生物檢測技術(shù)試題集一、名詞解釋、引物：PCR反應(yīng)過程中的一段與模板鏈互補， DNA聚合酶以其作為起始進行核酸聚合反應(yīng)的一段短核苷酸序列 。Sangerreaction：是在近于中性或堿性和室溫的情況下 ,2,4-二硝基氟化苯DNP與蛋白質(zhì)分子中N-端氨基酸中的游離a氨基生成DNP衍生物，濃鹽酸加熱水解全部肽鍵 ,生成物中有一 DNP氨基酸。Tm值：50％DNA分子發(fā)生變性的溫度稱為變性溫度(即熔解曲線中點對應(yīng)的溫度)，由于這一現(xiàn)象和結(jié)晶的熔解相類似，故又稱熔點或熔解溫度 (meltintemperature,Tm)。因此Tm是指消光值上升到最大消光值一半時的溫度。DNA變性：是指核酸雙螺旋堿基對的氫鍵斷裂，雙鏈變成單鏈，從而使核酸的天然構(gòu)象和性質(zhì)發(fā)生改變。 變性時維持雙螺旋穩(wěn)定性的氫鍵斷裂， 堿基間的堆積力遭到破壞， 但不涉及到其一級結(jié)構(gòu)的改變。 凡能破壞雙螺旋穩(wěn)定性的因素，如加熱、極端的 pH、有機試劑甲醇、乙醇、尿素及甲酰胺等，均可引起核酸分子變性。5、全基因組鳥槍法測序：將基因組打成小片段后將其克隆到質(zhì)粒載體中，然后隨機挑取克隆對插入片段測序， 并以獲得的測序序列構(gòu)建重疊群。 在此基礎(chǔ)上進一步搭建序列支架，最后以分子標(biāo)記為向?qū)⑿蛄兄Ъ苠^定到基因組整合圖上。6、real-timePCR：是1996年由美國AppliedBiosystems公司推出的一種新定量試驗技術(shù)，它是通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性的探針，對 PCR產(chǎn)物進行標(biāo)記跟蹤，實時在線監(jiān)控反應(yīng)過程，結(jié)合相應(yīng)的軟件可以對產(chǎn)物進行分析，計算待測樣品模板的初始濃度。7、蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu) (primarystructure)：就是蛋白質(zhì)多肽鏈中氨基酸殘基的排列順序( sequence)，也是蛋白質(zhì)最基本的結(jié)構(gòu)。它是由基因上遺傳密碼的排列順序所決定的。 各種氨基酸按遺傳密碼的順序， 通過肽鍵連接起來， 成為多肽鏈，故肽鍵是蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中的主鍵。8、蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu)：是指球狀蛋白質(zhì)的多肽鏈在二級結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上相互配置而形成特定的構(gòu)象。a螺旋、B折疊、B轉(zhuǎn)角和無規(guī)則卷曲等二級結(jié)構(gòu)通過側(cè)鏈基團的相互作用進一步卷曲、 折疊，借助次級鍵的維系形成三級結(jié)構(gòu)， 三級結(jié)構(gòu)的形成使肽鏈中所有的原子都達(dá)到空間上的重新排布， 它是建立在二級結(jié)構(gòu)、 超二級結(jié)構(gòu)和結(jié)構(gòu)域基礎(chǔ)上的球狀蛋白質(zhì)的高級空間結(jié)構(gòu)。9、宏基因組學(xué)( Metagenomics)又叫微生物環(huán)境基因組學(xué)、元基因組學(xué)。它通過直接從環(huán)境樣品中提取全部微生物的 DNA,構(gòu)建宏基因組文庫， 利用基因組學(xué)的研究策略研究環(huán)境樣品所包含的全部微生物的遺傳組成及其群落功能。10、蛋白質(zhì)組學(xué)本質(zhì)上指的是在大規(guī)模水平上研究蛋白質(zhì)的特征，包括蛋白質(zhì)的表達(dá)水平， 翻譯后的修飾， 蛋白與蛋白相互作用等， 由此獲得蛋白質(zhì)水平上的關(guān)于疾病發(fā)生，細(xì)胞代謝等過程的整體而全面的認(rèn)識，這個概念最早是由 MarcWilkins在1994年提出的。二、填空題1、核酸分離純化的技術(shù)路線包括破碎細(xì)胞、分離除雜、濃縮、分析鑒定以及分裝保存等步驟。2、質(zhì)粒 DNA的分離純化主要包括：堿裂解法；沸煮裂解法； SDS裂解法等。DNA復(fù)性不僅受溫度、時間影響還受 DNA濃度以及 DNA順序的復(fù)雜性影-可編輯修改--可編輯修改---可編輯修改 -。響。PCR根據(jù)時間和溫度可分為三個步驟，即變性、退火和延伸。5、高通量測序技術(shù)步驟分為： 1.樣本準(zhǔn)備( samplefragmentation)；2.文庫構(gòu)建(librarypreparation)；3.測序反應(yīng) (sequencingreaction)；4.數(shù)據(jù)分析(dataanalysis)。6、基因作圖有三種類型，即遺傳作圖、物理圖譜和轉(zhuǎn)錄圖譜。7、比較基因組學(xué)是基于基因組圖譜和測定基礎(chǔ)，對已知的基因和基因組結(jié)構(gòu)進行比較，從而了解基因的功能、表達(dá)機理和物種進化的學(xué)科。8、由于蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)中特殊的鍵或基團造成蛋白質(zhì)具有紫外吸收、蛋白黃反應(yīng)、Millon反應(yīng)、雙縮脲反應(yīng)、 ninhydrin反應(yīng)、亞硝酸反應(yīng)、 硫的反應(yīng)、 sakaguchi反應(yīng)、丹酰化反應(yīng)以及兩性電解質(zhì)等特點。9、蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)測定通常是將蛋白質(zhì)水解、部分水解以及選擇性水解，再分別測定水解產(chǎn)物的組成，包括肽類和氨基酸，以觀察組成蛋白質(zhì)的氨基酸種類、數(shù)目、排列狀態(tài)和次序等。10、氫鍵是穩(wěn)定蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)的主要作用力， 二級結(jié)構(gòu)包括：生螺旋(a-helix)、&折疊(3-sheet)、&轉(zhuǎn)角(3-turn)和無規(guī)卷曲(randoncoil)。、蛋白質(zhì)高級結(jié)構(gòu)分析測定方法分為儀器分析法和理論分析法。、蛋白質(zhì)組學(xué)檢測技術(shù)主要包括：電泳分析法；層析技術(shù)和質(zhì)譜技術(shù)。、生物傳感器是利用生物要素與物理化學(xué)檢測要素組合在一起對被分析物進行檢測的裝置，包括三個部分：識別元件；換能器和檢測元件組成。、根據(jù)電子鼻探測信號的類型可將其分為電信號電子鼻、光信號電子鼻、溫度信號電子鼻和質(zhì)量信號電子鼻，其中電信號電子鼻應(yīng)用最為廣泛。三、判斷改錯題1、CT值越小，模板DNA的起始拷貝數(shù)越少（X）2、測定蛋白質(zhì)水解程度可采用雙縮月尿法 （力3、變性溫度低，解鏈不完全是導(dǎo)致PCR失敗的最主要原因（兇4、.PCR的三個反應(yīng)步驟反復(fù)進行，使 DNA擴增，靶序列 DNA片段的增加一直成指數(shù)形式（為5、模板核算的量與純化程度，是PCR成敗與否的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。（6、PCR循環(huán)次數(shù)主要取決于模板 DNA的濃度，一般的循環(huán)次數(shù)選在 30-40次之間。（U7、PCR循環(huán)次數(shù)越多，特異性產(chǎn)物的量亦隨之增多（X）8、TaqMan探針是高度特異性的定量PCR技術(shù)，其核心是利用Taq酶的3'忐'外切核酸酶活性，切斷探針，產(chǎn)生熒光信號。（ /DNA變性后兩條互補鏈還能重新結(jié)合，稱為復(fù)性，無論外界條件如何都能復(fù)性。（淤）10、酚抽提法是基因組DNA分離純化的一種方法。（/11、蛋白質(zhì)高級結(jié)構(gòu)最終由初級結(jié)構(gòu)所決定。（ /12、蛋白質(zhì)是一種兩性電解質(zhì)是由于蛋白質(zhì)既有氨基又有竣基。（13、氫鍵是穩(wěn)定蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)的主要作用力。（力14、相比于基因組包含的全部基因，蛋白質(zhì)組包含了更多的功能性多肽，部分歸因于蛋白質(zhì)的修飾作用。（15、X射線衍射法不但可以測定晶體結(jié)構(gòu)而且可以用于測定非晶體結(jié)構(gòu)。（為16、蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)屬于高級結(jié)構(gòu)。（力17、B折疊屬于蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)的一種。（X）18、生物芯片，又稱蛋白芯片或基因芯片，它們起源于DNA雜交探針技術(shù)與半導(dǎo)體工業(yè)技術(shù)相結(jié)合的結(jié)晶。（力19、微生物傳感器比酶傳感器價格昂貴不利于推廣應(yīng)用。（的20、生物傳感器用途廣泛，涉及醫(yī)療保健、疾病診斷、食品檢測、環(huán)境監(jiān)測、發(fā)酵工業(yè)等各個領(lǐng)域。（力四、選擇題1、高效毛細(xì)管電泳和一般電泳法的區(qū)別在于（B）A.電滲流的速度 B.使用毛細(xì)管柱C.操作自動化 D.毛細(xì)管容易冷卻2、PCR反應(yīng)的特異性決定因素中的關(guān)鍵是（A）A.引物與模板DNA特異正確的結(jié)合 B.堿基配對原則C.TaqDNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性 D.靶基因的特異性與保守性3、對PCR產(chǎn)物檢測的方法不正確的是 （B）A.凝膠電泳分析法 B.熒光標(biāo)記法 C.分子雜交法 D.核酸序列分析法4、以下哪項不是目前常見的生物芯片（D）A.基因芯片 B.芯片實驗室 C.蛋白芯片 D.核酸芯片5、32.什么是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵（B）A.酶B、引物C.dNTPD模板6、雙鏈DNA在（A）溫度范圍內(nèi)變性A、90-95攝氏度 B、75-80攝氏度 C、80-85攝氏度 D、70-75攝氏度7、下列關(guān)于緩沖液的性質(zhì)敘述錯誤的是（ C）A.溶液PH值距離其等電點越遠(yuǎn)，電泳的速度就越大B.當(dāng)緩沖液PH大于蛋白質(zhì)分子的等電點時，其電泳方向指向正極C.對兩性分子而言，緩沖液PH并不影響其電泳方向D.泳動度與溶液黏度是成反比關(guān)系8、下列關(guān)于 PRC反映的五要素說法正確的是（ A）A.引物、酶、dDTP、摸板、Mg2+濃度.引物、蛋白質(zhì)、dNTP、摸板、Mg2+濃度C.引物、溫度、dNTP、模板、Mg2+濃度D.引物、酶、dDTP、RNA、PH值、.在常規(guī)紫外光測定時，紫外光波長集中于（B）區(qū)A.小于190nm B.200?400nmC.400?800nm D.800nm以上TOC\o"1-5"\h\z、下列方法中不屬于生物樣品的預(yù)處理方法的是（ E）A.消化分解B.提取C.分離D.濃縮E.結(jié)晶、在顯微鏡的光學(xué)系統(tǒng)中，能夠在上涂抹香柏油為介質(zhì)的器材是（ C）A.反光鏡 B.聚光器C.物鏡D.目鏡、下列微生物涂片的制作過程正確的是（ C）A.涂片-干燥-固定-水洗-染色-干燥-鏡檢B.涂片-干燥-水洗-染色-干燥-固定-鏡檢C.涂片-干燥-固定-染色-水洗-干燥-鏡檢D.涂片-干燥-染色-固定-水洗-干燥-鏡檢--可編輯修改 -TOC\o"1-5"\h\z、對PCR產(chǎn)物檢測的方法不正確的是 （B）A.凝膠電泳分析法 B.熒光標(biāo)記法 C.分子雜交法 D.核酸序列分析法、以下哪項不是目前常見的生物芯片（ D）A.基因芯片 B.芯片實驗室C.蛋白芯片 D.核酸芯片．在探針制備中常用到某些熒光物質(zhì)，以下哪項不是（ A）A.PNA B.TMR C.羅丹明 D.Cy5從酶的反應(yīng)溫度來看，溫度變化 1攝氏度，反應(yīng)速度可能相差（ A）A.10%以上 B.5% C.不變 D.1%不屬于固化酶的優(yōu)點的是（ D）A.可反復(fù)使用 B.高穩(wěn)定性 C.干擾較小 D.酶活力最高下列哪項不是影響電泳分析的因素（ D）A.待分離生物大分子的性質(zhì) B.電滲 C.溶液粘度 D.分離時間PCR反應(yīng)的特異性的決定因素中（C）_是最關(guān)鍵的.A.堿基配對原則 B.TagDNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性C.引物與模板DNA特意正確的結(jié)合 D.靶基因的特異性與保守性TLC是什么的簡稱 （A）A薄層層析 B紙層析C高效液相色譜D氣相色譜凝膠的種類很多，常用的凝膠主要有（D）。①葡聚糖凝膠②聚丙烯酰胺凝膠③瓊脂糖凝膠④多孔玻璃珠⑤多孔硅膠⑥聚苯乙烯凝膠A.①②③B.①②④⑤C.③④⑤⑥D(zhuǎn).以上都是.下列關(guān)于核酸探針的分類敘述錯誤的是（ C）A.根據(jù)核酸的性質(zhì)，可分為 DNA和RNA探針B.根據(jù)是否使用放射性標(biāo)記物的與否，可分為放射性標(biāo)記探針和非放射性標(biāo)記探針C.根據(jù)是否存在互補鏈，可分為互補鏈探針和非互補鏈探針D．根據(jù)放射性標(biāo)記物摻入情況，可分為均勻標(biāo)記和末端標(biāo)記探針五、簡答題1、簡述PCR原理、方法及應(yīng)用PCR技術(shù)類似于 DNA的天然復(fù)制過程， 其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。 PCR由變性--退火 --延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成： ①模板DNA的變性：模板 DNA經(jīng)加熱至 93℃左右一定時間后，使模板 DNA雙鏈或經(jīng) PCR擴增形成的雙鏈 DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備；②模板DNA與引物的退火 （復(fù)性 ）：模板 DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至 55℃左右，引物與模板 DNA單鏈的互補序列配對結(jié)合； ③引物的延伸：DNA模板--引物結(jié)合物在 TaqDNA聚合酶的作用下， 以dNTP為反應(yīng)原料， 靶序列為模板， 按堿基配對與半保留復(fù)制原理， 合成一條新的與模板 DNA鏈互補的半保留復(fù)制鏈，重復(fù)循環(huán)變性 --退火 --延伸三過程，就可獲得更多的 “半保留復(fù)制鏈”，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個循環(huán)需 2?4分鐘，2?3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。 PCR技術(shù)廣泛應(yīng)用有關(guān)基因操作的基礎(chǔ)研究， 及各種病原體所致疾病臨床檢測， 以及各種基因突變及基因表達(dá)異常所致的疾病檢測。2、簡述雙脫氧末端終止法測序原理利用DNA聚合酶以單鏈 DNA為模板 ,合成互補 DNA鏈，在合成過程中引入不（ddNTP）作為鏈終止劑與正常的 dNTP競爭，結(jié)果產(chǎn)生分別終止于模板鏈的每一個 A、C、G和T位置上的一系列長度的核苷酸鏈。通過高分辯率變性聚丙烯酰胺凝膠電泳 ,從膠片上通過熒光直接讀取出DNA上的核苷酸順序。3、結(jié)構(gòu)基因組學(xué)與功能基因組學(xué)的區(qū)別結(jié)構(gòu)基因組學(xué)主要描述染色體上核苷酸序列的構(gòu)造， 通常以一些功能不明確的遺傳標(biāo)志如STS/EST作記號加以描述，方法有RFLP（限制性酶切片段長度多態(tài)性卜RAPD（隨機引物擴增多態(tài)性DNA）、AFLP（擴增片段長度多態(tài)性卜STR儂串聯(lián)重復(fù)序列，又稱微衛(wèi)星）DNA遺傳多態(tài)性分析、SNP（單個核甘酸的多態(tài)性）分析、YAC作圖。功能基因組學(xué)主要描述染色體上功能區(qū)的結(jié)構(gòu)分布， 通常以一些功能明確的遺傳標(biāo)志如與細(xì)胞分化、 信號傳遞等有關(guān)的基因作記號加以描述， 方法有減法雜交、cDNA差異、mRNA差異顯示、 cDNA微陣列、生物芯片以及 AFLP等。4、簡述質(zhì)譜儀測定肽或 DNA序列的原理用化學(xué)裂解法或酶法處理蛋白質(zhì)或核酸， 形成不同分子量大小的次級片段， 經(jīng)質(zhì)譜儀分離測定，可形成具有精確質(zhì)量差的肽片段譜或 DNA片段譜，由質(zhì)譜圖中相鄰各峰之間的精確質(zhì)量差可依次讀出氨基酸的順序或核苷酸的順序。5、簡述急性毒性試驗的原則。急性毒性試驗是一次給予受試物后觀察動物所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)， 并測定其半數(shù)致死量（1D50）。觀察時間一般為一周，范圍可為1?28天。藥物要用兩種以上給藥途徑 （包括推薦給臨床研究的給藥途徑 ,溶于水的藥物應(yīng)當(dāng)測定靜脈注射的LD50）。觀察到有毒性反應(yīng)時應(yīng)進行肉眼尸檢 ,記錄所有病變。 當(dāng)尸檢發(fā)現(xiàn)病變組織時,應(yīng)對該組織進行鏡檢。6、生物傳感器的分類及其依據(jù)是什么？按所用分子識別原件的不同， 生物傳感器可分為酶傳感器、 微生物傳感器、 細(xì)胞傳感器、組織傳感器和免疫傳感器按信號轉(zhuǎn)換元件不同，生物傳感器可分為生物電極傳感器、