血涂片制備和染色血涂片制備和染色1【目的】掌握血涂片的制備和染色?！驹怼堪蜒褐瞥杉?xì)胞分布均勻的薄膜涂片，用瑞氏染液染色。不同的細(xì)胞種類及細(xì)胞的不同成分，對(duì)酸性及堿性染料的結(jié)合能力不同，而使各種細(xì)胞呈現(xiàn)出各自的染色特點(diǎn)。【器材】載玻片、推片、洗耳球、顯微鏡、香柏油、拭鏡紙、清潔液?！緲?biāo)本】EDTA，靜脈血。【目的】掌握血涂片的制備和染色。2瑞氏染色法【試劑】1．瑞氏(Wright)染液(1)I液:包含瑞氏染料1.0g、純甲醇600ml、甘油15ml。(2)Ⅱ液:磷酸鹽緩沖液(pH6.4～6.8)，含磷酸二氫鉀0.3g、磷酸氫二鈉0.2g、蒸餾水加至1000ml。瑞氏染色法3【操作】(1)采血(2)推片，推片與載片夾角30~45°平穩(wěn)地向前移動(dòng)，血膜應(yīng)呈舌狀，頭、體、尾三部分，且清晰可見(jiàn)。【操作】4實(shí)驗(yàn)二血涂片及染色課件5實(shí)驗(yàn)二血涂片及染色課件6實(shí)驗(yàn)二血涂片及染色課件7標(biāo)準(zhǔn)血涂片標(biāo)準(zhǔn)血涂片8血涂片分布不均主要原因：推片邊緣不齊、用力不均勻、載片不清潔

血涂片分布不均主要原因：9四、瑞氏染色法(Wright’sstain)1.瑞士染液成分：

①

美藍(lán)（亞甲藍(lán)）：M＋堿性染料，易氧化稱為天青。

②伊紅：E－酸性染料

③

瑞氏染料：M＋＋E-ME↓（伊－美中性物）

④甲醇：溶解染料；固定細(xì)胞形態(tài)；蛋白質(zhì)呈顆粒或網(wǎng)狀，增加細(xì)胞與染料的接觸。H2O甲醇四、瑞氏染色法(Wright’sstain)1.瑞士10四、瑞氏染色法(Wright’sstain)

1.

染液成分：

①

美藍(lán)（亞甲藍(lán)）：M＋堿性染料

②伊紅（曙紅）：E－酸性染料

③

瑞氏染料：M＋＋E-ME↓（伊－美中性物）

④甲醇：溶解染料；固定細(xì)胞形態(tài)；蛋白質(zhì)呈顆?；蚓W(wǎng)狀，增加細(xì)胞與染料的接觸。H2O甲醇四、瑞氏染色法(Wright’sstain)1.染液11

pH的影響：

H＋：堿性染料親和力下降，增強(qiáng)伊紅著色，出現(xiàn)紅染OH－：酸性染料親和力下降，增強(qiáng)美藍(lán)著色，出現(xiàn)藍(lán)染PBS緩沖液：pH6.4－6.8以維持恒定的pH環(huán)境pH的影響：123.染色方法

①

固定：滴加染液3~5滴，固定細(xì)胞0.5~1min

②

染色：加1~2倍PBS緩沖液，混勻染5~10min

③

沖洗：用流水沖去染液或加PBS緩沖液沖洗，待干。3.染色方法134.染色結(jié)果

①外觀：淡紫紅色

②鏡下：

紅細(xì)胞――粉紅色白細(xì)胞――胞核、胞漿及顆粒顯示特有的染色特征4.染色結(jié)果14實(shí)驗(yàn)二血涂片及染色課件15實(shí)驗(yàn)二血涂片及染色課件165.注意事項(xiàng)

①血膜要干透后才能染色，否則染色時(shí)易脫落；

②染色時(shí)間與染液濃度、室溫及細(xì)胞多少有關(guān)，一般染液淡、染色時(shí)間長(zhǎng)些效果好；

③染液不能過(guò)少，以防蒸發(fā)沉淀；5.注意事項(xiàng)17④沖洗時(shí)不能先倒掉染液，應(yīng)以流水沖，防染料沉著。沖洗時(shí)間也不能長(zhǎng)；⑤染色過(guò)淡時(shí)可復(fù)染，復(fù)染時(shí)先將染料稀釋好；

⑥染色過(guò)深可用水沖洗或浸泡，還可用甲醇脫色；

⑦分類最佳區(qū)域?yàn)轶w、尾交界處。④沖洗時(shí)不能先倒掉染液，應(yīng)以流水沖，防染料184.影響瑞氏染色效果的一些因素：A.染料放置時(shí)間；B.溶液的酸堿度；C.染色時(shí)間與染液濃度、室溫及細(xì)胞多少有關(guān)。

4.影響瑞氏染色效果的一些因素：19THANKSTHANKS20實(shí)驗(yàn)二血涂片及染色課件21血涂片制備和染色血涂片制備和染色22【目的】掌握血涂片的制備和染色?！驹怼堪蜒褐瞥杉?xì)胞分布均勻的薄膜涂片，用瑞氏染液染色。不同的細(xì)胞種類及細(xì)胞的不同成分，對(duì)酸性及堿性染料的結(jié)合能力不同，而使各種細(xì)胞呈現(xiàn)出各自的染色特點(diǎn)。【器材】載玻片、推片、洗耳球、顯微鏡、香柏油、拭鏡紙、清潔液?！緲?biāo)本】EDTA，靜脈血?！灸康摹空莆昭科闹苽浜腿旧?。23瑞氏染色法【試劑】1．瑞氏(Wright)染液(1)I液:包含瑞氏染料1.0g、純甲醇600ml、甘油15ml。(2)Ⅱ液:磷酸鹽緩沖液(pH6.4～6.8)，含磷酸二氫鉀0.3g、磷酸氫二鈉0.2g、蒸餾水加至1000ml。瑞氏染色法24【操作】(1)采血(2)推片，推片與載片夾角30~45°平穩(wěn)地向前移動(dòng)，血膜應(yīng)呈舌狀，頭、體、尾三部分，且清晰可見(jiàn)?！静僮鳌?5實(shí)驗(yàn)二血涂片及染色課件26實(shí)驗(yàn)二血涂片及染色課件27實(shí)驗(yàn)二血涂片及染色課件28標(biāo)準(zhǔn)血涂片標(biāo)準(zhǔn)血涂片29血涂片分布不均主要原因：推片邊緣不齊、用力不均勻、載片不清潔

血涂片分布不均主要原因：30四、瑞氏染色法(Wright’sstain)1.瑞士染液成分：

①

美藍(lán)（亞甲藍(lán)）：M＋堿性染料，易氧化稱為天青。

②伊紅：E－酸性染料

③

瑞氏染料：M＋＋E-ME↓（伊－美中性物）

④甲醇：溶解染料；固定細(xì)胞形態(tài)；蛋白質(zhì)呈顆?；蚓W(wǎng)狀，增加細(xì)胞與染料的接觸。H2O甲醇四、瑞氏染色法(Wright’sstain)1.瑞士31四、瑞氏染色法(Wright’sstain)

1.

染液成分：

①

美藍(lán)（亞甲藍(lán)）：M＋堿性染料

②伊紅（曙紅）：E－酸性染料

③

瑞氏染料：M＋＋E-ME↓（伊－美中性物）

④甲醇：溶解染料；固定細(xì)胞形態(tài)；蛋白質(zhì)呈顆?；蚓W(wǎng)狀，增加細(xì)胞與染料的接觸。H2O甲醇四、瑞氏染色法(Wright’sstain)1.染液32

pH的影響：

H＋：堿性染料親和力下降，增強(qiáng)伊紅著色，出現(xiàn)紅染OH－：酸性染料親和力下降，增強(qiáng)美藍(lán)著色，出現(xiàn)藍(lán)染PBS緩沖液：pH6.4－6.8以維持恒定的pH環(huán)境pH的影響：333.染色方法

①

固定：滴加染液3~5滴，固定細(xì)胞0.5~1min

②

染色：加1~2倍PBS緩沖液，混勻染5~10min

③

沖洗：用流水沖去染液或加PBS緩沖液沖洗，待干。3.染色方法344.染色結(jié)果

①外觀：淡紫紅色

②鏡下：

紅細(xì)胞――粉紅色白細(xì)胞――胞核、胞漿及顆粒顯示特有的染色特征4.染色結(jié)果35實(shí)驗(yàn)二血涂片及染色課件36實(shí)驗(yàn)二血涂片及染色課件375.注意事項(xiàng)

①血膜要干透后才能染色，否則染色時(shí)易脫落；

②染色時(shí)間與染液濃度、室溫及細(xì)胞多少有關(guān)，一般染液淡、染色時(shí)間長(zhǎng)些效果好；

③染液不能過(guò)少，以防蒸發(fā)沉淀；5.注意事項(xiàng)38④沖洗時(shí)不能先倒掉染液，應(yīng)以流水沖，防染料沉著。沖洗時(shí)間也不能長(zhǎng)；⑤染色過(guò)淡時(shí)可復(fù)染，復(fù)染時(shí)先將染料稀釋好；

⑥染色過(guò)深可用水沖洗或浸泡，還可用甲醇脫色；

⑦分類最佳區(qū)域?yàn)轶w、尾交