MCF-7是一種很好養(yǎng)的人乳腺癌細(xì)胞，培養(yǎng)基用DMEM或RPMI1640均可，10－15％的小牛血清就能長得很好。一般兩到三天傳一代。傳代也很常規(guī)。吸出培養(yǎng)基，加入0.25％的胰酶1ml，輕輕晃動培養(yǎng)瓶，使胰酶流遍瓶壁，以去除殘余的培養(yǎng)基。再加入2ml胰酶（25ml培養(yǎng)瓶）靜置消化2－5min，待細(xì)胞縮起變圓，將胰酶吸出加入培養(yǎng)基3ml吹打成單細(xì)胞懸液分瓶即可。我一般都不用緩沖液沖洗，而直接用胰酶沖洗一下以去除剩余血清的作用，感覺效果還不錯。因?yàn)镸CF-7消化較快，一般不放到培養(yǎng)箱中消化，以免消化太過。需要注意的是MCF-7生長較快如不及時(shí)傳代可出現(xiàn)整瓶細(xì)胞浮起，一般都來不及搶救。MDA-MB-231人乳腺癌細(xì)胞細(xì)胞中文名稱人乳腺癌細(xì)胞細(xì)胞英文名稱MDA-MB-231物種人細(xì)胞形態(tài)特征上皮樣細(xì)胞生長特性貼壁生長細(xì)胞特種特性MDA-MB-231是從一名51歲的白人女性乳腺癌患者的胸水中分離建立的。該細(xì)胞表達(dá)表皮生長因子EGF受體、TGF-α受體和WNT7B癌基因培養(yǎng)基L15:LeibovitzMedium血清10%FBS細(xì)胞傳代方法1:2~1:4傳代；每周2~3次細(xì)胞傳代情況C5細(xì)胞凍存條件MDA-MB-231人乳腺癌細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS支原體檢測陰性說明培養(yǎng)基：DMEM90%,FetalBovineSerum10%培養(yǎng)條件：37℃5%CO2消化條件：0.25%(w/v)Trypsin-0.53mMEDTA溶液，消化5-10min傳代的比例：1：2~1：4換液時(shí)間：2~3天換液一次凍存液比例：85%培養(yǎng)基，10%FBS,5%(v/v)DMSO凍存密度：1-2×106/管，液氮保存MDA-MB-231人乳腺癌細(xì)胞復(fù)蘇方法：取出凍存管后，投入37

℃水浴中，震蕩解凍2

min，酒精消毒管壁外側(cè)后，將其轉(zhuǎn)入超凈臺中，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至離心管中，加入5

ml

37

℃預(yù)熱的培養(yǎng)基，并清洗凍存管一次，將離心管離心（1000

rpm，5

min），棄去上清液，再加入2

ml培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。產(chǎn)品名稱：人正常乳腺細(xì)胞

Hs578Bst

規(guī)格：70%密度的25cm2培養(yǎng)瓶的細(xì)胞一瓶

特點(diǎn)：細(xì)胞代數(shù)為4-5代左右

包裝：內(nèi)層無菌自封袋；專用防壓泡沫盒；外層防壓保溫氣泡袋；說明書

細(xì)胞來源：ATCC、sciencell、ICLC

貨期：1-2周

運(yùn)輸方式：快遞運(yùn)輸

售后：收到細(xì)胞后7天，如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有質(zhì)量問題（如污染，死亡，快遞運(yùn)輸?shù)仍颍r(shí)，應(yīng)出具書面質(zhì)量問題報(bào)告并及時(shí)傳真或E-mail致銷售人員，我們將盡快為您解決。細(xì)胞培養(yǎng)常見問題分析

細(xì)胞培養(yǎng)

1、冷凍管應(yīng)如何解凍？

取出冷凍管后，須立即放入37℃水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí)，必須注意安全，預(yù)防冷凍管之爆裂。

2、細(xì)胞冷凍管解凍培養(yǎng)時(shí)，是否應(yīng)馬上去除DMSO？

除少數(shù)特別注明對DMSO敏感之細(xì)胞外，絕大部分細(xì)胞株（包括懸浮性細(xì)胞），在解凍之后，應(yīng)直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中，待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無法生長或貼附之問題。

3、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基？

不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基，若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基，細(xì)胞大都無法立即適應(yīng)，造成細(xì)胞無法存活。

4、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類？

不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源，所以血清的種類和品質(zhì)對于細(xì)胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清，在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯誤常會造成細(xì)胞無法存活。

5、何謂FBS,FCS,CS,HS?

FBS（fetalbovineserum）和FCS（fetalcalfserum）是相同的意思，兩者都是指胎牛血清，F(xiàn)CS乃錯誤的使用字眼，請不要再使用。CS（calfserum）則是指小牛血清。HS（horseserum）則是指馬血清。

6、培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)應(yīng)使用5%或10%CO2？或根本沒有影響？

一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統(tǒng)，而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用的CO2濃度。當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升3.7g時(shí)，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用10%CO2；當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5g時(shí)，則應(yīng)使用5%CO2培養(yǎng)細(xì)胞。

7、何時(shí)須更換培養(yǎng)基？

視細(xì)胞生長密度而定，或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上之更換時(shí)間，按時(shí)更換培養(yǎng)基即可。

8、培養(yǎng)基中是否須添加抗生素？

除于特殊篩選系統(tǒng)中外，一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下，培養(yǎng)基中不應(yīng)添加任何抗生素。

9、附著性細(xì)胞繼代時(shí)所使用之trypsin-EDTA濃度？應(yīng)如何處理？

一般使用之trypsin-EDTA濃度為0.05%trypsin-0.53mMEDTA.4Na。次開瓶后應(yīng)立即少量分裝于無菌試管中，保存于–20℃，避免反復(fù)冷凍解凍造成trypsin之活性降低，并可減少污染之機(jī)會。

10、懸浮性細(xì)胞應(yīng)如何繼代處理？

一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中，稀釋細(xì)胞濃度即可，若培養(yǎng)液太多時(shí)，可將培養(yǎng)角瓶口端稍微抬高，直到無法容納為止。分瓶時(shí)取出一部份含細(xì)胞之培養(yǎng)液至另一新的培養(yǎng)角瓶，加入新鮮培養(yǎng)基稀釋至適當(dāng)濃度，重復(fù)前述步驟即可。

11、欲將一般動物細(xì)胞離心下來，其離心速率應(yīng)為多少轉(zhuǎn)速？

欲回收動物細(xì)胞，其離心速率一般為300xg（約1,000rpm），5-10分鐘，過高之轉(zhuǎn)速，將造成細(xì)胞死亡。

12、細(xì)胞之接種密度為何？

依照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上之接種密度或稀釋分盤之比例接種即可。細(xì)胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細(xì)胞無法生長之一重要原因。

13、細(xì)胞冷凍培養(yǎng)基之成份為何？

動物細(xì)胞冷凍保存時(shí)最常使用的冷凍培養(yǎng)基是含5-10%DMSO（dimethylsulfoxide）和90-95%原來細(xì)胞生長用之新鮮培養(yǎng)基均勻混合之。注意：由于DMSO稀釋時(shí)會放出大量熱能，故不可將DMSO直接加入細(xì)胞液中，必須使用前先行配制完成。

14、DMSO之等級和無菌過濾之方式為何？

冷凍保存使用之DMSO等級，必須為Tissueculturegrade之DMSO（如SigmaD2650），其本身即為無菌狀況，次開瓶后應(yīng)立即少量分裝于無菌試管中，保存于4°C，避免反復(fù)冷凍解凍造成DMSO之裂解而釋出有害物質(zhì)，并可減少污染之機(jī)會。若要過濾DMSO，則須使用耐DMSO之Nylon材質(zhì)濾膜。

15、冷凍保存細(xì)胞之方法？

冷凍保存方法一:冷凍管置于4℃30~60分鐘→（-20℃30分鐘*）→-80℃16~18小時(shí)（或隔夜）→液氮槽vaporphase長期儲存。

冷凍保存方法二:冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽vaporphase長期儲存。*-20℃不可超過1小時(shí)，以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

15、細(xì)胞欲冷凍保存時(shí)，細(xì)胞冷凍管內(nèi)應(yīng)有多少細(xì)胞濃度？

冷凍管內(nèi)細(xì)胞數(shù)目一般為1x106cells/mlvial，融合瘤細(xì)胞則以5x106cells/mlvial為宜。

16、應(yīng)如何避免細(xì)胞污染？

細(xì)胞污染的種類可分成細(xì)菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉?jié){菌。主要的污染原因?yàn)闊o菌操作技術(shù)不當(dāng)、操作室環(huán)境不佳、污染之血清和污染之細(xì)胞等。嚴(yán)格之無菌操作技術(shù)、清潔的環(huán)境、與品質(zhì)良好之細(xì)胞來源和培養(yǎng)基配制是減低污染之方法。

17、如果細(xì)胞發(fā)生微生物污染時(shí)，應(yīng)如何處理？

加入相應(yīng)抗生素。直接滅菌后丟棄之。

18、支原體（mycoplasma）污染的細(xì)胞，是否能以肉眼觀察出異狀？

不能。除極有經(jīng)驗(yàn)之專家外，大多數(shù)遭受支原體污染的細(xì)胞株，無法以其外觀分辨之。

19、支原體污染會對細(xì)胞培養(yǎng)有何影響？

支原體污染幾乎可影響所有細(xì)胞之生長參數(shù)，代謝及研究之任一數(shù)據(jù)。故進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前，必須確認(rèn)細(xì)胞為mycoplasma-free，實(shí)驗(yàn)結(jié)果之?dāng)?shù)據(jù)方有意義。

20、CO2培養(yǎng)箱之水盤如何保持清潔？

定期（至少每兩周一次）以無菌蒸餾水或無菌去離子水更換之。

21、為何培養(yǎng)基保存于4℃冰箱中，顏色會偏暗紅色，且pH值會越來越偏堿性？

培養(yǎng)基保存于4℃冰箱中，培養(yǎng)基內(nèi)之CO2會逐漸溢出，造成培養(yǎng)基越來越偏堿性。而培養(yǎng)基中之酸堿指示劑（通常為phenolred）的顏色也會隨堿性增加而更偏暗紅。培養(yǎng)基偏堿之結(jié)果，將造成細(xì)胞生長停滯或死亡。若培養(yǎng)基偏堿時(shí)，可以通入無菌過濾之CO2，以調(diào)整pH值。

22、各種細(xì)胞培養(yǎng)用的dish，flask是否均相同？

不同廠牌的dish或flask，其所coating的polymer不同，制造程序亦不同，雖對大部分細(xì)胞沒有太大之影響，惟少數(shù)細(xì)胞則可能因使用廠牌不同之dish或flask而有顯著之生長差異。

23、購買之細(xì)胞冷凍管經(jīng)解凍后，為何會發(fā)生細(xì)胞數(shù)目太少之情形？購買之細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因？

研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳，常見原因可歸納為：培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯誤。冷凍細(xì)胞解凍后，加以洗滌細(xì)胞和離心。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細(xì)胞置于–80℃太久。

24、收到之冷凍管瓶身破裂，瓶蓋有裂紋，或瓶蓋脫落之原因？

冷凍管瓶蓋裂紋，或瓶身破裂，可能是因?yàn)椴僮髡邐A取冷凍管時(shí)用力不當(dāng)，造成冷凍管裂損，建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動或松脫，乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象，冷凍管有可能因此而造成細(xì)胞污染，故冷凍管于放入和取出液氮桶時(shí)，均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊。

25、如何選用特殊細(xì)胞系培養(yǎng)基？

培養(yǎng)某一類型細(xì)胞沒有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長。總之，首選MEM做粘附細(xì)胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細(xì)胞培養(yǎng)是一個好的開始，各種目的無血清培養(yǎng)首選AIMV（12005）培養(yǎng)基（SFM）。

26、L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)中重要嗎？它在溶液中不穩(wěn)定嗎？

L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)是重要的。脫掉氨基后，L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過一段時(shí)間后會降解，但是確切的降解率一直沒有最終定論。L-谷氨酰胺的降解導(dǎo)致氨的形成，而氨對于一些細(xì)胞具有毒性。

27、GlutaMAX-I是什么？培養(yǎng)細(xì)胞如何利用GlutaMAX-I？這個二肽有多穩(wěn)定？

GlutaMAX-I二肽是一個L-谷氨酰胺的衍生物，其不穩(wěn)定的alpha-氨基用L-丙氨酸來保護(hù)。一種肽酶逐漸裂解二肽，釋放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I二肽非常穩(wěn)定，即使在121磅滅菌20分鐘，GlutaMAX-I二肽溶液有最小的降解，如果在相同條件下，L-谷氨酰胺幾乎完全降解。

28、什么培養(yǎng)基中可以省去加酚紅？

酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為PH值的指示劑：中性時(shí)為紅色，酸性時(shí)為黃色，堿性時(shí)為紫色。研究表明，酚紅可以模擬固醇類激素的作用，（特別是雌激素）。為避免固醇類反應(yīng)，培養(yǎng)細(xì)胞，尤其是哺乳類細(xì)胞時(shí)，用不加酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測，一些研究人員在做流式細(xì)胞檢測時(shí)，不使用加有酚紅的培養(yǎng)基。

29、培養(yǎng)基中丙酮酸鈉的作用是什么？

丙酮酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源，盡管細(xì)胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是，如果沒有葡萄糖的話，細(xì)胞也可以代謝丙酮酸鈉。

30、二價(jià)離子抑制胰蛋白酶活性嗎？使用胰蛋白酶時(shí)加入EDTA的目的是什么？

二價(jià)離子的確抑制胰蛋白酶活性。EDTA用來螯合游離的鎂離子和鈣離子，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細(xì)胞前，用EDTA清洗細(xì)胞，以消除來自HYPERLINK"/cpro/ui/uijs.php?adclass=0&app_id=0&c=news&cf=1001&ch=0&di=128&fv=18&is_app=0&jk=5a01f7a57a64b6e5&k=%C5%E0%D1%F8%BB%F9&k0=%C5%E0%D1%F8%BB%F9&kdi0=0&luki=6&n=10&p=baidu&q=