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廢液處理U..=*111¥■if4Ill■■UliflilliniHIH?■llktl■■山HUAsystemofficeroom[HUA16H-TTMS2A-HUAS8Q8-HUAH1688]2014-3-2421:48:07含有機(jī)磷的廢液此類(lèi)廢液包括:含磷酸、亞磷酸、硫代磷酸及膦酸酯類(lèi),磷化氫類(lèi)以及磷系農(nóng)藥等物質(zhì)的廢液。對(duì)其濃度高的廢液進(jìn)行焚燒處理(因含難于燃燒的物質(zhì)多,故可與可燃性物質(zhì)混合進(jìn)行焚燒)。對(duì)濃度低的廢液,經(jīng)水解或溶劑萃取后,用吸附法進(jìn)行處理。含有天然及合成高分子化合物的廢液此類(lèi)廢液包括:含有聚乙烯、聚乙烯醇、聚苯乙烯、聚二醇等合成高分子化合物,以及蛋白質(zhì)、木質(zhì)素、纖維素、淀粉、橡膠等天然高分子化合物的廢液。對(duì)其含有可燃性物質(zhì)的廢液,用焚燒法處理。而對(duì)難以焚燒的物質(zhì)及含水的低濃度廢液,經(jīng)濃縮后,將其焚燒。但對(duì)蛋白質(zhì)、淀粉等易被微生物分解的物質(zhì),其稀溶液可不經(jīng)處理即可排放。葛所長(zhǎng)2014-3-2421:46:48、'八■,r*注意事項(xiàng)含烷基汞之類(lèi)廢液,毒性特別大,處理時(shí)必須十分注意。處理方法(氧化分解法)用下述處理方法,先將有機(jī)汞轉(zhuǎn)變成無(wú)機(jī)汞,然后再進(jìn)行處理。[操作步驟]在500毫升廢液(含汞0.025毫克以下)中,加入濃硝酸60毫升及6%的KMnO4水溶液20毫升,加熱回流二小時(shí)。待KMnO4溶液的顏色消失時(shí),把溫度降到60°C以下,然后加入2毫升KMnO4溶液,再加熱溶液。[分析方法][備注]除上述的處理方法外,還有用NaOCl和NaOH或KMnO4和H2SO4進(jìn)行氧化,以及用活性炭吸附等方法。含重金屬的廢液、'八■,r*注意事項(xiàng).對(duì)含有機(jī)物、絡(luò)離子及螯合物量大的廢液,要先把它們分解除去(參照含重金屬的有機(jī)類(lèi)廢液的處理方法)。.含Cr(III)、CN等物質(zhì)時(shí),也要預(yù)先進(jìn)行上述處理。.廢液中含有兩種以上的重金屬時(shí),因其處理的最適宜的pH值各不相同,必須加以注意。處理方法[原理]把重金屬離子轉(zhuǎn)變成難溶于水的氫氧化物或硫化物等的鹽類(lèi),然后進(jìn)行共沉淀而除去。.氫氧化物共沉淀法[操作步驟]在廢液中加入FeCl3或Fe2(S04)3,并加以充分?jǐn)嚢?。將Ca(OH)2制成石灰乳,然后加入上述廢液中,調(diào)整pH至9?11(如果pH值過(guò)高,沉淀會(huì)再溶解)。溶液經(jīng)放置后,過(guò)濾沉淀物。檢查濾液確實(shí)不含重金屬離子后,才把它中和排放。[備注]如果含有螯合物時(shí),往往不產(chǎn)生沉淀。但是,本法可以除去少量的螯合物。按照本法處理,可使Ca、Zn、Fe、Mn、Ni、Cr(III)、As、Sb、Al、Co、Ag、Sn、Bi、及其它很多重金屬生成氫氧化物沉淀而除去。共沉劑也可以用Al2(SO4)3或ZnCl2等物質(zhì)。因在強(qiáng)堿性下,兩性金屬的沉淀會(huì)發(fā)生溶解。故要注意其最適宜的pH值(兩性金屬沉淀溶解的pH值為:A13+:8.5;Cr3+:9.2;Sn2+:10.6;Zn2+:>11;Pb2+:>11。但是,用共沉淀法處理時(shí),由于產(chǎn)生沉淀的pH值范圍相當(dāng)寬,因而,在pH值為9?11的條件下,全都能完全沉淀)。中和劑與其用HaOH,不如用Ca(OH)2為好。因Ca(OH)2可防止兩性金屬的沉淀再溶解,且其沉降性能也較好。如果用碳酸鈉作中和劑,還可使Ca2+、Sr2+、Ba2+等離子生成難溶性的碳酸鹽而除去(pH=10?11)。葛所長(zhǎng)2014-3-2421:45:45【注】:如果有Cu+、Ni+等離子存在,必須加入過(guò)量的氧化劑。4.3含鎘及鉛的廢液、'八■,r*注意事項(xiàng).含重金屬兩種以上時(shí),由于其處理的最適宜pH值各不相同,因而,對(duì)處理后的廢液必須加以注意。.含大量有機(jī)物或氰化物的廢液,以及含有絡(luò)離子的時(shí)候,必須預(yù)先把它分解除去(參照含有重金屬的有機(jī)類(lèi)廢液的處理方法)。鎘的處理方法(氫氧化物沉淀法)[原理]用Ca(OH)2將Cd2+轉(zhuǎn)化成難溶于水的Cd(OH)2而分離。Cdz_+Ca(OH)2-^Cd(0H)丿當(dāng)pH值在11附近時(shí),Cd(OH)2的溶解度最小,因此調(diào)節(jié)pH值很重要。但是,若有金屬離子共沉淀時(shí),那么,即使pH值較低也會(huì)產(chǎn)生沉淀。[操作步驟].在廢液中加入Ca(OH)2,調(diào)節(jié)pH至10.6?11.2,充分?jǐn)嚢韬蠹捶胖谩?先過(guò)濾上層澄清液,然后才過(guò)濾沉淀。保管好沉淀物。.檢查濾液中確實(shí)不存在Cd2+離子時(shí),把它中和后即可排放。[分析方法]定性分析用鎘試劑試紙法或檢測(cè)箱進(jìn)行檢測(cè);定量分析則用二苯基硫巴腙(即雙硫腙)吸光光度法(見(jiàn)JISK010240.1)或原子吸收光譜分析法進(jìn)行測(cè)定。鉛的處理方法(氫氧化物共沉淀法)[原理]用Ca(OH)2把Pb2+轉(zhuǎn)變成難溶性的Pb(OH)2,然后使其與凝聚劑共沉淀而分離。Pb^+Ga{oh)PbOoh)丿十。尹為此,首先把廢液的pH值調(diào)整到11以上,使之生成Pb(OH)2。然后加入凝聚劑,繼而將pH值降到7?8,即產(chǎn)生Pb(OH)2共沉淀。但如果pH值在11以上,則生成HPbO2-而沉淀會(huì)再溶解。[操作步驟].在廢液中加入Ca(OH)2,調(diào)整pH值至11。.加入Al2(SO4)3(凝聚劑),用H2SO4慢慢調(diào)節(jié)pH值,使其降到7?8。.把溶液放置,待其充分澄清后即過(guò)濾。檢查濾液不含Pb2+后,即可排放。[分析方法]定性分析用檢測(cè)箱進(jìn)行(注意干擾離子)。定量分析用二苯基硫巴腙(即雙硫腙)吸光光度法(見(jiàn)JISK010239.1)或原子吸收光譜分析法。[備注].除上述處理方法外,還有硫化物沉淀法(其生成的硫化物溶解度較小,但因形成膠體微粒而難于分離);碳酸鹽沉淀法(生成的沉淀微粒細(xì)小,分離困難);吸附法(使用強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂,幾乎能把它們完全除去)。.堿性藥劑也可以用NaOH,但是由于生成微粒狀沉淀而難于過(guò)濾,故用Ca(OH)2較好。4.4含砷廢液、.,、'八.,T,注意事項(xiàng)1).As2O3是劇毒物質(zhì),其致命劑量為0.1克。因此,處理時(shí)必須十分謹(jǐn)慎。2).含有機(jī)砷化合物時(shí),先將其氧化分解,然后才進(jìn)行處理(參照含重金屬有機(jī)類(lèi)廢液的處理方法)。處理方法(氫氧化物共沉淀法)[原理]用中和法處理不能把As沉淀。通常使它與Ca、Mg、Ba、Fe、Al等的氫氧化物共沉淀而分離除去。用Fe(OH)3時(shí),其最適宜的操作條件是:鐵砷比(Fe/As)為30?50;pH為7?10。[操作步驟]1).廢液中含砷量大時(shí),加入Ca(OH)2溶液,調(diào)節(jié)pH至9.5附近,充分?jǐn)嚢?,先沉淀分離一部份砷。2).在上述濾液中,加入FeCl3,使其鐵砷比達(dá)到50,然后用堿調(diào)整pH至7?10之間,并進(jìn)行攪拌。3).把上述溶液放置一夜,然后過(guò)濾,保管好沉淀物。檢查濾液不含As后,加以中和即可排放。此法可使砷的濃度降到0.05ppm以下。[分析方法]定量分析有鐵共沉淀、濃縮——溶劑萃取——鉬藍(lán)法(見(jiàn)JISK010248.1);或鐵共沉淀、濃縮——分離砷化氫——二乙基氨荒酸銀法進(jìn)行測(cè)定(見(jiàn)JISK010248.2)。】備注]除上述處理方法外,還有硫化物沉淀法(用鹽酸酸化,然后用H2S或NaHS等試劑使之沉淀)及吸附法(用活性炭、活性礬土作吸附劑)。4.5含汞廢液注意事項(xiàng)1).廢液毒性大,經(jīng)微生物等的作用后,會(huì)變成毒性更大的有機(jī)汞。因此,處理時(shí)必須做到充分安全。2).含烷基汞之類(lèi)的有機(jī)汞廢液,要先把它分解轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)機(jī)汞,然后才進(jìn)行處理(參照有機(jī)汞的處理方法)。3).不能含有金屬汞。處理方法之一(硫化物共沉淀法)[原理]用Na2S或NaHS把Hg2+轉(zhuǎn)變?yōu)殡y溶于水的HgS,然后使其與Fe(OH)3共沉淀而分離除去。如果使其pH值在10以上進(jìn)行反應(yīng),HgS即變成膠體狀態(tài)。此時(shí),即使用濾紙過(guò)濾,也難于把它徹底清除。如果添加的Na2S過(guò)量時(shí),則生成[HgS2]2-而沉淀容易發(fā)生溶解。腘a2S過(guò)量時(shí),則生成[HgS2]2-而沉淀容易發(fā)生溶解。[操作步驟]1).于廢液中加入對(duì)于FeSO4(10ppm)及Hg2+之濃度的1:1當(dāng)量的Na2S9H2O,充分?jǐn)嚢瑁⑹箯U液之pH值保持在6?8范圍內(nèi)。2).上述溶液經(jīng)放置后,過(guò)濾沉淀并妥善保管好濾渣(用此法處理,可使Hg濃度降到0.05ppm以下)。3).再用活性炭吸附法或離子交換樹(shù)脂等方法,進(jìn)一步處理濾液。4).在處理后的廢液中,確證檢不出Hg后,才可排放。處理方法之二(活性炭吸附法)先稀釋廢液,使Hg濃度在lppm以下。然后加入NaCl,再調(diào)整pH值至6附近,加入過(guò)量的活性炭,攪拌約2小時(shí),然后過(guò)濾,保管好濾渣。此法也可以直接除去有機(jī)汞。處理方法之三(離子交換樹(shù)脂法)于含汞廢液中加入NaCl,使之生成[HgCl4]2-絡(luò)離子而被陰離子交換樹(shù)脂所吸附。但隨著汞的形態(tài)不同,有時(shí)此法效果不夠理想。并且,當(dāng)有有機(jī)溶劑存在時(shí),此法也不適用。[分析方法][備注]1).因?yàn)楣菀仔纬山j(luò)離子,故處理時(shí)必須考慮汞的存在形態(tài)。2).若用NaHS和ZnCl2代替Na2S+FeSO4,可以把汞清除到極微量的程度。例如,對(duì)含HglOppm的廢液1升,pH值在10.3,加入32毫克NaHS及80毫克ZnCl2進(jìn)行處理。處理后,Hg的濃度降至0.003ppm。4.6含有機(jī)汞的廢液葛所長(zhǎng)2014-3-2421:47:434.14含無(wú)機(jī)鹵化物的廢液處理方法[操作步驟]1).將含AlBr3、AlCl3、ClS03H、SnCl4及TiCl4等無(wú)機(jī)類(lèi)鹵化物的廢液,放入大號(hào)蒸發(fā)皿中,撒上高嶺土——碳酸鈉(1:1)的干燥混合物。2).把它充分混合后,噴灑1:1的氨水,至沒(méi)有NH4C1白煙放出為止。3).把它中和后放置,過(guò)濾沉淀物。檢查濾液有無(wú)重金屬離子。若無(wú),則用大量水稀釋后,即可排放。5.有機(jī)類(lèi)實(shí)驗(yàn)廢液的處理方法、.,Y-■、'八.,I[1*—r-.Tr注意事項(xiàng)1).盡量回收溶劑,在對(duì)實(shí)驗(yàn)沒(méi)有妨礙的情況下,把它反復(fù)使用。.為了方便處理,其收集分類(lèi)往往分為:a)可燃性物質(zhì);b)難燃性物質(zhì);c)含水廢液;d)固體物質(zhì)等。.可溶于水的物質(zhì),容易成為水溶液流失。因此,回收時(shí)要加以注意。但是,對(duì)甲醇、乙醇及醋酸之類(lèi)溶劑,能被細(xì)菌作用而易于分解。故對(duì)這類(lèi)溶劑的稀溶液,經(jīng)用大量水稀釋后,即可排放。.含重金屬等的廢液,將其有機(jī)質(zhì)分解后,作無(wú)機(jī)類(lèi)廢液進(jìn)行處理。處理方法1).焚燒法將可燃性物質(zhì)的廢液,置于燃燒爐中燃燒。如果數(shù)量很少,可把它裝入鐵制或瓷制容器,選擇室外安全的地方把它燃燒。點(diǎn)火時(shí),取一長(zhǎng)棒,在其一端扎上沾有油類(lèi)的破布,或用木片等東西,站在上風(fēng)方向進(jìn)行點(diǎn)火燃燒。并且,必須監(jiān)視至燒完為止。對(duì)難于燃燒的物質(zhì),可把它與可燃性物質(zhì)混合燃燒,或者把它噴入配備有助燃器的焚燒爐中燃燒。對(duì)多氯聯(lián)苯之類(lèi)難于燃燒的物質(zhì),往往會(huì)排出一部份還未焚燒的物質(zhì),要加以注意。對(duì)含水的高濃度有機(jī)類(lèi)廢液,此法亦能進(jìn)行焚燒。對(duì)由于燃燒而產(chǎn)生NO2、SO2或HCl之類(lèi)有害氣體的廢液,必須用配備有洗滌器的焚燒爐燃燒。此時(shí),必須用堿液洗滌燃燒廢氣,除去其中的有害氣體。對(duì)固體物質(zhì),亦可將其溶解于可燃性溶劑中,然后使之燃燒。.溶劑萃取法對(duì)含水的低濃度廢液,用與水不相混合的正己烷之類(lèi)揮發(fā)性溶劑進(jìn)行萃取,分離出溶劑層后,把它進(jìn)行焚燒。再用吹入空氣的方法,將水層中的溶劑吹出。對(duì)形成乳濁液之類(lèi)的廢液,不能用此法處理。要用焚燒法處理。.吸附法用活性炭、硅藻土、礬土、層片狀織物、聚丙烯、聚酯片、氨基甲酸乙酯泡沫塑料、稻草屑及鋸末之類(lèi)能良好吸附溶劑的物質(zhì),使其充分吸附后,與吸附劑一起焚燒。.氧化分解法(參照含重金屬有機(jī)類(lèi)廢液的處理方法)在含水的低濃度有機(jī)類(lèi)廢液中,對(duì)其易氧化分解的廢液,用H202、KMnO4、NaOCl、H2S04+HN03、HN03+HCl04、H2S04+HCl04及廢鉻酸混合液等物質(zhì),將其氧化分解。然后,按上述無(wú)機(jī)類(lèi)實(shí)驗(yàn)廢液的處理方法加以處理。.水解法對(duì)有機(jī)酸或無(wú)機(jī)酸的酯類(lèi),以及一部份有機(jī)磷化合物等容易發(fā)生水解的物質(zhì),可加入NaOH或Ca(OH)2,在室溫或加熱下進(jìn)行水解。水解后,若廢液無(wú)毒害時(shí),把它中和、稀釋后,即可排放。如果含有有害物質(zhì)時(shí),用吸附等適當(dāng)?shù)姆椒右蕴幚怼?生物化學(xué)處理法用活性污泥之類(lèi)東西并吹入空氣進(jìn)行處理。例如,對(duì)含有乙醇、乙酸、動(dòng)植物性油脂、蛋白質(zhì)及淀粉等的稀溶液,可用此法進(jìn)行處理。含一般有機(jī)溶劑的廢液一般有機(jī)溶劑是指醇類(lèi)、酯類(lèi)、有機(jī)酸、酮及醚等由C、H、O元素構(gòu)成的物質(zhì)。對(duì)此類(lèi)物質(zhì)的廢液中的可燃性物質(zhì),用焚燒法處理。對(duì)難于燃燒的物質(zhì)及可燃性物質(zhì)的低濃度廢液,則用溶劑萃取法、吸附法及氧化分解法處理。再者,廢液中含有重金屬時(shí),要保管好焚燒殘?jiān)?。但是,?duì)其易被生物分解的物質(zhì)(即通過(guò)微生物的作用而容易分解的物質(zhì)),其稀溶液經(jīng)用水稀釋后,即可排放。含石油、動(dòng)植物性油脂的廢液此類(lèi)廢液包括:苯、已烷、二甲苯、甲苯、煤油、輕油、重油、潤(rùn)滑油、切削油、機(jī)器油、動(dòng)植物性油脂及液體和固體脂肪酸等物質(zhì)的廢液。對(duì)其可燃性物質(zhì),用焚燒法處理。對(duì)其難于燃燒的物質(zhì)及低濃度的廢液,則用溶劑萃取法或吸附法處理。對(duì)含機(jī)油之類(lèi)的廢液,含有重金屬時(shí),要保管好焚燒殘?jiān)?.3含N、S及鹵素類(lèi)的有機(jī)廢液此類(lèi)廢液包含的物質(zhì):吡啶、喹啉、甲基吡啶、氨基酸、酰胺、二甲基甲酰胺、二硫化碳、硫醇、烷基硫、硫脲、硫酰胺、噻吩、二甲亞砜、氯仿、四氯化碳、氯乙烯類(lèi)、氯苯類(lèi)、酰鹵化物和含N、S、鹵素的染料、農(nóng)藥、顏料及其中間體等等。對(duì)其可燃性物質(zhì),用焚燒法處理。但必須采取措施除去由燃燒而產(chǎn)生的有害氣體(如SO2、HCl、NO2等)。對(duì)多氯聯(lián)苯之類(lèi)物質(zhì),因難以燃燒而有一部分直接被排出,要加以、:I.注意。對(duì)難于燃燒的物質(zhì)及低濃度的廢液,用溶劑萃取法、吸附法及水解法進(jìn)行處理。但對(duì)氨基酸等易被微生物分解的物質(zhì),經(jīng)用水稀釋后,即可排放。含酚類(lèi)物質(zhì)的廢液此類(lèi)廢液包含的物質(zhì):苯酚、甲酚、萘酚等。對(duì)其濃度大的可燃性物質(zhì),可用焚燒法處理。而濃度低的廢液,則用吸附法、溶劑萃取法或氧化分解法處理。含有酸、堿、氧化劑、還原劑及無(wú)機(jī)鹽類(lèi)的有機(jī)類(lèi)廢液此類(lèi)廢液包括:含有硫酸、鹽酸、硝酸等酸類(lèi)和氫氧化鈉、碳酸鈉、氨等堿類(lèi),以及過(guò)氧化氫、過(guò)氧化物等氧化劑與硫化物、聯(lián)氨等還原劑的有機(jī)類(lèi)廢液。首先,按無(wú)機(jī)類(lèi)廢液的處理方法,把它分別加以中和。然后,若有機(jī)類(lèi)物質(zhì)濃度大時(shí),用焚燒法處理(保管好殘?jiān)?。能分離出有機(jī)層和水層時(shí),將有機(jī)層焚燒,對(duì)水層或其濃度低的廢液,則用吸附法、溶劑萃取法或氧化分解法進(jìn)行處理。但是,對(duì)其易被微生物分解的物質(zhì),用水稀釋后,即可排放。葛所長(zhǎng)2014-3-2421:57:57菌株的保藏方法1、傳代保存法:有些微生物當(dāng)遇到冷凍或干燥等處理時(shí),會(huì)很快死亡,因此在這種情況下,只能求助于傳代培養(yǎng)保存法。傳代培養(yǎng)就是要定期地進(jìn)行菌種轉(zhuǎn)接、培養(yǎng)后再保存,它是最基本的微生物保存法,例如酸奶等常用生產(chǎn)菌種的保存。傳代保存時(shí),培養(yǎng)基的濃度不宜過(guò)高,營(yíng)養(yǎng)成分不宜過(guò)于豐富,尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長(zhǎng)溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種,則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣。一般地,大多數(shù)菌種的保藏溫度以5°C為好,像厭氧菌、霍亂弧菌及部分病原真菌等微生物菌種則可以使用37C進(jìn)行保存,而蕈類(lèi)等大型食用菌的菌種則可以室溫直接保存。傳代培養(yǎng)保存法雖然簡(jiǎn)便,但其缺點(diǎn)也很明顯,如:①菌種管棉塞經(jīng)常容易發(fā)霉;②菌株的遺傳性狀容易發(fā)生變異;③反復(fù)傳代時(shí),菌株的病原性、形成生理活性物質(zhì)的能力以及形成抱子的能力等均有降低;④需要定期轉(zhuǎn)種,工作量大;⑤雜菌的污染機(jī)會(huì)較多。通派(上海)生物科技有限公司是供應(yīng)國(guó)內(nèi)/外各類(lèi)細(xì)胞(人/大鼠/小鼠細(xì)胞等),菌種,ELISA試劑盒(人/大鼠/豬),PCR試劑盒,免疫組化試劑盒,單克隆抗體,多克隆抗體,移液器,培養(yǎng)皿,BD培養(yǎng)基,實(shí)驗(yàn)室耗材,實(shí)驗(yàn)室小型耗材等產(chǎn)品的國(guó)內(nèi)一流服務(wù)商。公司集生物科技產(chǎn)品生產(chǎn)、銷(xiāo)售于一體,公司實(shí)驗(yàn)室熱門(mén)提供:傳代細(xì)胞,原代細(xì)胞,耐藥株,細(xì)胞染色,免疫組化,ELISA試劑盒等。2、液體石蠟覆蓋保存法:該法較前一種方法保存菌種的時(shí)間更長(zhǎng),適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細(xì)菌等的保存。此法可防止干燥,并通過(guò)限制氧的供給而達(dá)到削弱微生物代謝作用的目的。其具有方法簡(jiǎn)便的優(yōu)點(diǎn),同時(shí)也適用于不宜冷凍干燥的微生物(如產(chǎn)抱能力低的絲狀菌)的保存,而某些細(xì)菌如固氮菌、乳酸桿菌、明串珠菌、分枝桿菌、紅螺菌及沙門(mén)氏菌等和一些真菌如卷霉菌、小克銀漢霉、毛霉、根霉等不宜采用此法進(jìn)行保存。3、懸液保存法:即使微生物混懸于適當(dāng)溶液中進(jìn)行保存的方法。常用的有,蒸餾水保存法:適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌,將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。糖液保存法:適用于酵母菌,如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗處保存,可長(zhǎng)達(dá)10年。除此之外,也可使用緩沖液或食鹽水等進(jìn)行保存。4、載體保存法:即將微生物吸附在適當(dāng)載體上進(jìn)行干燥保存的方法。常用的有方法包括以下幾種,如土壤保存法:主要用于能形成抱子或抱囊的微生物菌種的保藏。方法是在滅菌的土壤中加入菌液,立即在室溫下進(jìn)行干燥或使菌體繁殖后再干燥,然后冷藏或在室溫下密封保存。保存用的土壤原則上以肥沃的耕土為宜,土壤需風(fēng)干、粉碎、過(guò)篩和滅菌。使微生物在土壤中繁殖后進(jìn)行干燥保存的方法是:取適量土壤(5克)置于塞有棉塞的試管中,加水或加入充分稀釋的液體培養(yǎng)基(以含水量為土壤最大持水量的60%為宜),然后高壓滅菌。再將需保存的微生物進(jìn)行大量接種,培養(yǎng)至菌絲能用肉眼確認(rèn)的程度為止,移入干燥器中經(jīng)短時(shí)間干燥或風(fēng)干后密封,冷藏或室溫保存。砂土保存法:取清潔的砂,過(guò)60目篩去掉大砂粒,并用磁鐵吸去砂中鐵屑,再用NaOH溶液、10%HCl溶液和水交替清洗數(shù)次,干燥后,置于試管或安瓶管中保持2?3cm深,再經(jīng)干熱滅菌后,加入1ml菌種培養(yǎng)液,經(jīng)充分混勻后,放入真空干燥器中,完全干燥后熔封保存。也可用二份洗凈的砂(經(jīng)HCl預(yù)處理)和一份貧瘠、過(guò)篩的黃土攙和后滅菌,再進(jìn)行菌種保藏。硅膠保存法:以6?16目的無(wú)色硅膠代替砂子,干熱滅菌后,加入菌液。加菌液時(shí),由于硅膠的吸附熱常使溫度升高,因而需設(shè)法加以冷卻。磁珠保存法:將菌液浸入素?zé)胖椋ɑ蚨嗫撞Aе椋┖笤龠M(jìn)行干燥保存的一種方法。在螺旋口試管中裝入1/2管高的硅膠(或無(wú)水CaS04),上鋪玻璃棉,再放上10?20粒磁珠,經(jīng)干熱滅菌后,接入菌懸液,最后冷藏、室溫保藏或減壓干燥后密封保藏。本法對(duì)酵母菌很有效,特別適用于根瘤菌,可保存長(zhǎng)達(dá)兩年半時(shí)間。麩皮保存法:在麩皮內(nèi)加入60%的水,經(jīng)滅菌后接種培養(yǎng),最后干燥保藏。紙片(濾紙)保存法:將滅菌紙片浸入培養(yǎng)液或菌懸液中,常壓或減壓干燥后,置于裝有干燥劑的容器內(nèi)進(jìn)行保存。5、寄主保存法:即令微生物侵入其寄主后加以保存的方法。6、冷凍保存法:適用于抗凍力強(qiáng)的微生物。這些微生物可在其菌體細(xì)胞外遭受凍結(jié)的情況下而不受損傷,而對(duì)其它大多數(shù)微生物而言,無(wú)論在細(xì)胞外凍結(jié)還是在細(xì)胞內(nèi)凍結(jié),都會(huì)對(duì)菌體造成損傷,因此當(dāng)采用這種保藏方法時(shí),應(yīng)注意以下幾點(diǎn),要選擇適于冷凍干燥的菌齡細(xì)胞;要選擇適宜的培養(yǎng)基,因?yàn)槟承┪⑸飳?duì)冷凍的抵抗力,常隨培養(yǎng)基成分的變化而顯示出巨大差異;要選擇合適的菌液濃度,通常菌液濃度越高,生存率越高,保存期也越長(zhǎng);最好在菌液內(nèi)不添加電解質(zhì)(如食鹽等);可在菌液內(nèi)添加甘油等保護(hù)劑,以防止在冷凍過(guò)程中出現(xiàn)菌體大量死亡的現(xiàn)象。同樣,也可添加各種糖類(lèi)、去纖維血液和脫脂牛乳等具有良好保護(hù)效果的溶劑,但對(duì)有些微生物而言,不加保護(hù)劑時(shí)更有效。原則上應(yīng)盡快進(jìn)行冷凍處理,但當(dāng)加入保護(hù)劑時(shí),可靜置一段時(shí)間后再進(jìn)行處理。就動(dòng)物細(xì)胞而言,應(yīng)在一20°C范圍內(nèi)以1°C/min左右的速度緩慢降溫,此后必須盡快降到貯藏溫度;而對(duì)絕大多數(shù)微生物而言,則不必如此,如結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜的原蟲(chóng)則可在-35C范圍內(nèi)進(jìn)行緩慢降溫,而噬菌體則必需采用上述的二階段法進(jìn)行冷凍;若進(jìn)行長(zhǎng)期保存,則貯藏溫度越低越好;取用冷凍保存的菌種時(shí),應(yīng)采取速融措施,即在35?40C溫水中輕輕振蕩使之迅速融解。而就厭氧菌來(lái)說(shuō),則應(yīng)選擇靜置融化的措施。當(dāng)冷凍菌融化后,應(yīng)盡量避免再次冷凍,否則菌體的存活率將顯著下降。常用的冷凍保存法包括:?低溫冰箱保存法(一20°C、一50°C或一85°C):低溫冷凍保存時(shí)使用螺旋口試管較為方便,也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時(shí)菌液加量不宜過(guò)多,有些可添加保護(hù)劑。此外,也可用?5mm的玻璃珠來(lái)吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器內(nèi),再放入低溫冰箱內(nèi)進(jìn)行保存的。?干冰保存法(一70°C左右):即將菌種管插入干冰內(nèi),再置于冰箱內(nèi)進(jìn)行冷凍保存。?液氮保存法(一196C):是適用范圍最廣的微生物保存法。其操作步驟如下,a、裝安瓶管:使用盡量
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