骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療心力衰竭的實(shí)驗(yàn)研究研究生：導(dǎo)師：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療心力衰竭的實(shí)驗(yàn)研究研究生：1一、研究背景

一、研究背景2心肌病、難治性心力衰竭等心血管疾病仍嚴(yán)重威脅著人類(lèi)的生命。各種心肌疾病→心肌缺血、壞死→有功能的心肌細(xì)胞、心肌組織↓→纖維組織增生、取代→形成瘢痕組織→進(jìn)行性的心收縮功能不良、心腔擴(kuò)張和心力衰竭。

心肌病、難治性心力衰竭等心血管疾病仍嚴(yán)重威脅著人類(lèi)的生命。3內(nèi)科治療：不能替代壞死心?。恍呐K移植：供體少、費(fèi)用高→難以推廣細(xì)胞移植：帶來(lái)了新的曙光內(nèi)科治療：不能替代壞死心肌；4移植細(xì)胞異體細(xì)胞自體細(xì)胞骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植細(xì)胞異體細(xì)胞自體細(xì)胞骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞5骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）分化：（1）心肌細(xì)胞（2）內(nèi)皮細(xì)胞（3）平滑肌細(xì)胞

優(yōu)點(diǎn)：(1)自體移植，不存在免疫排斥問(wèn)題。(2)MSCs定向分化的能力較強(qiáng)(3)來(lái)源廣，容易獲取。(4)不存在倫理道德上的爭(zhēng)議。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）分化：優(yōu)點(diǎn)：6現(xiàn)有的研究已證實(shí)，MSCs移植→減少梗死面積改善心功能增加新生血管形成

現(xiàn)有的研究已證實(shí)，MSCs移植→減少梗死面積7二、研究目的

分離純化骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)阿霉素誘導(dǎo)的心力衰竭大鼠心功能的影響。

二、研究目的分離純化骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，探8三、材料與方法三、材料與方法9動(dòng)物：

具有同基因背景的近交系F344大鼠藥品及試劑：

注射用鹽酸阿霉素、淋巴細(xì)胞分離液、胎牛血清、低糖DMEM培養(yǎng)基、胰蛋白酶、5-溴-2′脫氧尿苷(BrdU)、小鼠抗大鼠Brdu單克隆抗體、SP法試劑盒、濃縮型DAB試劑盒、小鼠抗大鼠單抗CD11b/c-FITC、CD34-FITC、CD44-PE和CD90-PE，以及相應(yīng)同型對(duì)照單抗小鼠IgG1-FITC、IgG1-PE、IgG2a–PE和IgG2a–FITC等設(shè)備及器械：

BCM-1000型生物潔凈工作臺(tái)、37℃恒溫CO2培養(yǎng)箱、倒置相差顯微鏡、－70℃超低溫冰箱、LXJ－Ⅱ離心機(jī)、RM6240型生物信號(hào)采集分析系統(tǒng)、YP100型壓力換能器、流式細(xì)胞儀等動(dòng)物：10實(shí)驗(yàn)路線(xiàn)1：細(xì)胞部分MSCs分離純化接種傳代鑒定BrdU標(biāo)記標(biāo)記率檢測(cè)細(xì)胞移植實(shí)驗(yàn)路線(xiàn)1：細(xì)胞部分MSCs分離純化接種傳代鑒定BrdU標(biāo)記11實(shí)驗(yàn)路線(xiàn)2：動(dòng)物實(shí)驗(yàn)F344大鼠ADR注射細(xì)胞移植組心功測(cè)定＋組化分析細(xì)胞移植DMEM注射移植對(duì)照組NS注射F344大鼠正常對(duì)照組實(shí)驗(yàn)路線(xiàn)2：動(dòng)物實(shí)驗(yàn)F344ADR注射細(xì)胞移植組心功測(cè)定＋組12（一）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及心力衰竭模型建立1.隨機(jī)選取10只大鼠作為正常對(duì)照組（NS腹腔注射）2.其余36只大鼠，采用腹腔注射阿霉素（2mg/kg，每周一次，共六次）建立心力衰竭模型3.存活大鼠再隨機(jī)分為2組：移植對(duì)照組、細(xì)胞移植組

（一）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及心力衰竭模型建立1.隨機(jī)選取10只大鼠13（二）MSCs的分離及培養(yǎng)：1.將F344大鼠處，無(wú)菌條件下獲取股骨和脛骨，用培養(yǎng)液沖洗骨髓腔，獲取全部骨髓細(xì)胞2.采用淋巴細(xì)胞分離液進(jìn)行分離純化3.細(xì)胞以1×104/cm2的密度接種于培養(yǎng)瓶，置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)4.48h后首次換液,以后約3－4天換液一次5.待細(xì)胞生長(zhǎng)至鋪滿(mǎn)瓶壁的2/3以上時(shí)，進(jìn)行消化、傳代（二）MSCs的分離及培養(yǎng)：1.將F344大鼠處，無(wú)菌14（三）、MSCs的鑒定：

1.倒置顯微鏡下觀察MSCs的形態(tài)。2.MSCs的流式細(xì)胞儀鑒定：檢測(cè)MSCs細(xì)胞表面抗原CD11b/c、CD34、CD44和CD90的表達(dá)

第3代MSCs消化離心洗滌濾過(guò)

一抗孵育離心洗滌上機(jī)檢測(cè)

（三）、MSCs的鑒定：

1.倒置顯微鏡下觀察MSCs的形態(tài)15（四）、MSCs的標(biāo)記：1.BrdU儲(chǔ)存液的配制：將10mgBrdU、0.8mL二甲基亞砜和1.2mL蒸餾水充分混勻，4℃避光保存。2.移植前，待細(xì)胞達(dá)到50％融合時(shí)，在細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入上述BrdU液，終濃度調(diào)至50mg/L，于37℃、含5％的CO2的飽和濕度培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)48h。（四）、MSCs的標(biāo)記：1.BrdU儲(chǔ)存液的配制：將10m16（五）、MSCs的BrdU標(biāo)記率檢測(cè)：第3代MSCs細(xì)胞爬片BrdU孵育48hPBS甲醛固定3%H2O2滅活內(nèi)源性酶

酸變性胰酶修復(fù)非免疫血清封閉液PBS（陰性對(duì)照）一抗1：200生物素化二抗SABCDAB顯色蒸餾水蒸餾水蒸餾水、PBSPBSPBSPBS蘇木素復(fù)染（陰性對(duì)照）PBS蒸餾水（五）、MSCs的BrdU標(biāo)記率檢測(cè)：第3代MSCs細(xì)胞爬片17（六）、MSCs移植：1.細(xì)胞移植組：大鼠腹腔阿霉素末次注射后1周，將標(biāo)記好的MSCs50μl（細(xì)胞數(shù)3×106），從股靜脈緩慢注入。2.移植對(duì)照組：股靜脈緩慢注入DMEM培養(yǎng)基50μl。3.正常組不做任何處理。（六）、MSCs移植：1.細(xì)胞移植組：大鼠腹腔阿霉素末次注射18（七）、大鼠心功能的測(cè)定：儀器準(zhǔn)備、參數(shù)調(diào)節(jié)大鼠麻醉、固定去毛、切開(kāi)皮膚

手術(shù)分離右頸總動(dòng)脈插入自制心導(dǎo)管緩慢推進(jìn)至左心室穩(wěn)定后測(cè)量LVSP、LVDP、HR及±dP/dtmax

（七）、大鼠心功能的測(cè)定：儀器準(zhǔn)備、參數(shù)調(diào)節(jié)大鼠麻醉、固定去19（八）、MSCs移植后的心臟歸巢檢測(cè)：心臟甲醛固定酒精脫水、石蠟包埋切片脫蠟、水化3%H2O2滅活內(nèi)源性酶

酸變性胰酶修復(fù)非免疫血清封閉液PBS（陰性對(duì)照）一抗1：200生物素化二抗SABCDAB顯色蒸餾水蒸餾水、PBSPBSPBSPBS固綠復(fù)染PBS蒸餾水透明封片（八）、MSCs移植后的心臟歸巢檢測(cè)：心臟甲醛固定酒精脫水、20（九）、統(tǒng)計(jì)分析

所得的數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）表示SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)多個(gè)樣本均數(shù)比較采用oneway-ANOVA檢驗(yàn)P﹤0.05表示有顯著性差異。（九）、統(tǒng)計(jì)分析

所得的數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）21四、結(jié)果四、結(jié)果22MSCs貼壁生長(zhǎng)示意圖MSCs貼壁生長(zhǎng)示意圖23其余結(jié)果略，呵呵！其余結(jié)果略，呵呵！24五、討論五、討論25阿霉素鈣超載自由基作用能量代謝障礙抑制基因表達(dá)心肌損傷、舒縮功能障礙心力衰竭阿霉素心肌損害機(jī)制阿霉素鈣超載自由基作用能量代謝障礙抑制基因表達(dá)心肌損傷、舒26阿霉素誘導(dǎo)的心衰模型成功構(gòu)建

判定指標(biāo)：①行為表現(xiàn)②肝淤血③心功能（LVSP、LVEP、±dP/dtmax）

阿霉素誘導(dǎo)的心衰模型成功構(gòu)建27本研究發(fā)現(xiàn)從開(kāi)始腹腔注射阿霉素第2周起，造模組大鼠即開(kāi)始出現(xiàn)程度不等的中毒癥狀，表現(xiàn)為精神委靡，腹瀉，皮毛松軟失去光澤，活動(dòng)、進(jìn)食減少，體重減輕等大鼠斷頭處死之后發(fā)現(xiàn)，造模組大鼠均有不同稱(chēng)度的肝淤血、胸腔積液及粘連

【生物醫(yī)學(xué)】骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療心力衰竭的實(shí)驗(yàn)研究課件28MSCs的分離和純化方法貼壁篩選法密度梯度離心法免疫分選法MSCs的分離貼壁篩選法密度梯度離心法免疫分選法29MSCs的鑒定：MSCs的表型不均一，分別具有間充質(zhì)細(xì)胞、上皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的特點(diǎn);MSCs陽(yáng)性表達(dá)的抗原:SB-10、SH-2、SH-3、SH-4、CD29、CD44、CD71、CD90、CD106、CD120a和CD124等；MSCs陰性表達(dá)的抗原:CD1a、CD11b/c、CD31、CD34、CD14、CD45、CD56、ESA等

MSCs的鑒定：MSCs的表型不均一，分別具有間充質(zhì)細(xì)胞、30本研究選用了CD11b/c、CD34、CD44、CD90表面抗原對(duì)MSCs進(jìn)行表型鑒定CD11b/c為巨嗜細(xì)胞表型，CD34為造血細(xì)胞表型結(jié)果證實(shí)MSCs不表達(dá)CD11b/c和CD34而表達(dá)CD44和CD90。【生物醫(yī)學(xué)】骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療心力衰竭的實(shí)驗(yàn)研究課件31MSCs的移植途徑

局部直接注入：

直視下心肌內(nèi)直接注射、經(jīng)導(dǎo)管冠狀動(dòng)脈內(nèi)注射及經(jīng)導(dǎo)管心肌內(nèi)直接注射

全身注入：MSCs的歸巢（homing）功能：Orlic：細(xì)胞→梗死心肌周?chē)固旌蟆瓑乃佬募〉?8％；Kocher：細(xì)胞→尾靜脈注入→２周后→壞死心肌上出現(xiàn)移植細(xì)胞分化的內(nèi)皮細(xì)胞

MSCs的移植途徑局部直接注入：32【生物醫(yī)學(xué)】骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療心力衰竭的實(shí)驗(yàn)研究課件33MSCs移植改善心功能的機(jī)制移植的干細(xì)胞分化形成了新的心肌細(xì)胞和血管移植的細(xì)胞維持了受損心肌的相對(duì)完整性移植的細(xì)胞分泌某些血管生成因子、生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子等物質(zhì)干細(xì)胞激發(fā)某種化學(xué)反應(yīng)，改善局部細(xì)胞的功能

MSCs移植改善心功能的機(jī)制移植的干細(xì)胞分化形成了新的心肌34展望一系列基礎(chǔ)及臨床研究均獲得了振奮人心的結(jié)果隨著基礎(chǔ)、臨床研究的繼續(xù)開(kāi)展，尚存的諸多難題將得以一一解決MSCs移植有望成為心肌病、難治性心力衰竭的一種有效治療方法展望一系列基礎(chǔ)及臨床研究均獲得了振奮人心的結(jié)果35六、結(jié)論采用腹腔注射阿霉素，可成功復(fù)制阿霉素誘導(dǎo)的心力衰竭大鼠模型。體外培養(yǎng)的第三代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞均一表達(dá)CD44和CD90，不表達(dá)CD11b/c和CD34。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植后4周，在受體大鼠的心臟上可發(fā)現(xiàn)移植的細(xì)胞存活。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植可明顯改善阿霉素誘導(dǎo)的心力衰竭大鼠的心功能。六、結(jié)論采用腹腔注射阿霉素，可成功復(fù)制阿霉素誘導(dǎo)的心36七、致謝本課題是在林明教授和謝良地教授無(wú)微不至的關(guān)心和指導(dǎo)下完成的。兩位導(dǎo)師嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目蒲凶黠L(fēng)、精益求精的治學(xué)態(tài)度和誨人不倦的精神將使我受益終生。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中還得到高血壓研究所吳可貴教授、王華軍主管技師、許昌聲技師和其他同學(xué)，以及福建醫(yī)科大學(xué)高雅萍老師、生理教研室彭小鵬老師和分子中心趙榕老師的指導(dǎo)幫助和大力支持。在此一并致予衷心的感謝。七、致謝本課題是在林明教授和謝良地教授無(wú)微不至的關(guān)心37謝謝！謝謝！38骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療心力衰竭的實(shí)驗(yàn)研究研究生：導(dǎo)師：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療心力衰竭的實(shí)驗(yàn)研究研究生：39一、研究背景

一、研究背景40心肌病、難治性心力衰竭等心血管疾病仍嚴(yán)重威脅著人類(lèi)的生命。各種心肌疾病→心肌缺血、壞死→有功能的心肌細(xì)胞、心肌組織↓→纖維組織增生、取代→形成瘢痕組織→進(jìn)行性的心收縮功能不良、心腔擴(kuò)張和心力衰竭。

心肌病、難治性心力衰竭等心血管疾病仍嚴(yán)重威脅著人類(lèi)的生命。41內(nèi)科治療：不能替代壞死心??；心臟移植：供體少、費(fèi)用高→難以推廣細(xì)胞移植：帶來(lái)了新的曙光內(nèi)科治療：不能替代壞死心肌；42移植細(xì)胞異體細(xì)胞自體細(xì)胞骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植細(xì)胞異體細(xì)胞自體細(xì)胞骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞43骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）分化：（1）心肌細(xì)胞（2）內(nèi)皮細(xì)胞（3）平滑肌細(xì)胞

優(yōu)點(diǎn)：(1)自體移植，不存在免疫排斥問(wèn)題。(2)MSCs定向分化的能力較強(qiáng)(3)來(lái)源廣，容易獲取。(4)不存在倫理道德上的爭(zhēng)議。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）分化：優(yōu)點(diǎn)：44現(xiàn)有的研究已證實(shí)，MSCs移植→減少梗死面積改善心功能增加新生血管形成

現(xiàn)有的研究已證實(shí)，MSCs移植→減少梗死面積45二、研究目的

分離純化骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)阿霉素誘導(dǎo)的心力衰竭大鼠心功能的影響。

二、研究目的分離純化骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，探46三、材料與方法三、材料與方法47動(dòng)物：

具有同基因背景的近交系F344大鼠藥品及試劑：

注射用鹽酸阿霉素、淋巴細(xì)胞分離液、胎牛血清、低糖DMEM培養(yǎng)基、胰蛋白酶、5-溴-2′脫氧尿苷(BrdU)、小鼠抗大鼠Brdu單克隆抗體、SP法試劑盒、濃縮型DAB試劑盒、小鼠抗大鼠單抗CD11b/c-FITC、CD34-FITC、CD44-PE和CD90-PE，以及相應(yīng)同型對(duì)照單抗小鼠IgG1-FITC、IgG1-PE、IgG2a–PE和IgG2a–FITC等設(shè)備及器械：

BCM-1000型生物潔凈工作臺(tái)、37℃恒溫CO2培養(yǎng)箱、倒置相差顯微鏡、－70℃超低溫冰箱、LXJ－Ⅱ離心機(jī)、RM6240型生物信號(hào)采集分析系統(tǒng)、YP100型壓力換能器、流式細(xì)胞儀等動(dòng)物：48實(shí)驗(yàn)路線(xiàn)1：細(xì)胞部分MSCs分離純化接種傳代鑒定BrdU標(biāo)記標(biāo)記率檢測(cè)細(xì)胞移植實(shí)驗(yàn)路線(xiàn)1：細(xì)胞部分MSCs分離純化接種傳代鑒定BrdU標(biāo)記49實(shí)驗(yàn)路線(xiàn)2：動(dòng)物實(shí)驗(yàn)F344大鼠ADR注射細(xì)胞移植組心功測(cè)定＋組化分析細(xì)胞移植DMEM注射移植對(duì)照組NS注射F344大鼠正常對(duì)照組實(shí)驗(yàn)路線(xiàn)2：動(dòng)物實(shí)驗(yàn)F344ADR注射細(xì)胞移植組心功測(cè)定＋組50（一）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及心力衰竭模型建立1.隨機(jī)選取10只大鼠作為正常對(duì)照組（NS腹腔注射）2.其余36只大鼠，采用腹腔注射阿霉素（2mg/kg，每周一次，共六次）建立心力衰竭模型3.存活大鼠再隨機(jī)分為2組：移植對(duì)照組、細(xì)胞移植組

（一）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及心力衰竭模型建立1.隨機(jī)選取10只大鼠51（二）MSCs的分離及培養(yǎng)：1.將F344大鼠處，無(wú)菌條件下獲取股骨和脛骨，用培養(yǎng)液沖洗骨髓腔，獲取全部骨髓細(xì)胞2.采用淋巴細(xì)胞分離液進(jìn)行分離純化3.細(xì)胞以1×104/cm2的密度接種于培養(yǎng)瓶，置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)4.48h后首次換液,以后約3－4天換液一次5.待細(xì)胞生長(zhǎng)至鋪滿(mǎn)瓶壁的2/3以上時(shí)，進(jìn)行消化、傳代（二）MSCs的分離及培養(yǎng)：1.將F344大鼠處，無(wú)菌52（三）、MSCs的鑒定：

1.倒置顯微鏡下觀察MSCs的形態(tài)。2.MSCs的流式細(xì)胞儀鑒定：檢測(cè)MSCs細(xì)胞表面抗原CD11b/c、CD34、CD44和CD90的表達(dá)

第3代MSCs消化離心洗滌濾過(guò)

一抗孵育離心洗滌上機(jī)檢測(cè)

（三）、MSCs的鑒定：

1.倒置顯微鏡下觀察MSCs的形態(tài)53（四）、MSCs的標(biāo)記：1.BrdU儲(chǔ)存液的配制：將10mgBrdU、0.8mL二甲基亞砜和1.2mL蒸餾水充分混勻，4℃避光保存。2.移植前，待細(xì)胞達(dá)到50％融合時(shí)，在細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入上述BrdU液，終濃度調(diào)至50mg/L，于37℃、含5％的CO2的飽和濕度培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)48h。（四）、MSCs的標(biāo)記：1.BrdU儲(chǔ)存液的配制：將10m54（五）、MSCs的BrdU標(biāo)記率檢測(cè)：第3代MSCs細(xì)胞爬片BrdU孵育48hPBS甲醛固定3%H2O2滅活內(nèi)源性酶

酸變性胰酶修復(fù)非免疫血清封閉液PBS（陰性對(duì)照）一抗1：200生物素化二抗SABCDAB顯色蒸餾水蒸餾水蒸餾水、PBSPBSPBSPBS蘇木素復(fù)染（陰性對(duì)照）PBS蒸餾水（五）、MSCs的BrdU標(biāo)記率檢測(cè)：第3代MSCs細(xì)胞爬片55（六）、MSCs移植：1.細(xì)胞移植組：大鼠腹腔阿霉素末次注射后1周，將標(biāo)記好的MSCs50μl（細(xì)胞數(shù)3×106），從股靜脈緩慢注入。2.移植對(duì)照組：股靜脈緩慢注入DMEM培養(yǎng)基50μl。3.正常組不做任何處理。（六）、MSCs移植：1.細(xì)胞移植組：大鼠腹腔阿霉素末次注射56（七）、大鼠心功能的測(cè)定：儀器準(zhǔn)備、參數(shù)調(diào)節(jié)大鼠麻醉、固定去毛、切開(kāi)皮膚

手術(shù)分離右頸總動(dòng)脈插入自制心導(dǎo)管緩慢推進(jìn)至左心室穩(wěn)定后測(cè)量LVSP、LVDP、HR及±dP/dtmax

（七）、大鼠心功能的測(cè)定：儀器準(zhǔn)備、參數(shù)調(diào)節(jié)大鼠麻醉、固定去57（八）、MSCs移植后的心臟歸巢檢測(cè)：心臟甲醛固定酒精脫水、石蠟包埋切片脫蠟、水化3%H2O2滅活內(nèi)源性酶

酸變性胰酶修復(fù)非免疫血清封閉液PBS（陰性對(duì)照）一抗1：200生物素化二抗SABCDAB顯色蒸餾水蒸餾水、PBSPBSPBSPBS固綠復(fù)染PBS蒸餾水透明封片（八）、MSCs移植后的心臟歸巢檢測(cè)：心臟甲醛固定酒精脫水、58（九）、統(tǒng)計(jì)分析

所得的數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）表示SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)多個(gè)樣本均數(shù)比較采用oneway-ANOVA檢驗(yàn)P﹤0.05表示有顯著性差異。（九）、統(tǒng)計(jì)分析

所得的數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）59四、結(jié)果四、結(jié)果60MSCs貼壁生長(zhǎng)示意圖MSCs貼壁生長(zhǎng)示意圖61其余結(jié)果略，呵呵！其余結(jié)果略，呵呵！62五、討論五、討論63阿霉素鈣超載自由基作用能量代謝障礙抑制基因表達(dá)心肌損傷、舒縮功能障礙心力衰竭阿霉素心肌損害機(jī)制阿霉素鈣超載自由基作用能量代謝障礙抑制基因表達(dá)心肌損傷、舒64阿霉素誘導(dǎo)的心衰模型成功構(gòu)建

判定指標(biāo)：①行為表現(xiàn)②肝淤血③心功能（LVSP、LVEP、±dP/dtmax）

阿霉素誘導(dǎo)的心衰模型成功構(gòu)建65本研究發(fā)現(xiàn)從開(kāi)始腹腔注射阿霉素第2周起，造模組大鼠即開(kāi)始出現(xiàn)程度不等的中毒癥狀，表現(xiàn)為精神委靡，腹瀉，皮毛松軟失去光澤，活動(dòng)、進(jìn)食減少，體重減輕等大鼠斷頭處死之后發(fā)現(xiàn)，造模組大鼠均有不同稱(chēng)度的肝淤血、胸腔積液及粘連

【生物醫(yī)學(xué)】骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療心力衰竭的實(shí)驗(yàn)研究課件66MSCs的分離和純化方法貼壁篩選法密度梯度離心法免疫分選法MSCs的分離貼壁篩選法密度梯度離心法免疫分選法67MSCs的鑒定：MSCs的表型不均一，分別具有間充質(zhì)細(xì)胞、上皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的特點(diǎn);MSCs陽(yáng)性表達(dá)的抗原:SB-10、SH-2、SH-3、SH-4、CD29、CD44、CD71、CD90、CD106、CD120a和CD124等；MSCs陰性表達(dá)的抗原:CD1a、CD11b/c、CD31、CD34、CD14、CD45、CD56、ESA等

MSCs的鑒定：MSCs的表型不均一，分別具有間充質(zhì)細(xì)胞、68本研究選用了CD11b/c、CD34、CD44、CD90表面抗原對(duì)MSCs進(jìn)行表型鑒定CD11b/c為巨嗜細(xì)胞表型，CD34為造血細(xì)胞表型結(jié)果證實(shí)MSCs不表達(dá)CD11b/c和CD34而表達(dá)CD44和CD90?！旧镝t(yī)