仿制藥雜質(zhì)檢查方法建立和方法學(xué)研究與評(píng)價(jià)主講人：許真玉講習(xí)組成員：霍秀敏、高楊藥品審評(píng)中心2008年7月一、概述二、雜質(zhì)檢查方法的建立三、雜質(zhì)檢查方法學(xué)驗(yàn)證的要求四、雜質(zhì)檢查方法和方法驗(yàn)證常見(jiàn)問(wèn)題分析五、幾個(gè)小問(wèn)題的計(jì)論六、小結(jié)主要內(nèi)容2雜質(zhì)：任何影響藥物純度的物質(zhì)統(tǒng)稱為雜質(zhì)。藥品中的雜質(zhì)按其理化性質(zhì)一般分為三類：有機(jī)雜質(zhì)、無(wú)機(jī)雜質(zhì)及殘留溶劑。有關(guān)物質(zhì)：有機(jī)雜質(zhì)包括工藝中引入的雜質(zhì)和降解產(chǎn)物等，可能是已知的或未知的、揮發(fā)性的或不揮發(fā)性的。由于這類雜質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)一般與活性成分類似或具淵源關(guān)系，故通常又可稱之為有關(guān)物質(zhì)。有關(guān)物質(zhì)包括已知雜質(zhì)和未知雜質(zhì)。主要內(nèi)容31、雜質(zhì)檢查方法和方法學(xué)驗(yàn)證對(duì)仿制藥的重要意義（1）安全性的重要保證-關(guān)注毒性雜質(zhì)（2）評(píng)價(jià)仿制藥質(zhì)量是否一致的關(guān)健指標(biāo)之一-仿制藥與被仿制藥的質(zhì)量一致-雜質(zhì)的種類和數(shù)量不高于被仿制藥（3）雜質(zhì)研究的基礎(chǔ)-雜質(zhì)檢查方法不合適或方法學(xué)驗(yàn)證不完善，雜質(zhì)檢查不可靠，無(wú)法準(zhǔn)確評(píng)價(jià)藥品質(zhì)量一、概述4仿制藥與被仿制藥一致性要求↓藥學(xué)方面一致（含量、結(jié)構(gòu)、雜質(zhì)、其它檢查項(xiàng)等）↓雜質(zhì)的數(shù)量和種類低于被仿制藥，否則需要分析雜質(zhì)的安全性并提供有關(guān)數(shù)據(jù)，必要時(shí)應(yīng)進(jìn)行相關(guān)的安全性試驗(yàn)↓建立雜質(zhì)適宜的雜質(zhì)檢查方法用于判斷一致性↓用于工藝優(yōu)化、去除雜質(zhì)、考察穩(wěn)定性、控制藥物質(zhì)量一、概述52、目前國(guó)內(nèi)仿制藥研究中雜質(zhì)檢查面臨的困難-雜質(zhì)來(lái)源不清被仿制藥和仿制藥雜質(zhì)的種類和數(shù)量不清，包括雜質(zhì)產(chǎn)生或引入過(guò)程、降解途徑-雜質(zhì)檢查方法缺乏針對(duì)性不知控制何種雜質(zhì)以及為何控制，缺乏安全性數(shù)據(jù)的支持-雜質(zhì)對(duì)照品制備困難（受限于工藝?yán)щy），方法驗(yàn)證不充分-雜質(zhì)檢查結(jié)果難于評(píng)價(jià)研究基礎(chǔ)薄弱，需要提高雜質(zhì)研究水平，包括雜質(zhì)檢查方法和驗(yàn)證水平，以提高仿制藥研制水平一、概述6例鹽酸曲美他嗪片進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)釆用梯度洗脫，對(duì)3種已知雜質(zhì)、單個(gè)未知雜質(zhì)及總雜質(zhì)分別進(jìn)行控制國(guó)內(nèi)仿制釆用等度洗脫，僅對(duì)未知雜質(zhì)（單個(gè)雜質(zhì)和/或總雜質(zhì)）進(jìn)行控制國(guó)內(nèi)同品種標(biāo)準(zhǔn)對(duì)有關(guān)物質(zhì)的規(guī)定：總雜質(zhì)不得過(guò)1.0%。一、概述7例BP收載的核黃素磷酸鈉雜質(zhì)檢驗(yàn)-HPLC法-已知雜質(zhì)核黃素：對(duì)照品法-其它雜質(zhì)：相對(duì)保留時(shí)間加上自身對(duì)照的方法·5-單磷酸核黃素的保留時(shí)間為20分鐘·3，4-二磷酸核黃素大約0.2·3，5-二磷酸核黃素大約0.3·4，5-二磷酸核黃素大約0.5·3-單磷酸核黃素大約0.7·4-單磷酸核黃素大約0.9·核黃素大約2-4-單單磷酸核黃素峰與5-單磷酸核黃素峰的分離度應(yīng)不小于1.5一、概述83、本講所依托的主要技術(shù)指導(dǎo)原則和技術(shù)要求《化學(xué)藥物雜質(zhì)研究的技術(shù)指導(dǎo)原則》《已有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)藥品研究技術(shù)指導(dǎo)原則》過(guò)渡期品種集中審評(píng)（化學(xué)藥品）技術(shù)要求FDA、ICH的相關(guān)指導(dǎo)原則-GuidanceforIndustry,ANDAs:ImpuritiesinDrugSubstances,Chemistry,Manufacturing,andControlsInformation-ANDAs:ImpuritiesinDrugProducts-Q3A(R)-Q3B(R)一、概述94、本講雜質(zhì)的范圍有機(jī)雜質(zhì)-包括工藝中引入的雜質(zhì)和降解產(chǎn)物，化學(xué)結(jié)構(gòu)與活性成分的分子式類似或具淵源關(guān)系，通常稱為有關(guān)物質(zhì)無(wú)機(jī)雜質(zhì)-產(chǎn)生的無(wú)機(jī)物殘留溶劑-生產(chǎn)過(guò)程中使用的有機(jī)溶劑來(lái)源-工藝雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、從反應(yīng)物及試劑中混入的雜質(zhì)（外源性雜質(zhì)）等結(jié)構(gòu)雜質(zhì)-幾何異構(gòu)體、光學(xué)異構(gòu)體、聚合物、其它甾體、其它氨基酸一、概述10目的-1、、建立立雜質(zhì)質(zhì)檢查查方法法是質(zhì)質(zhì)控的的要求求·包括括具體體的分分析操操作方方法，，以及及計(jì)算算方法法，限度要要求-2、、用于于分析析雜質(zhì)質(zhì)譜·考察察與被被仿制制藥一一致性性，進(jìn)進(jìn)而優(yōu)優(yōu)化制制備工工藝及及穩(wěn)定定性考考察二、、雜雜質(zhì)質(zhì)檢檢查查方方法法的的建建立立11二、、雜雜質(zhì)質(zhì)檢檢查查方方法法的的建建立立121、、雜雜質(zhì)質(zhì)檢檢查查方方法法建建立立的的前前提提-（（1））被被仿仿制制藥藥雜雜質(zhì)質(zhì)譜譜如如何何？？·參參考考公公開開信信息息：：質(zhì)質(zhì)量量標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)、、說(shuō)說(shuō)明明書書、、有有關(guān)關(guān)文文獻(xiàn)獻(xiàn)和和專專利利-（（2））自自身身雜雜質(zhì)質(zhì)譜譜如如何何？？·理理論論綜綜合合分分析析、、直直接接測(cè)測(cè)試試二、、雜雜質(zhì)質(zhì)檢檢查查方方法法的的建建立立13英國(guó)國(guó)藥藥典典頭頭孢孢克克洛洛中中收收載載的的雜雜質(zhì)質(zhì)譜譜二、、雜雜質(zhì)質(zhì)檢檢查查方方法法的的建建立立14雜質(zhì)質(zhì)譜譜分分析析的的一一些些方方法法（（供供參參考考））-分析起起始原料料中可能能存在的的雜質(zhì)例：鹽酸酸曲美他他嗪的合合成中哌哌嗪的控控制二、雜質(zhì)質(zhì)檢查方方法的建建立15-分析中中間體雜雜質(zhì)-分析副副反應(yīng)及及副反應(yīng)應(yīng)產(chǎn)物制劑工藝藝中可能能的Millard反反應(yīng)雜質(zhì)產(chǎn)生生的來(lái)源源？結(jié)構(gòu)構(gòu)？工藝藝條件（（滅菌溫溫度、滅滅菌時(shí)間間）的影影響？例：氨甲甲環(huán)酸與與葡萄糖糖二、雜質(zhì)質(zhì)檢查方方法的建建立16-推測(cè)降降解產(chǎn)物物舉例：甘甘氨酰谷谷酰胺·降解雜雜質(zhì)：環(huán)環(huán)-（甘甘氨酰-谷氨酰酰胺）和和焦谷氨氨酸二、雜質(zhì)質(zhì)檢查方方法的建建立17研究頭孢孢菌素的的降解途途徑研究究，為雜雜質(zhì)譜提提供基礎(chǔ)礎(chǔ)二、雜質(zhì)質(zhì)檢查方方法的建建立18-UV法法（HPLC-PAD）二、雜質(zhì)質(zhì)檢查方方法的建建立19-LC-MS/GC-MS或或CE-MS法法-HPLC峰峰保保留留時(shí)時(shí)間間對(duì)對(duì)比比法法·用用于于未未知知雜雜質(zhì)質(zhì)或或未未定定性性雜雜質(zhì)質(zhì)的的““標(biāo)標(biāo)記記””-其其他他方方法法雜質(zhì)質(zhì)研研究究實(shí)實(shí)例例.DOC二、、雜雜質(zhì)質(zhì)檢檢查查方方法法的的建建立立202、、仿仿制制藥藥雜雜質(zhì)質(zhì)檢檢查查方方法法建建立立的的一一般般考考慮慮點(diǎn)點(diǎn)（1））參參考考被被仿仿制制藥藥的的方方法法·被被仿仿制制藥藥雜雜質(zhì)質(zhì)檢檢查查方方法法和和限限度度如如何何？？標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)中中控控制制了了哪哪些些雜雜質(zhì)質(zhì)？？·重重要要參參考考，，為為方方法法建建立立提提供供重重要要的的信信息息，，全全面面考考察察·不不可可簡(jiǎn)簡(jiǎn)單單套套-工工藝藝或或處處方方的的不不同同，，二二者者的的雜雜質(zhì)質(zhì)譜譜可可能能不不同同，，被被仿仿制制藥藥雜雜質(zhì)質(zhì)檢檢查查方方法法可可能能不不適適用用-被被仿仿制制藥藥標(biāo)標(biāo)閃閃較較低低，，無(wú)無(wú)雜雜質(zhì)質(zhì)檢檢查查項(xiàng)項(xiàng)或或控控制制較較為為簡(jiǎn)簡(jiǎn)單單-被被仿仿制制藥藥的的雜雜質(zhì)質(zhì)檢檢查查方方法法無(wú)無(wú)法法獲獲得得二、、雜雜質(zhì)質(zhì)檢檢查查方方法法的的建建立立21（2））結(jié)結(jié)合合雜雜質(zhì)質(zhì)理理化化特特點(diǎn)點(diǎn)·根根據(jù)據(jù)雜雜質(zhì)質(zhì)譜譜，，考考慮慮雜雜質(zhì)質(zhì)結(jié)結(jié)構(gòu)構(gòu)、、理理化化性性質(zhì)質(zhì)例如如：：·阿阿司司匹匹林林→→比比色色法法→→游游離離水水楊楊酸酸（（CP2005））·葡葡萄萄糖糖→→UV法法→→5-羥羥甲甲基基糠糠醛醛（（CP2005））·氨氨基基酸酸原原料料藥藥→→TLC法法→→其其他他氨氨基基酸酸（（CP2005））二、、雜雜質(zhì)質(zhì)檢檢查查方方法法的的建建立立22（3））結(jié)結(jié)合合雜雜質(zhì)質(zhì)的的毒毒性性特特點(diǎn)點(diǎn)·安安全全性性控控制制的的需需要要·被被仿仿制制藥藥和和自自身身雜雜質(zhì)質(zhì)的的毒毒性性如如何何？？重重視視藥藥理理毒毒理理及及臨臨床床安安全全性性研研究究的的結(jié)結(jié)果果的的作作用用·對(duì)對(duì)于于有有些些分分子子通通過(guò)過(guò)以以下下化化學(xué)學(xué)反反應(yīng)應(yīng)可可能能產(chǎn)產(chǎn)生生潛潛在在的的遺遺傳傳毒毒性性作作用用-烷烷基基化化-交交聯(lián)聯(lián)-脫脫嘌嘌呤呤·可可參參考考遺遺傳傳毒毒性性結(jié)結(jié)構(gòu)構(gòu)庫(kù)庫(kù)·遺遺傳傳毒毒性性雜雜質(zhì)質(zhì)或或具具有有可可能能引引起起遺遺傳傳毒毒性性的的結(jié)結(jié)構(gòu)構(gòu)（（alertingstucture））的的雜雜質(zhì)質(zhì)需需要要建建立立靈靈敏敏的的試試驗(yàn)驗(yàn)方方法法·-EMEA《《遺遺傳傳毒毒性性雜雜質(zhì)質(zhì)限限度度指指導(dǎo)導(dǎo)原原則則》》：：毒毒理理學(xué)學(xué)閾閾值值（（TTC））1.5ug/人人/日日二、、雜雜質(zhì)質(zhì)檢檢查查方方法法的的建建立立23(4)考考慮慮不不同同檢檢查查方方法法的的特特點(diǎn)點(diǎn)·主主要要是是靈靈敏敏度度和和專專屬屬性性能能否否符符合合要要求求·痕量雜質(zhì)和和遺傳毒性雜雜質(zhì)的嚴(yán)格控控制，對(duì)方法法的要求較高高-化學(xué)法vsTLC法vsHPLC法-HPLC/MS，HPLC/熒光光·CE法可可用于于微量量樣品品·GC適用用于揮揮發(fā)性性雜質(zhì)質(zhì)檢查查二、雜雜質(zhì)檢檢查方方法的的建立立24（5））注意意多種種方法法聯(lián)用用·由雜雜質(zhì)多多樣性性復(fù)雜雜性和和方法法局限限性所所決定定·單一一方法法不能能滿足足多個(gè)個(gè)雜質(zhì)質(zhì)的檢檢測(cè)時(shí)時(shí)，可可釆用用兩種或或兩種種以上上的方方法互互為補(bǔ)補(bǔ)充，，控制制雜質(zhì)質(zhì)-化學(xué)學(xué)法、、色譜譜法、、光譜譜法、、生物物檢定定法-同一方法法釆用不同同的測(cè)試條條件如正相HPLC、反反相HPLC、不同同流動(dòng)相的的反相HPLC等-分離技術(shù)術(shù)與檢測(cè)手手段聯(lián)用，，較為有效效，如HPLC、GC、LC-MS、、HPLC-PDA、CE等等例：肝素鈉鈉中多硫酸酸軟骨素的的NMR檢檢查方法二、雜質(zhì)檢檢查方法的的建立25（6）綜合合藥學(xué)其他他研究結(jié)果果·雜質(zhì)檢查查與藥物外外觀色澤、、含量等項(xiàng)項(xiàng)目間存在在密切聯(lián)系系，如果這這些項(xiàng)目發(fā)發(fā)生明顯變變化，而雜雜質(zhì)基本不不變時(shí)，應(yīng)應(yīng)分析原因因，關(guān)注雜雜質(zhì)檢查方方法的可行行性二、雜質(zhì)檢檢查方法的的建立26例：5-羥羥甲基糠醛醛的檢查方方法的綜合合分析-溶液顏色色法、紫外外法、HPLC法·葡萄糖注注射液顏色色深淺與5-HMF產(chǎn)生的量量有關(guān)，非非葡萄糖注注射液變色色唯一因素素，專屬性性、準(zhǔn)確性性差·5-HMF的最大大吸收波長(zhǎng)長(zhǎng)為284nm，干干擾較少·如果制劑劑中的主藥藥或輔料在在284nm有明顯顯的明收，，會(huì)干擾5-HMF的檢查，，可釆用HPLC法法代替二、雜質(zhì)檢檢查方法的的建立273、雜質(zhì)檢檢查常見(jiàn)方方法介紹·HPLC法-考慮被仿仿制藥的色色譜條件-參考同類類物質(zhì)質(zhì)量量標(biāo)準(zhǔn)中的的雜質(zhì)檢查查方法-一般選擇擇多種色譜譜條件·反相和正正相-方法包括括·固定相、、流動(dòng)相、、洗脫方式式、波長(zhǎng)、、測(cè)試樣品品的處理、、具體操作作、計(jì)算方方法二、、雜雜質(zhì)質(zhì)檢檢查查方方法法的的建建立立28（1））固固定定相相的的選選擇擇-根根據(jù)據(jù)待待研研究究的的藥藥物物的的特特性性選選擇擇合合適適填填料料的的柱柱子子，，常常用用RP-HPLC，，色色譜譜柱柱多多選選用用C18柱柱，，C8柱柱、、苯苯基基柱柱、、氨氨基基柱柱也也有有使使用用-C18柱柱時(shí)時(shí)，，流流動(dòng)動(dòng)相相有有機(jī)機(jī)溶溶劑劑%通通常?！荨?%-流流動(dòng)動(dòng)相相PH值值2-8PH＞＞8，，溶溶解解硅硅膠膠載載體體，，宜宜選選用用耐耐堿堿填填充充劑劑：：包包覆覆聚聚合合物物、、高高純純硅硅膠膠為為載載體體并并具具有有高高表表面面覆覆蓋蓋度度的的鍵鍵合合硅硅膠膠、、非非硅硅膠膠或或有有機(jī)機(jī)-無(wú)無(wú)機(jī)機(jī)雜雜化化填填充充劑劑-PH＜＜2，，鍵鍵合合相相水水解解脫脫落落，，宜宜選選用用耐耐酸酸填填充充劑劑：：有有機(jī)機(jī)-無(wú)無(wú)機(jī)機(jī)雜雜質(zhì)質(zhì)填填充充劑劑、、具具有有大大體體積積側(cè)側(cè)鏈鏈的的二二異異丙丙基基或或二二異異丁丁基基取取代代基基取取代代C18鍵鍵合合硅硅膠膠等等二、雜質(zhì)質(zhì)檢查方方法的建建立29注意不同同品牌柱柱子在耐耐用性方方面的研研究：-當(dāng)雜質(zhì)質(zhì)峰與主主峰的分分離情況況不十分分完美-確定輔輔料峰的的相對(duì)保保留時(shí)間間（用于于定位扣扣除輔料料峰的干干擾）-確定特特定雜質(zhì)質(zhì)的相對(duì)對(duì)保留時(shí)時(shí)間-確定有有關(guān)物質(zhì)質(zhì)出峰完完畢的保保留時(shí)間間當(dāng)不同品品牌而引引起以上上各因素素不固定定時(shí)，應(yīng)應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)中注明明品牌。。二、雜質(zhì)質(zhì)檢查方方法的建建立30（2）流流動(dòng)相的的選擇嘗試多種種流動(dòng)相相結(jié)合雜質(zhì)質(zhì)的性質(zhì)質(zhì)-手性雜雜質(zhì)-無(wú)紫外外吸收雜雜質(zhì)-一般雜雜質(zhì)（3）洗洗脫方式式的選擇擇等度洗脫脫梯度洗脫脫：極性性大的化化合物可可能被掩掩蓋，極極性小的化合物物難以被被洗脫，，甚至保保留在柱柱上，可可適用梯梯度洗脫。二、雜質(zhì)質(zhì)檢查方方法的建建立31梯度洗脫脫與等度度洗脫條條件下有有關(guān)物質(zhì)質(zhì)的分離離情況二、雜質(zhì)質(zhì)檢查方方法的建建立32（4））波長(zhǎng)長(zhǎng)的選選擇-選擇擇的原原則是是大部部分主主要雜雜質(zhì)與與主成成分均均在此此波長(zhǎng)下下有吸吸收二極管管陣列列方法法-無(wú)紫紫外吸吸收或或檢測(cè)測(cè)波長(zhǎng)長(zhǎng)處吸吸收相相差較較大的的多種種化合物物，有有時(shí)在在單一一檢測(cè)測(cè)波長(zhǎng)長(zhǎng)處不不能檢檢出-兼顧顧各雜雜質(zhì)吸吸收情情況；；特定定波長(zhǎng)長(zhǎng)檢測(cè)測(cè)特定定雜質(zhì)質(zhì)-必要要時(shí)，，改用用其他他類型型檢測(cè)測(cè)器二、雜雜質(zhì)檢檢查方方法的的建立立33三、雜雜質(zhì)檢檢查方方法驗(yàn)驗(yàn)證的的要求求34（5））樣品品的處處理和和配制制-預(yù)處處理樣樣品的的考慮慮乳膏提取可可能導(dǎo)導(dǎo)致的的雜質(zhì)質(zhì)漏檢檢和失失真衍生化化處理理導(dǎo)致致的雜雜質(zhì)丟丟失-樣品品濃度度的影影響濃度高高利于于雜質(zhì)質(zhì)的檢檢出，，但防防超載載低濃度度樣品品雜質(zhì)質(zhì)的檢檢查難難題？？二、雜雜質(zhì)檢檢查方方法的的建立立35（6））雜質(zhì)質(zhì)的定定量計(jì)計(jì)算方方法-雜質(zhì)質(zhì)對(duì)照照品法法定量準(zhǔn)準(zhǔn)確，，已知知雜質(zhì)質(zhì)，需需用雜雜質(zhì)對(duì)對(duì)照品品-校正正因子子的主主成分分自身身對(duì)照照法定量準(zhǔn)準(zhǔn)確，，已知知雜質(zhì)質(zhì)，無(wú)無(wú)需長(zhǎng)長(zhǎng)期提提供對(duì)對(duì)照品品-不加加校正正因子子的主主成分分自身身對(duì)照照法前提是是假定定雜質(zhì)質(zhì)與主主成分分的響響應(yīng)因因子基基本相相同有一定定誤差差，可可用于于未知知雜質(zhì)質(zhì)已知雜雜質(zhì)對(duì)對(duì)主成成分的的響應(yīng)應(yīng)因子子在0.9～1.1之間間-峰面積歸歸一法簡(jiǎn)便因雜質(zhì)與主主成分響應(yīng)應(yīng)因子不同同、線性范范圍不同、、儀器對(duì)它它們的積分分精度及準(zhǔn)準(zhǔn)確度不同同等因素，，有一定的的局限性二、、雜雜質(zhì)質(zhì)檢檢查查方方法法的的建建立立36目前前定定量量方方法法中中存存在在的的主主要要問(wèn)問(wèn)題題-雜雜質(zhì)質(zhì)對(duì)對(duì)照照品品法法較較少少使使用用-主主成成分分自自身身對(duì)對(duì)照照法法較較少少采采用用校校正正因因子子計(jì)計(jì)算算雜質(zhì)質(zhì)無(wú)無(wú)法法進(jìn)進(jìn)行行歸歸屬屬或或雜雜質(zhì)質(zhì)對(duì)對(duì)照照品品無(wú)無(wú)法法得得到到校正正因因子子無(wú)無(wú)法法計(jì)計(jì)算算-常常見(jiàn)見(jiàn)的的是是對(duì)對(duì)未未知知雜雜質(zhì)質(zhì)，，不不加加校校正正因因子子的的主主成成分分自身身對(duì)對(duì)照照或或面面積積歸歸一一化化法法無(wú)法法準(zhǔn)準(zhǔn)確確定定量量無(wú)法法有有效效檢檢測(cè)測(cè)雜雜質(zhì)質(zhì)二、、雜雜質(zhì)質(zhì)檢檢查查方方法法的的建建立立37TLC法法-設(shè)設(shè)備備和和操操作作簡(jiǎn)簡(jiǎn)便便，，一一些些特特定定雜雜質(zhì)質(zhì)的的檢檢查查-靈敏度較差差、定量不夠夠精確，分離離度欠佳，有有時(shí)無(wú)法滿足需需要-僅限于限度度檢查（半定定量），結(jié)合合不同原理的的檢視技術(shù)能使使各雜質(zhì)斑點(diǎn)點(diǎn)均可顯示，，彌補(bǔ)HPLC的不足-需做好系統(tǒng)統(tǒng)適用性試驗(yàn)驗(yàn)二、雜質(zhì)檢查查方法的建立立38-定量方法限度檢查（半半定量）對(duì)照品比較法法——已知雜雜質(zhì)，對(duì)照品品自身對(duì)照法———已知雜質(zhì)質(zhì)、未知雜質(zhì)質(zhì)，色調(diào)一致檢視技術(shù)———顯色、熒光光、自身顏色色等二、雜質(zhì)檢查查方法的建立立39LC-MS/GC-MS/GC-IR/CE-MS法-分離技術(shù)和和鑒別技術(shù)聯(lián)聯(lián)用，為解析析化合物的結(jié)結(jié)構(gòu)提供直接接證據(jù)-有助于雜質(zhì)質(zhì)譜的分析和和定性二、雜質(zhì)檢查查方法的建立立40方法驗(yàn)證的目目的-考察分析方方法是否適用用于雜質(zhì)的檢檢測(cè)和定量方法驗(yàn)證中面面臨的困難-雜質(zhì)譜不清清-雜質(zhì)對(duì)照品品無(wú)法獲得驗(yàn)證的具體要要求三、雜質(zhì)檢查查方法驗(yàn)證的的要求411、專屬性指在可能的共共存組分存在在時(shí)，對(duì)被分分析物準(zhǔn)確測(cè)測(cè)定的能力。。分離度-專屬性指標(biāo)標(biāo)-雜質(zhì)譜的明明確是基礎(chǔ)雜質(zhì)可得→最最難分離物質(zhì)質(zhì)對(duì)的分離試試驗(yàn)、粗品中中間體分離試試驗(yàn)、輔料與與雜質(zhì)及主成成他的分離試試驗(yàn)雜質(zhì)不可得→→強(qiáng)制降解試試驗(yàn)、與另一一成熟方法比比對(duì)峰純度-二極極管陣列、質(zhì)質(zhì)譜；改變流流動(dòng)相比例方法不夠?qū)賹贂r(shí)，應(yīng)多個(gè)個(gè)方法予以補(bǔ)補(bǔ)充三、雜質(zhì)檢查查方法驗(yàn)證的的要求42降解試驗(yàn)的注注意點(diǎn)-降解程度-當(dāng)降解產(chǎn)物物、中間體、、副產(chǎn)物吸收收波長(zhǎng)不同時(shí)時(shí)的處理-制劑降解破破壞-消除輔料的的干擾，當(dāng)無(wú)無(wú)法避開輔料料的干擾時(shí)應(yīng)應(yīng)對(duì)輔料進(jìn)行行定位予以扣扣除三、雜質(zhì)檢查查方法驗(yàn)證的的要求43破壞性試驗(yàn)-酸降解一般般釆用0.1mol/L-1mol/L鹽酸或或硫酸-堿降解釆用用0.1mol/L-1mol/L氫氧化鈉溶溶液-氧化降解釆釆用合適的過(guò)過(guò)不去氧化氫氫溶液-必要時(shí)可以以加熱或提高高濃度-高溫試驗(yàn)通通常溫度高于于加速試驗(yàn)溫溫度的10℃℃，50℃、、60℃等-對(duì)于原料藥藥有時(shí)需考慮慮水溶液或混混懸液的降解解-考慮在不同同PH值條件件下的降解-光照試驗(yàn)條條件可釆用4500LX三、雜質(zhì)檢查查方法驗(yàn)證的的要求44存在的主要問(wèn)問(wèn)題：-（1）主藥藥完全降解，，無(wú)法對(duì)降解解產(chǎn)物進(jìn)行有有效檢測(cè)-（2）由于于選擇的降解解條件強(qiáng)度不不夠，使藥物物未能降解，，而誤認(rèn)為藥藥物穩(wěn)定-（3）不能能選擇合適測(cè)測(cè)定方法測(cè)定定降解產(chǎn)物，，使主成分降降解后測(cè)定的的回收量偏低低-（4）未考考慮破壞性試試驗(yàn)時(shí)產(chǎn)生的的聚合物三、雜質(zhì)檢查查方法驗(yàn)證的的要求45三、雜質(zhì)檢查查方法驗(yàn)證的的要求462、靈敏度-試樣中能被被檢測(cè)（或定定量）的最低低量。-通常用檢測(cè)測(cè)限及定量限限表征，可根根據(jù)直觀評(píng)價(jià)價(jià)、信噪比、、響應(yīng)值的標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)差和斜率率獲得。-應(yīng)滿足質(zhì)控控需要-信噪比的方方法三、雜質(zhì)檢查查方法驗(yàn)證的的要求47三、雜質(zhì)檢查查方法驗(yàn)證的的要求483、精密度-在規(guī)定的測(cè)測(cè)試條件下，，同一個(gè)均勻勻樣品經(jīng)多次次取樣測(cè)定所所得結(jié)果之間間的接近程度度-重復(fù)性、中中間精密度、、重現(xiàn)性三、雜質(zhì)檢查查方法驗(yàn)證的的要求494、準(zhǔn)確度-測(cè)定結(jié)果與與真實(shí)值或參參考值接近程程度-已知雜質(zhì)：：回收率（根根據(jù)精密度、、專屬性、線線性）推斷-未知雜質(zhì)：：與另一成熟熟方法比對(duì)、、根據(jù)質(zhì)量平平衡原理結(jié)合合含量等結(jié)果果進(jìn)行粗略判判定，必要時(shí)時(shí)研究幾種不不同色譜條件件甚至不同測(cè)測(cè)定原理的方方法進(jìn)行比較較選用三、雜質(zhì)檢查查方法驗(yàn)證的的要求505、線性-在設(shè)計(jì)范圍圍內(nèi)，檢測(cè)響響應(yīng)值與待測(cè)測(cè)物質(zhì)量之間間成正比關(guān)系系的程度。6、-檢測(cè)方法能能達(dá)到一定精精密度、準(zhǔn)確確度和線性的的高、低濃度度或量的區(qū)間間-范圍應(yīng)在規(guī)規(guī)定限度的±±20%間或或定量限至限限度的＋20%間，若含含量測(cè)定和雜雜質(zhì)檢查同用用一套色譜系系統(tǒng)，則線性性范圍應(yīng)為雜雜質(zhì)限度的-20%至含含量限度（上上限）的+20%間三、雜質(zhì)檢檢查方法驗(yàn)驗(yàn)證的要求求517、耐用性性-指測(cè)定條條件有小的的變動(dòng)時(shí)，，測(cè)定結(jié)果果不受影響響的承受程程度-HPLC：流動(dòng)相相的組成比比例及PH值、不同同產(chǎn)家或批批號(hào)的色譜譜柱、柱效效、柱溫、、流速等及及被測(cè)溶液液的穩(wěn)定性性、樣品提提取的次數(shù)數(shù)和時(shí)間等等建議固定上上述測(cè)定條條件的參數(shù)數(shù)，如柱長(zhǎng)長(zhǎng)、填料的的粒度、溫溫度、流速速，甚至品品牌-TLC：：適當(dāng)改變變展開劑比比例及PH值，考察察耐用性。。如對(duì)色譜條條件要求苛苛刻時(shí)，規(guī)規(guī)定最難分分離物質(zhì)對(duì)對(duì)試驗(yàn)-較容易忽忽略三、雜質(zhì)檢檢查方法驗(yàn)驗(yàn)證的要求求528、溶液的的穩(wěn)定性考考察-一般在常常溫、常光光情況下進(jìn)進(jìn)行，對(duì)同同份樣品溶溶液進(jìn)行時(shí)時(shí)間的測(cè)定定，以雜質(zhì)質(zhì)量的變化化進(jìn)行考查查。-光或溫度度引起，應(yīng)應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)中中說(shuō)明避光光或?qū)嶒?yàn)溫溫度三、雜質(zhì)質(zhì)檢查方方法驗(yàn)證證的要求求539、系統(tǒng)統(tǒng)適用性性-理論板板數(shù)-柱拖尾尾因子-難分離離物質(zhì)對(duì)對(duì)的分離離度-對(duì)照品品溶液得得復(fù)進(jìn)樣樣的偏差差否則，應(yīng)應(yīng)對(duì)色譜譜系統(tǒng)作作必要的的調(diào)整或或更換色色譜柱雜質(zhì)檢查方法法驗(yàn)證實(shí)例.doc三、雜質(zhì)檢查查方法驗(yàn)證的的要求541、簡(jiǎn)單套用用被仿制藥的的檢查方法，，未建立針對(duì)對(duì)性的方法鹽酸偽麻黃堿堿，分別釆用用人工合成與與植物提取工工藝，有機(jī)溶溶劑殘留量、、有關(guān)物質(zhì)均均不同2、方法學(xué)驗(yàn)驗(yàn)證不充分-如強(qiáng)制降解解條件過(guò)于劇劇烈，無(wú)法判判斷主峰與降降解產(chǎn)物的分分離度情況-樣品經(jīng)堿解解、氧化破壞壞后主藥被完完全破壞，無(wú)無(wú)法說(shuō)明其降降解物與主峰峰的分離情況況-調(diào)整降解解條件的劇劇烈程度四、雜質(zhì)檢檢查方法和和方法驗(yàn)證證常見(jiàn)問(wèn)題題分析553、檢查方方法對(duì)雜質(zhì)質(zhì)的控制不不全面，尤尤其是對(duì)毒毒性雜質(zhì)某藥間位和和對(duì)位異構(gòu)構(gòu)體的檢查查脂質(zhì)體溶血血磷脂的檢檢查四、雜質(zhì)檢檢查方法和和方法驗(yàn)證證常見(jiàn)問(wèn)題題分析56案例間位位和對(duì)位異異構(gòu)體的控控制合成工藝簡(jiǎn)簡(jiǎn)介四、雜質(zhì)檢檢查方法和和方法驗(yàn)證證常見(jiàn)問(wèn)題題分析57合成原料中中的異構(gòu)體體雜質(zhì)產(chǎn)生的雜質(zhì)質(zhì)四、雜質(zhì)檢檢查方法和和方法驗(yàn)證證常見(jiàn)問(wèn)題題分析58以雜質(zhì)對(duì)照照品驗(yàn)證HPLC方方法的檢測(cè)測(cè)能力四、雜質(zhì)檢檢查方法和和方法驗(yàn)證證常見(jiàn)問(wèn)題題分析59建議的質(zhì)量量保證策略略√過(guò)程控制制：控制合合成原料的的純度√終產(chǎn)品控控制：檢查查終產(chǎn)品殘殘留的結(jié)構(gòu)構(gòu)異構(gòu)體四、雜質(zhì)檢檢查方法和和方法驗(yàn)證證常見(jiàn)問(wèn)題題分析60脂質(zhì)體溶血血磷脂的檢檢查四、雜質(zhì)檢檢查方法和和方法驗(yàn)證證常見(jiàn)問(wèn)題題分析614、方法靈靈敏度不夠夠-有有關(guān)關(guān)物物質(zhì)質(zhì)檢檢查查法法的的定定量量限限為為0.75ng，，標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)規(guī)規(guī)定定雜雜質(zhì)質(zhì)限限度度不不得得過(guò)過(guò)1.0%，，折折算算為為0.5ng，，表表明明此此方方法法不不能能有有效效檢檢測(cè)測(cè)產(chǎn)產(chǎn)品品雜雜質(zhì)質(zhì)，，需需重重新新建建立立有有效效的的雜雜質(zhì)質(zhì)檢檢測(cè)測(cè)方方法法5、方方法缺缺乏互互補(bǔ)性性-合成成中重重要中中間體體檢測(cè)測(cè)波長(zhǎng)長(zhǎng)處無(wú)無(wú)吸收收，建建立的的有關(guān)關(guān)物質(zhì)質(zhì)檢查查方法法無(wú)法法檢測(cè)測(cè)該物物質(zhì)-建立立該中中間體體適宜宜的要要檢測(cè)測(cè)方法法四、雜雜質(zhì)檢檢查方方法和和方法法驗(yàn)證證常見(jiàn)見(jiàn)問(wèn)題題分析析626、積積分時(shí)時(shí)間不不充分分，不不能有有效檢檢出雜雜質(zhì)-氧化化破壞壞試驗(yàn)驗(yàn)中，，主峰峰保留留時(shí)間間的3倍處處，仍仍有降降解物物峰出出現(xiàn)，，色譜譜圖記記錄至至2倍倍，不不能有有效檢檢出有有關(guān)物物質(zhì)-改進(jìn)進(jìn)7、檢檢測(cè)波波長(zhǎng)缺缺乏針針對(duì)性性-220nm附附近的的吸收收強(qiáng)度度遠(yuǎn)高高于278nm波長(zhǎng)長(zhǎng)處-提供供檢測(cè)測(cè)波長(zhǎng)長(zhǎng)選擇擇依據(jù)據(jù)四、雜雜質(zhì)檢檢查方方法和和方法法驗(yàn)證證常見(jiàn)見(jiàn)問(wèn)題題分析析638、供供試液液制備備處理理欠妥妥-有關(guān)關(guān)物質(zhì)質(zhì)檢查查中供供試液液制備備經(jīng)過(guò)過(guò)了堿堿化、、萃取取等復(fù)復(fù)雜過(guò)過(guò)程，，是否否會(huì)引引起產(chǎn)產(chǎn)品中中有關(guān)關(guān)物質(zhì)質(zhì)的變變化而而影響響了檢檢出結(jié)結(jié)果？？-供試試液制制備經(jīng)經(jīng)過(guò)了了固定定萃取取過(guò)程程，測(cè)測(cè)定結(jié)結(jié)果可可能難難以如如實(shí)反反映產(chǎn)產(chǎn)品中中雜質(zhì)質(zhì)情況