牛病毒性腹瀉與黏膜病牛病毒性腹瀉與黏膜病

牛病毒性腹瀉，又稱牛病毒性腹瀉/粘膜病，是由BVDV引起的，主要侵害牛、羊、鹿、牦牛等反芻動物及豬的一種重要傳染病。臨床主要表現(xiàn)為發(fā)熱、粘膜糜爛、潰瘍、白細(xì)胞減少、持續(xù)感染、咳嗽及懷孕母牛流產(chǎn)或產(chǎn)生畸形胎兒。同一種病原引起的多種病狀的傳染病

我國1980年李佑民首從國外進(jìn)口奶牛分離出BVDV；上世紀(jì)90年代鄭志剛等在全國范圍內(nèi)調(diào)查，BVDV平均陽性率為19.56%，近年來本病在國內(nèi)陽性檢出率呈逐年上漲的趨勢。本病給養(yǎng)牛業(yè)造成明顯損失（產(chǎn)乳↓、重↓、流產(chǎn)等）。牛病毒性腹瀉牛病毒性腹瀉，又稱牛病毒性腹瀉/粘膜病1BVDV的流行病學(xué)

2BVDV的病原學(xué)

3BVDV的基因結(jié)構(gòu)及其蛋白4BVDV的研究進(jìn)展

內(nèi)容摘要56BVDV的防治

BVDV的主要診斷方法

1BVDV的流行病學(xué)2BVDV的病原學(xué)3BVDV的基BVDV的流行病學(xué)傳染源：病牛和帶毒牛是主要傳染源。傳播途徑：主要通過消化道和呼吸道傳播；直接或間接接觸也可以傳播；吸血昆蟲也是重要的傳播媒介。易感動物：主要感染牛（肉牛、奶牛），也可感染豬。

本病多發(fā)于寒冷季節(jié)，過分擁擠可促進(jìn)本病發(fā)生。BVDV的流行病學(xué)傳染源：病牛和帶毒牛是主要傳染源。BVDV的病原學(xué)屬黃病毒科、瘟病毒屬有囊膜，直徑25-30nm，正鏈RNA胎牛腎、睪丸、豬腎、胎羊睪丸可增殖傳代BVDV。BVDV可以分成致細(xì)胞病變型（CP）和非致細(xì)胞病變型（NCP）。BVDV的病原學(xué)屬黃病毒科、瘟病毒屬牛病毒性腹瀉與粘膜病課件BVDV的基因結(jié)構(gòu)及其蛋白

5'-Npro（P20）-C(P14)-Erns(gp48)-E1(gp25)-E2(gp53)-P7-NS2-3(P125)-NS4A(P10)-NS4B(P30)-NS5A(P58)-NS5B(P75)-3',其中C，ERNS，E1，E2是病毒的結(jié)構(gòu)蛋白。其余為非結(jié)構(gòu)蛋白。BVDV的基因結(jié)構(gòu)及其蛋白5'-Npro（P20）-C(BVDV的主要基因、蛋白研究進(jìn)展ADDYOURTITLE核衣殼組成成分，具有免疫原性BVDV基因組具有較高的保守性瘟病毒屬內(nèi)高度保守，在病毒復(fù)制、病毒RNA轉(zhuǎn)譯或者病毒多聚蛋白加工過程中具有重要作用5‘-UTRCNS3ERNS內(nèi)有一高度保守結(jié)構(gòu)域，可用于研究亞單位疫苗，也可作為基因工程診斷抗原E2與抗BVDV抗體結(jié)合、介導(dǎo)免疫中和反應(yīng)及與宿主細(xì)胞識別、吸附的主要部位Npro具有自體蛋白酶活性，有較高的保守，可以對瘟病毒進(jìn)行種、群或型的鑒定BVDV的主要基因、蛋白研究進(jìn)展ADDYOURTIT5'-UTR：5'末端無甲基化的“帽子”結(jié)構(gòu)，5'-UTR序列在BVDV的各毒株間有較高的保守性，因此常根據(jù)5'-UTR的序列設(shè)計引物來檢測

BVDV或?qū)VDV進(jìn)行分型。5'-UTR在病毒轉(zhuǎn)錄、翻譯過程中起重要的作用。2010年張興娟等分別用5'-UTR設(shè)計一對引物，預(yù)擴(kuò)增片段125bp；2010年孟雨等人也利用5'-UTR設(shè)計一對引物，預(yù)擴(kuò)增片段218bp，實(shí)驗(yàn)證明利用5'-UTR設(shè)計引物具有很好的特異性和敏感性。5'-UTR：5'末端無甲基化的“帽子”結(jié)構(gòu)，5'-UTR序E2：是BVDV的主要保護(hù)性抗原，能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體，所以新型疫苗都是針對E2結(jié)構(gòu)蛋白的。也是與抗BVDV抗體結(jié)合、介導(dǎo)免疫中和反應(yīng)及與宿主細(xì)胞識別、吸附的主要部位，E2基因一直是國內(nèi)外學(xué)者研究瘟病毒的重點(diǎn)。E2是形成BVD基因工程疫苗的最好的選擇。BVDVE2DNA疫苗是近年來BVDV免疫研究的熱點(diǎn)。如2007吳明福等構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1(+)-E2并免疫小鼠，可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生一定程度的體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答。E2：是BVDV的主要保護(hù)性抗原，能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體，所NS-3：NS3區(qū)域與病毒的毒力，生長特性有關(guān)。NS3在瘟病毒屬內(nèi)高度保守，在病毒復(fù)制、病毒RNA轉(zhuǎn)譯或者病毒多聚蛋白加工過程中具有重要作用。NS3的表達(dá)與宿主細(xì)胞CPE的產(chǎn)生有密切關(guān)系。2009年魏偉等用BVDVNS3蛋白中有免疫反應(yīng)性的重組片段作為包被抗原，建立了一個BVDV抗體檢測的間接ELISA方法。NS-3：NS3區(qū)域與病毒的毒力，生長特性有關(guān)。NS3在瘟病血清學(xué)診斷免疫學(xué)診斷診斷方法的進(jìn)展分子生物學(xué)診斷123血清學(xué)診斷免疫學(xué)診斷診斷方法的進(jìn)展分子生物學(xué)診斷123血清學(xué)診斷常見的方法為主要包括血清中和試驗(yàn)和瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)兩種。瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)準(zhǔn)確性較低，檢出的結(jié)果常常有假陽性。血清中和試驗(yàn)重復(fù)性高，準(zhǔn)確性好，已作為BVDV診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但血清中和試驗(yàn)在基層使用時，常遇到費(fèi)時、費(fèi)力，需要細(xì)胞培養(yǎng)等試驗(yàn)室技術(shù)問題，無法得到推廣。血清學(xué)診斷常見的方法為主要包括血清中和試驗(yàn)免疫學(xué)診斷酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）免疫熒光技術(shù)（IFA）免疫過氧化物酶技術(shù)（IP）免疫學(xué)診斷酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）免疫熒光技術(shù)（IFA免疫熒光技術(shù)（IFA）

免疫熒光技術(shù)（IFA）又稱熒光抗體技術(shù)，可用于檢測細(xì)胞培養(yǎng)物以及病變組織的冰凍切片中BVDV感染情況。

免疫熒光抗體技術(shù)特異、敏感、快速，但它需要熒光顯微鏡，使得此技術(shù)無法得到推廣應(yīng)用。免疫熒光技術(shù)（IFA）免疫熒光技術(shù)（IFA）又ELISA

ELISA常被用于檢測組織器官培養(yǎng)物中BVDV，監(jiān)測牛群中BVD抗體水平，評估潛伏感染情況。其中最常用的是雙抗夾心ELISA和間接ELISA，也有使用BVDV單克隆抗體與ELISA聯(lián)合診斷BVD。研究較多的IBRV診斷蛋白有NS3，E2蛋白酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）ELISAELISA常被用于檢測組織器官培養(yǎng)物

免疫過氧化物酶技術(shù)（IP）診斷BVDV準(zhǔn)確、可靠，可用于了解BVD的總體分布情況。鏈酶親和素-生物素過氧化物酶檢測方法，可以用來檢測福爾馬林固定、石蠟包埋組織切片中的BVDV。近年來，為了避免非特異性染色反應(yīng)，則可以使用單克隆抗體+生物素化抗鼠抗體-鏈酶親和素過氧化物酶檢測方法。免疫過氧化物酶技術(shù)（IP）免疫過氧化物酶技術(shù)（IP）診斷BVDV準(zhǔn)確、可靠，分子生物學(xué)診斷RT-PCR核酸探針檢測12分子生物學(xué)診斷RT-PCR核酸探針檢測12RT-PCR

RT–PCR是目前廣泛應(yīng)用的分子生物學(xué)技術(shù)，對于檢測BVDV的RNA是一個合適的方法。根據(jù)BVDV基因組序列合成一對或幾對特異性引物，可以高度特異、敏感的檢測出器官、組織、細(xì)胞培養(yǎng)物中的BVDV，并可區(qū)別CSFV、BDV，還可對BVDV的基因型和生物型作進(jìn)一步的鑒定RT-PCRRT–PCR是目前廣泛應(yīng)用的分子生

PCR引物多數(shù)選在BVDV保守區(qū)5’-UTR和NS3基因內(nèi)，尤其5’UTR是BVDV進(jìn)行鑒定、基因分型的首選區(qū)域。

2007年王偉利建立了BVDV熒光RT-PCR檢測方法并進(jìn)行了初步應(yīng)用，2007年國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫局制定了牛病毒性腹瀉/黏膜病反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)操作規(guī)程PCR引物多數(shù)選在BVDV保守區(qū)5’-UTR和核酸探針檢測（NAH）

與傳統(tǒng)方法相比，該技術(shù)敏感，特異性強(qiáng)，而且應(yīng)用很廣泛，NAH可直接檢測臟器組織和血細(xì)胞中的BVDV。NAH技術(shù)應(yīng)用最廣泛的是核酸標(biāo)記法，按核酸探針標(biāo)記物不同可分為兩類：一類是放射性同位素（如32P，35S）標(biāo)記的DNA探針，另一類是用如地高辛、生物素標(biāo)記的DNA探針。核酸探針技術(shù)標(biāo)記簡單，特異性好，可長期保存，并且可以回收利用，制成試劑盒，是一種安全、快速、經(jīng)濟(jì)的診斷方法。核酸探針檢測（NAH）與傳統(tǒng)方法相比，該技術(shù)敏預(yù)防和控制免疫預(yù)防和藥物治療健全完善BVD檢測體系，加強(qiáng)檢測牛群及牛源生物制品的BVDV污染情況排除掉持續(xù)性感染牛等隱性感染動物加強(qiáng)環(huán)境監(jiān)控，在飼養(yǎng)環(huán)節(jié)加強(qiáng)管理，建立封閉式牧場管理系統(tǒng)，不進(jìn)行混合飼養(yǎng)實(shí)施免疫預(yù)防、過度到捕殺根除程序預(yù)防和控制免疫預(yù)防和藥物治療ThankYou!ThankYou!牛病毒性腹瀉與黏膜病牛病毒性腹瀉與黏膜病

牛病毒性腹瀉，又稱牛病毒性腹瀉/粘膜病，是由BVDV引起的，主要侵害牛、羊、鹿、牦牛等反芻動物及豬的一種重要傳染病。臨床主要表現(xiàn)為發(fā)熱、粘膜糜爛、潰瘍、白細(xì)胞減少、持續(xù)感染、咳嗽及懷孕母牛流產(chǎn)或產(chǎn)生畸形胎兒。同一種病原引起的多種病狀的傳染病

我國1980年李佑民首從國外進(jìn)口奶牛分離出BVDV；上世紀(jì)90年代鄭志剛等在全國范圍內(nèi)調(diào)查，BVDV平均陽性率為19.56%，近年來本病在國內(nèi)陽性檢出率呈逐年上漲的趨勢。本病給養(yǎng)牛業(yè)造成明顯損失（產(chǎn)乳↓、重↓、流產(chǎn)等）。牛病毒性腹瀉牛病毒性腹瀉，又稱牛病毒性腹瀉/粘膜病1BVDV的流行病學(xué)

2BVDV的病原學(xué)

3BVDV的基因結(jié)構(gòu)及其蛋白4BVDV的研究進(jìn)展

內(nèi)容摘要56BVDV的防治

BVDV的主要診斷方法

1BVDV的流行病學(xué)2BVDV的病原學(xué)3BVDV的基BVDV的流行病學(xué)傳染源：病牛和帶毒牛是主要傳染源。傳播途徑：主要通過消化道和呼吸道傳播；直接或間接接觸也可以傳播；吸血昆蟲也是重要的傳播媒介。易感動物：主要感染牛（肉牛、奶牛），也可感染豬。

本病多發(fā)于寒冷季節(jié)，過分擁擠可促進(jìn)本病發(fā)生。BVDV的流行病學(xué)傳染源：病牛和帶毒牛是主要傳染源。BVDV的病原學(xué)屬黃病毒科、瘟病毒屬有囊膜，直徑25-30nm，正鏈RNA胎牛腎、睪丸、豬腎、胎羊睪丸可增殖傳代BVDV。BVDV可以分成致細(xì)胞病變型（CP）和非致細(xì)胞病變型（NCP）。BVDV的病原學(xué)屬黃病毒科、瘟病毒屬牛病毒性腹瀉與粘膜病課件BVDV的基因結(jié)構(gòu)及其蛋白

5'-Npro（P20）-C(P14)-Erns(gp48)-E1(gp25)-E2(gp53)-P7-NS2-3(P125)-NS4A(P10)-NS4B(P30)-NS5A(P58)-NS5B(P75)-3',其中C，ERNS，E1，E2是病毒的結(jié)構(gòu)蛋白。其余為非結(jié)構(gòu)蛋白。BVDV的基因結(jié)構(gòu)及其蛋白5'-Npro（P20）-C(BVDV的主要基因、蛋白研究進(jìn)展ADDYOURTITLE核衣殼組成成分，具有免疫原性BVDV基因組具有較高的保守性瘟病毒屬內(nèi)高度保守，在病毒復(fù)制、病毒RNA轉(zhuǎn)譯或者病毒多聚蛋白加工過程中具有重要作用5‘-UTRCNS3ERNS內(nèi)有一高度保守結(jié)構(gòu)域，可用于研究亞單位疫苗，也可作為基因工程診斷抗原E2與抗BVDV抗體結(jié)合、介導(dǎo)免疫中和反應(yīng)及與宿主細(xì)胞識別、吸附的主要部位Npro具有自體蛋白酶活性，有較高的保守，可以對瘟病毒進(jìn)行種、群或型的鑒定BVDV的主要基因、蛋白研究進(jìn)展ADDYOURTIT5'-UTR：5'末端無甲基化的“帽子”結(jié)構(gòu)，5'-UTR序列在BVDV的各毒株間有較高的保守性，因此常根據(jù)5'-UTR的序列設(shè)計引物來檢測

BVDV或?qū)VDV進(jìn)行分型。5'-UTR在病毒轉(zhuǎn)錄、翻譯過程中起重要的作用。2010年張興娟等分別用5'-UTR設(shè)計一對引物，預(yù)擴(kuò)增片段125bp；2010年孟雨等人也利用5'-UTR設(shè)計一對引物，預(yù)擴(kuò)增片段218bp，實(shí)驗(yàn)證明利用5'-UTR設(shè)計引物具有很好的特異性和敏感性。5'-UTR：5'末端無甲基化的“帽子”結(jié)構(gòu)，5'-UTR序E2：是BVDV的主要保護(hù)性抗原，能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體，所以新型疫苗都是針對E2結(jié)構(gòu)蛋白的。也是與抗BVDV抗體結(jié)合、介導(dǎo)免疫中和反應(yīng)及與宿主細(xì)胞識別、吸附的主要部位，E2基因一直是國內(nèi)外學(xué)者研究瘟病毒的重點(diǎn)。E2是形成BVD基因工程疫苗的最好的選擇。BVDVE2DNA疫苗是近年來BVDV免疫研究的熱點(diǎn)。如2007吳明福等構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1(+)-E2并免疫小鼠，可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生一定程度的體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答。E2：是BVDV的主要保護(hù)性抗原，能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體，所NS-3：NS3區(qū)域與病毒的毒力，生長特性有關(guān)。NS3在瘟病毒屬內(nèi)高度保守，在病毒復(fù)制、病毒RNA轉(zhuǎn)譯或者病毒多聚蛋白加工過程中具有重要作用。NS3的表達(dá)與宿主細(xì)胞CPE的產(chǎn)生有密切關(guān)系。2009年魏偉等用BVDVNS3蛋白中有免疫反應(yīng)性的重組片段作為包被抗原，建立了一個BVDV抗體檢測的間接ELISA方法。NS-3：NS3區(qū)域與病毒的毒力，生長特性有關(guān)。NS3在瘟病血清學(xué)診斷免疫學(xué)診斷診斷方法的進(jìn)展分子生物學(xué)診斷123血清學(xué)診斷免疫學(xué)診斷診斷方法的進(jìn)展分子生物學(xué)診斷123血清學(xué)診斷常見的方法為主要包括血清中和試驗(yàn)和瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)兩種。瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)準(zhǔn)確性較低，檢出的結(jié)果常常有假陽性。血清中和試驗(yàn)重復(fù)性高，準(zhǔn)確性好，已作為BVDV診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但血清中和試驗(yàn)在基層使用時，常遇到費(fèi)時、費(fèi)力，需要細(xì)胞培養(yǎng)等試驗(yàn)室技術(shù)問題，無法得到推廣。血清學(xué)診斷常見的方法為主要包括血清中和試驗(yàn)免疫學(xué)診斷酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）免疫熒光技術(shù)（IFA）免疫過氧化物酶技術(shù)（IP）免疫學(xué)診斷酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）免疫熒光技術(shù)（IFA免疫熒光技術(shù)（IFA）

免疫熒光技術(shù)（IFA）又稱熒光抗體技術(shù)，可用于檢測細(xì)胞培養(yǎng)物以及病變組織的冰凍切片中BVDV感染情況。

免疫熒光抗體技術(shù)特異、敏感、快速，但它需要熒光顯微鏡，使得此技術(shù)無法得到推廣應(yīng)用。免疫熒光技術(shù)（IFA）免疫熒光技術(shù)（IFA）又ELISA

ELISA常被用于檢測組織器官培養(yǎng)物中BVDV，監(jiān)測牛群中BVD抗體水平，評估潛伏感染情況。其中最常用的是雙抗夾心ELISA和間接ELISA，也有使用BVDV單克隆抗體與ELISA聯(lián)合診斷BVD。研究較多的IBRV診斷蛋白有NS3，E2蛋白酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）ELISAELISA常被用于檢測組織器官培養(yǎng)物

免疫過氧化物酶技術(shù)（IP）診斷BVDV準(zhǔn)確、可靠，可用于了解BVD的總體分布情況。鏈酶親和素-生物素過氧化物酶檢測方法，可以用來檢測福爾馬林固定、石蠟包埋組織切片中的BVDV。近年來，為了避免非特異性染色反應(yīng)，則可以使用單克隆抗體+生物素化抗鼠抗體-鏈酶親和素過氧化物酶檢測方法。免疫過氧化物酶技術(shù)（IP）免疫過氧化物酶技術(shù)（IP）診斷BVDV準(zhǔn)確、可靠，分子生物學(xué)診斷RT-PCR核酸探針檢測12分子生物學(xué)診斷RT-PCR核酸探針檢測12RT-PCR

RT–PCR是目前廣泛應(yīng)用的分子生物學(xué)技術(shù)，對于檢測BVDV的RNA是一