血液病分子病理診斷臨床應(yīng)用北京海思特臨床檢驗(yàn)所

分子病理室2013.06血液病分子病理診斷臨床應(yīng)用北京海思特臨床檢驗(yàn)所1

多層次檢測(cè)平臺(tái)綜合應(yīng)用細(xì)胞遺傳學(xué)形態(tài)學(xué)分子生物學(xué)流式細(xì)胞學(xué)

染色體核型分析

熒光原位雜交RT-PCR測(cè)序

多重?zé)晒獬彩絇CR定量PCR直接測(cè)序GeneScan多層次檢測(cè)平臺(tái)綜合應(yīng)用細(xì)胞2血液病診斷分型

定量監(jiān)測(cè)MRD

白血病預(yù)后靶向治療

耐藥及疾病進(jìn)展監(jiān)測(cè)

范可尼貧血嗜血細(xì)胞綜合癥等血液病分子病理檢測(cè)

融合基因檢測(cè)基因突變檢測(cè)血液遺傳病檢測(cè)大多數(shù)情況下，某一患者只有一種融合基因陽性血液病診斷分型血液病分子病理檢測(cè)融合基因檢測(cè)大多3個(gè)案t(15;17)witht(9;22)46,XY,t(9;22)(q34;q11),t(15;17)(q22;q21)BMmorphology:APLFCM:M3QPCR:PML/RARA+BCR/ABL(190)+個(gè)案t(15;17)witht(94多重巢式RT-PCR

篩查

定性檢測(cè)用于染色體斷裂點(diǎn)跨越很大的區(qū)域的融合基因。

熒光定量RT-PCR定量檢測(cè)

內(nèi)參基因c-abl結(jié)果以比值表示，全程動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)融合基因的拷貝數(shù)/內(nèi)參基因c-ablPCR-測(cè)序血液病分子病理檢測(cè)多重巢式RT-PCR血液病分子病理檢測(cè)5篩查每月定量監(jiān)測(cè)3-6月定量監(jiān)測(cè)每月定量監(jiān)測(cè)篩查每月定量監(jiān)測(cè)3-6月定6CMPD-慢性骨髓增殖性疾病CML慢性粒細(xì)胞白血病Ph染色體t(9;22)(q34;q11)ET原發(fā)性血小板增多癥JAK2V617F*PV真性紅細(xì)胞增多癥JAK2V617F*CIMF慢性特發(fā)性骨髓纖維化JAK2V617F*HES特發(fā)性高嗜酸性粒細(xì)胞白血病FIP1L1-PDGFRα4q12缺失CMML慢性粒單核細(xì)胞白血病TEL/PDGFRβ:t(5;12)(q33;p13)

*WilliamV,StefanN.AuniqueactivatingmutationinJAK2(V617F)isattheoriginofpolycythemiaveraandallowsanewclassificationofmyeloproliferativediseases.Hematology.2005,10-13:195-200

CMPD-慢性骨髓增殖性疾病CML慢性粒細(xì)胞白血病Ph染色體7CML—BCR/ABL約95%的CML5%的兒童ALL15%-30%的成人ALLCML—BCR/ABL約95%的CML8CMPD-慢性骨髓增殖性疾病BCR/ABLJAK2V617FPV(-)65%-97%(+)純合子多見少數(shù)JAK2V617F(-)12Exon突變ET(-)50%(+)CIMF(-)50%(+)JAK2V617F(-)5%MPLW515L/K(+)MolecularPathology：themolecularbasisofhumandiseasebyWillamB.Coleman,GregoryJ.TsongalisCMPD-慢性骨髓增殖性疾病BCR/ABLJAK2V617F9激活JAK2基因使細(xì)胞對(duì)生長因子敏感性增高

PV、ET、CIMF

不是獨(dú)立的診斷指標(biāo)MDS、3%CMMLJAK2V617F纈氨酸苯丙氨酸激活JAK2基因使細(xì)胞對(duì)生長因子敏感性增高JAK2V617F10FISH內(nèi)參缺失預(yù)后5q-5p15.25q31差7q-7p11.1-q11.17q31差20q-20q12好+88p11-q11MDS轉(zhuǎn)AML的幾率為50%-Yq11好MDS-骨髓增生異常綜合癥分子方面的理論有限，但發(fā)現(xiàn)有5q31,7q31，20q12的反復(fù)缺失，提示可能這些區(qū)域存在腫瘤抑制基因。FISH內(nèi)參缺失預(yù)后5q-5p15.25q31差7q-7p1111.MLL/AFX2.MLL/AF43.MLL/AF64.MLL/AF95.MLL/ELL6.MLL/ENL7.CBFB/MYH118.BCR/ABL9.MLL/AF1P10.TEL/PDGFR11.MLL/AF1012.DEK/CAN13.MLL/AF1714.SET/CAN15.dupMLL16.PML/RARa17.E2A/PBX118.PLZF/RARa19.E2A/HLF20.NPM/ALK21.SIL/TAL122.NPM/MLF123.TEL/AML124.NPM/RARa25.AML1/ETO26.TEL/ABL27.AML1/MDS128.HOX1129.TLS/ERG30.EVI131.MLL/AF1Q白血病-31種融合基因篩查1.MLL/AFX2.MLL/AF43.MLL/AF64.M1255%L型5%

V型體外對(duì)ATRA的敏感度低40%

S型低分化M3其他融合基因M3:PML-RARAt(5;17)(q32;q21)t(11;17)(q13;q21)t(11;17)(q23;q21)t(15;17)(q22;q21)PML-RARaPLZF-RARaNPM-RARaNuMA-RARa95%<5%dup(17)(q21.3;q23)STAT5b-RARa55%L型M3:PML-RARAt(5;17)(q313AML1/ETO80-90%M2少數(shù)M1/M4/M5CBFβ-MYH11M4Eo化療敏感預(yù)后較好AML1/ETO14TEL/AML1

前B細(xì)胞ALLE2A/PBX15-6%的兒童ALL3%的成人ALL大部分前B細(xì)胞ALL血液病分子病理診斷15同一患者可能同時(shí)存在多種基因突變可與融合基因或其它基因突變同時(shí)存在；預(yù)后判斷；個(gè)體化用藥基因突變?cè)诩膊“l(fā)展過程中可能會(huì)變化AML患者常見基因突變及其預(yù)后意義基因位置發(fā)生率預(yù)后C-KIT4q1220-30%差NPM15q3525-35%好FLT3-ITD13q1220-30%差CEBPA19q13.112.80%好同一患者可能同時(shí)存在多種基因突變AML患者常見基因突變及其預(yù)16血液病分子病理診斷17AML其他突變AML其他突變18淋巴瘤分子檢測(cè)IG重排

Ig受體基因重排MRDTCR重排T細(xì)胞受體基因重排BCL-1/JHt(11;14)(q13;q32)套細(xì)胞淋巴瘤（MCL）少數(shù)B細(xì)胞增殖性疾病如多發(fā)性骨髓瘤BCL-2/JHt(14;18)70-80%的濾泡性淋巴瘤(FL)，大部分為t(14;18)，30%DLBCL淋巴瘤分子檢測(cè)IG重排Ig受體基因重排MRDTCR重排T細(xì)19IG和TCR基因重排不一定是譜系的標(biāo)志

某些T、B淋巴瘤有基因重排的交叉淋巴瘤-TCR，IG重排IG和TCR基因重排不一定是譜系的標(biāo)志淋巴瘤-TCR，IG重20多發(fā)性骨髓瘤（MM）探針名稱位點(diǎn)異常率意義中位生存期（月）P53缺失17p1310-34%預(yù)后差24.7IGH重排(4;14)(14;16)50-70%預(yù)后差1q21擴(kuò)增1q2135-45%預(yù)后差21.9RB1缺失13q1450%預(yù)后中等42.3D13S319缺失13q1445%預(yù)后中等IGH重排(11;14)50-70%預(yù)后尚可50.5多發(fā)性骨髓瘤（MM）探針名稱位點(diǎn)異常率意義中位生存期（月）P21各細(xì)胞遺傳學(xué)亞組MM患者生存期(n=351)24.742.350.5FonsecaR.Blood2003;101:4569-4575.

各細(xì)胞遺傳學(xué)亞組MM患者生存期(n=351)24.742.322各細(xì)胞遺傳學(xué)亞組MM患者生存期（n=159）FonsecaR.Leukemia2006;20,2034-2040.各細(xì)胞遺傳學(xué)亞組MM患者生存期（n=159）Fonseca23慢性淋巴細(xì)胞白血病CLL探針名稱位點(diǎn)及讀取異常率意義中位生存期(月)p5317p13缺失7-8%預(yù)后很差

32ATM11q22.3缺失11-18%預(yù)后差

7912cen12p11.1-q11三體16-25%預(yù)后中等

114RB113q14缺失36-64%預(yù)后好133D13S2513q14缺失36-64%預(yù)后好

133慢性淋巴細(xì)胞白血病CLL探針名稱位點(diǎn)及讀取異常率意義中位生存24各細(xì)胞遺傳學(xué)亞組CLL患者生存期（n=325）3279114111133D?hnerH,EnglJMed.2000;43:1910-1916.

各細(xì)胞遺傳學(xué)亞組CLL患者生存期（n=325）327911425酪氨酸激酶抑制劑TKIBCR/ABL融合基因FIP1L1/PDGFRa融合基因基因檢測(cè)個(gè)體化用藥酪氨酸激酶抑制劑TKI基因26基因檢測(cè)個(gè)體化用藥2012NCCN基因檢測(cè)個(gè)體化用藥2012NCCN27ABL激酶突變檢測(cè)ABL激酶區(qū)突變c.763G>A(p.E255K)和c.944C>T(p.T315I)。ABL激酶突變檢測(cè)ABL激酶區(qū)突變c.763G>A(p.E228WT1表達(dá)量檢測(cè)*約75%AML患者可檢測(cè)到WT1高水平表達(dá)，WT1是AML患者常用的MRD檢測(cè)標(biāo)志融合基因定量檢測(cè)MRD監(jiān)測(cè)*CurrentOpinioninOncology2010,22:656–663WT1表達(dá)量檢測(cè)MRD監(jiān)測(cè)*CurrentOpinion29WT1(Wilm’stumorgene)1.WT1基因在各類型白血病中均能表達(dá)(ALL，AML，CML，MDS).2.表達(dá)水平與白血病的進(jìn)程相關(guān)，可作為化療和骨髓移植后MRD檢測(cè)敏感指標(biāo)。3.鑒別白血病與反應(yīng)性白細(xì)胞增高。WT1(Wilm’stumorgene)1.WT130初診B-ALL;MLL-AF4t(4;11)(q21;q23)WT1(Wilm’stumorgene)血液學(xué)復(fù)發(fā)FCMMRD+弟供姐異基因造血干細(xì)胞移植+14d白細(xì)胞植活+27d血小板植活初診B-ALL;MLL-AF4t(4;1131嗜血細(xì)胞綜合征相關(guān)基因突變PRF1、UNC13D、STXBP2、STX11、SH2D1A、XIAP

LYST、AP3B1、RAB27A范可尼貧血基因突變FANCA60%、FANCC

15%、FANCG

10%

WASP綜合征純紅再障RPS19先天性角化不良

DKC1、NHP2、TERC、TERT、NOP10、TINF2血液遺傳病分子檢測(cè)嗜血細(xì)胞綜合征相關(guān)基因突變血液遺傳病分子檢測(cè)32PRF110q21-10q22細(xì)胞殺傷功能缺陷

嗜血細(xì)胞綜合征Perforin

PRF110q21-10q22細(xì)胞殺傷功能缺陷嗜血細(xì)33FANCA16q24.3FANCC9q22.3

范可尼貧血基因檢測(cè)Exon1Itron4Exon5Exon6Exon14Q13XIVS4+4A>Tc.637_643delTACCGCCR185XR548XL554PFANCA16q24.3范可尼貧血基因檢測(cè)Exon1Itr34RPS1919q13.2hotspotofmissensemutations-codons52and62常染色體1歲

女

Exon4發(fā)現(xiàn)點(diǎn)突變：c.184C>T(p.R62W)，其他外顯子未發(fā)現(xiàn)突變純紅再障-RPS19基因檢測(cè)RPS1919q13.2純紅再障-RPS19基因檢35DKC1Xq28X-連鎖隱性7歲男

DKC1基因Exon11發(fā)現(xiàn)錯(cuò)義突變：c.1058C>T(p.A353V)先天性角化不良DKC1Xq28先天性角化不良36

PCR

Secquence送檢標(biāo)本要求標(biāo)本要求EDTA抗凝、快速送達(dá)實(shí)驗(yàn)室EDTA抗凝、DNAorcDNA靈敏度最高大于15-20%分辨率bpbp報(bào)告時(shí)間3-5天5-7天PCRS37MolecularplatformMolecularplatform38

謝謝！謝謝！39耐藥位點(diǎn)伊馬替尼尼洛替尼達(dá)沙替尼耐藥位點(diǎn)伊馬替尼尼洛4017P13-11q22-1213q14-17P13-11q41SimplegeneticdiagnosisofhairycellleukemiabysensitivedetectionoftheBRAFV600Emutation2012119:192-195Simplegeneticdiagnosisofha42血液病分子病理診斷43血液病分子病理診斷臨床應(yīng)用北京海思特臨床檢驗(yàn)所

分子病理室2013.06血液病分子病理診斷臨床應(yīng)用北京海思特臨床檢驗(yàn)所44

多層次檢測(cè)平臺(tái)綜合應(yīng)用細(xì)胞遺傳學(xué)形態(tài)學(xué)分子生物學(xué)流式細(xì)胞學(xué)

染色體核型分析

熒光原位雜交RT-PCR測(cè)序

多重?zé)晒獬彩絇CR定量PCR直接測(cè)序GeneScan多層次檢測(cè)平臺(tái)綜合應(yīng)用細(xì)胞45血液病診斷分型

定量監(jiān)測(cè)MRD

白血病預(yù)后靶向治療

耐藥及疾病進(jìn)展監(jiān)測(cè)

范可尼貧血嗜血細(xì)胞綜合癥等血液病分子病理檢測(cè)

融合基因檢測(cè)基因突變檢測(cè)血液遺傳病檢測(cè)大多數(shù)情況下，某一患者只有一種融合基因陽性血液病診斷分型血液病分子病理檢測(cè)融合基因檢測(cè)大多46個(gè)案t(15;17)witht(9;22)46,XY,t(9;22)(q34;q11),t(15;17)(q22;q21)BMmorphology:APLFCM:M3QPCR:PML/RARA+BCR/ABL(190)+個(gè)案t(15;17)witht(947多重巢式RT-PCR

篩查

定性檢測(cè)用于染色體斷裂點(diǎn)跨越很大的區(qū)域的融合基因。

熒光定量RT-PCR定量檢測(cè)

內(nèi)參基因c-abl結(jié)果以比值表示，全程動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)融合基因的拷貝數(shù)/內(nèi)參基因c-ablPCR-測(cè)序血液病分子病理檢測(cè)多重巢式RT-PCR血液病分子病理檢測(cè)48篩查每月定量監(jiān)測(cè)3-6月定量監(jiān)測(cè)每月定量監(jiān)測(cè)篩查每月定量監(jiān)測(cè)3-6月定49CMPD-慢性骨髓增殖性疾病CML慢性粒細(xì)胞白血病Ph染色體t(9;22)(q34;q11)ET原發(fā)性血小板增多癥JAK2V617F*PV真性紅細(xì)胞增多癥JAK2V617F*CIMF慢性特發(fā)性骨髓纖維化JAK2V617F*HES特發(fā)性高嗜酸性粒細(xì)胞白血病FIP1L1-PDGFRα4q12缺失CMML慢性粒單核細(xì)胞白血病TEL/PDGFRβ:t(5;12)(q33;p13)

*WilliamV,StefanN.AuniqueactivatingmutationinJAK2(V617F)isattheoriginofpolycythemiaveraandallowsanewclassificationofmyeloproliferativediseases.Hematology.2005,10-13:195-200

CMPD-慢性骨髓增殖性疾病CML慢性粒細(xì)胞白血病Ph染色體50CML—BCR/ABL約95%的CML5%的兒童ALL15%-30%的成人ALLCML—BCR/ABL約95%的CML51CMPD-慢性骨髓增殖性疾病BCR/ABLJAK2V617FPV(-)65%-97%(+)純合子多見少數(shù)JAK2V617F(-)12Exon突變ET(-)50%(+)CIMF(-)50%(+)JAK2V617F(-)5%MPLW515L/K(+)MolecularPathology：themolecularbasisofhumandiseasebyWillamB.Coleman,GregoryJ.TsongalisCMPD-慢性骨髓增殖性疾病BCR/ABLJAK2V617F52激活JAK2基因使細(xì)胞對(duì)生長因子敏感性增高

PV、ET、CIMF

不是獨(dú)立的診斷指標(biāo)MDS、3%CMMLJAK2V617F纈氨酸苯丙氨酸激活JAK2基因使細(xì)胞對(duì)生長因子敏感性增高JAK2V617F53FISH內(nèi)參缺失預(yù)后5q-5p15.25q31差7q-7p11.1-q11.17q31差20q-20q12好+88p11-q11MDS轉(zhuǎn)AML的幾率為50%-Yq11好MDS-骨髓增生異常綜合癥分子方面的理論有限，但發(fā)現(xiàn)有5q31,7q31，20q12的反復(fù)缺失，提示可能這些區(qū)域存在腫瘤抑制基因。FISH內(nèi)參缺失預(yù)后5q-5p15.25q31差7q-7p1541.MLL/AFX2.MLL/AF43.MLL/AF64.MLL/AF95.MLL/ELL6.MLL/ENL7.CBFB/MYH118.BCR/ABL9.MLL/AF1P10.TEL/PDGFR11.MLL/AF1012.DEK/CAN13.MLL/AF1714.SET/CAN15.dupMLL16.PML/RARa17.E2A/PBX118.PLZF/RARa19.E2A/HLF20.NPM/ALK21.SIL/TAL122.NPM/MLF123.TEL/AML124.NPM/RARa25.AML1/ETO26.TEL/ABL27.AML1/MDS128.HOX1129.TLS/ERG30.EVI131.MLL/AF1Q白血病-31種融合基因篩查1.MLL/AFX2.MLL/AF43.MLL/AF64.M5555%L型5%

V型體外對(duì)ATRA的敏感度低40%

S型低分化M3其他融合基因M3:PML-RARAt(5;17)(q32;q21)t(11;17)(q13;q21)t(11;17)(q23;q21)t(15;17)(q22;q21)PML-RARaPLZF-RARaNPM-RARaNuMA-RARa95%<5%dup(17)(q21.3;q23)STAT5b-RARa55%L型M3:PML-RARAt(5;17)(q356AML1/ETO80-90%M2少數(shù)M1/M4/M5CBFβ-MYH11M4Eo化療敏感預(yù)后較好AML1/ETO57TEL/AML1

前B細(xì)胞ALLE2A/PBX15-6%的兒童ALL3%的成人ALL大部分前B細(xì)胞ALL血液病分子病理診斷58同一患者可能同時(shí)存在多種基因突變可與融合基因或其它基因突變同時(shí)存在；預(yù)后判斷；個(gè)體化用藥基因突變?cè)诩膊“l(fā)展過程中可能會(huì)變化AML患者常見基因突變及其預(yù)后意義基因位置發(fā)生率預(yù)后C-KIT4q1220-30%差NPM15q3525-35%好FLT3-ITD13q1220-30%差CEBPA19q13.112.80%好同一患者可能同時(shí)存在多種基因突變AML患者常見基因突變及其預(yù)59血液病分子病理診斷60AML其他突變AML其他突變61淋巴瘤分子檢測(cè)IG重排

Ig受體基因重排MRDTCR重排T細(xì)胞受體基因重排BCL-1/JHt(11;14)(q13;q32)套細(xì)胞淋巴瘤（MCL）少數(shù)B細(xì)胞增殖性疾病如多發(fā)性骨髓瘤BCL-2/JHt(14;18)70-80%的濾泡性淋巴瘤(FL)，大部分為t(14;18)，30%DLBCL淋巴瘤分子檢測(cè)IG重排Ig受體基因重排MRDTCR重排T細(xì)62IG和TCR基因重排不一定是譜系的標(biāo)志

某些T、B淋巴瘤有基因重排的交叉淋巴瘤-TCR，IG重排IG和TCR基因重排不一定是譜系的標(biāo)志淋巴瘤-TCR，IG重63多發(fā)性骨髓瘤（MM）探針名稱位點(diǎn)異常率意義中位生存期（月）P53缺失17p1310-34%預(yù)后差24.7IGH重排(4;14)(14;16)50-70%預(yù)后差1q21擴(kuò)增1q2135-45%預(yù)后差21.9RB1缺失13q1450%預(yù)后中等42.3D13S319缺失13q1445%預(yù)后中等IGH重排(11;14)50-70%預(yù)后尚可50.5多發(fā)性骨髓瘤（MM）探針名稱位點(diǎn)異常率意義中位生存期（月）P64各細(xì)胞遺傳學(xué)亞組MM患者生存期(n=351)24.742.350.5FonsecaR.Blood2003;101:4569-4575.

各細(xì)胞遺傳學(xué)亞組MM患者生存期(n=351)24.742.365各細(xì)胞遺傳學(xué)亞組MM患者生存期（n=159）FonsecaR.Leukemia2006;20,2034-2040.各細(xì)胞遺傳學(xué)亞組MM患者生存期（n=159）Fonseca66慢性淋巴細(xì)胞白血病CLL探針名稱位點(diǎn)及讀取異常率意義中位生存期(月)p5317p13缺失7-8%預(yù)后很差

32ATM11q22.3缺失11-18%預(yù)后差

7912cen12p11.1-q11三體16-25%預(yù)后中等

114RB113q14缺失36-64%預(yù)后好133D13S2513q14缺失36-64%預(yù)后好

133慢性淋巴細(xì)胞白血病CLL探針名稱位點(diǎn)及讀取異常率意義中位生存67各細(xì)胞遺傳學(xué)亞組CLL患者生存期（n=325）3279114111133D?hnerH,EnglJMed.2000;43:1910-1916.

各細(xì)胞遺傳學(xué)亞組CLL患者生存期（n=325）327911468酪氨酸激酶抑制劑TKIBCR/ABL融合基因FIP1L1/PDGFRa融合基因基因檢測(cè)個(gè)體化用藥酪氨酸激酶抑制劑TKI基因69基因檢測(cè)個(gè)體化用藥2012NCCN基因檢測(cè)個(gè)體化用藥2012NCCN70ABL激酶突變檢測(cè)ABL激酶區(qū)突變c.763G>A(p.E255K)和c.944C>T(p.T315I)。ABL激酶突變檢測(cè)ABL激酶區(qū)突變c.763G>A(p.E271WT1表達(dá)量檢測(cè)*約75%AML患者可檢測(cè)到WT1高水平表達(dá)，WT1是AML患者常用的MRD檢測(cè)標(biāo)志融合基因定量檢測(cè)MRD監(jiān)測(cè)*CurrentOpinioninOncology2010,22:656–663WT1表達(dá)量檢測(cè)MRD監(jiān)測(cè)*CurrentOpinion72WT1(Wilm’stumorgene)1.WT1基因在各類型白血病中均能表達(dá)(ALL，AML，CML，MDS).2.表達(dá)水平與白血病的進(jìn)程相關(guān)，可作為化療和骨髓移植后MRD檢測(cè)敏感指標(biāo)。3.鑒別白血病與反應(yīng)性白細(xì)胞增高。WT1(Wilm’stumorgene)1.WT173初診B-ALL;MLL-AF4t(4;11)(q21;q23)WT1(Wilm’stumorgene)血液學(xué)復(fù)發(fā)FCMMRD+弟供姐異基因造血干細(xì)胞移植+14d白細(xì)胞植活+27d血小板植活初診B-ALL;MLL-AF4t(4;1174嗜血細(xì)胞綜合征相關(guān)基因突變PRF1、UNC13D、STXBP2、STX11、SH2D1A、XIAP

LYST、AP3B1、RAB27A范可尼貧血基因突變FANCA60%、FANCC

15%、FANCG

10%

WASP綜合征純紅再障RPS19先天性角化不良

DKC1、NHP