電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網(wǎng)址：本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用！請(qǐng)勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測(cè)等用途！-上海液質(zhì)檢測(cè)技術(shù)有限公司第第頁(yè)α-葡萄糖苷酶（α-GC）活性檢測(cè)試劑盒說明書可見分光光度法UPLC-MS-422050T/24S試劑名稱規(guī)格保存條件提取液液體50mL×1瓶2-8℃保存試劑一粉劑×2瓶-20℃保存試劑二液體25mL×1瓶2-8℃保存試劑三液體80mL×1瓶2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品液體1mL×1支2-8℃保存溶液的配制：1110mL-20℃42、標(biāo)準(zhǔn)品：5μmol/mL的對(duì)硝基苯酚溶液。α-GC(EC0)糖苷鍵α-GC--α-D-400nmα-GCp-Nitrophenylα-D-Glucopyranoside

α-GC

p-Nitrophenol(400nm)2-3可見分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、超聲破碎儀、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）110001mL（2031030500g，20.2g1mL3、液體樣本：直接檢測(cè)。若溶液有渾濁需離心后取上清進(jìn)行測(cè)定。二、測(cè)定步驟1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)400nm，蒸餾水調(diào)零。25μmol/mL100502512.56.250nmol/mL3、標(biāo)準(zhǔn)液稀釋可參考下表：序號(hào)標(biāo)準(zhǔn)液體積（μL）蒸餾水體積（μL）1500010040010002100020018001003100100010005045010001000255251000100012.5612.5100010006.2576.25010000（空白管）備注：實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需500μL標(biāo)準(zhǔn)溶液。4、加樣表試劑名稱（μL）測(cè)定管對(duì)照管標(biāo)準(zhǔn)管試劑一400試劑二500500樣本100100充分混勻，放入37℃水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱中準(zhǔn)確反應(yīng)30min后，立即放入沸水浴中煮沸5min（蓋緊，以防止水分散失），流水冷卻后充分混勻（以保證濃度不變）試劑一400充分混勻，8000g，4℃，離心5min，取上清液待測(cè)上清液500500標(biāo)準(zhǔn)液500試劑三1000100010002min400nm，分別記為AAAΔA=A-AΔA=A-A1-2次。三、活力計(jì)算1根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度（x，nmol/mL）和吸光度（y，ΔA標(biāo)準(zhǔn)），建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，將ΔA（y，ΔA測(cè)定）代入公式計(jì)算樣本產(chǎn)物濃度x（nmol/mL）。2、α-GC活力計(jì)算單位的定義：每mg組織蛋白在每mL體系中每小時(shí)產(chǎn)生1nmol對(duì)-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。α-GC活力（U/mgprot）=（x×V反總）÷（V樣×Cpr）÷T=20x÷Cpr單位的定義：每g組織在每mL體系中每小時(shí)產(chǎn)生1nmol對(duì)-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。α-GC活力（U/g質(zhì)量）=（x×V反總）÷（W×V樣÷V樣總）÷T=20x÷W單位的定義：每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每mL體系中每小時(shí)產(chǎn)生1nmol對(duì)-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。α-GC活力（U/104cell）=（x×V反總）÷（1000×V樣÷V樣總）÷T=0.02xCpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL，蛋白濃