炭疽的病原學(xué)與實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)自治區(qū)疾控中心應(yīng)急辦賽娜瓦爾1炭疽的病原學(xué)與實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)自治區(qū)疾控中心應(yīng)急辦1內(nèi)容病原學(xué)培養(yǎng)特性與生化反應(yīng)抗原結(jié)構(gòu)致病性毒力變異性抵抗力軍事醫(yī)學(xué)意義實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)鑒定方法2內(nèi)容病原學(xué)病原學(xué)形態(tài)與染色

炭疽芽孢桿菌是病原菌中最大的桿菌之一，大小為（3～5）um×（1～1.2）um，革蘭氏染色陽(yáng)性，無(wú)鞭毛，無(wú)動(dòng)力，有莢膜，能形成芽孢。鏡檢兩端平切，在動(dòng)物和人體標(biāo)本中，常呈單個(gè)或短鏈排列，在人工培養(yǎng)基中常形成竹節(jié)狀長(zhǎng)鏈，有的鏈長(zhǎng)達(dá)數(shù)百個(gè)菌體，菌體相連處有胞間鏈絲。3病原學(xué)形態(tài)與染色3445566形態(tài)與染色 炭疽桿菌在機(jī)體內(nèi)或含血清或碳酸氫鈉特殊培養(yǎng)基中可形成莢膜。莢膜抗腐敗能力大于菌體，因此在腐尸檢片中可見(jiàn)到稱(chēng)為菌影的無(wú)內(nèi)容物的莢膜。莢膜是由質(zhì)粒DNA編碼，無(wú)毒菌株不產(chǎn)生莢膜。莢膜成分為D-多聚谷氨酸，由莢膜質(zhì)粒控制，與炭疽桿菌治病力有關(guān)，在體內(nèi)能抑制白細(xì)胞的吞噬和消化，在體外能阻斷菌體胞壁上的噬菌體受體，有助于病菌在體內(nèi)繁殖擴(kuò)散和建立感染。病原學(xué)7形態(tài)與染色病原學(xué)7

芽孢

炭疽桿菌是需氧芽孢桿菌屬（Bacillus）中最重要的致病菌，在有氧、溫度適宜（25-30℃）的外界環(huán)境或人工培養(yǎng)基上，易形成芽孢。芽孢位于菌體中央，呈橢圓形，孢子囊不膨大。芽孢又稱(chēng)內(nèi)生孢子，帶有完整的核質(zhì)、酶系統(tǒng)，合成菌體的機(jī)構(gòu)，保存細(xì)菌的全部生命活性。病原學(xué)8芽孢病原學(xué)8圖1

在血瓊脂平板上炭疽桿菌G（X1000）

圖2

帶芽胞炭疽桿菌，G（1000）9圖1在血瓊脂平板上炭疽桿菌G（X1000）芽孢

在適宜的條件下，芽孢通過(guò)激活、發(fā)芽、生長(zhǎng)3個(gè)階段又可成為新的繁殖體，繼續(xù)分裂、增殖、活躍生長(zhǎng)，所以芽孢是處于休眠狀態(tài)的細(xì)菌，廣泛存在于空氣、塵埃、地表、水源、土壤和腐爛物體中。每種細(xì)菌的芽孢形態(tài)、大小和在菌體中所處部位相當(dāng)穩(wěn)定，這在細(xì)菌鑒別上重要意義。病原學(xué)10芽孢病原學(xué)10芽孢

芽孢具有多層厚膜結(jié)構(gòu)，其中芽孢殼由一種類(lèi)似角蛋白的疏水蛋白組成，非常致密、不具滲透性，對(duì)外界抵抗力強(qiáng)，能抵抗表面火性劑、化學(xué)藥物的滲透和常用物理滅菌法。病原學(xué)11芽孢病原學(xué)11

芽孢 炭疽芽孢污染點(diǎn)難以徹底消除，往往成為頑固疫點(diǎn)，是炭疽的自然疫源地，也是炭疽在畜間、人間暴發(fā)流行的源頭。芽孢是炭疽桿菌在自然條件下存在的主要形式；在宿主體內(nèi)和完整尸體內(nèi)，炭疽桿菌保持繁殖體形態(tài)，不形成芽孢。所以，炭疽病死尸體嚴(yán)禁解剖、屠宰、剝皮，以防止炭疽芽孢污染環(huán)境。

病原學(xué)12 芽孢病原學(xué)12

芽孢

由于炭疽芽孢可大量制備、長(zhǎng)期存放，并適宜于氣溶膠施放，其在軍事醫(yī)學(xué)上有特殊意義。人吸入極微量的炭疽芽孢即可造成致死性感染。美國(guó)國(guó)會(huì)報(bào)告中稱(chēng)，于大都市在適宜的氣象條件下施放1Kg的炭疽芽孢，可造成數(shù)十萬(wàn)人員死亡，其威力可見(jiàn)一斑。病原學(xué)13 芽孢病原學(xué)13

培養(yǎng)特性與生化反應(yīng)

炭疽桿菌營(yíng)養(yǎng)要求不高，一般營(yíng)養(yǎng)肉湯和普通瓊脂均可生長(zhǎng)，需氧菌或蒹性厭氧菌，最適pH7.2-7.4，最適溫度34-37℃，低于12℃或高于45℃則不能生長(zhǎng)。菌落灰白色粗糙型，表面稍隆起，干燥無(wú)光澤不透明，邊緣不整齊，常有小尾突起，放大鏡觀察菌落呈卷發(fā)狀，邊緣有菌絲射出的典型菌落形態(tài)。14培養(yǎng)特性與生化反應(yīng)炭疽桿菌營(yíng)養(yǎng)要

培養(yǎng)特性與生化反應(yīng)

培養(yǎng)3天后，菌落表面有小泡狀顆粒即所謂仔集落。在血瓊脂平板上，早期無(wú)溶血環(huán)，培養(yǎng)24h后有輕微溶血。有毒株在含動(dòng)物血清培養(yǎng)基或0.9%NaHCO3培養(yǎng)基，置于20%CO2、37℃條件下培養(yǎng)24-48h可形成粘液性菌落，用接種針挑取時(shí)可見(jiàn)拉絲狀，此粘液物質(zhì)為炭疽菌的莢膜，主要成分為D-多聚谷氨酸：無(wú)毒株不形成莢膜，菌落仍保持粗糙型。15培養(yǎng)特性與生化反應(yīng)培養(yǎng)3天后，菌落

培養(yǎng)特性與生化反應(yīng)

炭疽桿菌在適當(dāng)濃度青霉素溶液作用下，菌體形態(tài)發(fā)生腫脹，成為均勻鏈狀串珠，稱(chēng)為串珠試驗(yàn)，對(duì)本菌有鑒別意義，其他需氧芽孢桿菌無(wú)此現(xiàn)象。16培養(yǎng)特性與生化反應(yīng)16

培養(yǎng)特性與生化反應(yīng)

在肉湯培養(yǎng)時(shí)由于形成長(zhǎng)鏈，呈絮狀發(fā)育，管底有絮狀、卷繞成團(tuán)的沉淀，液體透明，搖之均勻渾濁，不形成菌膜或壁環(huán)。炭疽桿菌能分解葡萄糖、麥芽糖、果糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不分解乳糖、阿伯拉糖、甘露醇、水楊素，不產(chǎn)生H2S。在明膠培養(yǎng)基中經(jīng)37℃24h培養(yǎng)，可使表面液化呈漏斗狀，由于細(xì)菌沿穿刺線向四周擴(kuò)散成倒松樹(shù)狀生長(zhǎng)。17培養(yǎng)特性與生化反應(yīng) 17

在某些培養(yǎng)基上，炭疽桿菌在培養(yǎng)6h開(kāi)始產(chǎn)生紫紅色色素，在堿性條件下為紅色，24h達(dá)高峰，色素的生物學(xué)功能不詳，據(jù)認(rèn)為與培養(yǎng)基的硫酸亞鐵含量有關(guān)。培養(yǎng)特性與生化反應(yīng)18在某些培養(yǎng)基上，炭疽桿菌在培養(yǎng)6h開(kāi)始產(chǎn)生紫紅色色抗原結(jié)構(gòu)

炭疽芽孢桿菌的抗原組成主要包括莢膜抗原、菌體抗原、芽孢抗原及保護(hù)性抗原等四種成分。19抗原結(jié)構(gòu)19抗原結(jié)構(gòu)

莢膜多肽抗原：

僅見(jiàn)于有毒菌株，是由D-谷氨酸多肽組成的一種半抗原，可由腐敗破壞而失去抗原性，具抗吞噬作用。與細(xì)菌毒力有關(guān)。由質(zhì)粒DNA（pOX2）編碼，質(zhì)粒丟失，形成莢膜能力也消失。莢膜抗原所產(chǎn)生的抗體對(duì)動(dòng)物無(wú)保護(hù)作用。若以高效價(jià)抗莢膜多肽血清作莢膜腫脹試驗(yàn)及免疫熒光抗體試驗(yàn)，對(duì)鑒定本菌有一定意義。20抗原結(jié)構(gòu)莢膜多肽抗原：20

抗原結(jié)構(gòu)

菌體多糖抗原：

由N-乙酰葡萄胺、D-半乳糖組成，與毒力無(wú)關(guān)。由于耐熱、耐腐敗，在病畜皮毛和腐敗臟器中的此抗原雖經(jīng)長(zhǎng)時(shí)間煮沸仍可與相應(yīng)抗體（特異免疫血清）發(fā)生沉淀反應(yīng)，稱(chēng)Ascoli熱沉淀反應(yīng)，對(duì)追溯炭疽芽孢桿菌病源方面有用。但由于此抗原特異性不高，與其他需氧芽孢桿菌、14型肺炎鏈球菌，甚至人類(lèi)A血型抗原之間發(fā)生交叉反應(yīng)，故Ascoli反應(yīng)目前已很少使用。21抗原結(jié)構(gòu)21

抗原結(jié)構(gòu)

芽孢抗原：

由芽孢的外膜、芽孢殼等組成的芽孢特異性抗原，具有免疫原性和血清學(xué)診斷價(jià)值。最新研究發(fā)現(xiàn)炭疽芽孢抗原在炭疽芽孢感染、致病和免疫上也起作用。芽孢外膜的膠原樣糖蛋白是免疫顯性抗原，能刺激機(jī)體產(chǎn)生強(qiáng)烈免疫應(yīng)答。22抗原結(jié)構(gòu)芽孢抗原：22

抗原結(jié)構(gòu)保護(hù)性抗原（PA）：

是一種胞外蛋白質(zhì)抗原成分，在人工培養(yǎng)條件下亦可產(chǎn)生，為炭疽毒素的組成成分之一，具有免疫原性，能使機(jī)體產(chǎn)生抗炭疽桿菌的保護(hù)力。23抗原結(jié)構(gòu)23

莊汗瀾、牟兆欽等探討了保護(hù)性抗原（PA）的免疫機(jī)制，發(fā)現(xiàn)：

1、PA免疫后，動(dòng)物產(chǎn)生抗PA抗體、血中吞噬細(xì)胞被激活，抗PA抗體除中和作用外，在體內(nèi)能直接殺滅炭疽芽孢桿菌；

2、PA免疫動(dòng)物抑制入侵的炭疽芽孢出芽，在炭疽強(qiáng)毒芽孢攻擊后1-3天內(nèi)，PA免疫兔的肝、脾、淋巴結(jié)切片中只見(jiàn)少量芽孢而無(wú)繁殖體，而對(duì)照兔組織內(nèi)細(xì)菌以繁殖體為主；抗原結(jié)構(gòu)24 莊汗瀾、牟兆欽等探討了保護(hù)性抗原（PA）的免疫

3、PA能非特異性的激活小鼠腹腔吞噬細(xì)胞，增強(qiáng)對(duì)入侵炭疽芽孢和金葡菌的吞噬和殺滅；

4、被動(dòng)轉(zhuǎn)移PA免疫小鼠的血清和T細(xì)胞均可提高受體小鼠對(duì)炭疽芽孢的攻擊保護(hù)，細(xì)胞免疫反應(yīng)較弱，起著輔助B細(xì)胞的作用；抗原結(jié)構(gòu)25 3、PA能非特異性的激活小鼠腹腔吞噬細(xì)胞，增強(qiáng)對(duì)入侵炭疽

5、抗PA抗體水平與保護(hù)力之間并不絕對(duì)呈平行關(guān)系、如粗制PA免疫，抗體滴度不很高攻擊后動(dòng)物存活，而用純化PA免疫，抗體滴度很高攻擊后卻有動(dòng)物死亡，提示除抗PA抗體外，吞噬細(xì)胞及其他防御因素也參與抗炭疽保護(hù)力的形成。抗原結(jié)構(gòu)26 5、抗PA抗體水平與保護(hù)力之間并不絕對(duì)呈平行關(guān)系、如粗制

致病性

炭疽桿菌對(duì)綿羊、山羊致病力最強(qiáng)，牛、馬、驢、騾、駝、鹿等草食動(dòng)物皆很易感，豬、犬、貓等雜食動(dòng)物亦可感染；虎、獅、豹、狼等肉食動(dòng)物，誤食炭疽病畜肉，亦可引起感染而死亡。豬常無(wú)癥狀，僅在宰后肉檢時(shí)才被發(fā)現(xiàn)?；騼H局部出現(xiàn)淋巴結(jié)炎、咽峽炎，個(gè)別出現(xiàn)肺炎及敗血癥。27致病性27

前蘇聯(lián)一家動(dòng)物園因喂食病馬肉，使一些豺、獾、貂、黃鼬、美洲豹、山貓、豹死亡，白熊感染發(fā)病。家畜改良品種較土種易感，幼齡家畜較老齡家畜易感。人對(duì)炭疽桿菌中等敏感、介于草食和肉食動(dòng)物之間。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物猴、兔、羊、豚鼠、大鼠、小鼠對(duì)炭疽人工感染皆相對(duì)敏感，其中猴、兔、羊、較豚鼠、大鼠、小鼠敏感。在感染瀕死階段（臨死前10-14h），血中菌數(shù)倍增時(shí)間：小鼠、豚鼠為50min，羊95min，大鼠115min。致病性28 前蘇聯(lián)一家動(dòng)物園因喂食病馬肉，使一些豺、獾、貂、黃鼬、

炭疽毒株芽孢皮下感染兔后，芽孢出芽、增殖，全身擴(kuò)散，血、肝、脾、肺、淋巴結(jié)等組織都可找到炭疽桿菌和芽孢，當(dāng)菌數(shù)達(dá)108/ml時(shí)，實(shí)驗(yàn)兔死亡。肺中菌數(shù)約比其他臟器高10倍；組織切片可見(jiàn)吞噬細(xì)胞內(nèi)有芽孢和大量短鏈菌體位于細(xì)胞間隙。按照猴數(shù)據(jù)推算，人LD50計(jì)量為吸入2500-55000個(gè)炭疽芽孢。F-344大鼠是炭疽毒素試驗(yàn)的模型動(dòng)物。致病性29 炭疽毒株芽孢皮下感染兔后，芽孢出芽、增殖，全身擴(kuò)散，血、

在自然界，野鼠中鼬鼠特別敏感，曾從自然條件中的大沙土鼠、黃胸鼠體內(nèi)分離出炭疽桿菌。鳥(niǎo)類(lèi)在自然條件下是不感染的，只有馬達(dá)加斯加和南部非洲的鴕鳥(niǎo)較?；疾　Ｔ袌?bào)告，青蛙和魚(yú)也能感染炭疽，國(guó)內(nèi)也曾有從魚(yú)體內(nèi)分離出炭疽桿菌的報(bào)道。致病性30 在自然界，野鼠中鼬鼠特別敏感，曾從自然條件中的大沙土鼠、

毒力

炭疽的毒力依賴(lài)于莢膜和毒素兩種成分，這兩種成分是由不同質(zhì)粒編碼的。莢膜物質(zhì)在體內(nèi)可防御吞噬消化，在體外可掩蓋噬菌體受體，免于被噬菌體裂解。毒素含有三個(gè)因子，即水腫因子（EF）、致死因子（LF）和保護(hù)性抗原（PA）。其中水腫因子（EF）能使血管滲透壓增加，大量漿液滲出，紅細(xì)胞大量溶解引起血紅蛋白和氧結(jié)合不全，可產(chǎn)生缺氧性休克；31毒力31

致死因子（LF）是非常強(qiáng)大的毒素，只要一分子進(jìn)入細(xì)胞，就可以導(dǎo)致細(xì)胞死亡。致死因子作用于中樞神經(jīng)，可以引起中樞麻痹，導(dǎo)致呼吸衰竭而死亡。這兩種毒素的作用都需要保護(hù)性抗原的協(xié)同才能發(fā)揮作用。毒素作用是死亡的主要原因，但毒素產(chǎn)生的本身并不能使炭疽菌具有完全毒力，該菌需要在一個(gè)地方繁殖并從那里擴(kuò)散，從而在體內(nèi)產(chǎn)生致死量的毒素，這就需要莢膜的抗吞噬作用。所以完全毒力的炭疽桿菌至少有兩個(gè)特點(diǎn)：有莢膜、能產(chǎn)毒。毒力32毒力32

變異性

在自然條件下，炭疽桿菌易受物理、化學(xué)、生理因素影響而發(fā)生變異。實(shí)驗(yàn)時(shí)會(huì)出現(xiàn)形狀不一的光滑型或黏液型菌落、無(wú)明顯卷發(fā)狀邊菌落、顯示色素的菌落、不產(chǎn)生莢膜的菌株、毒力減弱或消失的菌株。33

變異性

在自然條件下，炭疽桿菌易

變異性

巴斯德（Pasteur1881年）通過(guò)42.5℃高溫連續(xù)培育研制出獸用菌苗即炭疽桿菌減毒疫苗。Vodkin和Leppla(1983年)首先發(fā)現(xiàn)了炭疽桿菌毒素質(zhì)粒，Green等（1985年）又發(fā)現(xiàn)了炭疽桿菌莢膜質(zhì)粒，后分別命名為Pxo1和Pxo2。34變異性

巴斯德（Pasteur1881年）通過(guò)

變異性

兩個(gè)質(zhì)粒的相繼發(fā)現(xiàn)，證明了炭疽桿菌的自然毒力處決定于染色體基因外，還與兩個(gè)編碼質(zhì)粒有關(guān)，從而對(duì)培養(yǎng)傳代減毒、通過(guò)機(jī)體減毒、強(qiáng)烈理化因素作用等人工獲得減毒菌株的方法中的分子機(jī)制和有關(guān)炭疽毒素產(chǎn)生的遺傳學(xué)提供了合理的解釋。35變異性兩個(gè)質(zhì)粒的相繼發(fā)現(xiàn)，證明了炭疽桿菌的自然毒力

梁旭東等（1994年）對(duì)我國(guó)不同時(shí)期、不同地區(qū)、不同來(lái)源所收集的炭疽桿菌進(jìn)行了質(zhì)粒電泳圖分析譜分析，強(qiáng)毒株含有兩個(gè)質(zhì)粒，弱毒株因表現(xiàn)型不同，所含質(zhì)粒各異，但只能單一存在。我國(guó)楊叔雅等通過(guò)新生霉素、紫外線等理化因子誘變、篩選，或無(wú)莢膜減毒株。現(xiàn)已清楚，這些都是由于編碼莢膜和毒素的質(zhì)粒丟失而引起的變異。變異性36梁旭東等（1994年）對(duì)我國(guó)不同時(shí)期、不同地區(qū)、

變異性

Boehm用DNA-DNA雜交技術(shù)檢測(cè)多株炭疽桿菌和蠟狀桿菌發(fā)現(xiàn)，10株炭疽桿菌強(qiáng)、弱毒株的DNA同源性為90%-99%，與17株蠟狀桿菌的DNA同源性為32%-59%。根據(jù)《伯杰氏鑒定細(xì)菌學(xué)手冊(cè)》，種內(nèi)同源性為﹥70%，亞種間同源性為60%-70%。炭疽桿菌與其他需氧芽孢桿菌的同源性未高于59%，因此炭疽桿菌應(yīng)視為獨(dú)立種。37變異性37

變異性

大家公認(rèn)全球的炭疽桿菌菌株間無(wú)多大差異，最近Smith等用重復(fù)序列可變數(shù)法分析從非洲Kruger國(guó)家公園分離的98株炭疽菌存在A、B2個(gè)基本型。全球引起炭疽暴發(fā)流行的菌株皆屬A型。僅非洲存在A、B2個(gè)型菌株。分離出B型菌株土壤的鈣含量和pH值高于A型，提示基因型與泥土的化學(xué)特性相關(guān)。38變異性

大家公認(rèn)全球的炭疽桿菌菌株間無(wú)多大差異，最

抵抗力

炭疽桿菌繁殖體在56℃2h、60℃15min、75℃1min即可滅之。常用的消毒方法也能迅速殺滅。繁殖體在干燥的血液中能生存1個(gè)月以上，對(duì)低溫抵抗力較強(qiáng)，保存于-15℃鮮肉中能存活兩周以上。39抵抗力39

抵抗力

芽孢對(duì)外界因素的抵抗力很強(qiáng)，氣溶膠的衰亡率0.1%/min。炭疽芽孢在學(xué)塊和動(dòng)物糞粒中可存活40年以上，在干燥明膠或瓊脂中保存55年仍能發(fā)芽和有毒力，染色標(biāo)本中的芽孢仍可引起實(shí)驗(yàn)感染，在皮革中也能生存數(shù)年。40抵抗力 40

抵抗力

Peeler證明，在堆肥中，溫度達(dá)72-76.5℃，4天內(nèi)可殺死芽孢。腌漬一個(gè)半月可殺死肉中菌體，但芽孢仍有存活。經(jīng)石灰水處理的皮革在125天后芽孢仍有存活。所以在自然條件下，炭疽芽孢在引發(fā)炭疽感染和傳播上起著主要作用。據(jù)報(bào)告煮沸10min、140℃干熱2h、濕熱121℃需30min和2h，紫外線照射需4h才能將芽孢殺死。41抵抗力41

抵抗力

化學(xué)消毒劑以強(qiáng)氧化劑效果為好，如過(guò)氧乙酸、氯亞明、環(huán)氧乙烷。炭疽芽孢對(duì)碘敏感，1：2500碘液10min即可破壞芽孢，如有污穢物不宜使用。新配制的20%石灰乳、20%漂白粉需浸泡48h，可殺死芽孢。甲醛殺滅力強(qiáng)，在有大量有機(jī)物存在時(shí)，采用10%甲醛溶液較1%碘液好。42抵抗力42

抵抗力

因此對(duì)炭疽桿菌消毒效果的評(píng)價(jià)，應(yīng)以芽孢是否被消滅為標(biāo)準(zhǔn)，即使殘存幾個(gè)芽孢也會(huì)引起嚴(yán)重后患。

1964年Wilson報(bào)道在干燥土壤中的炭疽芽孢40年后仍能發(fā)芽、致死動(dòng)物。1959年我國(guó)因挖掘64年前埋葬的墓地引發(fā)炭疽疫情。43抵抗力431970年，在某一國(guó)家公園，考古學(xué)家在考古時(shí)挖掘出一些骨骼，根據(jù)碳原子測(cè)定，估計(jì)約有200年左右，該骨骼經(jīng)培養(yǎng)后分離出炭疽桿菌。被炭疽芽孢污染的地表自然疫源地，土壤中的病原體雖在陽(yáng)光等環(huán)境因素作用下存在生物衰亡，但30年后仍可檢測(cè)出相當(dāng)數(shù)量有感染力的芽孢，可引起炭疽暴發(fā)流行。抵抗力441970年，在某一國(guó)家公園，考古學(xué)家在考古時(shí)挖掘出一些骨

抵抗力

牧場(chǎng)一旦被污染，傳染性往往達(dá)30年以上。1941-1942年，英國(guó)在蘇格蘭實(shí)驗(yàn)炭疽芽孢炸彈，估計(jì)約4×1014個(gè)芽孢被擴(kuò)散，安置于起爆點(diǎn)下風(fēng)向的羊在幾天內(nèi)死于炭疽，說(shuō)明炭疽芽孢可通過(guò)爆炸分散成氣溶膠，使牲畜吸入感染死亡。第二次世界大戰(zhàn)后的20多年中，每年皆查出活芽孢。，1979年（污染后37年）從約6cm的深的土層中仍檢出活芽孢。45抵抗力45抵抗力

為了消除污染，1986年英國(guó)國(guó)防部多次使用表面噴灑、鉆孔注入甲醛液，歷時(shí)一年多才洗消結(jié)束，共用去280噸福爾馬林和2000噸海水。由此可見(jiàn)，在泥土中炭疽芽孢可存活至少37年以上，殺滅它非常困難。 炭疽菌對(duì)青霉素、紅霉素、氯霉素、四環(huán)素、環(huán)丙沙星多種抗生素皆敏感，美國(guó)報(bào)道存在含有青霉素酶菌株，將減低青霉素的療效46抵抗力

為了消除污染，1986年英國(guó)國(guó)防部多次使用表面噴軍事醫(yī)學(xué)意義

炭疽芽孢長(zhǎng)期被日、美、英、伊拉克和前蘇聯(lián)等國(guó)家作為致死性戰(zhàn)劑加以研究和儲(chǔ)備，美軍將炭疽桿菌列為制式生物戰(zhàn)劑。

WHO顧問(wèn)組將炭疽桿菌列為可能的生物戰(zhàn)劑。

1940年設(shè)在哈爾濱郊區(qū)的“731”細(xì)菌部隊(duì)每月以能生產(chǎn)炭疽桿菌500-600公斤。1952年侵朝戰(zhàn)爭(zhēng)中，美國(guó)飛機(jī)在遼寧投擲帶有炭疽桿菌的羽毛、雜物，曾使5人患吸入性炭疽和炭疽腦膜炎致死。47軍事醫(yī)學(xué)意義

炭疽芽孢長(zhǎng)期被日、美、英、伊軍事醫(yī)學(xué)意義

據(jù)國(guó)外報(bào)道，1979年前蘇聯(lián)的Sverdlovsk事件，曾發(fā)生吸入性炭疽，至少79人感染，68人死亡。1985-1991年，伊拉克秘密研制炭疽戰(zhàn)劑，至海灣戰(zhàn)爭(zhēng)前夕以完成生物戰(zhàn)劑導(dǎo)彈的裝填，所幸戰(zhàn)爭(zhēng)期間并未使用。美國(guó)“9.11”事件以后，又發(fā)生無(wú)數(shù)起炭疽粉末相關(guān)生物恐怖事件，更加深了全世界對(duì)本病原體的重視和研究48軍事醫(yī)學(xué)意義 48實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)檢驗(yàn)程序 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的要求是快速檢出、分離病原菌和正確鑒定，以利早期確診、查清疫源、及時(shí)治療和采取正確合理的防治對(duì)策。炭疽桿菌的檢驗(yàn)操作應(yīng)按炭疽細(xì)菌學(xué)檢查要求（ＧＢ）進(jìn)行。49實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)檢驗(yàn)程序49實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)檢驗(yàn)方法1、標(biāo)本采集和處理

樣品采集的原則是在治療、消毒處理前，盡量無(wú)菌、多部位、采足量，注意個(gè)人、環(huán)境防護(hù)，妥善運(yùn)送。對(duì)疑似炭疽污染樣品推薦用多黏菌素-溶菌酶-EDTA-醋酸佗選擇性瓊脂培養(yǎng)基；對(duì)細(xì)菌含量較少的樣品采用血清肉湯增菌和感染豚鼠、小鼠法提高檢出率。50實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)檢驗(yàn)方法50實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)標(biāo)本采集：患者 皮膚炭疽以無(wú)菌手續(xù)采取局部病灶滲出物、水皰內(nèi)容物；肺炭疽采取血液和痰；腸炭疽采取血液、嘔吐物及血樣便；敗血癥型炭疽采取血液；腦膜性炭疽采集腦脊液。51實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)標(biāo)本采集：51病畜死畜、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 炭疽感染尸體嚴(yán)禁屠宰解剖，以防芽孢形成，一般割取耳朵、舌尖組織供檢；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物靜脈或心臟采血和肋部切開(kāi)檢查病變,無(wú)菌手續(xù)取脾一塊.病、死豬切開(kāi)咽喉部采取淋巴結(jié)和出血性浸液。外界現(xiàn)場(chǎng)標(biāo)本 根據(jù)污染情況采取空氣、土壤、水、食品、物件表面等標(biāo)本實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)52病畜死畜、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)52

實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)標(biāo)本處理

患者、病畜標(biāo)本：血液直接檢查。臟器經(jīng)研磨制成1：10至1：20懸液，供檢。 外界現(xiàn)場(chǎng)標(biāo)本：炭疽芽孢桿菌沾染的外界現(xiàn)場(chǎng)，天然的基本是芽孢；人為的也是用芽孢作為生物戰(zhàn)劑。芽孢氣溶膠沾染的外界標(biāo)本中混有雜菌和雜質(zhì)，應(yīng)先將標(biāo)本經(jīng)過(guò)稀釋、洗脫（振蕩10-15min，靜置5-10min，吸出上清液）、加溫處理：60-65℃，30min，不要超過(guò)65℃

，以防止炭疽芽孢被殺死，吸出上清液。53實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)標(biāo)本處理53實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)分離培養(yǎng)

分泌液、血液、腦脊液等可直接分離接種于血瓊脂平板、普通瓊脂平板和碳酸氫鈉平板。血標(biāo)本應(yīng)先增菌培養(yǎng)。皮毛等檢材雜菌污染嚴(yán)重時(shí)可加熱60-65℃，30min以殺死無(wú)芽孢雜菌。

54實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)分離培養(yǎng)54實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)分泌物體液或洗滌掖等臨床標(biāo)本可直接分離接種，每份至少分離接種5%血瓊脂平板各一個(gè)。接種前血瓊脂平板應(yīng)置37℃孵箱內(nèi)將表面烘干。臟器組織標(biāo)本應(yīng)切成幾個(gè)不同的斷面，壓印瓊脂平板表面，或滴加組織懸液（1：20）稀釋?zhuān)?.05ml，然后用L形玻棒均勻涂布。55實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)分泌物體液或洗滌掖等臨床標(biāo)本可直接分離接種，每份至

外界現(xiàn)場(chǎng)標(biāo)本經(jīng)加溫處理后，每份標(biāo)本分別接種5%血瓊脂平板與戊烷脒選擇性血瓊脂平板各一個(gè)。接種量視不同標(biāo)本的雜菌污染程度而定。如皮毛、土壤等污染程度較嚴(yán)重的標(biāo)本，每個(gè)血瓊脂平板接種0.01～0.02ml，必要時(shí)稀釋后再接種，戊烷脒瓊脂平板因能抑制大部分雜菌，一般接種0.1ml。

實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)56外界現(xiàn)場(chǎng)標(biāo)本經(jīng)加溫處理后，每份標(biāo)本分別接種實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

接種后，瓊脂平板孵育于37℃。血瓊脂平板培養(yǎng)12h，取出觀察早期菌落特征和溶血性的觀察。最遲不得超過(guò)15h，因培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，炭疽芽孢桿菌菌落過(guò)大，會(huì)影響菌落特征與溶血性的觀察。57實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)接種后，瓊脂平板孵育于37℃。血瓊脂平

戊烷脒血瓊脂平板培養(yǎng)15～24h，對(duì)多數(shù)其他需氧芽孢桿菌有抑制其出芽與繁殖的作用，而炭疽芽孢桿菌能適應(yīng)出芽繁殖，其生長(zhǎng)仍受到輕度抑制，菌落生長(zhǎng)較慢、較小，但仍可保持獅子頭狀和不溶血的特征。但戊烷脒血瓊脂平板對(duì)某些溶血性蠟樣桿菌的抑制仍嫌不足。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)58戊烷脒血瓊脂平板培養(yǎng)15～24h，對(duì)多

根據(jù)菌落特征和溶血反應(yīng)，挑選可疑炭疽芽孢桿菌菌落，接種于增菌肉湯中，用37℃氺浴箱孵育3～4h，觀察肉湯生長(zhǎng)情況及時(shí)做動(dòng)力等檢查，再將分離得到的純菌進(jìn)行鑒定。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)59根據(jù)菌落特征和溶血反應(yīng)，挑選可疑炭疽芽孢桿菌菌落鑒定方法如培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)可疑菌落，可根據(jù)形態(tài)特征、青霉素串珠試驗(yàn)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)等鑒定，操作方法:一、直接涂片鏡檢（莢膜檢查）：滲出液、血液可直接涂片，新鮮器官組織切面制成壓印片。自然干燥后，通過(guò)火焰固定，在10%福爾馬林中浸泡10～15min或1：1000升汞中固定5min以殺死芽孢。晾干后革蘭氏染色，若見(jiàn)有莢膜的典型竹節(jié)狀革蘭氏陽(yáng)性大桿菌，可作為初步判定的依據(jù)之一，并結(jié)合臨床癥狀即可做初步診斷。60鑒定方法如培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)可疑菌落，可根據(jù)形態(tài)特征、青霉素串珠試驗(yàn)二、菌落形狀：觀察37℃培養(yǎng)12～15h的血瓊脂平板上菌落形狀，炭疽芽孢桿菌典型菌落呈獅子頭狀，常有小尾突起，大小2～3mm，表面粗糙，呈毛玻璃樣色調(diào)，邊緣不整，低倍鏡檢菌落邊緣呈“卷發(fā)狀”。用接種針挑取時(shí)有黏性，呈“拉絲狀”，這些特征在其他需氧芽孢桿菌則少見(jiàn)。鑒定方法61二、菌落形狀：鑒定方法61三、肉湯串珠試驗(yàn)：炭疽桿菌在含有適當(dāng)濃度的青霉素培養(yǎng)基中，可發(fā)生生態(tài)變異，菌體腫大而呈均勻的圓球，呈串珠狀。先制備瓊脂板，將營(yíng)養(yǎng)瓊脂溶化后傾注平皿，待凝固后用手術(shù)刀切取瓊脂片，大小為長(zhǎng)、寬、厚相當(dāng)（3cm╳0.5cm╳0.3cm）,置玻片中央，接種待檢菌均勻涂滿再取滅菌的濾紙條（1.5cm╳0.5cm），浸漬新配制的青霉素溶液（10—100U/ml），不宜太濕緊貼于接種菌瓊脂片之一端，置平皿中于37℃培養(yǎng)4～6h。取出載玻片，與低倍鏡下觀察，在有菌生長(zhǎng)和抑菌區(qū)的臨界線處，應(yīng)有明顯典型串珠形態(tài)。鑒定方法62三、肉湯串珠試驗(yàn)：炭疽桿菌在含有適當(dāng)濃度的青霉素培養(yǎng)基中，可

四、噬菌體裂解試驗(yàn)：取一接種環(huán)被檢新鮮菌液，均勻涂布于烘干的普通瓊脂平板表面，干后，在涂菌區(qū)中心滴加診斷噬菌體1滴，干后，置37℃培養(yǎng)8h，觀察有無(wú)噬菌斑；必要時(shí)，孵育18h再觀察一次。最好同時(shí)用人用炭疽芽孢桿菌疫苗株作為陽(yáng)性對(duì)照。鑒定方法63四、噬菌體裂解試驗(yàn)：取一接種環(huán)被檢新鮮菌液，均五、溶血性：觀察37℃培養(yǎng)12～15h血瓊脂平板上菌落的溶血性。炭疽芽孢桿菌多不容血，或僅少數(shù)菌株微溶血；其他需氧芽孢桿菌大多迅速溶血，而且強(qiáng)烈。鑒定方法64五、溶血性：觀察37℃培養(yǎng)12～15h血瓊脂平板上菌落的溶血

六、肉湯生長(zhǎng)：將可疑菌落純培養(yǎng)物種于增菌肉湯中，37℃水浴中培養(yǎng)，4h，觀察生長(zhǎng)情況，必要時(shí)培養(yǎng)12～18h再觀察一次。炭疽芽孢桿菌在肉湯中生長(zhǎng)的特點(diǎn)為絮狀沉淀生長(zhǎng)、上液澄清，而其他需氧芽孢桿菌則為顆粒狀沉淀、均勻混濁，有的形成菌膜。鑒定方法65六、肉湯生長(zhǎng)：將可疑菌落純培養(yǎng)物種于增菌肉湯中，

七、動(dòng)力檢查：取37℃水浴培養(yǎng)4h的新鮮肉湯培養(yǎng)物一滴，置于蓋玻片上，做懸滴標(biāo)本，鏡檢。炭疽芽孢桿菌無(wú)動(dòng)力，而其他需氧芽孢桿菌大多有動(dòng)力。

八、青霉素抑制試驗(yàn)：取一接種環(huán)肉湯培養(yǎng)物接種與10U/ml青霉素瓊脂平板上，培養(yǎng)18h，觀察有無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)。炭疽芽孢桿菌一般不生長(zhǎng)，或僅微生長(zhǎng)；而大多數(shù)蠟樣芽孢桿菌等則生長(zhǎng)良好。鑒定方法66七、動(dòng)力檢查：取37℃水浴培養(yǎng)4h的新鮮肉湯培養(yǎng)

九、動(dòng)物致病力試驗(yàn)：注射18h肉湯培養(yǎng)物0.2ml于家兔皮下。若局部注射處有膠樣水腫，2～4天死亡，肝脾腫大呈暗褐色，則為炭疽桿菌有毒株。動(dòng)物試驗(yàn)亦可用于污染標(biāo)本中炭疽桿菌的檢出，可將檢材用皮膚擦入法接種小鼠或豚鼠，如炭疽桿菌，動(dòng)物多在2～3天內(nèi)死亡，除局部有特殊病變、肝脾腫大外內(nèi)臟及血液中有大量具有莢膜的炭疽桿菌存在。鑒定方法67

鑒定方法十、分子生物學(xué)鑒定：近年來(lái)，DNA-DNA雜交、基因探針、脈沖電場(chǎng)凝膠電泳（PFGE）、PCR、ISR（基因間區(qū)）測(cè)序等分子生物學(xué)方法已用于炭疽桿菌的檢驗(yàn)和基因鑒定。美Carl、Beyer、Makino等分別建立針對(duì)質(zhì)粒pXO1的EF、PA基因和質(zhì)粒pXO2的cap基因的PCR和巢式PCR法，檢測(cè)炭疽感染動(dòng)物的血、皮或鞣革廠污染環(huán)境標(biāo)本，結(jié)果表明樣品中僅含1個(gè)炭疽芽孢或100g泥土中〈10個(gè)靶拷貝即可被檢出；此方法特異性強(qiáng)、時(shí)間短（4～16h）。68鑒定方法十、分子生物學(xué)鑒定：近年來(lái)，DNA-DNA雜交鑒定方法

Henderson（1994年）用18種限制性內(nèi)切酶切割細(xì)菌，再以任意引物和序列特異引物PCR分析40株炭疽桿菌、7株蠟樣桿菌。炭疽桿菌PCR圖形獨(dú)特且一致，而其他種存在株間差異，結(jié)果提示炭疽桿菌屬于幾乎完全同源性的單一克隆譜系。Harrell（1995年）用PFGE和16S、23SDNA測(cè)序發(fā)現(xiàn)來(lái)自不同地區(qū)的炭疽桿菌的DNA序列一致，與蠟樣桿菌有差別，可作鑒別診斷。他認(rèn)為作為種，炭疽桿菌具有很高的同質(zhì)性。69鑒定方法Henderson（1994年）用18種限制性

鑒定方法十一、碳酸氫鈉瓊脂平板CO2培養(yǎng)試驗(yàn)：

取大量細(xì)菌菌苔種于活性碳酸氫鈉瓊脂平板上，在25%CO2環(huán)境中，37℃培養(yǎng)16～22h，觀察菌落形狀。若生長(zhǎng)粘液性菌落，為形成莢膜的炭疽芽孢桿菌強(qiáng)毒菌株；若生長(zhǎng)粘液一粗糙型菌落，為不形成莢膜的炭疽芽孢桿菌弱毒菌株；生長(zhǎng)粗糙型菌落，為不形成莢膜的炭疽芽孢桿菌無(wú)毒菌株。進(jìn)一步挑取粘液型菌落莢膜染色，鏡檢可找見(jiàn)莢膜，幫助鑒別。70鑒定方法十一、碳酸氫鈉瓊脂平板CO2培養(yǎng)試驗(yàn)：取大量細(xì)炭疽桿菌實(shí)驗(yàn)室記錄菌株編號(hào)原標(biāo)本編號(hào)來(lái)源分離日期菌落形態(tài)革蘭氏染色動(dòng)力肉湯生長(zhǎng)溶血試驗(yàn)噬菌體裂解串珠試驗(yàn)青霉素抑菌CO2培養(yǎng)莢膜檢查炭疽細(xì)菌學(xué)記錄（地區(qū)）市71炭疽桿菌實(shí)驗(yàn)室記錄菌株編號(hào)原標(biāo)本來(lái)源分離日期菌落形態(tài)Thankyou2007-11-2772Thankyou2007-11-2772炭疽的病原學(xué)與實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)自治區(qū)疾控中心應(yīng)急辦賽娜瓦爾73炭疽的病原學(xué)與實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)自治區(qū)疾控中心應(yīng)急辦1內(nèi)容病原學(xué)培養(yǎng)特性與生化反應(yīng)抗原結(jié)構(gòu)致病性毒力變異性抵抗力軍事醫(yī)學(xué)意義實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)鑒定方法74內(nèi)容病原學(xué)病原學(xué)形態(tài)與染色

炭疽芽孢桿菌是病原菌中最大的桿菌之一，大小為（3～5）um×（1～1.2）um，革蘭氏染色陽(yáng)性，無(wú)鞭毛，無(wú)動(dòng)力，有莢膜，能形成芽孢。鏡檢兩端平切，在動(dòng)物和人體標(biāo)本中，常呈單個(gè)或短鏈排列，在人工培養(yǎng)基中常形成竹節(jié)狀長(zhǎng)鏈，有的鏈長(zhǎng)達(dá)數(shù)百個(gè)菌體，菌體相連處有胞間鏈絲。75病原學(xué)形態(tài)與染色3764775786形態(tài)與染色 炭疽桿菌在機(jī)體內(nèi)或含血清或碳酸氫鈉特殊培養(yǎng)基中可形成莢膜。莢膜抗腐敗能力大于菌體，因此在腐尸檢片中可見(jiàn)到稱(chēng)為菌影的無(wú)內(nèi)容物的莢膜。莢膜是由質(zhì)粒DNA編碼，無(wú)毒菌株不產(chǎn)生莢膜。莢膜成分為D-多聚谷氨酸，由莢膜質(zhì)?？刂?，與炭疽桿菌治病力有關(guān)，在體內(nèi)能抑制白細(xì)胞的吞噬和消化，在體外能阻斷菌體胞壁上的噬菌體受體，有助于病菌在體內(nèi)繁殖擴(kuò)散和建立感染。病原學(xué)79形態(tài)與染色病原學(xué)7

芽孢

炭疽桿菌是需氧芽孢桿菌屬（Bacillus）中最重要的致病菌，在有氧、溫度適宜（25-30℃）的外界環(huán)境或人工培養(yǎng)基上，易形成芽孢。芽孢位于菌體中央，呈橢圓形，孢子囊不膨大。芽孢又稱(chēng)內(nèi)生孢子，帶有完整的核質(zhì)、酶系統(tǒng)，合成菌體的機(jī)構(gòu)，保存細(xì)菌的全部生命活性。病原學(xué)80芽孢病原學(xué)8圖1

在血瓊脂平板上炭疽桿菌G（X1000）

圖2

帶芽胞炭疽桿菌，G（1000）81圖1在血瓊脂平板上炭疽桿菌G（X1000）芽孢

在適宜的條件下，芽孢通過(guò)激活、發(fā)芽、生長(zhǎng)3個(gè)階段又可成為新的繁殖體，繼續(xù)分裂、增殖、活躍生長(zhǎng)，所以芽孢是處于休眠狀態(tài)的細(xì)菌，廣泛存在于空氣、塵埃、地表、水源、土壤和腐爛物體中。每種細(xì)菌的芽孢形態(tài)、大小和在菌體中所處部位相當(dāng)穩(wěn)定，這在細(xì)菌鑒別上重要意義。病原學(xué)82芽孢病原學(xué)10芽孢

芽孢具有多層厚膜結(jié)構(gòu)，其中芽孢殼由一種類(lèi)似角蛋白的疏水蛋白組成，非常致密、不具滲透性，對(duì)外界抵抗力強(qiáng)，能抵抗表面火性劑、化學(xué)藥物的滲透和常用物理滅菌法。病原學(xué)83芽孢病原學(xué)11

芽孢 炭疽芽孢污染點(diǎn)難以徹底消除，往往成為頑固疫點(diǎn)，是炭疽的自然疫源地，也是炭疽在畜間、人間暴發(fā)流行的源頭。芽孢是炭疽桿菌在自然條件下存在的主要形式；在宿主體內(nèi)和完整尸體內(nèi)，炭疽桿菌保持繁殖體形態(tài)，不形成芽孢。所以，炭疽病死尸體嚴(yán)禁解剖、屠宰、剝皮，以防止炭疽芽孢污染環(huán)境。

病原學(xué)84 芽孢病原學(xué)12

芽孢

由于炭疽芽孢可大量制備、長(zhǎng)期存放，并適宜于氣溶膠施放，其在軍事醫(yī)學(xué)上有特殊意義。人吸入極微量的炭疽芽孢即可造成致死性感染。美國(guó)國(guó)會(huì)報(bào)告中稱(chēng)，于大都市在適宜的氣象條件下施放1Kg的炭疽芽孢，可造成數(shù)十萬(wàn)人員死亡，其威力可見(jiàn)一斑。病原學(xué)85 芽孢病原學(xué)13

培養(yǎng)特性與生化反應(yīng)

炭疽桿菌營(yíng)養(yǎng)要求不高，一般營(yíng)養(yǎng)肉湯和普通瓊脂均可生長(zhǎng)，需氧菌或蒹性厭氧菌，最適pH7.2-7.4，最適溫度34-37℃，低于12℃或高于45℃則不能生長(zhǎng)。菌落灰白色粗糙型，表面稍隆起，干燥無(wú)光澤不透明，邊緣不整齊，常有小尾突起，放大鏡觀察菌落呈卷發(fā)狀，邊緣有菌絲射出的典型菌落形態(tài)。86培養(yǎng)特性與生化反應(yīng)炭疽桿菌營(yíng)養(yǎng)要

培養(yǎng)特性與生化反應(yīng)

培養(yǎng)3天后，菌落表面有小泡狀顆粒即所謂仔集落。在血瓊脂平板上，早期無(wú)溶血環(huán)，培養(yǎng)24h后有輕微溶血。有毒株在含動(dòng)物血清培養(yǎng)基或0.9%NaHCO3培養(yǎng)基，置于20%CO2、37℃條件下培養(yǎng)24-48h可形成粘液性菌落，用接種針挑取時(shí)可見(jiàn)拉絲狀，此粘液物質(zhì)為炭疽菌的莢膜，主要成分為D-多聚谷氨酸：無(wú)毒株不形成莢膜，菌落仍保持粗糙型。87培養(yǎng)特性與生化反應(yīng)培養(yǎng)3天后，菌落

培養(yǎng)特性與生化反應(yīng)

炭疽桿菌在適當(dāng)濃度青霉素溶液作用下，菌體形態(tài)發(fā)生腫脹，成為均勻鏈狀串珠，稱(chēng)為串珠試驗(yàn)，對(duì)本菌有鑒別意義，其他需氧芽孢桿菌無(wú)此現(xiàn)象。88培養(yǎng)特性與生化反應(yīng)16

培養(yǎng)特性與生化反應(yīng)

在肉湯培養(yǎng)時(shí)由于形成長(zhǎng)鏈，呈絮狀發(fā)育，管底有絮狀、卷繞成團(tuán)的沉淀，液體透明，搖之均勻渾濁，不形成菌膜或壁環(huán)。炭疽桿菌能分解葡萄糖、麥芽糖、果糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不分解乳糖、阿伯拉糖、甘露醇、水楊素，不產(chǎn)生H2S。在明膠培養(yǎng)基中經(jīng)37℃24h培養(yǎng)，可使表面液化呈漏斗狀，由于細(xì)菌沿穿刺線向四周擴(kuò)散成倒松樹(shù)狀生長(zhǎng)。89培養(yǎng)特性與生化反應(yīng) 17

在某些培養(yǎng)基上，炭疽桿菌在培養(yǎng)6h開(kāi)始產(chǎn)生紫紅色色素，在堿性條件下為紅色，24h達(dá)高峰，色素的生物學(xué)功能不詳，據(jù)認(rèn)為與培養(yǎng)基的硫酸亞鐵含量有關(guān)。培養(yǎng)特性與生化反應(yīng)90在某些培養(yǎng)基上，炭疽桿菌在培養(yǎng)6h開(kāi)始產(chǎn)生紫紅色色抗原結(jié)構(gòu)

炭疽芽孢桿菌的抗原組成主要包括莢膜抗原、菌體抗原、芽孢抗原及保護(hù)性抗原等四種成分。91抗原結(jié)構(gòu)19抗原結(jié)構(gòu)

莢膜多肽抗原：

僅見(jiàn)于有毒菌株，是由D-谷氨酸多肽組成的一種半抗原，可由腐敗破壞而失去抗原性，具抗吞噬作用。與細(xì)菌毒力有關(guān)。由質(zhì)粒DNA（pOX2）編碼，質(zhì)粒丟失，形成莢膜能力也消失。莢膜抗原所產(chǎn)生的抗體對(duì)動(dòng)物無(wú)保護(hù)作用。若以高效價(jià)抗莢膜多肽血清作莢膜腫脹試驗(yàn)及免疫熒光抗體試驗(yàn)，對(duì)鑒定本菌有一定意義。92抗原結(jié)構(gòu)莢膜多肽抗原：20

抗原結(jié)構(gòu)

菌體多糖抗原：

由N-乙酰葡萄胺、D-半乳糖組成，與毒力無(wú)關(guān)。由于耐熱、耐腐敗，在病畜皮毛和腐敗臟器中的此抗原雖經(jīng)長(zhǎng)時(shí)間煮沸仍可與相應(yīng)抗體（特異免疫血清）發(fā)生沉淀反應(yīng)，稱(chēng)Ascoli熱沉淀反應(yīng)，對(duì)追溯炭疽芽孢桿菌病源方面有用。但由于此抗原特異性不高，與其他需氧芽孢桿菌、14型肺炎鏈球菌，甚至人類(lèi)A血型抗原之間發(fā)生交叉反應(yīng)，故Ascoli反應(yīng)目前已很少使用。93抗原結(jié)構(gòu)21

抗原結(jié)構(gòu)

芽孢抗原：

由芽孢的外膜、芽孢殼等組成的芽孢特異性抗原，具有免疫原性和血清學(xué)診斷價(jià)值。最新研究發(fā)現(xiàn)炭疽芽孢抗原在炭疽芽孢感染、致病和免疫上也起作用。芽孢外膜的膠原樣糖蛋白是免疫顯性抗原，能刺激機(jī)體產(chǎn)生強(qiáng)烈免疫應(yīng)答。94抗原結(jié)構(gòu)芽孢抗原：22

抗原結(jié)構(gòu)保護(hù)性抗原（PA）：

是一種胞外蛋白質(zhì)抗原成分，在人工培養(yǎng)條件下亦可產(chǎn)生，為炭疽毒素的組成成分之一，具有免疫原性，能使機(jī)體產(chǎn)生抗炭疽桿菌的保護(hù)力。95抗原結(jié)構(gòu)23

莊汗瀾、牟兆欽等探討了保護(hù)性抗原（PA）的免疫機(jī)制，發(fā)現(xiàn)：

1、PA免疫后，動(dòng)物產(chǎn)生抗PA抗體、血中吞噬細(xì)胞被激活，抗PA抗體除中和作用外，在體內(nèi)能直接殺滅炭疽芽孢桿菌；

2、PA免疫動(dòng)物抑制入侵的炭疽芽孢出芽，在炭疽強(qiáng)毒芽孢攻擊后1-3天內(nèi)，PA免疫兔的肝、脾、淋巴結(jié)切片中只見(jiàn)少量芽孢而無(wú)繁殖體，而對(duì)照兔組織內(nèi)細(xì)菌以繁殖體為主；抗原結(jié)構(gòu)96 莊汗瀾、牟兆欽等探討了保護(hù)性抗原（PA）的免疫

3、PA能非特異性的激活小鼠腹腔吞噬細(xì)胞，增強(qiáng)對(duì)入侵炭疽芽孢和金葡菌的吞噬和殺滅；

4、被動(dòng)轉(zhuǎn)移PA免疫小鼠的血清和T細(xì)胞均可提高受體小鼠對(duì)炭疽芽孢的攻擊保護(hù)，細(xì)胞免疫反應(yīng)較弱，起著輔助B細(xì)胞的作用；抗原結(jié)構(gòu)97 3、PA能非特異性的激活小鼠腹腔吞噬細(xì)胞，增強(qiáng)對(duì)入侵炭疽

5、抗PA抗體水平與保護(hù)力之間并不絕對(duì)呈平行關(guān)系、如粗制PA免疫，抗體滴度不很高攻擊后動(dòng)物存活，而用純化PA免疫，抗體滴度很高攻擊后卻有動(dòng)物死亡，提示除抗PA抗體外，吞噬細(xì)胞及其他防御因素也參與抗炭疽保護(hù)力的形成?？乖Y(jié)構(gòu)98 5、抗PA抗體水平與保護(hù)力之間并不絕對(duì)呈平行關(guān)系、如粗制

致病性

炭疽桿菌對(duì)綿羊、山羊致病力最強(qiáng)，牛、馬、驢、騾、駝、鹿等草食動(dòng)物皆很易感，豬、犬、貓等雜食動(dòng)物亦可感染；虎、獅、豹、狼等肉食動(dòng)物，誤食炭疽病畜肉，亦可引起感染而死亡。豬常無(wú)癥狀，僅在宰后肉檢時(shí)才被發(fā)現(xiàn)?；騼H局部出現(xiàn)淋巴結(jié)炎、咽峽炎，個(gè)別出現(xiàn)肺炎及敗血癥。99致病性27

前蘇聯(lián)一家動(dòng)物園因喂食病馬肉，使一些豺、獾、貂、黃鼬、美洲豹、山貓、豹死亡，白熊感染發(fā)病。家畜改良品種較土種易感，幼齡家畜較老齡家畜易感。人對(duì)炭疽桿菌中等敏感、介于草食和肉食動(dòng)物之間。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物猴、兔、羊、豚鼠、大鼠、小鼠對(duì)炭疽人工感染皆相對(duì)敏感，其中猴、兔、羊、較豚鼠、大鼠、小鼠敏感。在感染瀕死階段（臨死前10-14h），血中菌數(shù)倍增時(shí)間：小鼠、豚鼠為50min，羊95min，大鼠115min。致病性100 前蘇聯(lián)一家動(dòng)物園因喂食病馬肉，使一些豺、獾、貂、黃鼬、

炭疽毒株芽孢皮下感染兔后，芽孢出芽、增殖，全身擴(kuò)散，血、肝、脾、肺、淋巴結(jié)等組織都可找到炭疽桿菌和芽孢，當(dāng)菌數(shù)達(dá)108/ml時(shí)，實(shí)驗(yàn)兔死亡。肺中菌數(shù)約比其他臟器高10倍；組織切片可見(jiàn)吞噬細(xì)胞內(nèi)有芽孢和大量短鏈菌體位于細(xì)胞間隙。按照猴數(shù)據(jù)推算，人LD50計(jì)量為吸入2500-55000個(gè)炭疽芽孢。F-344大鼠是炭疽毒素試驗(yàn)的模型動(dòng)物。致病性101 炭疽毒株芽孢皮下感染兔后，芽孢出芽、增殖，全身擴(kuò)散，血、

在自然界，野鼠中鼬鼠特別敏感，曾從自然條件中的大沙土鼠、黃胸鼠體內(nèi)分離出炭疽桿菌。鳥(niǎo)類(lèi)在自然條件下是不感染的，只有馬達(dá)加斯加和南部非洲的鴕鳥(niǎo)較?；疾　Ｔ袌?bào)告，青蛙和魚(yú)也能感染炭疽，國(guó)內(nèi)也曾有從魚(yú)體內(nèi)分離出炭疽桿菌的報(bào)道。致病性102 在自然界，野鼠中鼬鼠特別敏感，曾從自然條件中的大沙土鼠、

毒力

炭疽的毒力依賴(lài)于莢膜和毒素兩種成分，這兩種成分是由不同質(zhì)粒編碼的。莢膜物質(zhì)在體內(nèi)可防御吞噬消化，在體外可掩蓋噬菌體受體，免于被噬菌體裂解。毒素含有三個(gè)因子，即水腫因子（EF）、致死因子（LF）和保護(hù)性抗原（PA）。其中水腫因子（EF）能使血管滲透壓增加，大量漿液滲出，紅細(xì)胞大量溶解引起血紅蛋白和氧結(jié)合不全，可產(chǎn)生缺氧性休克；103毒力31

致死因子（LF）是非常強(qiáng)大的毒素，只要一分子進(jìn)入細(xì)胞，就可以導(dǎo)致細(xì)胞死亡。致死因子作用于中樞神經(jīng)，可以引起中樞麻痹，導(dǎo)致呼吸衰竭而死亡。這兩種毒素的作用都需要保護(hù)性抗原的協(xié)同才能發(fā)揮作用。毒素作用是死亡的主要原因，但毒素產(chǎn)生的本身并不能使炭疽菌具有完全毒力，該菌需要在一個(gè)地方繁殖并從那里擴(kuò)散，從而在體內(nèi)產(chǎn)生致死量的毒素，這就需要莢膜的抗吞噬作用。所以完全毒力的炭疽桿菌至少有兩個(gè)特點(diǎn)：有莢膜、能產(chǎn)毒。毒力104毒力32

變異性

在自然條件下，炭疽桿菌易受物理、化學(xué)、生理因素影響而發(fā)生變異。實(shí)驗(yàn)時(shí)會(huì)出現(xiàn)形狀不一的光滑型或黏液型菌落、無(wú)明顯卷發(fā)狀邊菌落、顯示色素的菌落、不產(chǎn)生莢膜的菌株、毒力減弱或消失的菌株。105

變異性

在自然條件下，炭疽桿菌易

變異性

巴斯德（Pasteur1881年）通過(guò)42.5℃高溫連續(xù)培育研制出獸用菌苗即炭疽桿菌減毒疫苗。Vodkin和Leppla(1983年)首先發(fā)現(xiàn)了炭疽桿菌毒素質(zhì)粒，Green等（1985年）又發(fā)現(xiàn)了炭疽桿菌莢膜質(zhì)粒，后分別命名為Pxo1和Pxo2。106變異性

巴斯德（Pasteur1881年）通過(guò)

變異性

兩個(gè)質(zhì)粒的相繼發(fā)現(xiàn)，證明了炭疽桿菌的自然毒力處決定于染色體基因外，還與兩個(gè)編碼質(zhì)粒有關(guān)，從而對(duì)培養(yǎng)傳代減毒、通過(guò)機(jī)體減毒、強(qiáng)烈理化因素作用等人工獲得減毒菌株的方法中的分子機(jī)制和有關(guān)炭疽毒素產(chǎn)生的遺傳學(xué)提供了合理的解釋。107變異性兩個(gè)質(zhì)粒的相繼發(fā)現(xiàn)，證明了炭疽桿菌的自然毒力

梁旭東等（1994年）對(duì)我國(guó)不同時(shí)期、不同地區(qū)、不同來(lái)源所收集的炭疽桿菌進(jìn)行了質(zhì)粒電泳圖分析譜分析，強(qiáng)毒株含有兩個(gè)質(zhì)粒，弱毒株因表現(xiàn)型不同，所含質(zhì)粒各異，但只能單一存在。我國(guó)楊叔雅等通過(guò)新生霉素、紫外線等理化因子誘變、篩選，或無(wú)莢膜減毒株。現(xiàn)已清楚，這些都是由于編碼莢膜和毒素的質(zhì)粒丟失而引起的變異。變異性108梁旭東等（1994年）對(duì)我國(guó)不同時(shí)期、不同地區(qū)、

變異性

Boehm用DNA-DNA雜交技術(shù)檢測(cè)多株炭疽桿菌和蠟狀桿菌發(fā)現(xiàn)，10株炭疽桿菌強(qiáng)、弱毒株的DNA同源性為90%-99%，與17株蠟狀桿菌的DNA同源性為32%-59%。根據(jù)《伯杰氏鑒定細(xì)菌學(xué)手冊(cè)》，種內(nèi)同源性為﹥70%，亞種間同源性為60%-70%。炭疽桿菌與其他需氧芽孢桿菌的同源性未高于59%，因此炭疽桿菌應(yīng)視為獨(dú)立種。109變異性37

變異性

大家公認(rèn)全球的炭疽桿菌菌株間無(wú)多大差異，最近Smith等用重復(fù)序列可變數(shù)法分析從非洲Kruger國(guó)家公園分離的98株炭疽菌存在A、B2個(gè)基本型。全球引起炭疽暴發(fā)流行的菌株皆屬A型。僅非洲存在A、B2個(gè)型菌株。分離出B型菌株土壤的鈣含量和pH值高于A型，提示基因型與泥土的化學(xué)特性相關(guān)。110變異性

大家公認(rèn)全球的炭疽桿菌菌株間無(wú)多大差異，最

抵抗力

炭疽桿菌繁殖體在56℃2h、60℃15min、75℃1min即可滅之。常用的消毒方法也能迅速殺滅。繁殖體在干燥的血液中能生存1個(gè)月以上，對(duì)低溫抵抗力較強(qiáng)，保存于-15℃鮮肉中能存活兩周以上。111抵抗力39

抵抗力

芽孢對(duì)外界因素的抵抗力很強(qiáng)，氣溶膠的衰亡率0.1%/min。炭疽芽孢在學(xué)塊和動(dòng)物糞粒中可存活40年以上，在干燥明膠或瓊脂中保存55年仍能發(fā)芽和有毒力，染色標(biāo)本中的芽孢仍可引起實(shí)驗(yàn)感染，在皮革中也能生存數(shù)年。112抵抗力 40

抵抗力

Peeler證明，在堆肥中，溫度達(dá)72-76.5℃，4天內(nèi)可殺死芽孢。腌漬一個(gè)半月可殺死肉中菌體，但芽孢仍有存活。經(jīng)石灰水處理的皮革在125天后芽孢仍有存活。所以在自然條件下，炭疽芽孢在引發(fā)炭疽感染和傳播上起著主要作用。據(jù)報(bào)告煮沸10min、140℃干熱2h、濕熱121℃需30min和2h，紫外線照射需4h才能將芽孢殺死。113抵抗力41

抵抗力

化學(xué)消毒劑以強(qiáng)氧化劑效果為好，如過(guò)氧乙酸、氯亞明、環(huán)氧乙烷。炭疽芽孢對(duì)碘敏感，1：2500碘液10min即可破壞芽孢，如有污穢物不宜使用。新配制的20%石灰乳、20%漂白粉需浸泡48h，可殺死芽孢。甲醛殺滅力強(qiáng)，在有大量有機(jī)物存在時(shí)，采用10%甲醛溶液較1%碘液好。114抵抗力42

抵抗力

因此對(duì)炭疽桿菌消毒效果的評(píng)價(jià)，應(yīng)以芽孢是否被消滅為標(biāo)準(zhǔn)，即使殘存幾個(gè)芽孢也會(huì)引起嚴(yán)重后患。

1964年Wilson報(bào)道在干燥土壤中的炭疽芽孢40年后仍能發(fā)芽、致死動(dòng)物。1959年我國(guó)因挖掘64年前埋葬的墓地引發(fā)炭疽疫情。115抵抗力431970年，在某一國(guó)家公園，考古學(xué)家在考古時(shí)挖掘出一些骨骼，根據(jù)碳原子測(cè)定，估計(jì)約有200年左右，該骨骼經(jīng)培養(yǎng)后分離出炭疽桿菌。被炭疽芽孢污染的地表自然疫源地，土壤中的病原體雖在陽(yáng)光等環(huán)境因素作用下存在生物衰亡，但30年后仍可檢測(cè)出相當(dāng)數(shù)量有感染力的芽孢，可引起炭疽暴發(fā)流行。抵抗力1161970年，在某一國(guó)家公園，考古學(xué)家在考古時(shí)挖掘出一些骨

抵抗力

牧場(chǎng)一旦被污染，傳染性往往達(dá)30年以上。1941-1942年，英國(guó)在蘇格蘭實(shí)驗(yàn)炭疽芽孢炸彈，估計(jì)約4×1014個(gè)芽孢被擴(kuò)散，安置于起爆點(diǎn)下風(fēng)向的羊在幾天內(nèi)死于炭疽，說(shuō)明炭疽芽孢可通過(guò)爆炸分散成氣溶膠，使牲畜吸入感染死亡。第二次世界大戰(zhàn)后的20多年中，每年皆查出活芽孢。，1979年（污染后37年）從約6cm的深的土層中仍檢出活芽孢。117抵抗力45抵抗力

為了消除污染，1986年英國(guó)國(guó)防部多次使用表面噴灑、鉆孔注入甲醛液，歷時(shí)一年多才洗消結(jié)束，共用去280噸福爾馬林和2000噸海水。由此可見(jiàn)，在泥土中炭疽芽孢可存活至少37年以上，殺滅它非常困難。 炭疽菌對(duì)青霉素、紅霉素、氯霉素、四環(huán)素、環(huán)丙沙星多種抗生素皆敏感，美國(guó)報(bào)道存在含有青霉素酶菌株，將減低青霉素的療效118抵抗力

為了消除污染，1986年英國(guó)國(guó)防部多次使用表面噴軍事醫(yī)學(xué)意義

炭疽芽孢長(zhǎng)期被日、美、英、伊拉克和前蘇聯(lián)等國(guó)家作為致死性戰(zhàn)劑加以研究和儲(chǔ)備，美軍將炭疽桿菌列為制式生物戰(zhàn)劑。

WHO顧問(wèn)組將炭疽桿菌列為可能的生物戰(zhàn)劑。

1940年設(shè)在哈爾濱郊區(qū)的“731”細(xì)菌部隊(duì)每月以能生產(chǎn)炭疽桿菌500-600公斤。1952年侵朝戰(zhàn)爭(zhēng)中，美國(guó)飛機(jī)在遼寧投擲帶有炭疽桿菌的羽毛、雜物，曾使5人患吸入性炭疽和炭疽腦膜炎致死。119軍事醫(yī)學(xué)意義

炭疽芽孢長(zhǎng)期被日、美、英、伊軍事醫(yī)學(xué)意義

據(jù)國(guó)外報(bào)道，1979年前蘇聯(lián)的Sverdlovsk事件，曾發(fā)生吸入性炭疽，至少79人感染，68人死亡。1985-1991年，伊拉克秘密研制炭疽戰(zhàn)劑，至海灣戰(zhàn)爭(zhēng)前夕以完成生物戰(zhàn)劑導(dǎo)彈的裝填，所幸戰(zhàn)爭(zhēng)期間并未使用。美國(guó)“9.11”事件以后，又發(fā)生無(wú)數(shù)起炭疽粉末相關(guān)生物恐怖事件，更加深了全世界對(duì)本病原體的重視和研究120軍事醫(yī)學(xué)意義 48實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)檢驗(yàn)程序 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的要求是快速檢出、分離病原菌和正確鑒定，以利早期確診、查清疫源、及時(shí)治療和采取正確合理的防治對(duì)策。炭疽桿菌的檢驗(yàn)操作應(yīng)按炭疽細(xì)菌學(xué)檢查要求（ＧＢ）進(jìn)行。121實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)檢驗(yàn)程序49實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)檢驗(yàn)方法1、標(biāo)本采集和處理

樣品采集的原則是在治療、消毒處理前，盡量無(wú)菌、多部位、采足量，注意個(gè)人、環(huán)境防護(hù)，妥善運(yùn)送。對(duì)疑似炭疽污染樣品推薦用多黏菌素-溶菌酶-EDTA-醋酸佗選擇性瓊脂培養(yǎng)基；對(duì)細(xì)菌含量較少的樣品采用血清肉湯增菌和感染豚鼠、小鼠法提高檢出率。122實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)檢驗(yàn)方法50實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)標(biāo)本采集：患者 皮膚炭疽以無(wú)菌手續(xù)采取局部病灶滲出物、水皰內(nèi)容物；肺炭疽采取血液和痰；腸炭疽采取血液、嘔吐物及血樣便；敗血癥型炭疽采取血液；腦膜性炭疽采集腦脊液。123實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)標(biāo)本采集：51病畜死畜、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 炭疽感染尸體嚴(yán)禁屠宰解剖，以防芽孢形成，一般割取耳朵、舌尖組織供檢；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物靜脈或心臟采血和肋部切開(kāi)檢查病變,無(wú)菌手續(xù)取脾一塊.病、死豬切開(kāi)咽喉部采取淋巴結(jié)和出血性浸液。外界現(xiàn)場(chǎng)標(biāo)本 根據(jù)污染情況采取空氣、土壤、水、食品、物件表面等標(biāo)本實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)124病畜死畜、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)52

實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)標(biāo)本處理

患者、病畜標(biāo)本：血液直接檢查。臟器經(jīng)研磨制成1：10至1：20懸液，供檢。 外界現(xiàn)場(chǎng)標(biāo)本：炭疽芽孢桿菌沾染的外界現(xiàn)場(chǎng)，天然的基本是芽孢；人為的也是用芽孢作為生物戰(zhàn)劑。芽孢氣溶膠沾染的外界標(biāo)本中混有雜菌和雜質(zhì)，應(yīng)先將標(biāo)本經(jīng)過(guò)稀釋、洗脫（振蕩10-15min，靜置5-10min，吸出上清液）、加溫處理：60-65℃，30min，不要超過(guò)65℃

，以防止炭疽芽孢被殺死，吸出上清液。125實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)標(biāo)本處理53實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)分離培養(yǎng)

分泌液、血液、腦脊液等可直接分離接種于血瓊脂平板、普通瓊脂平板和碳酸氫鈉平板。血標(biāo)本應(yīng)先增菌培養(yǎng)。皮毛等檢材雜菌污染嚴(yán)重時(shí)可加熱60-65℃，30min以殺死無(wú)芽孢雜菌。

126實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)分離培養(yǎng)54實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)分泌物體液或洗滌掖等臨床標(biāo)本可直接分離接種，每份至少分離接種5%血瓊脂平板各一個(gè)。接種前血瓊脂平板應(yīng)置37℃孵箱內(nèi)將表面烘干。臟器組織標(biāo)本應(yīng)切成幾個(gè)不同的斷面，壓印瓊脂平板表面，或滴加組織懸液（1：20）稀釋?zhuān)?.05ml，然后用L形玻棒均勻涂布。127實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)分泌物體液或洗滌掖等臨床標(biāo)本可直接分離接種，每份至

外界現(xiàn)場(chǎng)標(biāo)本經(jīng)加溫處理后，每份標(biāo)本分別接種5%血瓊脂平板與戊烷脒選擇性血瓊脂平板各一個(gè)。接種量視不同標(biāo)本的雜菌污染程度而定。如皮毛、土壤等污染程度較嚴(yán)重的標(biāo)本，每個(gè)血瓊脂平板接種0.01～0.02ml，必要時(shí)稀釋后再接種，戊烷脒瓊脂平板因能抑制大部分雜菌，一般接種0.1ml。

實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)128外界現(xiàn)場(chǎng)標(biāo)本經(jīng)加溫處理后，每份標(biāo)本分別接種實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

接種后，瓊脂平板孵育于37℃。血瓊脂平板培養(yǎng)12h，取出觀察早期菌落特征和溶血性的觀察。最遲不得超過(guò)15h，因培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，炭疽芽孢桿菌菌落過(guò)大，會(huì)影響菌落特征與溶血性的觀察。129實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)接種后，瓊脂平板孵育于37℃。血瓊脂平

戊烷脒血瓊脂平板培養(yǎng)15～24h，對(duì)多數(shù)其他需氧芽孢桿菌有抑制其出芽與繁殖的作用，而炭疽芽孢桿菌能適應(yīng)出芽繁殖，其生長(zhǎng)仍受到輕度抑制，菌落生長(zhǎng)較慢、較小，但仍可保持獅子頭狀和不溶血的特征。但戊烷脒血瓊脂平板對(duì)某些溶血性蠟樣桿菌的抑制仍嫌不足。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)130戊烷脒血瓊脂平板培養(yǎng)15～24h，對(duì)多

根據(jù)菌落特征和溶血反應(yīng)，挑選可疑炭疽芽孢桿菌菌落，接種于增菌肉湯中，用37℃氺浴箱孵育3～4h，觀察肉湯生長(zhǎng)情況及時(shí)做動(dòng)力等檢查，再將分離得到的純菌進(jìn)行鑒定。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)131根據(jù)菌落特征和溶血反應(yīng)，挑選可疑炭疽芽孢桿菌菌落鑒定方法如培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)可疑菌落，可根據(jù)形態(tài)特征、青霉素串珠試驗(yàn)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)等鑒定，操作方法:一、直接涂片鏡檢（莢膜檢查）：滲出液、血液可直接涂片，新鮮器官組織切面制成壓印片。自然干燥后，通過(guò)火焰固定，在10%福爾馬林中浸泡10～15min或1：1000升汞中固定5min以殺死芽孢。晾干后革蘭氏染色，若見(jiàn)有莢膜的典型竹節(jié)狀革蘭氏陽(yáng)性大桿菌，可作為初步判定的依據(jù)之一，并結(jié)合臨床癥狀即可做初步診斷。132鑒定方法如培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)可疑菌落，可根據(jù)形態(tài)特征、青霉素串珠試驗(yàn)二、菌落形狀：觀察37℃培養(yǎng)12～15h的血瓊脂平板上菌落形狀，炭疽芽孢桿菌典型菌落呈獅子頭狀，常有小尾突起，大小2～3mm，表面粗糙，呈毛玻璃樣色調(diào)，邊緣不整，低倍鏡檢菌落邊緣呈“卷發(fā)狀”。用接種針挑取時(shí)有黏性，呈“拉絲狀”，這些特征在其他需氧芽孢桿菌則少見(jiàn)。鑒定方法133二、菌落形狀：鑒定方法61三、肉湯串珠試驗(yàn)：炭疽桿菌在含有適當(dāng)濃度的青霉素培養(yǎng)基中，可發(fā)生生態(tài)變異，菌體腫大而呈均勻的圓球，呈串珠狀。先制備瓊脂板，將營(yíng)養(yǎng)瓊脂溶化后傾注平皿，待凝固后用手術(shù)刀切取瓊脂片，大小為長(zhǎng)、寬、厚相當(dāng)（3cm╳0.5cm╳0.3cm）,置玻片中央，接種待檢菌均勻涂滿再取滅菌的濾紙條（1.5cm╳0.5cm），浸漬新配制的青霉素溶液（10—100U/ml），不宜太濕緊貼于接種菌瓊脂片之一端，置平皿中于37℃培養(yǎng)4～6h。取出載玻片，與低倍鏡下觀察，在有菌生長(zhǎng)和抑菌區(qū)的臨界線處，應(yīng)有明顯典型串珠形態(tài)。鑒定方法134三、肉湯串珠試驗(yàn)：炭疽桿菌在含有適當(dāng)濃度的青霉素培養(yǎng)基中，可

四、噬菌體裂解試驗(yàn)：取一接種環(huán)被檢新鮮菌液，均勻涂布于烘干的普通瓊脂平板表面，干后，在涂菌區(qū)中心滴加診斷噬菌體1滴，干后，置37℃培養(yǎng)8h，觀察有無(wú)噬菌斑；必要時(shí)，孵育18h再觀察一次。最好同時(shí)用人用炭疽芽孢桿菌疫苗株作為陽(yáng)性對(duì)照。鑒定方法135四、噬菌體裂解試驗(yàn)：取一接種環(huán)被檢新鮮菌液，均五、溶血性：觀察37℃培養(yǎng)12～15h血瓊脂平板上菌落的溶血性。炭疽芽孢桿菌多不容血，或僅少數(shù)菌株微溶血；其他需氧芽孢桿菌大多迅速溶血，而且強(qiáng)烈。鑒定方法136五、溶血性：觀察37℃培養(yǎng)12～15h血瓊脂平板上菌落的溶血

六、肉湯生長(zhǎng)：將可疑菌落純培養(yǎng)物種于增菌肉湯中，37℃水浴中培養(yǎng)，4h，觀察生長(zhǎng)情況，必要時(shí)培養(yǎng)12～18h再觀察一次。炭疽芽孢桿菌在肉湯中生長(zhǎng)的特點(diǎn)為絮狀沉淀生長(zhǎng)、上液澄清，而其他需氧芽孢桿菌則為顆粒狀沉淀、均勻混濁，有的形成菌膜。鑒定方法137六、肉湯生長(zhǎng)：將可疑菌落純培養(yǎng)物種于增菌肉湯中，

七、動(dòng)力檢查：取37℃水浴培養(yǎng)4h的新鮮肉湯培養(yǎng)物一滴，置于蓋玻片上，做懸滴標(biāo)本，鏡檢。炭疽芽孢桿菌無(wú)動(dòng)力，而其他需氧芽孢桿菌大多有動(dòng)力。

八、青霉素抑制試驗(yàn)：取一接種環(huán)肉湯培養(yǎng)物接種與10U/ml青霉素瓊脂平板上，培養(yǎng)18h，觀察有無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)。炭疽芽孢桿菌一般不生長(zhǎng)，或僅微生長(zhǎng)；而大多數(shù)蠟樣芽孢桿菌等則生長(zhǎng)良好。鑒定方法138七、動(dòng)力檢查：取37℃水浴培養(yǎng)4h的新鮮肉湯培養(yǎng)