第二章藥物體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)主要內(nèi)容：第一節(jié)概述第二節(jié)藥物跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的影響因素第三節(jié)藥物的吸收第四節(jié)藥物的分布第五節(jié)藥物的排泄第六節(jié)多藥耐藥與外排轉(zhuǎn)運(yùn)體第二章藥物體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)主要內(nèi)容：1第一節(jié)概述第一節(jié)概述2藥物體內(nèi)過(guò)程藥物體內(nèi)過(guò)程3第二節(jié)藥物跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的影響因素一、生物膜組成：主要由糖、脂肪、蛋白質(zhì)組成特點(diǎn)：1、類脂（脂溶性成分易于通過(guò)）2、通道（小分子化合物）3、轉(zhuǎn)運(yùn)體（特殊化合物，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)）第二節(jié)藥物跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的影響因素一、生物膜4二、藥物的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)方式1、被動(dòng)擴(kuò)散特點(diǎn)：

1）、順濃度梯度轉(zhuǎn)運(yùn)2）、無(wú)選擇性，與藥物的油/水分配系數(shù)有關(guān)3）、無(wú)飽和現(xiàn)象

4）、無(wú)競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用

5）、不需要能量二、藥物的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)方式1、被動(dòng)擴(kuò)散5圖2-2.不同的酸性藥物的非離子型百分?jǐn)?shù)與體系的pH值關(guān)系

圖2-2.不同的酸性藥物的非離子型百分?jǐn)?shù)與體系的pH值關(guān)系62、孔道轉(zhuǎn)運(yùn)特點(diǎn)：1）、主要為水和電解質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)2）、轉(zhuǎn)運(yùn)速率與所處組織及膜的性質(zhì)有關(guān)2、孔道轉(zhuǎn)運(yùn)特點(diǎn)：73、特殊轉(zhuǎn)運(yùn)activetransport,carrier-mediatedtransport,receptor-mediatedtransport特點(diǎn)：1）、逆濃度梯度轉(zhuǎn)運(yùn)2）、常需要能量3）、有飽和現(xiàn)象

4）、有競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用

5）、有選擇性3、特殊轉(zhuǎn)運(yùn)activetransport,carrie8其它轉(zhuǎn)運(yùn)方式易化擴(kuò)散：facilitatediffusion類似于主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)，但不需要能量胞飲：pinocytosis主要轉(zhuǎn)運(yùn)大分子化合物其它轉(zhuǎn)運(yùn)方式易化擴(kuò)散：facilitatediffusio9第三節(jié)藥物吸收影響藥物吸收的因素一、劑型因素：藥物理化性質(zhì)，劑型，賦形劑，制備工藝等。二、生理病理因素種族，年齡，性別，遺傳，飲食，胃腸pH,肝功能，運(yùn)動(dòng)第三節(jié)藥物吸收影響藥物吸收的因素10一、藥物在胃腸道中的吸收胃腸道的生理特點(diǎn)

胃的生理特點(diǎn)藥物停留時(shí)間較短較小的吸收表面積強(qiáng)酸性和蛋白酶的破壞作用一、藥物在胃腸道中的吸收胃腸道的生理特點(diǎn)11腸道的生理學(xué)特點(diǎn)較大的表面積藥物停留時(shí)間較長(zhǎng)血流量豐富代謝酶的作用分泌功能腸道的生理學(xué)特點(diǎn)較大的表面積122、藥物胃腸轉(zhuǎn)運(yùn)2、藥物胃腸轉(zhuǎn)運(yùn)13轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制藥物通過(guò)不攪動(dòng)水層藥物通過(guò)腸上皮藥物透過(guò)細(xì)胞間隙藥物通過(guò)淋巴吸收轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制藥物通過(guò)不攪動(dòng)水層143、影響藥物胃腸吸收的因素1）藥物和劑型的影響2）胃排空時(shí)間的影響3）首過(guò)效應(yīng)4）腸上皮的外排5）疾病6）藥物相互作用3、影響藥物胃腸吸收的因素1）藥物和劑型的影響154、研究藥物胃腸道吸收的常用方法1）整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)法2）在體回腸灌流法3）離體腸外翻法4）Caco-2細(xì)胞模型4、研究藥物胃腸道吸收的常用方法1）整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)法16第二章藥物轉(zhuǎn)運(yùn)1(藥物代謝動(dòng)力學(xué))課件17Caco-2細(xì)胞模型的優(yōu)點(diǎn)1)可用于大量、快速篩選2）可在細(xì)胞水平上對(duì)藥物的吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)、和代謝進(jìn)行研究3）可同時(shí)研究藥物對(duì)黏膜的毒性4）與人有同源性5）試驗(yàn)結(jié)果的重現(xiàn)性一般比在體法好不足：酶和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的表達(dá)不完整，此外來(lái)源，培養(yǎng)代數(shù)，培養(yǎng)時(shí)間對(duì)結(jié)果有影響Caco-2細(xì)胞模型的優(yōu)點(diǎn)1)可用于大量、快速篩選18二、藥物在其他部位的吸收1、藥物在口腔粘膜的吸收特點(diǎn)：藥物吸收快且可避免首過(guò)效應(yīng)對(duì)藥物性質(zhì)及劑量有一定要求2、藥物在直腸的吸收特點(diǎn)：可避免首過(guò)效應(yīng)可避免藥物對(duì)胃腸刺激性3、藥物透皮吸收特點(diǎn)：適用于劑量小，脂溶性大的藥物或局部作用的藥物具有緩釋作用，可減少給藥次數(shù)，使用藥更方便

二、藥物在其他部位的吸收1、藥物在口腔粘膜的吸收19藥物在其他部位的吸收4、藥物在肺部的吸收特點(diǎn)：表面積大吸收速度快避免酶的破壞5、藥物的眼部吸收特點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：用藥方便，避免首過(guò)效應(yīng)，可用于大分子藥物。缺點(diǎn)：易對(duì)眼部形成刺激，劑量易流失，藥物停留時(shí)間較短，不符合用藥習(xí)慣

藥物在其他部位的吸收4、藥物在肺部的吸收20藥物在其他部位的吸收6、藥物在鼻粘膜的吸收特點(diǎn)：有一定的吸收表面積，可避免首過(guò)效應(yīng)，藥物因停留時(shí)間較短而影響吸收量7、藥物在肌肉中的吸收特點(diǎn)：過(guò)去較常用所以符合用藥習(xí)慣，對(duì)注射容量有一定限制，肌肉的血流量影響藥物的吸收速度8、皮下注射特點(diǎn)：適應(yīng)于小劑量藥物和疫苗等，因不存在消化酶所以可用于多肽與蛋白質(zhì)類藥物，吸收慢，作用時(shí)間長(zhǎng)

藥物在其他部位的吸收6、藥物在鼻粘膜的吸收21第四節(jié)藥物的分布一、藥物的分布及其影響因素1、組織血流速率（灌注速率）

Kpt=

Q/Vt肝：t=1.94/(1580/1500)=1.8min脂肪：t=0.98/(260/12200)=46min第四節(jié)藥物的分布一、藥物的分布及其影響因素222、膜擴(kuò)散速率

血腦屏障胎盤屏障被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)的藥物的膜擴(kuò)散速度取決于油/水分配系數(shù)2、膜擴(kuò)散速率

血腦屏障233、藥物與血漿蛋白或組織成分的結(jié)合

蛋白種類：血漿蛋白（包括：白蛋白（與酸性、堿性、中性藥物均可結(jié)合），

α-酸性糖蛋白（可與堿性藥物結(jié)合），脂蛋白（可與中性藥物結(jié)合））組織蛋白（包括：

Y蛋白）3、藥物與血漿蛋白或組織成分的結(jié)合

蛋白種類：244、藥物的再分布血漿游離藥物

組織1

組織2消除4、藥物的再分布血漿游離藥物25二、血漿蛋白結(jié)合率及常用的測(cè)定方法1、平衡透析法2、超過(guò)濾法二、血漿蛋白結(jié)合率及常用的測(cè)定方法1、平衡透析法26血漿蛋白結(jié)合與藥物分布血漿蛋白結(jié)合與藥物分布27相關(guān)計(jì)算公式（1）式中，[D]表示血漿游離藥物濃度，[P]表示游離血漿蛋白濃度，[DP]表示藥物血漿蛋白復(fù)合物的濃度，K1和K2分別表示結(jié)合速率常數(shù)和解離速率常數(shù)。（2）式中Ka是藥物與血漿蛋白的結(jié)合常數(shù)，Kd表示解離常數(shù)，兩者都反應(yīng)藥物與血漿蛋白結(jié)合親和力的大小。假設(shè)每個(gè)血漿蛋白分子上含有N個(gè)相互獨(dú)立，且親和力相當(dāng)(Ka)的藥物結(jié)合位點(diǎn)，根據(jù)配體與大分子表面之間的Langmuir吸附等溫式，則有

（3）式中，r表示每摩爾血漿蛋白所能結(jié)合的藥物分子數(shù)，（4）式中，[Pt]表示總蛋白濃度。根據(jù)（3）式可以推導(dǎo)得（5）式，如下

相關(guān)計(jì)算公式（1）式中，[D]表示血漿游離藥物濃度，[P]表28計(jì)算方法(1)直接法直接以（3）式中r為縱坐標(biāo)，以[D]為橫坐標(biāo)作圖，當(dāng)r=N/2時(shí)，[D]=1/Ka，當(dāng)[D]>>1/Ka時(shí)，r≈N，如圖a。

(2)雙倒數(shù)法對(duì)（3）式兩邊取倒數(shù)得

在（6）式中，以1/r為縱坐標(biāo)，以1/[D]為橫坐標(biāo)作圖，則斜率為1/(NKa)，縱坐標(biāo)截距為1/N，如圖b(3)Scatchard法將（3）式整理得，

以（7）式中r/[D]為縱坐標(biāo)，r為橫坐標(biāo)作圖，則斜率為-Ka，縱坐標(biāo)截距為NK。如圖c。計(jì)算方法(1)直接法29（二）與藥物結(jié)合的血漿蛋白種類及結(jié)合位點(diǎn)

人血漿中蛋白質(zhì)種類繁多，達(dá)60多種，但是與藥物結(jié)合有關(guān)的主要有三種蛋白，為白蛋白（albumin），α-酸性糖蛋白（AGP）及脂蛋白（lipoproteins）。表？列舉了一些藥物的蛋白結(jié)合情況。（1）白蛋白（與酸性、堿性、中性藥物均可結(jié)合）人血漿白蛋白(HSA)是人血漿含量最多的蛋白質(zhì)，約45g/L，占血漿總蛋白的60%。HSA為水溶性蛋白質(zhì)，其等電點(diǎn)大約為pH5，在人生理pH值下荷負(fù)電，與酸性藥物的結(jié)合常在其N-末端基團(tuán)。HSA主要由肝臟合成，占肝臟分泌蛋白的50%，半衰期大約為19天。HSA基因位于第4號(hào)染色體上，其初級(jí)翻譯產(chǎn)物為前白蛋白原(preproalbumin)。在分泌過(guò)程中切除信號(hào)肽，生成白蛋白原(proalbumis)。繼而在高爾基氏體經(jīng)組織蛋白酶B切除N末端的一個(gè)6肽片斷(精－甘－纈－苯丙－精－精)，成為成熟的白蛋白。（二）與藥物結(jié)合的血漿蛋白種類及結(jié)合位點(diǎn)

人血漿中蛋白質(zhì)種類30白蛋白結(jié)合位點(diǎn)HSA是由585個(gè)氨基酸殘基組成的一條多肽鏈，含有35個(gè)半胱氨酸殘基(Cys),除Cys34外,其余形成17對(duì)二硫鍵。根據(jù)X-晶體衍射分析，白蛋白多肽鏈形成一個(gè)類似心型的形狀。HSA的二級(jí)結(jié)構(gòu)包括I、II、III三個(gè)α-螺旋的結(jié)構(gòu)域(domain)(如圖)，其中每個(gè)結(jié)構(gòu)域又分為A和B兩個(gè)亞結(jié)構(gòu)域(subdomain)，即IA，IB，IIA，IIB，IIIA和IIIB。Sudlow等人根據(jù)熒光探針置換法的結(jié)果認(rèn)為大多數(shù)藥物的結(jié)合位點(diǎn)主要集中在兩大位點(diǎn)：siteI（華法林結(jié)合位點(diǎn)）和siteII（地西絆/吲哚結(jié)合位點(diǎn)），分別位于亞結(jié)構(gòu)域的IIA和IIIA上。

siteI是位于IIA上的一個(gè)“袋裝”結(jié)構(gòu)，內(nèi)壁為氨基酸疏水側(cè)鏈，“袋口”由帶負(fù)電荷的氨基酸殘基包繞。與siteI結(jié)合的藥物多為二羥酸或中心帶負(fù)電荷的雜環(huán)分子。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，siteI含有多個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，且結(jié)合位點(diǎn)之間有所重復(fù)。另外，siteI與藥物分子結(jié)合具有“柔性”的特征，其空間構(gòu)象是可變的，因此能夠結(jié)合較大的藥物分子。白蛋白結(jié)合位點(diǎn)HSA是由585個(gè)氨基酸殘基組成的一條多肽鏈31（2）α-酸性糖蛋白（可與堿性藥物結(jié)合）人血漿α-酸性糖蛋白（AGP）是由183個(gè)氨基酸殘基組成的單鏈，2-個(gè)二硫鍵（5-147和72-165），5個(gè)多聚糖鏈（占總重的42%）通過(guò)N-糖苷鍵于蛋白質(zhì)上的天冬酰胺殘基相連接，如圖。AGP分子偏酸性，等電點(diǎn)約為pH3，主要肝臟合成和代謝，半衰期約為6天。因?yàn)榉肿觾?nèi)部帶負(fù)電，因此AGP多與堿性藥物結(jié)合。AGP是主要的急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，在急性炎癥時(shí)增高，可能與免疫防御功能有關(guān)。根據(jù)大分子結(jié)構(gòu)分析技術(shù)，如圓二色柱、X-晶體衍射分析表明，AGP構(gòu)象絕大多數(shù)為β折疊，

（2）α-酸性糖蛋白（可與堿性藥物結(jié)合）32（3）脂蛋白（可與中性藥物結(jié)合）

血漿脂蛋白（Lipoprotein）是由蛋白質(zhì)（載脂蛋白）和脂類組成的，脂類主要包括甘油三酯、膽固醇及其酯、磷脂等。載脂蛋白主要有apoA、B、C、D、E、J及apo（a）等類，每類載脂蛋白又可分為若干亞類，如apoA又分為AⅠ、AⅡ、AⅣ；apoB又分為B48及B100；apoC為CⅠ、CⅡ、CⅢ。幾種主要載脂蛋白的一級(jí)結(jié)構(gòu)已確定，多數(shù)載脂蛋白與脂類結(jié)合的部位都在氨基酸鏈羧基末端的片段上。脂蛋白的分類方法很多，根據(jù)超速離心法分類，血漿脂蛋白可分為乳糜微粒(CM)，極低密度脂蛋白(VLDL)，低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)。血漿脂蛋白一般為球狀，其基本結(jié)構(gòu)類似。脂蛋白的表面覆蓋極性分子或親水基團(tuán)，如載脂蛋白（pr）、磷脂（pL）和游離膽固醇（C）的親水性基團(tuán)朝向表面，使脂蛋白得以在血液中運(yùn)輸。疏水分子或疏水基團(tuán)構(gòu)成脂蛋白的核心部分，如甘油三酯（TG）、膽固醇酯（ChE）、磷脂的脂肪酸鏈等。以下為HDL的結(jié)構(gòu)模式圖。

（3）脂蛋白（可與中性藥物結(jié)合）

血漿脂蛋白（Lipopr33藥物間血漿蛋白結(jié)合的相互作用

血漿結(jié)合率≥90%的藥物，須做藥物間相互作用實(shí)驗(yàn)（∵其他藥物會(huì)與該藥物競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合血漿蛋白，就把該藥物替換下來(lái)了，該藥被替換下來(lái)后（即游離藥濃度升高后），毒性會(huì)升高）。臨床上許多疾病治療需要聯(lián)合用藥(combinedtreatment)時(shí)，須考慮有可能會(huì)發(fā)生藥物間相互作用，從藥動(dòng)學(xué)角度考慮，相互作用可發(fā)生在體內(nèi)過(guò)程的各個(gè)環(huán)節(jié)(吸收、分布、代謝及排泄)，而發(fā)生在分布環(huán)節(jié)的藥物間相互作用主要是指藥物與血漿蛋白結(jié)合的相互作用。當(dāng)兩種或兩種以上藥物同時(shí)結(jié)合血漿蛋白上的同一結(jié)合位點(diǎn)時(shí)，可能會(huì)發(fā)生“競(jìng)爭(zhēng)置換”(competitivedisplacement)現(xiàn)象。藥物間發(fā)生“競(jìng)爭(zhēng)置換”一般須滿足兩個(gè)條件，一是“置換藥”(displacingdrug)與該血漿蛋白共同結(jié)合位點(diǎn)的親和力要高于“被置換藥”(displaceddrug)；二是發(fā)生“競(jìng)爭(zhēng)置換”作用的藥物與該血漿蛋白比要有較高的摩爾濃度?！案?jìng)爭(zhēng)置換”作用多發(fā)生在酸性藥物之間(見(jiàn)下表)，其原因可能就是堿性藥物較酸性藥物有較大的分布容積和較低的血漿摩爾濃度。被置換藥(displaceddrug)置換藥(displacingdrug)被置換藥(displaceddrug)置換藥(displacingdrug)利多卡因(Lidocaine)布比卡因(Bupicaine)

苯妥英(Phenytoin)

水楊酸(Salicylicacid)卡馬西平(Carbamaepine)丙戊酸(Valproicacid)甲糖寧(Tolbutamide)地西泮(Diazepam)丙戊酸(Valproicacid)保泰松(Phenylbutazone)丙戊酸(Valproicacid)水楊酸(Salicylicacid)丙戊酸(Valproicacid)華法林(Warfarin)保泰松(Phenylbutazone)甲胺碟呤(Methotrexate)水楊酸(Salicylicacid)青霉素(Penicillin)阿司匹林(Aspirin)丙磺舒(Probenecid)鄰二氮雜苯(Pyridazine)硫代異唑(Sulfisoxazole)藥物間血漿蛋白結(jié)合的相互作用 血漿結(jié)合率≥90%的藥物，須做34第二節(jié)藥物的血漿蛋白結(jié)合率的測(cè)定方法

（一）平衡透析法1．原理平衡透析法是國(guó)內(nèi)外血漿蛋白結(jié)合率測(cè)定最常用、最經(jīng)典的一種方法。此方法主要是利用與血漿蛋白結(jié)合的藥物不能通過(guò)半透膜這一原理，將蛋白置于一個(gè)隔室內(nèi)，用半透膜將它與另外一個(gè)隔室隔開(kāi)，游離藥物可以自由從半透膜自由透過(guò)，而與血漿蛋白結(jié)合的藥物卻不能自由透過(guò)半透膜，待平衡后，半透膜兩側(cè)隔室的游離藥物濃度相等。如圖所示。第二節(jié)藥物的血漿蛋白結(jié)合率的測(cè)定方法

（一）平衡透析法35示意圖示意圖36平衡透析法1．方法（1）

緩沖液通常用與血漿側(cè)等滲的緩沖液，調(diào)定其pH值為7.4，有時(shí)加入適量的中性鹽如NaCl，以消除道南（Donnan）效應(yīng)。（2）

血漿蛋白一般情況下是根據(jù)需要選擇擬研究的人或動(dòng)物的血漿。若要研究結(jié)合率常數(shù)等可采用市售血漿白蛋白，其白蛋白含量一般為95%，α-球蛋白是其主要雜質(zhì)。另外在白蛋白制備過(guò)程中可能帶入氯仿、甲苯等雜質(zhì)，可用透析、電泳、凝膠過(guò)濾等方法將其去除。白蛋白應(yīng)首先100℃真空脫水，然后用含有五氧化二磷的干燥器干燥。在配制白蛋白溶液前，最好是先加少許水將其膨脹，以便再配成溶液。不要?jiǎng)×艺駬u，因?yàn)榘椎鞍妆砻婵赡鼙慌菽绊懚冃?，通常置?℃環(huán)境中避免污染，最好是使用前新鮮配制。（3）

半透膜最常用的是醋酸纖維膜，具有不同的孔徑和厚度。市售的透析膜在使用前應(yīng)進(jìn)行預(yù)處理，以除去水和甘油等雜質(zhì)，如進(jìn)行一般的結(jié)合試驗(yàn)，僅將膜在水或緩沖液中浸泡數(shù)小時(shí)即可。通常根據(jù)所要研究的藥物分子量不同而選擇不同孔徑和型號(hào)的半透膜。（4）

透析儀器:最簡(jiǎn)單的可行的方法就是取一段透析袋，廣口瓶或平底試管，也有很多形式的透析用儀器可供選購(gòu)，但原理都大同小異。過(guò)程：將處理后的透析袋一端折疊后結(jié)扎,將定量的血漿蛋白溶液或血漿加入透析袋中,透析袋內(nèi)留有一小空氣泡,將多余空氣排出,并將透析袋的另一端折疊后用扎緊,放置懸浮于盛有透析外液的帶塞廣口瓶中,利用兩端線調(diào)節(jié)透析袋內(nèi)外液面,使其保持同一水平,并使透析袋不靠瓶壁,以免影響藥物透析。蓋嚴(yán)瓶蓋,將其置于4℃冰箱或37℃的恒溫箱中,直到藥物擴(kuò)散達(dá)到平衡。透析時(shí)間：透析時(shí)間理論上講與膜厚度膜面積膜兩側(cè)濃度差以及溫度等因素有關(guān)。但通常是在實(shí)驗(yàn)之前通過(guò)做預(yù)試驗(yàn)來(lái)確定達(dá)到平衡所需時(shí)間，然后對(duì)袋內(nèi)外藥物濃度定時(shí)取點(diǎn)，直到兩者間濃度不隨時(shí)間而改變，從而確定透析所需時(shí)間。藥物濃度：最好選用三種以上的藥物濃度測(cè)定，從而同時(shí)考察藥物與血漿蛋白的結(jié)合是否呈線性，其中一種濃度應(yīng)與體內(nèi)的濃度相當(dāng)。平衡透析法1．方法37平衡透析法要注意的幾個(gè)問(wèn)題（1）道南（Donnan）效應(yīng)：由于蛋白質(zhì)和藥物均帶電荷，這樣膜兩側(cè)藥物濃度即使在透析達(dá)到平衡后也不會(huì)相等，這種現(xiàn)象就稱之為道南（Donnan）效應(yīng)。處理方法是采用高濃度的緩沖液或加中性鹽溶液，可以最大限度地降低這種效應(yīng)。（2）藥物在半透膜上有無(wú)保留：藥物與膜的吸附影響因素較多，結(jié)合程度取決于藥物的特點(diǎn)及膜的化學(xué)特性，當(dāng)結(jié)合程度很高時(shí)，就會(huì)對(duì)結(jié)果影響較大，所以必須重視。解決辦法是設(shè)立一個(gè)對(duì)照組，考察藥物與半透膜的吸附程度，如果吸附嚴(yán)重，就應(yīng)該考慮換膜或者采用其他研究方法。（3）空白干擾：有時(shí)從透析膜上溶解下來(lái)的一些成分會(huì)影響藥物的測(cè)定，如用紫外或熒光法，因此在實(shí)驗(yàn)之前應(yīng)該對(duì)膜進(jìn)行預(yù)處理，盡可能去除空白干擾。（4）膜完整性檢驗(yàn)：透析結(jié)束后，要檢查透析外液中是否有蛋白溢出，即檢查半透膜的穩(wěn)定性，如有蛋白溢出，需換膜重復(fù)實(shí)驗(yàn)。4．評(píng)價(jià)采用平衡透析法測(cè)定藥物血漿蛋白結(jié)合率實(shí)驗(yàn)要求較低，簡(jiǎn)單易行，因此應(yīng)用最為廣泛。但缺點(diǎn)是比較費(fèi)時(shí)，通常需要48小時(shí)左右才能達(dá)到平衡，故最好是在低溫環(huán)境下進(jìn)行，以防蛋白質(zhì)可能被破壞。平衡透析法要注意的幾個(gè)問(wèn)題（1）道南（Donnan）效應(yīng)：由38（一）超過(guò)濾法

原理基本原理和平衡透析法一樣，也是通過(guò)藥物、藥物血漿蛋白結(jié)合物的分子量的差異而將兩者分開(kāi)。與平衡透析法不同的是在血漿蛋白室一側(cè)施加壓力或超離心力，使游離藥物能夠快速地透過(guò)半透膜而進(jìn)入另一個(gè)隔室，而結(jié)合型藥物仍然保留在半透膜上的隔室內(nèi)。如圖所示。（一）超過(guò)濾法

原理391．方法在超濾之前最好將待測(cè)藥物與蛋白漩渦混合后，水浴37℃溫孵4h左右，以保證藥物與蛋白能夠充分結(jié)合，然后將含有血漿和藥物的混合液加入到超濾管的濾膜分隔裝置中，根據(jù)裝置要求，離心或加壓促使溶液透過(guò)濾過(guò)膜，測(cè)定過(guò)濾液的藥物濃度，即游離藥物濃度。通常有配套的裝置可供選擇。如藥物的總濃度測(cè)定為Ca，濾過(guò)液中藥物的濃度測(cè)定為Cb，則蛋白結(jié)合率可用下式計(jì)算得出。2．超濾離心法要注意的幾個(gè)問(wèn)題（1）

不同型號(hào)的濾過(guò)膜對(duì)結(jié)合率測(cè)定結(jié)果的影響。隨著超濾膜截留蛋白分子量的增大而結(jié)合率降低，可能是此類膜在同條件下超濾時(shí)，有部分小分子量蛋白及其結(jié)合的藥物滲漏過(guò)膜，使濾過(guò)液中的表觀游離藥物濃度增大，即測(cè)得的游離藥物濃度增高，因此蛋白結(jié)合率會(huì)比真實(shí)值偏低。（2）

不同的超濾時(shí)間對(duì)結(jié)合率的影響。有實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，隨著超濾時(shí)間的延長(zhǎng)，結(jié)合率也有所增加，原因可能是隨超濾時(shí)間增長(zhǎng)，濾過(guò)液容量增多，當(dāng)小分子溶劑留出量增加時(shí)，超濾液中的游離藥物濃度因稀釋而降低，因此測(cè)得的蛋白結(jié)合率會(huì)比真實(shí)值偏高。（3）

不同壓力下超濾對(duì)結(jié)合率的影響。壓力對(duì)結(jié)合率的影響是雙向的。隨著超濾時(shí)所受壓力增大，即離心轉(zhuǎn)速增加時(shí)，蛋白結(jié)合率會(huì)增大，因?yàn)閴毫Υ蠖垢嗟娜軇┓肿油高^(guò)濾膜。隨著超濾壓力的增加，雖然溶劑濾出量有所增加，但當(dāng)濾過(guò)壓力超過(guò)一定程度時(shí)會(huì)使部分藥物蛋白結(jié)合物也滲漏過(guò)膜，這時(shí)濾出液中藥物相對(duì)濃度會(huì)增高，使藥物蛋白結(jié)合率降低。因此，超濾時(shí)，應(yīng)根據(jù)樣品性質(zhì)和需要收集的超濾液體積，確定超濾速度和時(shí)間，一般超濾速度為3000～10000rpm，超濾時(shí)間為10～25min。超濾液與超濾前蛋白質(zhì)溶液體積之比不應(yīng)太大(一般比值為0.3～0.6)否則，蛋白質(zhì)溶液因超濾而過(guò)分濃縮，引起藥物與蛋白結(jié)合常數(shù)變化。3．評(píng)價(jià)與平衡透析法相比，超濾法優(yōu)點(diǎn)是快速，不僅設(shè)備簡(jiǎn)單，而且通常僅需離心十幾分鐘至數(shù)十分鐘，即可收集到足夠供測(cè)定的血漿超濾液，因此可用于不穩(wěn)定的藥物的蛋白結(jié)合率的測(cè)定。如果用微量超過(guò)濾裝置，蛋白用量可少，故可用于在體的血漿蛋白結(jié)合率測(cè)定，但用量少的情況下，要特別注意與膜結(jié)合的問(wèn)題。

1．方法在超濾之前最好將待測(cè)藥物與蛋白漩渦混合后，水浴37℃40其它方法其它方法41三、藥物在特殊屏障中的轉(zhuǎn)運(yùn)（一）、血腦屏障1、血腦屏障的特點(diǎn)（1）脂溶性藥物易于透過(guò)（2）低導(dǎo)水性（3）高反射系數(shù)（4）高電阻性三、藥物在特殊屏障中的轉(zhuǎn)運(yùn)（一）、血腦屏障42圖2-8.物質(zhì)透過(guò)血腦屏障的主要途徑：A、緊密聯(lián)接；B、胞飲轉(zhuǎn)運(yùn)；C、跨膜擴(kuò)散轉(zhuǎn)運(yùn)；D、受體、載體介導(dǎo)轉(zhuǎn)運(yùn)；E、外排系統(tǒng)。血腦屏障血腦屏障432、影響藥物通過(guò)血腦屏障的因素

（1）藥物因素脂溶性相對(duì)分子量（2）生理病理因素

滲透壓藥物、毒物影響電荷性的改變腦缺血缺氧的影響炎癥的影響（3）藥物相互作用2、影響藥物通過(guò)血腦屏障的因素

（1）藥物因素443、常用的研究藥物透過(guò)血腦屏障的方法（1）在體法1）快速頸內(nèi)動(dòng)脈注射技術(shù)

2）靜脈注射給藥后腦部取樣技術(shù)

3）腦灌流技術(shù)

4）腦血管灌流/除去毛細(xì)血管技術(shù)

3、常用的研究藥物透過(guò)血腦屏障的方法（1）在體法45血腦屏障（2）研究藥物透過(guò)血腦屏障的離體法1）離體腦微血管片的制備2）藥物攝取試驗(yàn)（3）原代腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)1）細(xì)胞攝取試驗(yàn)2）轉(zhuǎn)運(yùn)試驗(yàn)血腦屏障（2）研究藥物透過(guò)血腦屏障的離體法46（二）胎盤轉(zhuǎn)運(yùn)1、胎盤屏障的特點(diǎn)2、常用的研究方法（1）離體試驗(yàn)技術(shù)1）離體胎盤絨毛葉雙面灌流技術(shù)2）胎盤刷狀緣膜囊（2）在體試驗(yàn)（二）胎盤轉(zhuǎn)運(yùn)1、胎盤屏障的特點(diǎn)47第五節(jié)藥物的排泄一、腎排泄（一）腎藥物排泄特點(diǎn)及其影響因素1、腎小球?yàn)V過(guò)2、腎小管主動(dòng)分泌3、腎小管的重吸收（1）主動(dòng)重吸收（2）被動(dòng)重吸收第五節(jié)藥物的排泄一、腎排泄48（二）研究藥物腎排泄的常用方法1、在體法2、離體腎灌流法（二）研究藥物腎排泄的常用方法1、在體法49二、膽汁排泄1、膽汁中藥物排泄特點(diǎn)及其影響因素2、研究藥物膽汁排泄的常用方法二、膽汁排泄1、膽汁中藥物排泄特點(diǎn)及其影響因素50三、糞排泄1、糞中藥物排泄特點(diǎn)及其影響因素2、研究藥物糞排泄的常用方法三、糞排泄1、糞中藥物排泄特點(diǎn)及其影響因素51第六節(jié)多藥耐藥與藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體一、多藥耐藥現(xiàn)象多藥耐藥（multidrugresidence，MDR）現(xiàn)象最早在腫瘤細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的。對(duì)藥物敏感的腫瘤細(xì)胞長(zhǎng)期用一種抗腫瘤藥物處理后，該細(xì)胞對(duì)藥物敏感性降低，產(chǎn)生耐藥性，同時(shí)也對(duì)其它結(jié)構(gòu)類型的抗腫瘤藥物敏感性也降低。第六節(jié)多藥耐藥與藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體一、多藥耐藥現(xiàn)象52二、P-糖蛋白P-糖蛋白特性P-GP首先是Juliano和Ling發(fā)現(xiàn)在耐藥性中國(guó)倉(cāng)鼠卵細(xì)胞表達(dá)的一種含磷糖蛋白，分子量為170kda。在人中存在兩種P-GP蛋白基因家族（MDR1和MDR3）,在小鼠中，存在3個(gè)家族（mdr1a，mdr1b和mdr2）。人類MDR1（又稱MDR1P-糖蛋白，MDR1P-glycoprotein,MDR1P-GP）和鼠mdr1a/mdr1b基因表達(dá)的蛋白是藥物外排載體，而MDR3和mdr2表達(dá)的P-GP認(rèn)為參與磷脂轉(zhuǎn)運(yùn)。但近來(lái)發(fā)現(xiàn)，人MDR3P-GP也參與藥物轉(zhuǎn)運(yùn)。MDR1P-糖蛋白在分類上歸為ABCB1.又稱為MDR1，P-GP或PGY1。二、P-糖蛋白P-糖蛋白特性532．P-GP底物P-GP有廣泛結(jié)構(gòu)類型的底物。常見(jiàn)的有鈣拮抗劑：維拉帕米(verapamil)，尼莫地平等；抗癌藥：阿霉素（adriamycin）、長(zhǎng)春新堿（vincristine）和長(zhǎng)春堿（vinblastine）、比生群（bisantrene）,絲裂霉素（mitoxantrone）、柔紅霉素、道諾霉素（daunorubicin）、表柔吡辛（epirubicin）、依托甙（epitoside）、替尼泊甙（teniposide）、放線菌素D（actinomycinD）和紫杉醇（paclitaxel）等；HIV蛋白酶抑制劑：塞喹那韋（saquinavir）、利托那韋（ritonavir）,奈菲那韋（nelfinavir）、印地那韋（indinavir）、洛吡那韋（lopinavir）和安潑那韋（amprenavir）;類固醇類：地塞米松(Dexamethason)、可的松（corticosteron）和氫化可的松（hydrocortisone）等；免疫抑制劑：環(huán)孢素A和FK506等；抗生素類：紅霉素、纈霉素（valinomycin）和短桿菌素D(gramicidinD)等;其它如嗎啡（morphine）、秋水仙堿(colchicine)、地高辛（Digoxin）、羅丹明123、Hoechst33342、伊維菌素（ivermectin）和阿巴菌素（abamectine）等。由于底物的廣泛性，表現(xiàn)出對(duì)多種藥物的交叉耐藥性。2．P-GP底物P-GP有廣泛結(jié)構(gòu)類型的底物。常見(jiàn)的有鈣拮543.P-GP抑制劑許多物質(zhì)可以抑制P-GP轉(zhuǎn)運(yùn)底物，這類物質(zhì)稱之為MDR逆轉(zhuǎn)劑(MDR–reversingagents)或P-GP抑制劑(P-GPinhibitor)。多數(shù)抑制劑如維拉帕米、環(huán)孢素A等本身也是P-GP底物,屬于競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑。但也有些抑制劑是P-GP不良底物或不是P-GP底物，提示通過(guò)其它機(jī)制發(fā)揮作用的。最早的抑制劑主要集中在腫瘤細(xì)胞的MDR逆轉(zhuǎn)方面，這些抑制劑在調(diào)節(jié)機(jī)體中藥物作用是很有用。但所謂第一代P-GP抑制劑如維拉帕米往往作用抑制作用比較弱，有的本身也有很強(qiáng)的藥理活性如維拉帕米、環(huán)孢素A等，合用常常引起嚴(yán)重的不良反應(yīng)。新發(fā)現(xiàn)的抑制劑如PSC833,GF120918,LY335979,XR9576和OC144-093屬于第二代或第三代抑制劑，本身沒(méi)有其它的藥理活性，但其抑制作用較強(qiáng)，多數(shù)正在進(jìn)行臨床試驗(yàn)。3.P-GP抑制劑許多物質(zhì)可以抑制P-GP轉(zhuǎn)運(yùn)底物，這類554．P-GP生理功能在人中，P-GP主要表達(dá)于一些特殊組織如腸、腎、肝、腦血管內(nèi)皮、睪丸和胎盤等，成為血腦屏障、血-睪屏障和胎盤屏障的一部分。P-GP將毒物從細(xì)胞排出胞外，保護(hù)相應(yīng)組織，免受毒物的危害。P-GP也與一些藥物的治療失敗和某些疾病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。如P-GP的表達(dá)也是Imatinib在治療慢性骨髓性的白血病(CML)和急性淋巴性白血病（ALL）中出現(xiàn)耐藥的原因。4．P-GP生理功能在人中，P-GP主要表達(dá)于一些特殊組織如56三．多藥耐藥相關(guān)蛋白(MRP)MRP1(AUCC1)的分子量190kDa,屬于ABCC1。MRP1最早是在產(chǎn)生多藥耐藥的肺腫瘤細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的,也是多種腫瘤細(xì)胞耐藥的原因之一。在正常組織中也有MRP1的表達(dá),在肺和睪丸中表達(dá)量相對(duì)較高。MRP1是兩性有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)載體，也轉(zhuǎn)運(yùn)脂溶性藥物或化合物，多數(shù)底物是葡萄糖醛酸結(jié)合或硫酸結(jié)合物。三．多藥耐藥相關(guān)蛋白(MRP)MRP1(AUCC1)的分57四．乳腺癌耐藥蛋白BCRP（breastcancerresistanceprotein，ABCG2）的結(jié)構(gòu)與功能BCRP又稱為胎盤特異性ABC載體（placentalABCprotein，ABCP），乳腺癌耐藥蛋白（BCRP），絲裂霉素耐藥（mitoxantroneresistance，MXR）。根據(jù)命名規(guī)則，BCRP應(yīng)定義命名為ABCG2。BCRP結(jié)構(gòu)不同于P-GP和MRP家族。BCRP只有一個(gè)NBF和TM域，為一半ABC載體。BCRPmRNA最早發(fā)現(xiàn)于胎盤中，

主要存在于細(xì)胞的頂側(cè)面膜上。四．乳腺癌耐藥蛋白BCRP（breastcancerr58第二章藥物體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)主要內(nèi)容：第一節(jié)概述第二節(jié)藥物跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的影響因素第三節(jié)藥物的吸收第四節(jié)藥物的分布第五節(jié)藥物的排泄第六節(jié)多藥耐藥與外排轉(zhuǎn)運(yùn)體第二章藥物體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)主要內(nèi)容：59第一節(jié)概述第一節(jié)概述60藥物體內(nèi)過(guò)程藥物體內(nèi)過(guò)程61第二節(jié)藥物跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的影響因素一、生物膜組成：主要由糖、脂肪、蛋白質(zhì)組成特點(diǎn)：1、類脂（脂溶性成分易于通過(guò)）2、通道（小分子化合物）3、轉(zhuǎn)運(yùn)體（特殊化合物，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)）第二節(jié)藥物跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的影響因素一、生物膜62二、藥物的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)方式1、被動(dòng)擴(kuò)散特點(diǎn)：

1）、順濃度梯度轉(zhuǎn)運(yùn)2）、無(wú)選擇性，與藥物的油/水分配系數(shù)有關(guān)3）、無(wú)飽和現(xiàn)象

4）、無(wú)競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用

5）、不需要能量二、藥物的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)方式1、被動(dòng)擴(kuò)散63圖2-2.不同的酸性藥物的非離子型百分?jǐn)?shù)與體系的pH值關(guān)系

圖2-2.不同的酸性藥物的非離子型百分?jǐn)?shù)與體系的pH值關(guān)系642、孔道轉(zhuǎn)運(yùn)特點(diǎn)：1）、主要為水和電解質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)2）、轉(zhuǎn)運(yùn)速率與所處組織及膜的性質(zhì)有關(guān)2、孔道轉(zhuǎn)運(yùn)特點(diǎn)：653、特殊轉(zhuǎn)運(yùn)activetransport,carrier-mediatedtransport,receptor-mediatedtransport特點(diǎn)：1）、逆濃度梯度轉(zhuǎn)運(yùn)2）、常需要能量3）、有飽和現(xiàn)象

4）、有競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用

5）、有選擇性3、特殊轉(zhuǎn)運(yùn)activetransport,carrie66其它轉(zhuǎn)運(yùn)方式易化擴(kuò)散：facilitatediffusion類似于主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)，但不需要能量胞飲：pinocytosis主要轉(zhuǎn)運(yùn)大分子化合物其它轉(zhuǎn)運(yùn)方式易化擴(kuò)散：facilitatediffusio67第三節(jié)藥物吸收影響藥物吸收的因素一、劑型因素：藥物理化性質(zhì)，劑型，賦形劑，制備工藝等。二、生理病理因素種族，年齡，性別，遺傳，飲食，胃腸pH,肝功能，運(yùn)動(dòng)第三節(jié)藥物吸收影響藥物吸收的因素68一、藥物在胃腸道中的吸收胃腸道的生理特點(diǎn)

胃的生理特點(diǎn)藥物停留時(shí)間較短較小的吸收表面積強(qiáng)酸性和蛋白酶的破壞作用一、藥物在胃腸道中的吸收胃腸道的生理特點(diǎn)69腸道的生理學(xué)特點(diǎn)較大的表面積藥物停留時(shí)間較長(zhǎng)血流量豐富代謝酶的作用分泌功能腸道的生理學(xué)特點(diǎn)較大的表面積702、藥物胃腸轉(zhuǎn)運(yùn)2、藥物胃腸轉(zhuǎn)運(yùn)71轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制藥物通過(guò)不攪動(dòng)水層藥物通過(guò)腸上皮藥物透過(guò)細(xì)胞間隙藥物通過(guò)淋巴吸收轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制藥物通過(guò)不攪動(dòng)水層723、影響藥物胃腸吸收的因素1）藥物和劑型的影響2）胃排空時(shí)間的影響3）首過(guò)效應(yīng)4）腸上皮的外排5）疾病6）藥物相互作用3、影響藥物胃腸吸收的因素1）藥物和劑型的影響734、研究藥物胃腸道吸收的常用方法1）整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)法2）在體回腸灌流法3）離體腸外翻法4）Caco-2細(xì)胞模型4、研究藥物胃腸道吸收的常用方法1）整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)法74第二章藥物轉(zhuǎn)運(yùn)1(藥物代謝動(dòng)力學(xué))課件75Caco-2細(xì)胞模型的優(yōu)點(diǎn)1)可用于大量、快速篩選2）可在細(xì)胞水平上對(duì)藥物的吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)、和代謝進(jìn)行研究3）可同時(shí)研究藥物對(duì)黏膜的毒性4）與人有同源性5）試驗(yàn)結(jié)果的重現(xiàn)性一般比在體法好不足：酶和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的表達(dá)不完整，此外來(lái)源，培養(yǎng)代數(shù)，培養(yǎng)時(shí)間對(duì)結(jié)果有影響Caco-2細(xì)胞模型的優(yōu)點(diǎn)1)可用于大量、快速篩選76二、藥物在其他部位的吸收1、藥物在口腔粘膜的吸收特點(diǎn)：藥物吸收快且可避免首過(guò)效應(yīng)對(duì)藥物性質(zhì)及劑量有一定要求2、藥物在直腸的吸收特點(diǎn)：可避免首過(guò)效應(yīng)可避免藥物對(duì)胃腸刺激性3、藥物透皮吸收特點(diǎn)：適用于劑量小，脂溶性大的藥物或局部作用的藥物具有緩釋作用，可減少給藥次數(shù)，使用藥更方便

二、藥物在其他部位的吸收1、藥物在口腔粘膜的吸收77藥物在其他部位的吸收4、藥物在肺部的吸收特點(diǎn)：表面積大吸收速度快避免酶的破壞5、藥物的眼部吸收特點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：用藥方便，避免首過(guò)效應(yīng)，可用于大分子藥物。缺點(diǎn)：易對(duì)眼部形成刺激，劑量易流失，藥物停留時(shí)間較短，不符合用藥習(xí)慣

藥物在其他部位的吸收4、藥物在肺部的吸收78藥物在其他部位的吸收6、藥物在鼻粘膜的吸收特點(diǎn)：有一定的吸收表面積，可避免首過(guò)效應(yīng)，藥物因停留時(shí)間較短而影響吸收量7、藥物在肌肉中的吸收特點(diǎn)：過(guò)去較常用所以符合用藥習(xí)慣，對(duì)注射容量有一定限制，肌肉的血流量影響藥物的吸收速度8、皮下注射特點(diǎn)：適應(yīng)于小劑量藥物和疫苗等，因不存在消化酶所以可用于多肽與蛋白質(zhì)類藥物，吸收慢，作用時(shí)間長(zhǎng)

藥物在其他部位的吸收6、藥物在鼻粘膜的吸收79第四節(jié)藥物的分布一、藥物的分布及其影響因素1、組織血流速率（灌注速率）

Kpt=

Q/Vt肝：t=1.94/(1580/1500)=1.8min脂肪：t=0.98/(260/12200)=46min第四節(jié)藥物的分布一、藥物的分布及其影響因素802、膜擴(kuò)散速率

血腦屏障胎盤屏障被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)的藥物的膜擴(kuò)散速度取決于油/水分配系數(shù)2、膜擴(kuò)散速率

血腦屏障813、藥物與血漿蛋白或組織成分的結(jié)合

蛋白種類：血漿蛋白（包括：白蛋白（與酸性、堿性、中性藥物均可結(jié)合），

α-酸性糖蛋白（可與堿性藥物結(jié)合），脂蛋白（可與中性藥物結(jié)合））組織蛋白（包括：

Y蛋白）3、藥物與血漿蛋白或組織成分的結(jié)合

蛋白種類：824、藥物的再分布血漿游離藥物

組織1

組織2消除4、藥物的再分布血漿游離藥物83二、血漿蛋白結(jié)合率及常用的測(cè)定方法1、平衡透析法2、超過(guò)濾法二、血漿蛋白結(jié)合率及常用的測(cè)定方法1、平衡透析法84血漿蛋白結(jié)合與藥物分布血漿蛋白結(jié)合與藥物分布85相關(guān)計(jì)算公式（1）式中，[D]表示血漿游離藥物濃度，[P]表示游離血漿蛋白濃度，[DP]表示藥物血漿蛋白復(fù)合物的濃度，K1和K2分別表示結(jié)合速率常數(shù)和解離速率常數(shù)。（2）式中Ka是藥物與血漿蛋白的結(jié)合常數(shù)，Kd表示解離常數(shù)，兩者都反應(yīng)藥物與血漿蛋白結(jié)合親和力的大小。假設(shè)每個(gè)血漿蛋白分子上含有N個(gè)相互獨(dú)立，且親和力相當(dāng)(Ka)的藥物結(jié)合位點(diǎn)，根據(jù)配體與大分子表面之間的Langmuir吸附等溫式，則有

（3）式中，r表示每摩爾血漿蛋白所能結(jié)合的藥物分子數(shù)，（4）式中，[Pt]表示總蛋白濃度。根據(jù)（3）式可以推導(dǎo)得（5）式，如下

相關(guān)計(jì)算公式（1）式中，[D]表示血漿游離藥物濃度，[P]表86計(jì)算方法(1)直接法直接以（3）式中r為縱坐標(biāo)，以[D]為橫坐標(biāo)作圖，當(dāng)r=N/2時(shí)，[D]=1/Ka，當(dāng)[D]>>1/Ka時(shí)，r≈N，如圖a。

(2)雙倒數(shù)法對(duì)（3）式兩邊取倒數(shù)得

在（6）式中，以1/r為縱坐標(biāo)，以1/[D]為橫坐標(biāo)作圖，則斜率為1/(NKa)，縱坐標(biāo)截距為1/N，如圖b(3)Scatchard法將（3）式整理得，

以（7）式中r/[D]為縱坐標(biāo)，r為橫坐標(biāo)作圖，則斜率為-Ka，縱坐標(biāo)截距為NK。如圖c。計(jì)算方法(1)直接法87（二）與藥物結(jié)合的血漿蛋白種類及結(jié)合位點(diǎn)

人血漿中蛋白質(zhì)種類繁多，達(dá)60多種，但是與藥物結(jié)合有關(guān)的主要有三種蛋白，為白蛋白（albumin），α-酸性糖蛋白（AGP）及脂蛋白（lipoproteins）。表？列舉了一些藥物的蛋白結(jié)合情況。（1）白蛋白（與酸性、堿性、中性藥物均可結(jié)合）人血漿白蛋白(HSA)是人血漿含量最多的蛋白質(zhì)，約45g/L，占血漿總蛋白的60%。HSA為水溶性蛋白質(zhì)，其等電點(diǎn)大約為pH5，在人生理pH值下荷負(fù)電，與酸性藥物的結(jié)合常在其N-末端基團(tuán)。HSA主要由肝臟合成，占肝臟分泌蛋白的50%，半衰期大約為19天。HSA基因位于第4號(hào)染色體上，其初級(jí)翻譯產(chǎn)物為前白蛋白原(preproalbumin)。在分泌過(guò)程中切除信號(hào)肽，生成白蛋白原(proalbumis)。繼而在高爾基氏體經(jīng)組織蛋白酶B切除N末端的一個(gè)6肽片斷(精－甘－纈－苯丙－精－精)，成為成熟的白蛋白。（二）與藥物結(jié)合的血漿蛋白種類及結(jié)合位點(diǎn)

人血漿中蛋白質(zhì)種類88白蛋白結(jié)合位點(diǎn)HSA是由585個(gè)氨基酸殘基組成的一條多肽鏈，含有35個(gè)半胱氨酸殘基(Cys),除Cys34外,其余形成17對(duì)二硫鍵。根據(jù)X-晶體衍射分析，白蛋白多肽鏈形成一個(gè)類似心型的形狀。HSA的二級(jí)結(jié)構(gòu)包括I、II、III三個(gè)α-螺旋的結(jié)構(gòu)域(domain)(如圖)，其中每個(gè)結(jié)構(gòu)域又分為A和B兩個(gè)亞結(jié)構(gòu)域(subdomain)，即IA，IB，IIA，IIB，IIIA和IIIB。Sudlow等人根據(jù)熒光探針置換法的結(jié)果認(rèn)為大多數(shù)藥物的結(jié)合位點(diǎn)主要集中在兩大位點(diǎn)：siteI（華法林結(jié)合位點(diǎn)）和siteII（地西絆/吲哚結(jié)合位點(diǎn)），分別位于亞結(jié)構(gòu)域的IIA和IIIA上。

siteI是位于IIA上的一個(gè)“袋裝”結(jié)構(gòu)，內(nèi)壁為氨基酸疏水側(cè)鏈，“袋口”由帶負(fù)電荷的氨基酸殘基包繞。與siteI結(jié)合的藥物多為二羥酸或中心帶負(fù)電荷的雜環(huán)分子。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，siteI含有多個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，且結(jié)合位點(diǎn)之間有所重復(fù)。另外，siteI與藥物分子結(jié)合具有“柔性”的特征，其空間構(gòu)象是可變的，因此能夠結(jié)合較大的藥物分子。白蛋白結(jié)合位點(diǎn)HSA是由585個(gè)氨基酸殘基組成的一條多肽鏈89（2）α-酸性糖蛋白（可與堿性藥物結(jié)合）人血漿α-酸性糖蛋白（AGP）是由183個(gè)氨基酸殘基組成的單鏈，2-個(gè)二硫鍵（5-147和72-165），5個(gè)多聚糖鏈（占總重的42%）通過(guò)N-糖苷鍵于蛋白質(zhì)上的天冬酰胺殘基相連接，如圖。AGP分子偏酸性，等電點(diǎn)約為pH3，主要肝臟合成和代謝，半衰期約為6天。因?yàn)榉肿觾?nèi)部帶負(fù)電，因此AGP多與堿性藥物結(jié)合。AGP是主要的急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，在急性炎癥時(shí)增高，可能與免疫防御功能有關(guān)。根據(jù)大分子結(jié)構(gòu)分析技術(shù)，如圓二色柱、X-晶體衍射分析表明，AGP構(gòu)象絕大多數(shù)為β折疊，

（2）α-酸性糖蛋白（可與堿性藥物結(jié)合）90（3）脂蛋白（可與中性藥物結(jié)合）

血漿脂蛋白（Lipoprotein）是由蛋白質(zhì)（載脂蛋白）和脂類組成的，脂類主要包括甘油三酯、膽固醇及其酯、磷脂等。載脂蛋白主要有apoA、B、C、D、E、J及apo（a）等類，每類載脂蛋白又可分為若干亞類，如apoA又分為AⅠ、AⅡ、AⅣ；apoB又分為B48及B100；apoC為CⅠ、CⅡ、CⅢ。幾種主要載脂蛋白的一級(jí)結(jié)構(gòu)已確定，多數(shù)載脂蛋白與脂類結(jié)合的部位都在氨基酸鏈羧基末端的片段上。脂蛋白的分類方法很多，根據(jù)超速離心法分類，血漿脂蛋白可分為乳糜微粒(CM)，極低密度脂蛋白(VLDL)，低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)。血漿脂蛋白一般為球狀，其基本結(jié)構(gòu)類似。脂蛋白的表面覆蓋極性分子或親水基團(tuán)，如載脂蛋白（pr）、磷脂（pL）和游離膽固醇（C）的親水性基團(tuán)朝向表面，使脂蛋白得以在血液中運(yùn)輸。疏水分子或疏水基團(tuán)構(gòu)成脂蛋白的核心部分，如甘油三酯（TG）、膽固醇酯（ChE）、磷脂的脂肪酸鏈等。以下為HDL的結(jié)構(gòu)模式圖。

（3）脂蛋白（可與中性藥物結(jié)合）

血漿脂蛋白（Lipopr91藥物間血漿蛋白結(jié)合的相互作用

血漿結(jié)合率≥90%的藥物，須做藥物間相互作用實(shí)驗(yàn)（∵其他藥物會(huì)與該藥物競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合血漿蛋白，就把該藥物替換下來(lái)了，該藥被替換下來(lái)后（即游離藥濃度升高后），毒性會(huì)升高）。臨床上許多疾病治療需要聯(lián)合用藥(combinedtreatment)時(shí)，須考慮有可能會(huì)發(fā)生藥物間相互作用，從藥動(dòng)學(xué)角度考慮，相互作用可發(fā)生在體內(nèi)過(guò)程的各個(gè)環(huán)節(jié)(吸收、分布、代謝及排泄)，而發(fā)生在分布環(huán)節(jié)的藥物間相互作用主要是指藥物與血漿蛋白結(jié)合的相互作用。當(dāng)兩種或兩種以上藥物同時(shí)結(jié)合血漿蛋白上的同一結(jié)合位點(diǎn)時(shí)，可能會(huì)發(fā)生“競(jìng)爭(zhēng)置換”(competitivedisplacement)現(xiàn)象。藥物間發(fā)生“競(jìng)爭(zhēng)置換”一般須滿足兩個(gè)條件，一是“置換藥”(displacingdrug)與該血漿蛋白共同結(jié)合位點(diǎn)的親和力要高于“被置換藥”(displaceddrug)；二是發(fā)生“競(jìng)爭(zhēng)置換”作用的藥物與該血漿蛋白比要有較高的摩爾濃度?！案?jìng)爭(zhēng)置換”作用多發(fā)生在酸性藥物之間(見(jiàn)下表)，其原因可能就是堿性藥物較酸性藥物有較大的分布容積和較低的血漿摩爾濃度。被置換藥(displaceddrug)置換藥(displacingdrug)被置換藥(displaceddrug)置換藥(displacingdrug)利多卡因(Lidocaine)布比卡因(Bupicaine)

苯妥英(Phenytoin)

水楊酸(Salicylicacid)卡馬西平(Carbamaepine)丙戊酸(Valproicacid)甲糖寧(Tolbutamide)地西泮(Diazepam)丙戊酸(Valproicacid)保泰松(Phenylbutazone)丙戊酸(Valproicacid)水楊酸(Salicylicacid)丙戊酸(Valproicacid)華法林(Warfarin)保泰松(Phenylbutazone)甲胺碟呤(Methotrexate)水楊酸(Salicylicacid)青霉素(Penicillin)阿司匹林(Aspirin)丙磺舒(Probenecid)鄰二氮雜苯(Pyridazine)硫代異唑(Sulfisoxazole)藥物間血漿蛋白結(jié)合的相互作用 血漿結(jié)合率≥90%的藥物，須做92第二節(jié)藥物的血漿蛋白結(jié)合率的測(cè)定方法

（一）平衡透析法1．原理平衡透析法是國(guó)內(nèi)外血漿蛋白結(jié)合率測(cè)定最常用、最經(jīng)典的一種方法。此方法主要是利用與血漿蛋白結(jié)合的藥物不能通過(guò)半透膜這一原理，將蛋白置于一個(gè)隔室內(nèi)，用半透膜將它與另外一個(gè)隔室隔開(kāi)，游離藥物可以自由從半透膜自由透過(guò)，而與血漿蛋白結(jié)合的藥物卻不能自由透過(guò)半透膜，待平衡后，半透膜兩側(cè)隔室的游離藥物濃度相等。如圖所示。第二節(jié)藥物的血漿蛋白結(jié)合率的測(cè)定方法

（一）平衡透析法93示意圖示意圖94平衡透析法1．方法（1）

緩沖液通常用與血漿側(cè)等滲的緩沖液，調(diào)定其pH值為7.4，有時(shí)加入適量的中性鹽如NaCl，以消除道南（Donnan）效應(yīng)。（2）

血漿蛋白一般情況下是根據(jù)需要選擇擬研究的人或動(dòng)物的血漿。若要研究結(jié)合率常數(shù)等可采用市售血漿白蛋白，其白蛋白含量一般為95%，α-球蛋白是其主要雜質(zhì)。另外在白蛋白制備過(guò)程中可能帶入氯仿、甲苯等雜質(zhì)，可用透析、電泳、凝膠過(guò)濾等方法將其去除。白蛋白應(yīng)首先100℃真空脫水，然后用含有五氧化二磷的干燥器干燥。在配制白蛋白溶液前，最好是先加少許水將其膨脹，以便再配成溶液。不要?jiǎng)×艺駬u，因?yàn)榘椎鞍妆砻婵赡鼙慌菽绊懚冃?，通常置?℃環(huán)境中避免污染，最好是使用前新鮮配制。（3）

半透膜最常用的是醋酸纖維膜，具有不同的孔徑和厚度。市售的透析膜在使用前應(yīng)進(jìn)行預(yù)處理，以除去水和甘油等雜質(zhì)，如進(jìn)行一般的結(jié)合試驗(yàn)，僅將膜在水或緩沖液中浸泡數(shù)小時(shí)即可。通常根據(jù)所要研究的藥物分子量不同而選擇不同孔徑和型號(hào)的半透膜。（4）

透析儀器:最簡(jiǎn)單的可行的方法就是取一段透析袋，廣口瓶或平底試管，也有很多形式的透析用儀器可供選購(gòu)，但原理都大同小異。過(guò)程：將處理后的透析袋一端折疊后結(jié)扎,將定量的血漿蛋白溶液或血漿加入透析袋中,透析袋內(nèi)留有一小空氣泡,將多余空氣排出,并將透析袋的另一端折疊后用扎緊,放置懸浮于盛有透析外液的帶塞廣口瓶中,利用兩端線調(diào)節(jié)透析袋內(nèi)外液面,使其保持同一水平,并使透析袋不靠瓶壁,以免影響藥物透析。蓋嚴(yán)瓶蓋,將其置于4℃冰箱或37℃的恒溫箱中,直到藥物擴(kuò)散達(dá)到平衡。透析時(shí)間：透析時(shí)間理論上講與膜厚度膜面積膜兩側(cè)濃度差以及溫度等因素有關(guān)。但通常是在實(shí)驗(yàn)之前通過(guò)做預(yù)試驗(yàn)來(lái)確定達(dá)到平衡所需時(shí)間，然后對(duì)袋內(nèi)外藥物濃度定時(shí)取點(diǎn)，直到兩者間濃度不隨時(shí)間而改變，從而確定透析所需時(shí)間。藥物濃度：最好選用三種以上的藥物濃度測(cè)定，從而同時(shí)考察藥物與血漿蛋白的結(jié)合是否呈線性，其中一種濃度應(yīng)與體內(nèi)的濃度相當(dāng)。平衡透析法1．方法95平衡透析法要注意的幾個(gè)問(wèn)題（1）道南（Donnan）效應(yīng)：由于蛋白質(zhì)和藥物均帶電荷，這樣膜兩側(cè)藥物濃度即使在透析達(dá)到平衡后也不會(huì)相等，這種現(xiàn)象就稱之為道南（Donnan）效應(yīng)。處理方法是采用高濃度的緩沖液或加中性鹽溶液，可以最大限度地降低這種效應(yīng)。（2）藥物在半透膜上有無(wú)保留：藥物與膜的吸附影響因素較多，結(jié)合程度取決于藥物的特點(diǎn)及膜的化學(xué)特性，當(dāng)結(jié)合程度很高時(shí)，就會(huì)對(duì)結(jié)果影響較大，所以必須重視。解決辦法是設(shè)立一個(gè)對(duì)照組，考察藥物與半透膜的吸附程度，如果吸附嚴(yán)重，就應(yīng)該考慮換膜或者采用其他研究方法。（3）空白干擾：有時(shí)從透析膜上溶解下來(lái)的一些成分會(huì)影響藥物的測(cè)定，如用紫外或熒光法，因此在實(shí)驗(yàn)之前應(yīng)該對(duì)膜進(jìn)行預(yù)處理，盡可能去除空白干擾。（4）膜完整性檢驗(yàn)：透析結(jié)束后，要檢查透析外液中是否有蛋白溢出，即檢查半透膜的穩(wěn)定性，如有蛋白溢出，需換膜重復(fù)實(shí)驗(yàn)。4．評(píng)價(jià)采用平衡透析法測(cè)定藥物血漿蛋白結(jié)合率實(shí)驗(yàn)要求較低，簡(jiǎn)單易行，因此應(yīng)用最為廣泛。但缺點(diǎn)是比較費(fèi)時(shí)，通常需要48小時(shí)左右才能達(dá)到平衡，故最好是在低溫環(huán)境下進(jìn)行，以防蛋白質(zhì)可能被破壞。平衡透析法要注意的幾個(gè)問(wèn)題（1）道南（Donnan）效應(yīng)：由96（一）超過(guò)濾法

原理基本原理和平衡透析法一樣，也是通過(guò)藥物、藥物血漿蛋白結(jié)合物的分子量的差異而將兩者分開(kāi)。與平衡透析法不同的是在血漿蛋白室一側(cè)施加壓力或超離心力，使游離藥物能夠快速地透過(guò)半透膜而進(jìn)入另一個(gè)隔室，而結(jié)合型藥物仍然保留在半透膜上的隔室內(nèi)。如圖所示。（一）超過(guò)濾法

原理971．方法在超濾之前最好將待測(cè)藥物與蛋白漩渦混合后，水浴37℃溫孵4h左右，以保證藥物與蛋白能夠充分結(jié)合，然后將含有血漿和藥物的混合液加入到超濾管的濾膜分隔裝置中，根據(jù)裝置要求，離心或加壓促使溶液透過(guò)濾過(guò)膜，測(cè)定過(guò)濾液的藥物濃度，即游離藥物濃度。通常有配套的裝置可供選擇。如藥物的總濃度測(cè)定為Ca，濾過(guò)液中藥物的濃度測(cè)定為Cb，則蛋白結(jié)合率可用下式計(jì)算得出。2．超濾離心法要注意的幾個(gè)問(wèn)題（1）

不同型號(hào)的濾過(guò)膜對(duì)結(jié)合率測(cè)定結(jié)果的影響。隨著超濾膜截留蛋白分子量的增大而結(jié)合率降低，可能是此類膜在同條件下超濾時(shí)，有部分小分子量蛋白及其結(jié)合的藥物滲漏過(guò)膜，使濾過(guò)液中的表觀游離藥物濃度增大，即測(cè)得的游離藥物濃度增高，因此蛋白結(jié)合率會(huì)比真實(shí)值偏低。（2）

不同的超濾時(shí)間對(duì)結(jié)合率的影響。有實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，隨著超濾時(shí)間的延長(zhǎng)，結(jié)合率也有所增加，原因可能是隨超濾時(shí)間增長(zhǎng)，濾過(guò)液容量增多，當(dāng)小分子溶劑留出量增加時(shí)，超濾液中的游離藥物濃度因稀釋而降低，因此測(cè)得的蛋白結(jié)合率會(huì)比真實(shí)值偏高。（3）

不同壓力下超濾對(duì)結(jié)合率的影響。壓力對(duì)結(jié)合率的影響是雙向的。隨著超濾時(shí)所受壓力增大，即離心轉(zhuǎn)速增加時(shí)，蛋白結(jié)合率會(huì)增大，因?yàn)閴毫Υ蠖垢嗟娜軇┓肿油高^(guò)濾膜。隨著超濾壓力的增加，雖然溶劑濾出量有所增加，但當(dāng)濾過(guò)壓力超過(guò)一定程度時(shí)會(huì)使部分藥物蛋白結(jié)合物也滲漏過(guò)膜，這時(shí)濾出液中藥物相對(duì)濃度會(huì)增高，使藥物蛋白結(jié)合率降低。因此，超濾時(shí)，應(yīng)根據(jù)樣品性質(zhì)和需要收集的超濾液體積，確定超濾速度和時(shí)間，一般超濾速度為3000～10000rpm，超濾時(shí)間為10～25min。超濾液與超濾前蛋白質(zhì)溶液體積之比不應(yīng)太大(一般比值為0.3～0.6)否則，蛋白質(zhì)溶液因超濾而過(guò)分濃縮，引起藥物與蛋白結(jié)合常數(shù)變化。3．評(píng)價(jià)與平衡透析法相比，超濾法優(yōu)點(diǎn)是快速，不僅設(shè)備簡(jiǎn)單，而且通常僅需離心十幾分鐘至數(shù)十分鐘，即可收集到足夠供測(cè)定的血漿超濾液，因此可用于不穩(wěn)定的藥物的蛋白結(jié)合率的測(cè)定。如果用微量超過(guò)濾裝置，蛋白用量可少，故可用于在體的血漿蛋白結(jié)合率測(cè)定，但用量少的情況下，要特別注意與膜結(jié)合的問(wèn)題。

1．方法在超濾之前最好將待測(cè)藥物與蛋白漩渦混合后，水浴37℃98其它方法其它方法99三、藥物在特殊屏障中的轉(zhuǎn)運(yùn)（一）、血腦屏障1、血腦屏障的特點(diǎn)（1）脂溶性藥物易于透過(guò)（2）低導(dǎo)水性（3）高反射系數(shù)（4）高電阻性三、藥物在特殊屏障中的轉(zhuǎn)運(yùn)（一）、血腦屏障100圖2-8.物質(zhì)透過(guò)血腦屏障的主要途徑：A、緊密聯(lián)接；B、胞飲轉(zhuǎn)運(yùn)；C、跨膜擴(kuò)散轉(zhuǎn)運(yùn)；D、受體、載體介導(dǎo)轉(zhuǎn)運(yùn)；E、外排系統(tǒng)。血腦屏障血腦屏障1012、影響藥物通過(guò)血腦屏障的因素

（1）藥物因素脂溶性相對(duì)分子量（2）生理病理因素

滲透壓藥物、毒物影響電荷性的改變腦缺血缺氧的影響炎癥的影響（3）藥物相互作用2、影響藥物通過(guò)血腦屏障的因素

（1）藥物因素1023、常用的研究藥物透過(guò)血腦屏障的方法（1）在體法1）快速頸內(nèi)動(dòng)脈注射技術(shù)

2）靜脈注射給藥后腦部取樣技術(shù)

3）腦灌流技術(shù)

4）腦血管灌流/除去毛細(xì)血管技術(shù)

3、常用的研究藥物透過(guò)血腦屏障的方法（1）在體法103血腦屏障（2）研究藥物透過(guò)血腦屏障的離體法1）離體腦微血管片的制備2）藥物攝取試驗(yàn)（3）原代腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)1）細(xì)胞攝取試驗(yàn)2）轉(zhuǎn)運(yùn)試驗(yàn)血腦屏障（2）研究藥物透過(guò)血腦屏障的離體法104（二）胎盤轉(zhuǎn)運(yùn)1、胎盤屏障的特點(diǎn)2、常用的研究方法（1）離體試驗(yàn)技術(shù)1）離體胎盤絨毛葉雙面灌流技術(shù)2）胎盤刷狀緣膜囊（2）在體試驗(yàn)（二）胎盤轉(zhuǎn)運(yùn)1、胎盤屏障的特點(diǎn)105第五節(jié)藥物的排泄一、腎排泄（一）腎藥物排泄特點(diǎn)及其影響因素1、腎小球?yàn)V過(guò)2、腎小管主動(dòng)分泌3、腎小管的重吸收（1）主動(dòng)重吸收（2）被動(dòng)重吸收第五節(jié)藥物的排泄一、腎排泄106（二）研究藥物腎排泄的常用方法1、在體法2、離體腎灌流法（二）研究藥物腎排泄的常用方法1、在體法107二、膽汁排泄1、膽汁中藥物排泄特點(diǎn)及其影響因素2、研究藥物膽汁排泄的常用方法二、膽汁排泄1、膽汁中藥物排泄特點(diǎn)及其影響因素