微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的基本操作1.器具的滅菌2.培養(yǎng)基的配制3.培養(yǎng)基的滅菌4.倒平板5.微生物接種6.恒溫箱中培養(yǎng)7.菌種的保存培養(yǎng)基配制原理

微生物的生長(zhǎng)繁殖時(shí)需要各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，一般包括水、無(wú)機(jī)鹽、碳源和氮源，有的還需要少量特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)（生長(zhǎng)因子）根據(jù)微生物的種類和實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌x擇不同的原料配制不同培養(yǎng)基。本課題使用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，它是一種應(yīng)用最廣泛和最普遍的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基，也稱普通培養(yǎng)基。它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl，其中牛肉膏為細(xì)菌提供碳源和能源，磷酸鹽；蛋白胨主要提供氮源；而NaCl提供無(wú)機(jī)鹽。在配制固體培養(yǎng)基時(shí)還要加入瓊脂作凝固劑。在培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)要用稀酸或稀堿將pH調(diào)至中性或微堿性，以利于細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖。四、實(shí)驗(yàn)操作(一)制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(用于培養(yǎng)細(xì)菌)8．滅菌:將50ml培養(yǎng)基用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌鍋，在壓力為100kPa、溫度為121℃，滅菌15～30min。將培養(yǎng)皿用舊報(bào)紙包裹，放入干熱滅菌箱內(nèi)，在160～170℃下滅菌2h。倒平板技術(shù)1.將滅過(guò)菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上，右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手撥出棉塞。1234倒平板技術(shù)2.右手拿錐形瓶，使瓶口迅速通過(guò)火焰。1234倒平板技術(shù)12343.用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基(約10~

20mL)倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋。

9．倒平板:待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時(shí)，在酒精燈附近倒平板。（倒平板操作見課本）2d后觀察平板，無(wú)雜菌污染才可用來(lái)接種.10．無(wú)菌檢查：將滅菌的培養(yǎng)基放入37℃的溫室中培養(yǎng)24—48小時(shí)，以檢查滅菌是否徹底。一旦劃破，會(huì)造成劃線不均勻，難以達(dá)到分離單菌落的目的；二是存留在劃破處的單個(gè)細(xì)胞無(wú)法形成規(guī)矩的菌落，菌落會(huì)沿著劃破處生長(zhǎng)，會(huì)形成一個(gè)條狀的菌落。注意：

1、移液管需要經(jīng)過(guò)滅菌。操作時(shí)，試管口和移液管離火焰1~2cm處.微生物的恒溫培養(yǎng)微生物的恒溫培養(yǎng)微生物的恒溫培養(yǎng)接種的注意點(diǎn)：（1）用接種環(huán)取菌種之前、每次劃線之前和劃線結(jié)束都要進(jìn)行灼燒滅菌，灼燒后要在酒精燈附近冷卻后再操作；（2）劃線時(shí)不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)基，如果采用分段劃線法操作從第二次操作應(yīng)總在上一次劃線末端開始，首尾區(qū)不能相連；（3）操作必須始終在酒精燈火焰旁進(jìn)行。菌種的保存1.臨時(shí)保藏：接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長(zhǎng)成后置于4℃冰箱保存。2.長(zhǎng)期保存：甘油冷凍管藏法

（一）培養(yǎng)基的制作是否合格

如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1～2d后無(wú)菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。（二）接種操作是否符合無(wú)菌要求

如果培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌