā)的潛在病原體;地方性疾病譜和流行季節(jié)譜可進一步縮小可能的因素;同時還必須考慮到多種病原體感染可出現(xiàn)相似的臨床表現(xiàn),因而需要采集多種類型的標(biāo)本用于定義暴發(fā)的原因。12/10/202215在去現(xiàn)場之前,應(yīng)考慮到以下的問題在進行臨床和流行病學(xué)信息評估采樣基本原則盡早采集、根據(jù)可疑的病原體,選擇不同采集時機和標(biāo)本種類、在抗生素應(yīng)用前采集、遵守?zé)o菌操作、正確保存和運送。容器應(yīng)密封不易碎,標(biāo)本不得污染容器的口和外壁。12/10/202216采樣基本原則12/10/202216標(biāo)本種類和采集時間血液標(biāo)本全血標(biāo)本采集血清標(biāo)本采集第一份血清應(yīng)盡早(最好在發(fā)病后7天內(nèi))采集第二份血清應(yīng)在發(fā)病后第3~4周采集在病愈出院或死亡前采集血標(biāo)本1份12/10/202217標(biāo)本種類和采集時間血液標(biāo)本12/10/202217血液標(biāo)本的采集目的:血培養(yǎng)、分離血清血培養(yǎng):懷疑是細(xì)菌性疾病,特別是腦膜炎或疑似菌血癥的病人均要抽血。在病人高熱時可采取靜脈血3ml,注入雙相血培養(yǎng)瓶(也可用盛有30ml葡萄糖肉湯的三角瓶)內(nèi)增菌培養(yǎng)。分離血清用于抗體檢測。在疾病急性期和恢復(fù)期各采血2-3ml12/10/202218血液標(biāo)本的采集目的:血培養(yǎng)、分離血清12/10/202218血培養(yǎng)瓶含有0.025%SPS(聚茴香腦磺酸鈉sodiumpolyanetholsulfonateSPS),可以起到抗凝、抗吞噬、抗鰲合的作用;還含有樹脂、炭顆粒,可吸收血液中的抗生素,提高細(xì)菌培養(yǎng)的陽性率。血量>3ml時,將血分別放入兩個血培養(yǎng)瓶,若瓶子裝血太多將降低降低陽性率。12/10/202219血培養(yǎng)瓶含有0.025%SPS(聚茴香腦磺酸鈉sodium用真空負(fù)壓采血管采集血液標(biāo)本5ml,室溫靜置30分鐘,1500~2000rpm離心10分鐘,收集血清于2ml無菌螺口塑料管中12/10/202220用真空負(fù)壓采血管采集血液標(biāo)本5ml,室溫靜置30分鐘,150標(biāo)本種類和采集時間呼吸道標(biāo)本上呼吸道標(biāo)本:咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液、深咳痰液下呼吸道標(biāo)本:呼吸道抽取物、支氣管灌洗液、肺組織活檢標(biāo)本盡早采集上述標(biāo)本,發(fā)病一至兩周也可采集12/10/202221標(biāo)本種類和采集時間呼吸道標(biāo)本12/10/20222112/10/20222212/10/202222呼吸道標(biāo)本12/10/202223呼吸道標(biāo)本12/10/202223拭子的選擇

應(yīng)使用頭部為合成纖維的拭子(例如,聚酯纖維),用鋁或塑料做柄。不推薦棉拭子和木柄。12/10/202224拭子的選擇應(yīng)使用頭部為合成纖維的拭子(例如,聚酯纖維),用12/10/20222512/10/202225急性呼吸道綜合癥的可疑暴發(fā)可能的病原體白喉鏈球菌性咽炎猩紅熱漢坦病毒肺綜合癥百日咳嗜血流感桿菌呼吸道合胞病毒肺鏈軍團肺炭疽肺鼠疫支原體喉拭子血清血清鼻咽拭子血清血培養(yǎng)血清痰、尿肺泡灌洗液流感禽流感咽拭子氣管吸取物血清12/10/202226急性呼吸道綜合癥的可疑暴發(fā)可能的病原體白喉漢坦病毒肺綜合癥百需要準(zhǔn)備的材料運送培養(yǎng)基、拭子、壓舌板消毒的螺旋蓋管、真空采血管、5ml注射器75%酒精、壓脈帶、記號筆等。12/10/202227需要準(zhǔn)備的材料運送培養(yǎng)基、拭子、壓舌板12/10/20222運送培養(yǎng)基的選擇維持活力,不增菌的非營養(yǎng)性半固體培養(yǎng)基Stuarts,Cary-Blair,Amies,STGG四種主要的運送培養(yǎng)基。12/10/202228運送培養(yǎng)基的選擇維持活力,不增菌的非營養(yǎng)性半固體培養(yǎng)基12/127C

Softaluminumwire-greencap

軟金屬,易彎曲.143C

Regularaluminumwire-orangecap

男性尿道拭子139C

Doubleplasticswabs-redcap

咽拭子、陰道拭子、傷口和皮膚12/10/202229127C

Softaluminumwire-gree195C

Flexibletwistedwire-bluecap

Designedspecificallyfornasopharyngealsampling.Veryflexible,willbendandyieldwhenincontactwithposteriornasopharyngealwall.Featuresasafeloopshapedwiretipcoveredwithsoftrayon.鼻咽拭子標(biāo)本12/10/202230195C

Flexibletwistedwire-b12/10/20223112/10/202231Stuarts——主要成分甘油磷酸鈉硫代硫酸鈉氯化鈣亞甲蘭瓊脂炭粉12/10/202232Stuarts——主要成分甘油磷酸鈉12/10/202232Stuarts運送培養(yǎng)基12/10/202233Stuarts運送培養(yǎng)基12/10/202233Cary-Blair運送培養(yǎng)基克服在運送腸道菌時,因這些菌含有甘油磷酸脫氫酶,造成低度氧化,使細(xì)菌能代謝而生長。特別適合于運送含弧菌的標(biāo)本。研究顯示,在28℃情況下,Cary-Blair可維持弧菌活力22天,沙門氏、志賀氏菌49天;70~80℃副溶血弧菌可達35天。12/10/202234Cary-Blair運送培養(yǎng)基克服在運送腸道菌時,因這些菌含Cary-Blair運送培養(yǎng)基12/10/202235Cary-Blair運送培養(yǎng)基12/10/202235100株菌

Stuart'sAmies時間菌株存活數(shù)

菌株存活數(shù)24小時919848小時798772小時5677Amies運送培養(yǎng)基---Stuarts的改良產(chǎn)品(含活性炭)用磷酸鹽緩沖液代替甘油磷酸鈉等12/10/202236100株菌Stuart'sAmies時間菌株存活數(shù)菌株存STGG運送保存培養(yǎng)基(Skim-milktrytoneglucoseglycerol,STGG)脫脂牛奶粉(Difco)2g胰酶大豆肉湯(TSB,Oxoid)3g葡萄糖0.5g甘油10ml消毒蒸餾水100ml12/10/202237STGG運送保存培養(yǎng)基(Skim-milktrytoneg鼻咽拭子插入STGG培養(yǎng)基后,可立即凍存標(biāo)本。報告顯示,置冰上幾小時后再放置-70℃,肺炎鏈球菌、嗜血流感桿菌的活力仍能維持,在-20℃環(huán)境可達8周。置于-70℃的STGG中保存的鼻咽分泌物,其肺炎鏈球菌的分離率與直接接種平板相似,保存于-20℃分離率亦可接受,而4℃環(huán)境保存5天,分離率不理想。STGG運送保存培養(yǎng)基12/10/202238鼻咽拭子插入STGG培養(yǎng)基后,可立即凍存標(biāo)本。報告顯示,置冰需要采集的標(biāo)本上呼吸道感染:鼻咽拭子咽拭子血下呼吸道感染:痰標(biāo)本支氣管灌洗液胸液血12/10/202239需要采集的標(biāo)本上呼吸道感染:12/10/202239上呼吸道可能的致病菌β-溶血性鏈球菌:A、B、C、G群鏈球菌等;肺炎鏈球菌、嗜血流感桿菌、金黃色葡萄球菌;白喉棒狀桿菌、百日咳等12/10/202240上呼吸道可能的致病菌β-溶血性鏈球菌:A、B、C、G群鏈球菌下呼吸道感染性疾病可能的致病菌肺炎鏈球菌嗜血流感桿菌腸球菌肺炎克雷伯氏菌β-溶血性鏈球菌軍團菌百日咳菌屬

金黃色葡萄球菌腦膜炎奈瑟氏菌屬假單胞菌肺炎支原體肺炎衣原體12/10/202241下呼吸道感染性疾病可能的致病菌肺炎鏈球菌12/10/2022咽拭子的采集對健康人群或病人密切接觸者進行帶菌檢驗時一般采咽拭子。用無菌棉拭子擦取懸雍垂后之鼻咽部粘膜數(shù)下,應(yīng)避免接觸口腔內(nèi)其它部分,直接接種到巧克力雙抗平板或0.5%葡萄糖增菌肉湯中。12/10/202242咽拭子的采集對健康人群或病人密切接觸者進行帶菌檢驗時一般采咽干采用2根聚丙烯纖維頭的塑料桿拭子同時擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁,將拭子頭浸入含3ml采樣液的螺口管中,尾部棄去,旋緊管蓋。12/10/202243干采12/10/202243咽拭采集的正確與否?wrongright12/10/202244咽拭采集的正確與否?wrongright12/10/2022鼻拭子的采集將1根聚丙烯纖維頭的塑料桿拭子輕輕插入鼻道內(nèi)鼻腭處,停留片刻后緩慢轉(zhuǎn)動退出。取另一根聚丙烯纖維頭的塑料桿拭子以同樣的方法采集另一側(cè)鼻孔。上述兩根拭子浸入同一含3ml采樣液的管中,尾部棄去,旋緊管蓋。12/10/202245鼻拭子的采集將1根聚丙烯纖維頭的塑料桿拭子輕輕插入鼻道內(nèi)鼻腭鼻咽抽取物或呼吸道抽取物的采集用與負(fù)壓泵相連的收集器從鼻咽部抽取粘液或從氣管抽取呼吸道分泌物。將收集器頭部插入鼻腔或氣管,接通負(fù)壓,旋轉(zhuǎn)收集器頭部并緩慢退出,收集抽取的粘液,并用3ml采樣液沖洗收集器1次(亦可用小孩導(dǎo)尿管接在50ml注射器上來替代收集器)。12/10/202246鼻咽抽取物或呼吸道抽取物的采集用與負(fù)壓泵相連的收集器從鼻咽部咽漱液的采集用10ml不含抗菌素的采樣液漱口。漱口時讓患者頭部微后仰,發(fā)“噢”聲,讓洗液在咽部轉(zhuǎn)動。然后將咽漱液收集于50ml無菌的螺口塑料管中。無條件的可用平皿或燒杯收集咽漱液并轉(zhuǎn)入10ml螺口采樣管中。12/10/202247咽漱液的采集用10ml不含抗菌素的采樣液漱口。漱口時讓患者頭深咳痰液的采集要求病人深咳后,將咳出的痰液收集于50ml含3ml采樣液的螺口塑料管中12/10/202248深咳痰液的采集要求病人深咳后,將咳出的痰液收集于50ml含3呼吸道灌洗液的采集將收集器頭部從鼻孔或氣管插口處插入氣管(約30cm深處),注入5ml生理鹽水,接通負(fù)壓,旋轉(zhuǎn)收集器頭部并緩慢退出。收集抽取的粘液,并用采樣液涮洗收集器1次(亦可用小孩導(dǎo)尿管接在50ml注射器上來替代收集)12/10/202249呼吸道灌洗液的采集將收集器頭部從鼻孔或氣管插口處插入氣管(約常用的病毒采樣保存液成分pH7.0~7.6的Hanks液或MEM/DMEM液或生理鹽水。在采樣液中需加入抗菌素,可用青霉素(終濃度為100U/ml)、慶大霉素(終濃度為1mg/ml)和抗真菌藥物(終濃度為2μg/ml)12/10/202250常用的病毒采樣保存液成分pH7.0~7.6的Hanks液或M病毒采樣盒咽拭子器具12/10/202251病毒采樣盒咽拭子器具12/10/202251出血點滲液接種0.5%葡萄糖增菌肉湯或直接接種含雙抗巧克力平板和血平板接種增菌肉湯或直接接種巧克力平板和血平板咽拭子血液接種血培養(yǎng)瓶分離血清檢測IgG涂片G染色12/10/202252出血點滲液接種0.5%葡萄糖增菌肉湯或直接接種含雙抗巧克力平患者站立或床上坐直,在收集前囑咐患者用開水含漱口腔;深呼吸,從深部咳痰,將痰吐入已消毒的廣口螺旋蓋管(25~50ml)內(nèi);痰量1-2ml,如不足,應(yīng)重復(fù)上述步驟。痰標(biāo)本的采集12/10/202253患者站立或床上坐直,在收集前囑咐患者用開水含漱口腔;深呼吸,接種培養(yǎng)板的選擇根據(jù)所要檢測的目的菌而定,一般選擇兩種平板:血平板和巧克力平板鏈球菌屬:新鮮綿羊血(或馬血)平板奈瑟氏菌屬:巧克力平板(CAP),不含抗生素嗜血流感桿菌:含300μg/ml的桿菌肽的巧克力平板12/10/202254接種培養(yǎng)板的選擇根據(jù)所要檢測的目的菌而定,一般選擇兩種平板:標(biāo)本種類和采集時間腸道標(biāo)本糞便標(biāo)本采集肛拭標(biāo)本采集發(fā)病后盡可能早的采集標(biāo)本糞便標(biāo)本采集12/10/202255標(biāo)本種類和采集時間腸道標(biāo)本12/10/202255腸道標(biāo)本的采集采集5~10g糞便或采集肛拭子標(biāo)本置于含3~10ml無菌采樣液的螺口管中,嚴(yán)格密封12/10/202256腸道標(biāo)本的采集采集5~10g糞便或采集肛拭子標(biāo)本置于含3~1腸道標(biāo)本的采集用具12/10/202257腸道標(biāo)本的采集用具12/10/202257腦脊液標(biāo)本的采集正常人的腦脊液是無菌的。以無菌手續(xù)通過腰椎穿刺采集腦脊液3-5ml,應(yīng)立即送檢或床邊接種。應(yīng)在35℃保溫運送。

12/10/202258腦脊液標(biāo)本的采集12/10/202258腦脊液(CSF)CSF一經(jīng)采集,就應(yīng)盡快送到實驗室,運送過程中,標(biāo)本應(yīng)置于18~37℃的環(huán)境,不要暴露于陽光下或冷凍保存。若CSF不能馬上送到實驗室處理,延遲在幾小時之內(nèi),可將血培養(yǎng)瓶或螺旋管蓋擰松,置35℃、5%CO2環(huán)境。12/10/202259腦脊液(CSF)CSF一經(jīng)采集,就應(yīng)盡快送到實驗室,運送過程CSF離心1000~2000rpm,3~5min上清(用于膠乳凝集試驗)沉淀(混勻)接種平板培養(yǎng)注:如若CSF不足1ml,不必離心,直接進行G染色和接種培養(yǎng)。革蘭染色接種血培養(yǎng)12/10/202260CSF離心上清CSF標(biāo)本的運送和處理最好床旁接種涂片血培養(yǎng)瓶或2ml的0.5%葡萄糖增菌肉湯巧克力平板或血平板螺旋管裝CSF12/10/202261CSF標(biāo)本的運送和處理最好床旁接種涂片血培養(yǎng)瓶巧克力平板螺旋尸檢標(biāo)本的采集尸檢標(biāo)本病人死亡后應(yīng)盡早進行解剖,在嚴(yán)格按照生物安全防護的條件下,進行尸檢主要采集肺、氣管、肝、腎、脾、心臟、腦、胃、腸、淋巴結(jié)等可疑組織標(biāo)本同時采集血標(biāo)本、分泌物或滲出物沒有條件進行尸體解剖的,可采集呼吸道灌洗液或經(jīng)皮穿刺采集肺組織標(biāo)本12/10/202262尸檢標(biāo)本的采集尸檢標(biāo)本12/10/202262可疑組織標(biāo)本

每種組織應(yīng)多部位取材,每一采集部位分別使用不同消毒器械,以防交叉污染;各部位應(yīng)取20~50g,淋巴結(jié)取2個。各部位標(biāo)本,一半用10%福爾馬林固定,通常所取組織塊固定于不少于5~10倍以上體積的10%福爾馬林溶液中;另一半直接放-70℃或液氮罐中保存12/10/202263可疑組織標(biāo)本12/10/202263血無菌操作采集死者血液5ml,其2.5ml置無菌玻璃管中,使血球沉淀,吸出血清分泌物或滲出物:用滅菌棉棒擦拭局部,采集分泌物后,裝入放有保存液的試管中12/10/202264血12/10/202264其他標(biāo)本

出血點瘀斑胸水肺活檢標(biāo)本12/10/202265其他標(biāo)本12/10/202265出血點、瘀斑:可挑取出血點、瘀斑進行培養(yǎng)和涂片12/10/202266出血點、瘀斑:12/10/202266出血點、瘀斑滲出液以75%酒精消毒局部皮膚(切忌用碘酒消毒,因其具有滲透作用殺死出血點內(nèi)細(xì)菌),用無菌針頭挑破出血點或瘀斑,輕輕地擠出組織液。用無菌毛吸管吸取滲出液直接接種到血(和巧克力)平板上做分離培養(yǎng),也可將滲出液涂片,作革蘭氏染色鏡檢。12/10/202267出血點、瘀斑滲出液以75%酒精消毒局部皮膚(切忌用碘酒消毒,胸水、肺組織活檢標(biāo)本胸水在B超定位下進行胸腔穿刺,抽取胸水5ml,置于無菌的塑料螺口管中肺組織活檢標(biāo)本

在超聲或X線定位下,經(jīng)皮穿刺取肺組織活檢標(biāo)本,置于含3ml采樣液的塑料螺口管中12/10/202268胸水、肺組織活檢標(biāo)本胸水12/10/202268標(biāo)本保存用于病毒分離和核酸檢測的標(biāo)本應(yīng)盡快送樣進行檢測24小時內(nèi)能檢測的標(biāo)本可置于4℃保存24小時內(nèi)無法檢測的標(biāo)本則應(yīng)置于-70℃或以下保存如無-70℃保存條件,則于-20℃冰箱暫存血清可在4℃存放3天、-20℃以下長期保存。標(biāo)本運送期間應(yīng)避免反復(fù)凍融12/10/202269標(biāo)本保存用于病毒分離和核酸檢測的標(biāo)本應(yīng)盡快送樣進行檢測12/標(biāo)本送檢程序一般應(yīng)立即送檢,擱置時間過久,會影響檢驗結(jié)果。如路途較遠(yuǎn),應(yīng)予冷藏保存送檢。但有些標(biāo)本(如懷疑流腦)在送檢途中應(yīng)保存在保溫瓶中(37℃)或密封包裝好;放在貼身內(nèi)衣內(nèi)保溫,盡快送檢。不同疾病的標(biāo)本按照相關(guān)疾病的送檢程序進行送檢12/10/202270標(biāo)本送檢程序一般應(yīng)立即送檢,擱置時間過久,會影響檢驗結(jié)果。如標(biāo)本分析前的質(zhì)量控制標(biāo)本采取與運送是否正確,對檢驗結(jié)果影響很大,國內(nèi)權(quán)威機構(gòu)的一次調(diào)查,目前各級醫(yī)療單位88%的性病檢驗標(biāo)本由臨床醫(yī)師采取,經(jīng)檢查,采取標(biāo)本的合格率僅為46%。

12/10/202271標(biāo)本分析前的質(zhì)量控制標(biāo)本采取與運送是否正確,對檢驗結(jié)果影響很分析前的質(zhì)量控制是實驗室全面質(zhì)量控制的重要組成部分和基礎(chǔ),也就是說,實驗室要想獲得準(zhǔn)確、可靠及對臨床應(yīng)用有價值的可靠檢測結(jié)果,必須進行分析前的質(zhì)量控制,認(rèn)識和控制分析前的因素,不僅是實驗室技術(shù)人員的努力方向,也有賴于多部門的配合。12/10/202272分析前的質(zhì)量控制是實驗室全面質(zhì)量控制的重要組成部分和基礎(chǔ),也包括醫(yī)師正確選擇檢驗項目及化驗申請、病人準(zhǔn)備、樣本采集、標(biāo)本運送及標(biāo)本保存,任何一個環(huán)節(jié)處理不當(dāng)均會影響檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。標(biāo)本采集是檢驗質(zhì)量保證的重要環(huán)節(jié)之一,標(biāo)本運送過程中要注意標(biāo)本的包裝、溫度要求及處理方法等,要確保分析成分的穩(wěn)定性,在運送過程中要保持標(biāo)本管口封閉,向上垂直放置,避免劇烈振動。12/10/202273包括醫(yī)師正確選擇檢驗項目及化驗申請、病人準(zhǔn)備、樣本采集、標(biāo)本謝謝12/10/202274謝謝12/10/202274常見微生物標(biāo)本的采集、保存與送檢茂名市CDC流行病學(xué)培訓(xùn)班麥充志2011、312/10/202275常見微生物標(biāo)本的采集、保存與送檢茂名市CDC流行病學(xué)培訓(xùn)班碗與筷子的關(guān)系12/10/202276碗與筷子的關(guān)系12/10/20222標(biāo)本采集采集時間----何時采采集種類----采什么采集方法----怎么采采集數(shù)量----采多少12/10/202277標(biāo)本采集采集時間----何時采12/10/20223怎么采樣品采集程序采樣用物品準(zhǔn)備采樣程序方法采樣記錄樣品編號樣品保存樣品送檢12/10/202278怎么采樣品采集程序12/10/20224采多少所有標(biāo)本在采集時立即分裝,一式N份(不同檢驗項目、重復(fù)實驗、其它實驗室復(fù)核、留樣)

12/10/202279采多少所有標(biāo)本在采集時立即分裝,一式N份(不同檢驗項目、樣本采集的一般需要量

樣品種類檢驗?zāi)康臉悠妨匡嬘盟治黾爸虏【?gt;5l液體食品致病菌或毒物分析可疑食物>200ml固體食品致病菌或毒物分析可疑食物>200g嘔吐物致病菌或毒物分析>50g(ml)洗胃液致病菌或毒物分析>200ml腹瀉物致病菌或毒物分析>50g(ml)血液病原分離、抗體分析>5ml腦脊液病原分離>2ml皮損分泌物病原分析滅菌生理鹽水浸泡棉簽涂取12/10/202280樣本采集的一般需要量

樣品種類標(biāo)本標(biāo)簽內(nèi)容最小包裝(每個標(biāo)本)每個包裝箱每批樣本后要附上一個樣本清單,詳細(xì)列出此批樣本的名稱、狀態(tài)和注意事項。12/10/202281標(biāo)本標(biāo)簽內(nèi)容最小包裝(每個標(biāo)本)12/10/20227樣本編號——唯一性樣本來源——從什么物質(zhì)、材料中采集的,如病理采集的肝臟就可標(biāo)注為某某患者肝臟樣本數(shù)量——包裝中樣本的數(shù)量,如:此包裝中同時采集了2塊肝臟樣本,就要標(biāo)注為2采樣時間:采樣地點:采樣人:樣本處理情況:抗凝劑、運送培養(yǎng)基、標(biāo)本狀況(開封食品)12/10/202282樣本編號——唯一性12/10/20228標(biāo)本的保存、包裝、運送樣品的保存—容器、介質(zhì)、溫度樣品的包裝—感染性樣本樣品的運送—標(biāo)本應(yīng)由專業(yè)人員專人運送,最好使用專車交接手續(xù)12/10/202283標(biāo)本的保存、包裝、運送樣品的保存—容器、介質(zhì)、溫度12/10怎么檢對重大事件的毒物鑒定或樣本檢測要同時送數(shù)家具有鑒定檢驗資質(zhì)的實驗室同步開展工作,避免因?qū)嶒炇夜芾砗图夹g(shù)因素對結(jié)果的影響。12/10/202284怎么檢對重大事件的毒物鑒定或樣本檢測要同時送數(shù)家具有鑒定檢驗要達到有效控制疫情的目的,必須做到早期發(fā)現(xiàn)和報告可疑病例;快速的流行病學(xué)調(diào)查;實驗室對病原體的快速確診;實施有效的控制措施。12/10/202285要達到有效控制疫情的目的,必須做到早期發(fā)現(xiàn)和報告可疑病例;1實驗室診斷的目的意義識別暴發(fā)、確定病因

確定傳染來源確定流行范圍確定傳播鏈發(fā)現(xiàn)特殊的毒株判斷院內(nèi)交叉感染疫苗實施項目的考核仲裁依據(jù)12/10/202286實驗室診斷的目的意義識別暴發(fā)、確定病因12/10/2022實驗室對病原體的快速確診依靠技術(shù)和試劑儲備充分收集適當(dāng)?shù)摹⒆銐虻臉?biāo)本正確的包裝和快速運送到實驗室適當(dāng)?shù)纳锇踩拖敬胧?,以減少疾病進一步擴散的可能。12/10/202287實驗室對病原體的快速確診依靠技術(shù)和試劑儲備充分12/10/2

圍繞病因假設(shè),確定檢驗項目,采集標(biāo)本專業(yè)知識、經(jīng)驗充分物質(zhì)準(zhǔn)備高度的責(zé)任心12/10/202288

圍繞病因假設(shè),確定檢驗項目,采集標(biāo)本專業(yè)知識、經(jīng)驗12/1在去現(xiàn)場之前,應(yīng)考慮到以下的問題在進行臨床和流行病學(xué)信息評估時,需考慮引起暴發(fā)的潛在病原體;地方性疾病譜和流行季節(jié)譜可進一步縮小可能的因素;同時還必須考慮到多種病原體感染可出現(xiàn)相似的臨床表現(xiàn),因而需要采集多種類型的標(biāo)本用于定義暴發(fā)的原因。12/10/202289在去現(xiàn)場之前,應(yīng)考慮到以下的問題在進行臨床和流行病學(xué)信息評估采樣基本原則盡早采集、根據(jù)可疑的病原體,選擇不同采集時機和標(biāo)本種類、在抗生素應(yīng)用前采集、遵守?zé)o菌操作、正確保存和運送。容器應(yīng)密封不易碎,標(biāo)本不得污染容器的口和外壁。12/10/202290采樣基本原則12/10/202216標(biāo)本種類和采集時間血液標(biāo)本全血標(biāo)本采集血清標(biāo)本采集第一份血清應(yīng)盡早(最好在發(fā)病后7天內(nèi))采集第二份血清應(yīng)在發(fā)病后第3~4周采集在病愈出院或死亡前采集血標(biāo)本1份12/10/202291標(biāo)本種類和采集時間血液標(biāo)本12/10/202217血液標(biāo)本的采集目的:血培養(yǎng)、分離血清血培養(yǎng):懷疑是細(xì)菌性疾病,特別是腦膜炎或疑似菌血癥的病人均要抽血。在病人高熱時可采取靜脈血3ml,注入雙相血培養(yǎng)瓶(也可用盛有30ml葡萄糖肉湯的三角瓶)內(nèi)增菌培養(yǎng)。分離血清用于抗體檢測。在疾病急性期和恢復(fù)期各采血2-3ml12/10/202292血液標(biāo)本的采集目的:血培養(yǎng)、分離血清12/10/202218血培養(yǎng)瓶含有0.025%SPS(聚茴香腦磺酸鈉sodiumpolyanetholsulfonateSPS),可以起到抗凝、抗吞噬、抗鰲合的作用;還含有樹脂、炭顆粒,可吸收血液中的抗生素,提高細(xì)菌培養(yǎng)的陽性率。血量>3ml時,將血分別放入兩個血培養(yǎng)瓶,若瓶子裝血太多將降低降低陽性率。12/10/202293血培養(yǎng)瓶含有0.025%SPS(聚茴香腦磺酸鈉sodium用真空負(fù)壓采血管采集血液標(biāo)本5ml,室溫靜置30分鐘,1500~2000rpm離心10分鐘,收集血清于2ml無菌螺口塑料管中12/10/202294用真空負(fù)壓采血管采集血液標(biāo)本5ml,室溫靜置30分鐘,150標(biāo)本種類和采集時間呼吸道標(biāo)本上呼吸道標(biāo)本:咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液、深咳痰液下呼吸道標(biāo)本:呼吸道抽取物、支氣管灌洗液、肺組織活檢標(biāo)本盡早采集上述標(biāo)本,發(fā)病一至兩周也可采集12/10/202295標(biāo)本種類和采集時間呼吸道標(biāo)本12/10/20222112/10/20229612/10/202222呼吸道標(biāo)本12/10/202297呼吸道標(biāo)本12/10/202223拭子的選擇

應(yīng)使用頭部為合成纖維的拭子(例如,聚酯纖維),用鋁或塑料做柄。不推薦棉拭子和木柄。12/10/202298拭子的選擇應(yīng)使用頭部為合成纖維的拭子(例如,聚酯纖維),用12/10/20229912/10/202225急性呼吸道綜合癥的可疑暴發(fā)可能的病原體白喉鏈球菌性咽炎猩紅熱漢坦病毒肺綜合癥百日咳嗜血流感桿菌呼吸道合胞病毒肺鏈軍團肺炭疽肺鼠疫支原體喉拭子血清血清鼻咽拭子血清血培養(yǎng)血清痰、尿肺泡灌洗液流感禽流感咽拭子氣管吸取物血清12/10/2022100急性呼吸道綜合癥的可疑暴發(fā)可能的病原體白喉漢坦病毒肺綜合癥百需要準(zhǔn)備的材料運送培養(yǎng)基、拭子、壓舌板消毒的螺旋蓋管、真空采血管、5ml注射器75%酒精、壓脈帶、記號筆等。12/10/2022101需要準(zhǔn)備的材料運送培養(yǎng)基、拭子、壓舌板12/10/20222運送培養(yǎng)基的選擇維持活力,不增菌的非營養(yǎng)性半固體培養(yǎng)基Stuarts,Cary-Blair,Amies,STGG四種主要的運送培養(yǎng)基。12/10/2022102運送培養(yǎng)基的選擇維持活力,不增菌的非營養(yǎng)性半固體培養(yǎng)基12/127C

Softaluminumwire-greencap

軟金屬,易彎曲.143C

Regularaluminumwire-orangecap

男性尿道拭子139C

Doubleplasticswabs-redcap

咽拭子、陰道拭子、傷口和皮膚12/10/2022103127C

Softaluminumwire-gree195C

Flexibletwistedwire-bluecap

Designedspecificallyfornasopharyngealsampling.Veryflexible,willbendandyieldwhenincontactwithposteriornasopharyngealwall.Featuresasafeloopshapedwiretipcoveredwithsoftrayon.鼻咽拭子標(biāo)本12/10/2022104195C

Flexibletwistedwire-b12/10/202210512/10/202231Stuarts——主要成分甘油磷酸鈉硫代硫酸鈉氯化鈣亞甲蘭瓊脂炭粉12/10/2022106Stuarts——主要成分甘油磷酸鈉12/10/202232Stuarts運送培養(yǎng)基12/10/2022107Stuarts運送培養(yǎng)基12/10/202233Cary-Blair運送培養(yǎng)基克服在運送腸道菌時,因這些菌含有甘油磷酸脫氫酶,造成低度氧化,使細(xì)菌能代謝而生長。特別適合于運送含弧菌的標(biāo)本。研究顯示,在28℃情況下,Cary-Blair可維持弧菌活力22天,沙門氏、志賀氏菌49天;70~80℃副溶血弧菌可達35天。12/10/2022108Cary-Blair運送培養(yǎng)基克服在運送腸道菌時,因這些菌含Cary-Blair運送培養(yǎng)基12/10/2022109Cary-Blair運送培養(yǎng)基12/10/202235100株菌

Stuart'sAmies時間菌株存活數(shù)

菌株存活數(shù)24小時919848小時798772小時5677Amies運送培養(yǎng)基---Stuarts的改良產(chǎn)品(含活性炭)用磷酸鹽緩沖液代替甘油磷酸鈉等12/10/2022110100株菌Stuart'sAmies時間菌株存活數(shù)菌株存STGG運送保存培養(yǎng)基(Skim-milktrytoneglucoseglycerol,STGG)脫脂牛奶粉(Difco)2g胰酶大豆肉湯(TSB,Oxoid)3g葡萄糖0.5g甘油10ml消毒蒸餾水100ml12/10/2022111STGG運送保存培養(yǎng)基(Skim-milktrytoneg鼻咽拭子插入STGG培養(yǎng)基后,可立即凍存標(biāo)本。報告顯示,置冰上幾小時后再放置-70℃,肺炎鏈球菌、嗜血流感桿菌的活力仍能維持,在-20℃環(huán)境可達8周。置于-70℃的STGG中保存的鼻咽分泌物,其肺炎鏈球菌的分離率與直接接種平板相似,保存于-20℃分離率亦可接受,而4℃環(huán)境保存5天,分離率不理想。STGG運送保存培養(yǎng)基12/10/2022112鼻咽拭子插入STGG培養(yǎng)基后,可立即凍存標(biāo)本。報告顯示,置冰需要采集的標(biāo)本上呼吸道感染:鼻咽拭子咽拭子血下呼吸道感染:痰標(biāo)本支氣管灌洗液胸液血12/10/2022113需要采集的標(biāo)本上呼吸道感染:12/10/202239上呼吸道可能的致病菌β-溶血性鏈球菌:A、B、C、G群鏈球菌等;肺炎鏈球菌、嗜血流感桿菌、金黃色葡萄球菌;白喉棒狀桿菌、百日咳等12/10/2022114上呼吸道可能的致病菌β-溶血性鏈球菌:A、B、C、G群鏈球菌下呼吸道感染性疾病可能的致病菌肺炎鏈球菌嗜血流感桿菌腸球菌肺炎克雷伯氏菌β-溶血性鏈球菌軍團菌百日咳菌屬

金黃色葡萄球菌腦膜炎奈瑟氏菌屬假單胞菌肺炎支原體肺炎衣原體12/10/2022115下呼吸道感染性疾病可能的致病菌肺炎鏈球菌12/10/2022咽拭子的采集對健康人群或病人密切接觸者進行帶菌檢驗時一般采咽拭子。用無菌棉拭子擦取懸雍垂后之鼻咽部粘膜數(shù)下,應(yīng)避免接觸口腔內(nèi)其它部分,直接接種到巧克力雙抗平板或0.5%葡萄糖增菌肉湯中。12/10/2022116咽拭子的采集對健康人群或病人密切接觸者進行帶菌檢驗時一般采咽干采用2根聚丙烯纖維頭的塑料桿拭子同時擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁,將拭子頭浸入含3ml采樣液的螺口管中,尾部棄去,旋緊管蓋。12/10/2022117干采12/10/202243咽拭采集的正確與否?wrongright12/10/2022118咽拭采集的正確與否?wrongright12/10/2022鼻拭子的采集將1根聚丙烯纖維頭的塑料桿拭子輕輕插入鼻道內(nèi)鼻腭處,停留片刻后緩慢轉(zhuǎn)動退出。取另一根聚丙烯纖維頭的塑料桿拭子以同樣的方法采集另一側(cè)鼻孔。上述兩根拭子浸入同一含3ml采樣液的管中,尾部棄去,旋緊管蓋。12/10/2022119鼻拭子的采集將1根聚丙烯纖維頭的塑料桿拭子輕輕插入鼻道內(nèi)鼻腭鼻咽抽取物或呼吸道抽取物的采集用與負(fù)壓泵相連的收集器從鼻咽部抽取粘液或從氣管抽取呼吸道分泌物。將收集器頭部插入鼻腔或氣管,接通負(fù)壓,旋轉(zhuǎn)收集器頭部并緩慢退出,收集抽取的粘液,并用3ml采樣液沖洗收集器1次(亦可用小孩導(dǎo)尿管接在50ml注射器上來替代收集器)。12/10/2022120鼻咽抽取物或呼吸道抽取物的采集用與負(fù)壓泵相連的收集器從鼻咽部咽漱液的采集用10ml不含抗菌素的采樣液漱口。漱口時讓患者頭部微后仰,發(fā)“噢”聲,讓洗液在咽部轉(zhuǎn)動。然后將咽漱液收集于50ml無菌的螺口塑料管中。無條件的可用平皿或燒杯收集咽漱液并轉(zhuǎn)入10ml螺口采樣管中。12/10/2022121咽漱液的采集用10ml不含抗菌素的采樣液漱口。漱口時讓患者頭深咳痰液的采集要求病人深咳后,將咳出的痰液收集于50ml含3ml采樣液的螺口塑料管中12/10/2022122深咳痰液的采集要求病人深咳后,將咳出的痰液收集于50ml含3呼吸道灌洗液的采集將收集器頭部從鼻孔或氣管插口處插入氣管(約30cm深處),注入5ml生理鹽水,接通負(fù)壓,旋轉(zhuǎn)收集器頭部并緩慢退出。收集抽取的粘液,并用采樣液涮洗收集器1次(亦可用小孩導(dǎo)尿管接在50ml注射器上來替代收集)12/10/2022123呼吸道灌洗液的采集將收集器頭部從鼻孔或氣管插口處插入氣管(約常用的病毒采樣保存液成分pH7.0~7.6的Hanks液或MEM/DMEM液或生理鹽水。在采樣液中需加入抗菌素,可用青霉素(終濃度為100U/ml)、慶大霉素(終濃度為1mg/ml)和抗真菌藥物(終濃度為2μg/ml)12/10/2022124常用的病毒采樣保存液成分pH7.0~7.6的Hanks液或M病毒采樣盒咽拭子器具12/10/2022125病毒采樣盒咽拭子器具12/10/202251出血點滲液接種0.5%葡萄糖增菌肉湯或直接接種含雙抗巧克力平板和血平板接種增菌肉湯或直接接種巧克力平板和血平板咽拭子血液接種血培養(yǎng)瓶分離血清檢測IgG涂片G染色12/10/2022126出血點滲液接種0.5%葡萄糖增菌肉湯或直接接種含雙抗巧克力平患者站立或床上坐直,在收集前囑咐患者用開水含漱口腔;深呼吸,從深部咳痰,將痰吐入已消毒的廣口螺旋蓋管(25~50ml)內(nèi);痰量1-2ml,如不足,應(yīng)重復(fù)上述步驟。痰標(biāo)本的采集12/10/2022127患者站立或床上坐直,在收集前囑咐患者用開水含漱口腔;深呼吸,接種培養(yǎng)板的選擇根據(jù)所要檢測的目的菌而定,一般選擇兩種平板:血平板和巧克力平板鏈球菌屬:新鮮綿羊血(或馬血)平板奈瑟氏菌屬:巧克力平板(CAP),不含抗生素嗜血流感桿菌:含300μg/ml的桿菌肽的巧克力平板12/10/2022128接種培養(yǎng)板的選擇根據(jù)所要檢測的目的菌而定,一般選擇兩種平板:標(biāo)本種類和采集時間腸道標(biāo)本糞便標(biāo)本采集肛拭標(biāo)本采集發(fā)病后盡可能早的采集標(biāo)本糞便標(biāo)本采集12/10/2022129標(biāo)本種類和采集時間腸道標(biāo)本12/10/202255腸道標(biāo)本的采集采集5~10g糞便或采集肛拭子標(biāo)本置于含3~10ml無菌采樣液的螺口管中,嚴(yán)格密封12/10/2022130腸道標(biāo)本的采集采集5~10g糞便或采集肛拭子標(biāo)本置于含3~1腸道標(biāo)本的采集用具12/10/2022131腸道標(biāo)本的采集用具12/10/202257腦脊液標(biāo)本的采集正常人的腦脊液是無菌的。以無菌手續(xù)通過腰椎穿刺采集腦脊液3-5ml,應(yīng)立即送檢或床邊接種。應(yīng)在35℃保溫運送。

12/10/2022132腦脊液標(biāo)本的采集12/10/202258腦脊液(CSF)CSF一經(jīng)采集,就應(yīng)盡快送到實驗室,運送過程中,標(biāo)本應(yīng)置于18~37℃的環(huán)境,不要暴露于陽光下或冷凍保存。若CSF不能馬上送到實驗室處理,延遲在幾小時之內(nèi),可將血培養(yǎng)瓶或螺旋管蓋擰松,置35℃、5%CO2環(huán)境。12/10/2022133腦脊液(CSF)CSF一經(jīng)采集,就應(yīng)盡快送到實驗室,運送過程CSF離心1000~2000rpm,3~5min上清(用于膠乳凝集試驗)沉淀(混勻)接種平板培養(yǎng)注:如若CSF不足1ml,不必離心,直接進行G染色

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