電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網(wǎng)址：本產(chǎn)品僅供科學研究使用！請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途！-上海液質(zhì)檢測技術(shù)有限公司第第頁吲哚乙酸氧化酶活性檢測試劑盒說明書貨號：UPLC-MS-4305規(guī)格：50T/24S

可見分光光度法產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系工作人員。試劑名稱規(guī)格保存條件提取液液體40mL×1瓶2-8℃保存試劑一粉劑×1瓶2-8℃保存試劑二粉劑×2瓶2-8℃保存試劑三粉劑×1瓶-20℃保存試劑四液體60mL×1瓶2-8℃保存試劑五粉劑×1瓶2-8℃保存標準品粉劑×1支-20℃保存溶液的配制：1、試劑一：臨用前加入5mL蒸餾水備用，4℃保存兩周。213mL（11瓶粉劑。、5.71L50%乙醇（乙醇V：H2O（V）1：1）20℃周，避免反復凍融。4、試劑五：臨用前加入30mL試劑四溶解備用，2-8℃保存兩周。、10g1.14mL50%VHV1150μo/mL的標準溶液，-20℃分裝保存兩周，避免反復凍融。產(chǎn)品說明：IAA氧化酶能調(diào)節(jié)植物體內(nèi)吲哚乙酸的的水平，從而影響植物的生長。IAA在無機酸條件下與FeCl3作用生成紅色產(chǎn)物，在530nm下有最大吸收峰。酶活力的大小可用破壞IAA的速率表示。IAA

IndoleaceticAcidOxidase(IAAO)

3-MethyleneoxindoleIAA+FeCl3 RedChelate(530nm)注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。需自備的儀器和用品：1mL/操作步驟：一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）10.1g1mL12000g4℃15min25001mL提取液，超聲波破碎細菌或細胞（200W3s10s30次。12000g，4℃15min清，置冰上待測。二、測定步驟1、可見分光光度計預熱30min，波長調(diào)至530nm，蒸餾水調(diào)零。2、標準液的稀釋：將標準溶液用蒸餾水稀釋為0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125μmol/mL的標準液。3、標準液稀釋可參考下表：序號稀釋前濃度（μmol/mL）標準液體積（μL）蒸餾水體積（μL）稀釋后濃度（μmol/mL）150409602221009000.230.25005000.140.15005000.0550.055005000.02560.0255005000.0125備注：實驗中每個標準管需400μL標準溶液。4、加樣表：試劑名稱（μL）測定管對照管標準管空白管提取液200200--試劑一4040--試劑二4040--試劑三8080--樣本40上述試劑混勻后置于30℃水浴鍋中準確反應30min--試劑四400400400400樣本-40--標準品--400-蒸餾水40010000g常溫離心10min，取上清液待測--上清液750750--標準品混合液750750試劑五400400400400置于置于30℃水浴鍋中避光放置30min，測定530nm處的吸光值，分別記為A測定、A對照、A標準、空白，計算ΔA測定=A對照-A測定，ΔA標準=A標準-A空白。每個測定管需設一個對照管。標準曲線和空白管只需測1-2次。三、吲哚乙酸氧化酶酶活計算1、標準曲線的繪制：為xΔA標準為yΔA帶入方程中計算得到樣本濃度（x，μmol/mL）。2、吲哚乙酸氧化酶活力計算：按樣本蛋白濃度計算：單位的定義：每mg組織蛋白在反應體系中每分鐘消耗1nmolIAA的酶量定義為一個酶活性單位。IAA氧化酶酶活（U/mgprot）=x×V酶促×1000÷(V樣×Cpr)÷T=333×x÷Cpr按樣本質(zhì)量計算：單位的定義：每g組織在反應體系中每分鐘消耗1nmolIAA的酶量定義為一個酶活性單位。IAA氧化酶酶活（U/g質(zhì)量）=x×V酶促×1000÷(W÷V提取×V樣)÷T=333×x÷W按細胞或細菌數(shù)量計算：單位的定義：每104個細胞或細菌在反應體系中每分鐘消耗1nmolIAA的酶量定義為一個酶活性單位。IAA氧化酶酶活（U/104cell）=x×V酶促×1000÷(500÷V提取×V樣)÷T=0.667×