電話(huà)：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網(wǎng)址：本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用！請(qǐng)勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測(cè)等用途！-上海液質(zhì)檢測(cè)技術(shù)有限公司第第頁(yè)肌酸含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)貨號(hào)：UPLC-MS-6017規(guī)格：50T/24S

可見(jiàn)分光光度法產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系工作人員。試劑名稱(chēng)規(guī)格保存條件提取液一液體30mL×1瓶4℃保存提取液二液體5mL×1瓶4℃保存試劑一液體15mL×1瓶4℃保存試劑二液體5mL×1瓶4℃保存標(biāo)準(zhǔn)品粉劑×1支4℃保存溶液的配制：標(biāo)準(zhǔn)品：1mg1mL1mg/mL4℃保存一個(gè)月。產(chǎn)品說(shuō)明：肌酸(Creatine)是一種含氮化合物，自然存在于脊椎動(dòng)物體內(nèi)，能夠輔助為肌肉和神經(jīng)細(xì)胞提供能量。肌酸可由精氨酸（arginine)、甘氨酸（glycine）及甲硫氨酸（methionine）三種氨基酸合成，可由人體自行合成，也可以95%的肌酸存在于骨骼肌中，主要存在形式為磷酸肌酸。肌酸作為一種補(bǔ)充劑主要通過(guò)增加肌肉質(zhì)量，增強(qiáng)運(yùn)動(dòng)表現(xiàn)能力。肌酸也被作為神經(jīng)肌肉疾病的一種治療藥被廣泛研究，它可能有助于保護(hù)神經(jīng)和改善細(xì)胞生物功能狀態(tài)。肌酸可在堿性條件下與聯(lián)乙酰-α-萘酚發(fā)生反應(yīng)，生成紅色產(chǎn)物在530nm處有吸收峰。注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。需自備的儀器和用品：可見(jiàn)分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。操作步驟：一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）1（104個(gè)）:提取液一體積（mL）500~10001的比例（1mL提取液一）加入提取液一，冰浴超聲波破碎細(xì)胞（300W3954℃，12000g10min0.8mL0.15mL提取液二，4℃，12000g10min取上清待測(cè)。2（g）:提取液一體積(mL)1:5~10（0.1g1mL提取液一4℃12000g10mn0.8mL0.15mL12000g離心10min后取上清待測(cè)。3、血清（漿）：取100μL血清（漿）加入1mL提取液一，4℃，12000g離心10min，取0.8mL上清液，再加入0.15mL提取液二，4℃，12000g離心10min后取上清待測(cè)。二、測(cè)定步驟1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至530nm，蒸餾水調(diào)零。21mg/mL100、80、50、25、12.5、6.25μg/mL溶液待用。3、按下表步驟加樣：試劑名稱(chēng)（μL）測(cè)定管對(duì)照管空白管標(biāo)準(zhǔn)管樣本100100--蒸餾水-100100-標(biāo)準(zhǔn)溶液100試劑一200200200200試劑二100-100100室溫避光反應(yīng)10min蒸餾水600600600600530nmAAAA標(biāo)準(zhǔn)。ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白。注：空白管只需做1-2次。三、肌酸含量計(jì)算1（x，μg/mL），ΔA標(biāo)準(zhǔn)為縱坐標(biāo)（y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，y=kx+bΔAx（μg/mL）。2、計(jì)算公式按照蛋白濃度計(jì)算肌酸含量（μg/mgprot）=x×V樣÷（V樣×Cpr）×0.879=x÷Cpr×0.879按照樣本質(zhì)量計(jì)算肌酸含量（μg/g質(zhì)量）=x×（V上清+V提取液二）÷（W×V上清÷V提取液一）×0.879=1.044×x÷W按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算肌酸含量（μg/104cell）=x×（V上清+V提取液二）÷（細(xì)胞數(shù)量×V上清÷V提取液一）×0.879=1.044×x÷細(xì)胞數(shù)量按照血清（漿）體積計(jì)算肌酸含量（μg/mL）=x×（V上清+V提取液二）÷[V液體×V上清÷（V提取液一+V液體）]×0.879=11.482×xV樣：加入樣本體積，100μL=0.1mL；V上清：提取液一提取時(shí)上清液體積，0.8mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g104計(jì)；V提取液一：加入提取液一體積，1mL；V提取液二：加入提取液二體積，0.150.1149.15，131.13，0.879=131.13÷149.15。注意事項(xiàng)：1、顯色完成后，請(qǐng)?jiān)?0min之內(nèi)完成檢測(cè)。21