淋巴細(xì)胞亞群及血細(xì)胞抗體檢測(cè)在再生障礙性貧血中的臨床意義高澤莉;汪宏云;葉梅;李莉;周麗;郭峰【摘要】目的：探討再生障礙性貧血患者外周血淋巴細(xì)胞亞群及血細(xì)胞抗體水平25（718）20（對(duì)照）外周血淋巴細(xì)胞亞群（CD3＋、CD3＋CD4＋、CD3＋CD8＋、CD4＋／CD8＋、CD3－CD19＋、CD3－CD16＋CD56＋）及血細(xì)胞抗體（抗血小板抗體、抗紅細(xì)胞抗體及抗粒細(xì)胞抗體）CD4TCD56＋百分比明顯降低（P＜0．05）；血細(xì)胞抗體（血小板抗體、紅細(xì)胞抗體、粒細(xì)胞抗體）陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組（P＜0．05）。結(jié)液免疫也存在異常。%ObjectiveToinvestigateofthechangeofperipheralbloodlymphocytesubsetsandbloodcellantibodiesinaplas‐ticanemiaanditsclinicalsignificance.MethodsThelymphocytesubsetsCD3+,CD3+CD4+,CD3+CD8+,CD4+/CD8+,CD3-CD19+,CD3-CD16+CD56+from25aplasticanemia(includingSAA7cases,NSAA18cases),andhematocyteantibodydetection(granulocyte,erythrocyte,plateletcytomembrane)and20controlswereexaminedbyflowcytometry.ResultsCD4+Tlymphocytepercentage,CD4/CD8ratio,thepercentageofCD56+inaplasticanemiapatientssignificantlydecreased(P<0.05).Bloodcellanti‐bodies(plateletantibody,erythrocyteantibody,granulocyteantibody)weresignificantlyhigherthanthecontrolgroup(P<0.05).ConclusionAplasticanemiacellularimmunefunctioninpatientsisabnormal,andantibodypositiverateishigh,anditpromptthathumoralimmunityisalsoabnormal.【期刊名稱】《重慶醫(yī)學(xué)》【年(卷),期】2016(045)007【總頁(yè)數(shù)】3頁(yè)(P903-904,908)【關(guān)鍵詞】再生障礙性貧血;淋巴細(xì)胞亞群;血細(xì)胞抗體【作者】高澤莉;汪宏云;葉梅;李莉;周麗;郭峰【作者單位】四川省攀枝花學(xué)院附屬醫(yī)院血液科617000;四川省攀枝花學(xué)院附屬醫(yī)院血液科617000;四川省攀枝花學(xué)院附屬醫(yī)院血液科617000;四川省攀枝花學(xué)院附屬醫(yī)院血液科617000;四川省攀枝花學(xué)院附屬醫(yī)院血液科617000;四川省攀枝花學(xué)院附屬醫(yī)院血液科617000【正文語(yǔ)種】中文【中圖分類】R556.5再生障礙性貧血(aplasticanemia，AA)是一類主要由T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)造血組織損傷而導(dǎo)致的骨髓造血衰竭綜合征。近年來(lái)，越來(lái)越多研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞免疫是其主要發(fā)病機(jī)制，包括Th/Ts細(xì)胞失衡及CD8+T細(xì)胞過(guò)度活化、Treg細(xì)胞的明顯降低等有關(guān)。目前，細(xì)胞免疫功能T淋巴細(xì)胞亞群的研究較多，但對(duì)AA患者血細(xì)胞抗體的研究卻很少。本研究應(yīng)用流式細(xì)胞儀對(duì)25例AA患者的外周血淋巴細(xì)胞亞群及血細(xì)胞抗體進(jìn)行了檢測(cè)，旨在觀察二者在AA發(fā)病中的變化及臨床意義，以便指導(dǎo)治療及病情觀察。一般資料 全部AA病例均為本院住院或門診患者，根據(jù)血常規(guī)和骨髓檢查及骨髓活檢確診，符合張之南《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》。將研究對(duì)象分為兩組，AA1312AA7AA1835(2)11932亞群試劑盒及血細(xì)胞抗體試劑盒(Beckman,America)。試劑為鼠抗人單克隆BEKMANCOULTA11895。方法淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)方法 采集外周靜脈血3mL，乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝后，流式細(xì)胞儀檢測(cè)淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)，包括CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+/CD8+、CD3-CD19+、CD3-CD16+CD56+等。直接免疫熒光法：熒光素標(biāo)記的各種單克隆抗體加入到全血中，與白細(xì)胞膜相應(yīng)的抗原結(jié)合，經(jīng)過(guò)熒光標(biāo)記固定、溶血步驟后，在流式細(xì)胞儀上進(jìn)行分析，而得到淋巴細(xì)胞亞群的百分?jǐn)?shù)，加入Flow-Count即可得出絕對(duì)計(jì)數(shù)。3mL，EDTA-K2IgG-Fc統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS16.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，計(jì)量資料以±s表示,計(jì)量資料組間比較行t檢驗(yàn),計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。AA組與對(duì)照組淋巴細(xì)胞亞群的比較 AA組CD3+平均值(70.00±12.25)%，與對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，AA組CD4+T淋巴細(xì)胞平均值為(32.50±5.61)%，明顯低于對(duì)照組(P<0.05);CD8+平均值為(39.70±5.02)%，明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，CD4/CD8比值，平均值為(0.90±0.26)%，與對(duì)照組比明顯降低(P<0.05)，CD56+平均值(7.94±4.51)%,明顯低于對(duì)照組(P<0.05)，見表1。AA組與對(duì)照組外周血血細(xì)胞抗體的比較 血小板抗體PAIGG平均(2.30±1.94)%，明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，血小板抗體PAIGA平均值(2.22±2.09)%，明顯高于對(duì)照組(P<0.05),血小板抗體PAIGM平均值(8.27±9.93)%，明顯高于對(duì)照組。紅細(xì)胞抗體IGG(0.40±0.23)%,明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，紅細(xì)胞抗體IGA(1.17±1.76)%,與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，紅細(xì)胞抗體IGM平均值(2.25±1.60)%，明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，粒細(xì)胞抗體IGG平均值(1.86±1.20)%，，明顯高于對(duì)照組(P<0.05),粒細(xì)胞抗體IGA平均值(3.38±5.26)%，與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),粒細(xì)胞抗體IGM平均值(5.16±6.82)%，明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，見表2。傳統(tǒng)學(xué)說(shuō)認(rèn)為AA是原發(fā)、繼發(fā)干細(xì)胞缺陷、造血微環(huán)境異常及免疫異常3種機(jī)制導(dǎo)致的骨髓造血功能衰竭。目前，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為AA患者的發(fā)病機(jī)制為T細(xì)胞功能異常、細(xì)胞免疫亢進(jìn)并以骨髓為靶器官的自身免疫性疾病。其T細(xì)胞亞群失衡、CD8比例增高、CD4/CD8比例倒置[1-2]。AAT(P>0.05)，但CD4/CD8AAAACD4/CD8BAAB6，B3，B，BAABAAAATAAT[3]。CD16+56+是NK細(xì)胞的特性標(biāo)志，參與腫瘤、感染、免疫調(diào)節(jié)。本研究發(fā)現(xiàn)AA患者NK+減少的有6例，均為重型AA，說(shuō)明AA患者NK細(xì)胞免疫功能明顯受損的。較多文獻(xiàn)提及NK細(xì)胞在AA患者中數(shù)量是減低的，NK細(xì)胞表面同時(shí)存在抑制性受體和活化性受體，但抑制性受體居主導(dǎo)地位，表現(xiàn)為NK細(xì)胞對(duì)自身正常組織細(xì)胞不產(chǎn)生殺傷作用，NK細(xì)胞的降低減弱了T淋巴細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用，導(dǎo)致免疫功能失衡。在Fas缺陷的小鼠模型中，NK細(xì)胞在體外可以抑制自身反應(yīng)性B淋巴細(xì)胞，而在體內(nèi)將NK細(xì)胞清除后則會(huì)加重自身免疫性疾病的程度[4-8]，提示NK細(xì)胞減少在AA發(fā)病機(jī)制中起一定作用。本研究同時(shí)進(jìn)行了成熟血細(xì)胞抗體的測(cè)定。紅、粒細(xì)胞抗體包括IGG、IGM、IGA，血小板抗體包括PAIGG、PAIGA、PAIGM。成熟血細(xì)胞抗體測(cè)定目前較少文獻(xiàn)提及。劉惠等[9]研究較多的為免疫相關(guān)性血細(xì)胞減少(immuno-relatedhemocytopenia，IRH)，此病為自身抗體損傷和(或)抑制骨髓不成熟造血細(xì)胞導(dǎo)TBAA、MDS、PNHFCM用丙球蛋白等免疫抑制劑有效仍可確診[8-9]。作者沒(méi)有檢測(cè)干祖細(xì)胞抗體，而是檢測(cè)外周血成熟血細(xì)胞抗體。本研究發(fā)現(xiàn)，AA5/25(20%6/25(24%)，粒細(xì)胞抗體9/25(36%10/25(40%)。與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05IGMAATH2細(xì)胞，目前文獻(xiàn)不多，還有待進(jìn)一步研究。付蓉等[10IRH體可作用于骨髓紅系造血細(xì)胞膜上的促紅細(xì)胞生成素受體(EPOR)，封閉EPOR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，導(dǎo)致紅系較早階段增殖和分化受抑，EPORAAIRHAABCD5+BAAIGg1IGg3糖皮質(zhì)激素及靜脈用丙球蛋白療效好，起效快[11]。AA2AA細(xì)胞抗體仍異常，因在其他醫(yī)院停藥及減量導(dǎo)致病情復(fù)發(fā)，當(dāng)重新使用環(huán)孢素后患者血常規(guī)又恢復(fù)，故作者根據(jù)此2項(xiàng)結(jié)果來(lái)決定用藥時(shí)間和調(diào)整藥物劑量[12]。當(dāng)AA患者血象和骨髓象即使恢復(fù)正常后，若淋巴細(xì)胞亞群及血細(xì)胞抗體仍為陽(yáng)性時(shí)，建議適當(dāng)延長(zhǎng)用藥時(shí)間?！鞠嚓P(guān)文獻(xiàn)】KordastiS,MarshJ,Al-KhanS,etal.FunctionalcharacterizationofCD4+Tcellsinaplasticanemia[J].Blood,2012,119(9):2033-2043.林果為．現(xiàn)代臨床血液病學(xué)[M]．上海：復(fù)旦大學(xué)出版社，2013：365-368．文瑞婷，蔡靜怡，吳國(guó)才，等．B[J學(xué)院學(xué)報(bào)，2014，32(5)：624-625．LiuC,LiZ,ShengW,etal.Abnormalitiesofquantitiesandfunctionsofnaturalkillercellsinsevereaplasticanemia[J].ImmunolInvest,2014,43(5):491-503.LiZS,ShaoZH,FuR,etal.Percentagesandfunctionsofnaturalkillercellsubsetsinperipheralbloodofpatientswithsevereaplasticanemia[J].ZhonghuaYiXueZaZhi,2011,91(16):1084-1087.[J]．同濟(jì)大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版，2011，6(6)：70-73．何維，曹雪濤，熊思東．醫(yī)學(xué)免疫學(xué)[M]．22011：135．coomsT態(tài)[J]．中華醫(yī)學(xué)雜志，2010，90(42)：2989-2992．劉惠，付蓉，邵宗鴻．免疫相關(guān)性血細(xì)胞減少癥的診斷及鑒別診斷[J2013，26(4)：437-4