豬人工授精－實(shí)驗(yàn)室關(guān)鍵技術(shù)

育種部報告內(nèi)容豬人工授精的歷史及現(xiàn)狀豬人工授精的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備豬人工授精的意義豬精液的人工采集豬精液的品質(zhì)檢查豬精液的保存處理豬精液處理后輸精豬人工授精的歷史及現(xiàn)狀該技術(shù)始于20世紀(jì)30年代，已有70多年的歷史我國始于上世紀(jì)50年代，未達(dá)到理想的推廣程度20世紀(jì)90年代后，該技術(shù)得到迅速普及目前該技術(shù)已成為豬配種繁殖的主要手段之一豬人工授精的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備

儀器顯微鏡、精子密度測定儀、電子天平、恒溫水浴鍋、恒溫精液保存箱、pH計（試紙）、精子計數(shù)數(shù)器、移液器等

器皿溫度計、量筒、燒杯、保溫瓶、采精杯、玻璃棒等

消耗品紗布、輸精瓶、輸精管、乳膠手套、采精袋、稀稀釋粉等豬精液的采集采集前的準(zhǔn)備工作豬精液采精的方法精液采集前的準(zhǔn)備工作實(shí)驗(yàn)室的準(zhǔn)備精液稀釋液準(zhǔn)備操作人員的準(zhǔn)備采精器皿的準(zhǔn)備檢測儀器的準(zhǔn)備分裝器皿的準(zhǔn)備采精公豬的準(zhǔn)備豬的人工采精方法電刺激采精法手握采精法假陰道采精法豬精液的品質(zhì)檢查品質(zhì)檢查的目的精液顯微鏡檢查精液外觀檢查活率=直線運(yùn)動的精子數(shù)/總精子數(shù)精子活率檢查玻片升溫至37℃取精液10μl制片

于37℃恒溫臺上

相差顯微鏡下

400倍觀察精子

與受精能力相關(guān)精子活率精液品質(zhì)的指標(biāo)按0.1~1.0的十級評分法進(jìn)行評估目測估測法活率要求

鮮精活率＞0.7才可進(jìn)行稀釋配制

保存精液活率＞0.6才可以使用精子計數(shù)注意：讓稀釋后的精液通過毛細(xì)作用自行吸入！用吸管稀釋后精液注入計數(shù)室共有兩個對稱的計數(shù)室精子計數(shù)精子計數(shù)室及一個中方格精子計數(shù)方法以圖示次序計數(shù)，精子的頭部為準(zhǔn)，依數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左右不數(shù)右的原則進(jìn)行計數(shù)格線上的精子。計算公式1ml原精液內(nèi)的精子數(shù)＝5個中方個數(shù)的精子數(shù)×5×10×1000×稀釋倍數(shù)

（如為原精液則不×稀釋倍數(shù)）樣本儀器觀察精子活力及膜的完整性A.死精子區(qū)域:PI,陽性;AnV-FITC,陰性。B.死精子區(qū)域:PI,陽性;AnV-FITC,陽性。C.活精子區(qū)域:PI,陰性;AnV-FITC,陰性。D.活精子區(qū)域:PI,陰性;AnV-FITC,陽性。A)H33342標(biāo)記所有精子細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色熒光；PI標(biāo)記死精子的細(xì)胞核呈現(xiàn)紅色熒光；發(fā)生頂體反應(yīng)或頂體膜破損的精子被FITC-PNA標(biāo)記,呈現(xiàn)綠色頂體。熒光顯微鏡下觀察精子的活力和頂體狀態(tài)流式細(xì)胞儀觀察精子的活力和頂體狀態(tài)B)C)豬精液的保存處理精液的稀釋精液的分裝精液的保存精液的冷凍及解凍精液的運(yùn)輸精液的分裝精液的分裝瓶裝管裝袋裝分裝簡單方便用于冷凍保存輸精方便，但需分裝機(jī)分裝后標(biāo)注公豬品種公豬耳號生產(chǎn)日期稀釋液名稱稀釋后分裝的豬精液精液的保存保存溫度常溫（17℃等）低溫（4℃等）冷凍（-196℃）生產(chǎn)上：常溫17℃常溫保存要求精液需緩慢降溫，室溫1~2h或紗布包裹每12h將精液搖勻1次，要輕緩均勻注意冰箱內(nèi)溫度的變化防止溫度升高或降低減少保存箱開關(guān)次數(shù)，以減少對精子的影響使用前檢查活率，活率＜0.6精液應(yīng)棄之用稀釋液保存的精液，應(yīng)盡快用完精液的運(yùn)輸精液運(yùn)輸關(guān)鍵保溫、防震、避光運(yùn)輸注意事項(xiàng)運(yùn)輸前應(yīng)檢查活率，低于0.7的精液嚴(yán)禁調(diào)出包裝瓶（袋）應(yīng)排盡空氣，以減少運(yùn)輸震蕩運(yùn)輸過程中，放入保溫箱中保溫（16~18℃）到達(dá)目的地，檢查精子活率，合格方可接收運(yùn)輸過程中，應(yīng)嚴(yán)格避光輸精輸精的時間輸精的方法填寫輸精記錄人工授精

（Artificalinsemination：AI）借助于專門的器械，用人工的方法采取公畜精液，經(jīng)體外檢查與處理后，再輸入發(fā)情母畜的生殖道內(nèi)，使其受胎的一種繁殖技術(shù)。人工授精技術(shù)包括：采精精液品質(zhì)評定稀釋保存運(yùn)輸輸精等環(huán)節(jié)。輸精的時間輸精時間第一次輸精：出現(xiàn)靜立反射后12h左右進(jìn)行第二次輸精：第一次輸精后8~12h進(jìn)行豎耳，陰部紅腫，出現(xiàn)靜立反射母豬接收公豬或其它母豬的爬跨有爬跨其它母豬的行為發(fā)情母豬表現(xiàn)豬發(fā)情癥狀與人工授精最佳時間受精率：

靜立前一天：10%；靜立第一天：70%；靜立第二天：98%；靜立第三天：15%最佳時間：靜立后12~24h輸精方法子宮頸輸精法intra-cervicalinsemination，intra-CAI子宮內(nèi)輸精法post-cervicalinsemination，post-CAI子宮角輸精法deeputerineinsemination，DUI

宮頸輸精法

消毒清潔雙手，戴上消毒手套

清潔母豬外陰、尾根及臀部周圍

取出滅菌后的輸精管，在其前端涂上潤滑劑

將輸精管45℃向上插入母豬生殖道內(nèi)直到子宮頸

取出精液輕輕搖勻，去除瓶嘴，接輸精管，輸精

輸精完畢后抽出輸精管輸精流程輸精次數(shù)

一個情期內(nèi)輸精兩次(間隔8~12h)豬人工授精

精子在母畜生殖道運(yùn)行中的損耗

射精后的精子在母畜生殖道內(nèi)要通過三道屏障：子宮頸子宮腺窩與宮管結(jié)合部壺峽連接部精子在受精前的準(zhǔn)備

（精子獲能與頂體反應(yīng)）

精子在母畜生殖道內(nèi)存活時間

和維持受精能力的時間動物品種牛豬羊馬維持存活時間15～56h50h48h6d維持受精能力18～20h8～12h12～16h4～20h各種家畜精液的稀釋倍數(shù)和輸精劑量家畜種類稀釋比例輸精計量（ml）有效精子數(shù)（億）豬1:1~330~5010~20牛1:10~401~1.50.1~0.5馬1:1~320~302.5~5.0羊1:1~30.10.2~0.5凍精解凍和輸精過程中應(yīng)注意的事項(xiàng)解凍水浴溫度應(yīng)為39℃適宜;三防(寒、熱、光)