第一節(jié)蛋白質(zhì)的提取和分離第一節(jié)蛋白質(zhì)的提取和分離課程標(biāo)準(zhǔn)1．嘗試蛋白質(zhì)的提取和分離。2．以動物血清為材料，提取其中的乳糖脫氫酶并分離其同工酶。課標(biāo)解讀1．簡述蛋白質(zhì)提取和分離的基本方法和基本原理。2．嘗試血清蛋白等的提取和電泳分離。課程標(biāo)準(zhǔn)將生物體內(nèi)的蛋白質(zhì)提取出來并加以分離，就可以得到_________、甚至是________的蛋白質(zhì)。目前常用的蛋白質(zhì)分離提純技術(shù)，包括_____技術(shù)、_____技術(shù)和_____技術(shù)等。其中，_____技術(shù)最為快捷靈敏、簡便易行。提取和分離蛋白質(zhì)的方法原理1．提取和分離蛋白質(zhì)的方法高純度的單一種類離心層析電泳電泳提取和分離蛋白質(zhì)的方法原理1．提取和分離蛋白質(zhì)的方法高純度的(1)概念蛋白質(zhì)含有游離的_____和_____，是_____電解質(zhì)，在一定___條件下帶有電荷，在電場中可以向與其自身所帶電荷_____的電極方向移動，這就是電泳現(xiàn)象。(2)原理蛋白質(zhì)所帶的電荷數(shù)_____，移動_____；電荷數(shù)相同時，相對分子質(zhì)量_____，移動_____。(3)結(jié)果不同蛋白質(zhì)的混合溶液，經(jīng)___________電泳后，會在_____上形成不同的_____。2．電泳技術(shù)氨基羧基兩性pH相反越多越快越小越快同一個電場凝膠帶紋2．電泳技術(shù)氨基羧基兩性pH相反越多越快越小越快同一個電場凝 洗脫法分離蛋白質(zhì)利用的原理是什么？它與電泳技術(shù)的原理有何不同？提示洗脫法是依據(jù)蛋白質(zhì)分子質(zhì)量大小，利用凝膠色譜柱使大分子蛋白質(zhì)優(yōu)先洗脫出來，而小分子蛋白質(zhì)后分離出來，稱為凝膠色譜法。而電泳法技術(shù)則是依據(jù)各種分子帶電性質(zhì)的差異，以及分子本身的大小、形狀不同，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而實現(xiàn)在電場中將各種分子分離。[思維激活1] 洗脫法分離蛋白質(zhì)利用的原理是什么？它與電泳技術(shù)的(1)蛋白質(zhì)的性質(zhì)蛋白質(zhì)含有游離的氨基和羧基，是兩性電解質(zhì)，在一定pH條件下帶有電荷。(2)電泳現(xiàn)象作為帶電粒子，蛋白質(zhì)在電場中可以向與其自身所帶電荷相反的電極方向移動，這就是電泳現(xiàn)象。(3)電泳原理蛋白質(zhì)所帶的電荷數(shù)越多，移動得越快；電荷數(shù)相同時，相對分子質(zhì)量越小，則移動越快。1．電泳技術(shù)分離蛋白質(zhì)的原理1．電泳技術(shù)分離蛋白質(zhì)的原理(1)聚丙烯酰胺凝膠電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳是以聚丙烯酰胺凝膠為載體的一種區(qū)帶電泳。該凝膠由丙烯酰胺(Acr)和交聯(lián)劑N，N′—甲基雙丙烯聚酰胺(Bis)聚合而成。Acr和Bis單獨存在或混合在一起時是穩(wěn)定的，且具有神經(jīng)毒性，操作時應(yīng)戴手套，避免接觸皮膚，但在具有自由基團體系時就能聚合。引發(fā)自由基團的方法有化學(xué)法和光化學(xué)法兩種。采用不同濃度的Acr、Bis、Ap、TEMED使之聚合，產(chǎn)生不同孔徑的凝膠。因此，可按分離物質(zhì)的大小、形狀來選擇凝膠濃度。(2)電泳結(jié)果2．聚丙烯酰胺凝膠電泳的結(jié)果及其鑒定2．聚丙烯酰胺凝膠電泳的結(jié)果及其鑒定不同的蛋白質(zhì)的混合溶液，在經(jīng)過同一個電場電泳后，會在凝膠上形成不同的帶紋。每一種帶紋可能就是一種蛋白質(zhì)。(3)結(jié)果鑒定將帶紋一個一個地剪下來，分別予以洗脫，然后對洗脫液中蛋白質(zhì)做進一步的分離。如果不能再分離，則這個帶紋中很可能含有一種單純蛋白質(zhì)；如果還能再分離，則這個帶紋中含有多種蛋白質(zhì)，需要作進一步分離，直至提純。不同的蛋白質(zhì)的混合溶液，在經(jīng)過同一個電場電泳后，會在凝膠上形 電泳是指帶電粒子在電場的作用下向著與其所帶電荷________方向的電極移動 ()。A．相同 B．相反 C．相對 D．相向解析在一定pH作用下，生物大分子中有某些可解離的基團，這些基團會帶上正電荷或負(fù)電荷，在電場作用下，這些帶電分子會向著與其所帶電荷相反的電極移動。答案B【鞏固1】 電泳是指帶電粒子在電場的作用下向著與其所帶電荷______(1)點樣：樣品的成分包括_________5μL、與質(zhì)量濃度為0.4g/mL的_____溶液及質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的_______指示劑_______混勻后，用___________吸取樣品加到電泳樣品槽的_____上。(2)電泳：打開電源，將電流調(diào)節(jié)至___mA，待樣品進入分離膠后，改為________mA。當(dāng)溴酚藍前沿距離硅膠框下緣_____時，將電流調(diào)回零，關(guān)閉電源。提取和分離蛋白質(zhì)的過程1．血清蛋白的提取和分離新制血清蔗糖溴酚藍等體積微量加樣器膠面1020～301cm提取和分離蛋白質(zhì)的過程1．血清蛋白的提取和分離新制血清蔗糖溴(3)染色：將凝膠放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為______________________染色液中染色___min。(4)脫色：用體積分?jǐn)?shù)為__________溶液浸泡漂洗數(shù)次，每隔_____h更換一次脫色液。(5)制干膠板：可獲得血清蛋白的__________。(1)加拿大科學(xué)家班廷等人發(fā)現(xiàn)和提純了_______，救助了數(shù)千萬的糖尿病患者。(2)在癌變檢測中，現(xiàn)在只需從早期患者的_____、_____或___________中提取少量蛋白質(zhì)樣品，采用_______________技術(shù)，就可以更加快速、簡便、準(zhǔn)確地對_________作出診斷。能夠提前3～5年發(fā)現(xiàn)一些_________，從而為患者做出及時的腫瘤預(yù)警，爭得更多寶貴的治療時間。2．蛋白質(zhì)提取與分離的實踐意義0.05%的考馬斯亮藍R250307%的醋酸1～2電泳譜帶胰島素尿液血液細(xì)胞裂解液蛋白質(zhì)指紋圖譜細(xì)胞癌變變異基因(3)染色：將凝膠放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為______________ 除了上述分離方法，你還知道哪種方法可以分離蛋白質(zhì)？它依據(jù)的原理是什么？提示透析法。依據(jù)的原理是半透膜只允許小分子透過，不允許大分子透過。[思維激活2] 除了上述分離方法，你還知道哪種方法可以分離血清蛋白的提取與分離(1)點樣：取新制血清5μL、與質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.4g/mL蔗糖溶液及質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的溴酚藍指示劑等體積混合均勻后，用微量加樣器取5μL樣品，小心地將樣品加到樣品糟的膠面上(如下圖所示)。血清蛋白的提取與分離(2)電泳：將直流穩(wěn)壓電泳儀的正極與下槽連接，負(fù)極與上槽連接(方向切勿接錯)；接通冷卻水，打開電泳儀開關(guān)。開始時將電流調(diào)至10mA，待樣品進入分離膠時，將電流調(diào)至20～30mA。當(dāng)藍色染料遷移至距離橡膠框下緣1cm時，將電流調(diào)回到零，關(guān)閉電源。(3)染色：將凝膠放入0.05%考馬斯亮藍R250染色液中，使染色液沒過膠板，染色30min左右。(4)脫色：用7%醋酸浸泡漂洗數(shù)次，直至背景藍色褪去。如用50℃水浴或脫色搖床，則可縮短脫色時間。(5)制干膠板：將已脫色的凝膠板放在保存液中浸泡3～4h，然后將凝膠板放在兩層透氣玻璃紙中間，自然干燥即可獲得血清蛋白的電泳圖譜，如下圖所示。(2)電泳：將直流穩(wěn)壓電泳儀的正極與下槽連接，負(fù)極與上槽連接特別提醒分離膠和濃縮膠單獨存在時具有神經(jīng)毒性，應(yīng)避免接觸皮膚。特別提醒分離膠和濃縮膠單獨存在時具有神經(jīng)毒性，應(yīng)避免接觸皮 下列關(guān)于點樣的敘述正確的是 ()。A．點樣液是血清和溴酚藍指示劑等體積混合液B．點樣需用微量加樣器C．點樣液是指新鮮血清D．點樣液可在市場上購買答案B【鞏固2】 下列關(guān)于點樣的敘述正確的是 ()?！眷柟?】下列各項中，除哪項外均為電泳使樣品中各分子分離的原因 ()。A．分子帶電性質(zhì)的差異 B．分子的大小C．分子的形狀 D．分子的變性溫度思維導(dǎo)圖：【例1】示例一提取和分離蛋白質(zhì)的原理下列各項中，除哪項外均為電泳使樣品中各分子分離的深度剖析電泳是指帶電粒子在電場作用下發(fā)生遷移的過程，樣品分子的帶電性質(zhì)不同、分子的大小和形狀不同都會影響帶電粒子在電場中的遷移速度，與分子的變性溫度無關(guān)，故正確答案選D項。答案D深度剖析電泳是指帶電粒子在電場作用下發(fā)生遷移的過程，樣品分歸納提升蛋白質(zhì)的分離方法及相關(guān)原理比較：方法原理凝膠色譜法根據(jù)相對分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)電泳法根據(jù)各種分子帶電性質(zhì)的差異以及分子本身大小、形狀的不同進行分離歸納提升蛋白質(zhì)的分離方法及相關(guān)原理比較：方法原理凝膠色譜法用聚丙烯酰胺凝膠電泳法分離和提取血清蛋白的實驗操作中，錯誤的是 ()。A．點樣時將樣品小心加到電泳樣品槽的膠面上B．電泳時，將穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀的電流穩(wěn)定在10mAC．染色時用0.05%考馬斯亮藍P250染色液D．脫色用7%醋酸浸泡漂洗數(shù)次，直至背景藍色褪去思維導(dǎo)圖：【例2】示例二提取和分離蛋白質(zhì)的過程用聚丙烯酰胺凝膠電泳法分離和提取血清蛋白的實驗深度剖析用聚丙烯酰胺凝膠電泳法提取分離蛋白質(zhì)的操作順序為：點樣→電泳→染色→脫色→制干膠板。點樣用微量加樣器取5μL樣品，加到樣品槽的膠面上。電泳時，打開電泳儀開關(guān)將電流調(diào)至10mA，待樣品進入分離膠時，將電流調(diào)至20～30mA。當(dāng)藍色染料遷移至距離橡膠框下緣1cm時，將電流調(diào)回到零，關(guān)閉電源。答案B深度剖析用聚丙烯酰胺凝膠電泳法提取分離蛋白質(zhì)的操作順序為：凝膠色譜法的原理———利用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)———技法必備蛋白質(zhì)的分離原理根據(jù)蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量的大小，利用具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠的分子篩作用來進行分離蛋白質(zhì)分子運動情況類型相對分子質(zhì)量大相對分子質(zhì)量小大小直徑較大直徑較小方向垂直向下運動無規(guī)則擴散速度較快較慢路徑較短較長洗脫次序先流出后流出凝膠色譜法的原理———利用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)———技法必備下圖是凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)的原理示意圖，據(jù)圖回答下列問題：能力展示下圖是凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)的原理示意圖，據(jù)圖回答下列問題：能(1)圖中A表示的含義是：相對分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)____；相對分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)__________________________。(2)圖中B表示的凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)的過程，指出圖中①②③④⑤各自的含義：①________________________________________________；②________________________________________________；③________________________________________________；④________________________________________________；⑤________________________________________________。(1)圖中A表示的含義是：相對分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)____；解析本題主要是對識圖能力考查。圖中A表示相對分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)通過凝膠層時擴散的特點，B表示蛋白質(zhì)混合液通過凝膠色譜柱被洗脫的過程。答案(1)因擴散作用進入凝膠顆粒內(nèi)部而被滯留被排阻在凝膠顆粒外面，在顆粒之間迅速通過(2)①蛋白質(zhì)混合物上柱②洗脫開始，相對分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)擴散進入凝膠顆粒內(nèi)部；相對分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)則被排阻于顆粒之外③相對分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)被滯留，相對分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)向下移動④相對分子質(zhì)量不同的分子完全分開⑤相對分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)行程較短，已從層析柱中洗脫出來，相對分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)還在行進中

解析本題主要是對識圖能力考查。圖中A表示相對分子質(zhì)量不同的下列關(guān)于電泳概念的理解，錯誤的是 ()。A．能進行電泳的物質(zhì)一般是帶電顆粒B．帶電顆粒向著與其電性相同的電極移動C．影響電泳速度的因素包括帶電顆粒的性質(zhì)、電場強度、溶液的pH等D．電泳支持物有濾紙、大分子凝膠、醋酸纖維薄膜等解析電泳是指帶電顆粒向著與其電性相反的電極移動的現(xiàn)象。答案B1.下列關(guān)于電泳概念的理解，錯誤的是 ()。1.電泳過程中，什么樣的分子遷移速度最快 ()。A．纖維狀、大分子B．纖維狀、小分子C．球狀、大分子 D．球狀、小分子解析電泳就是利用了分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)的差異以及分子本身的大小、形狀的不同而分離各種分子的。一般來說，球形分子比纖維狀分子易移動，小分子比大分子易移動。答案D2．電泳過程中，什么樣的分子遷移速度最快 ()。2．(1)目前常用的蛋白質(zhì)分離提純技術(shù)，包括________、____和________等。其中，________最為快捷靈敏、簡便易行。(2)蛋白質(zhì)含有游離的________和________，是________電解質(zhì)，在一定pH條件下帶有電荷。答案(1)離心技術(shù)層析技術(shù)電泳技術(shù)電泳技術(shù)(2)氨基羧基兩性3．(1)目前常用的蛋白質(zhì)分離提純技術(shù)，包括________、_課堂小結(jié)課堂小結(jié)第一節(jié)蛋白質(zhì)的提取和分離第一節(jié)蛋白質(zhì)的提取和分離課程標(biāo)準(zhǔn)1．嘗試蛋白質(zhì)的提取和分離。2．以動物血清為材料，提取其中的乳糖脫氫酶并分離其同工酶。課標(biāo)解讀1．簡述蛋白質(zhì)提取和分離的基本方法和基本原理。2．嘗試血清蛋白等的提取和電泳分離。課程標(biāo)準(zhǔn)將生物體內(nèi)的蛋白質(zhì)提取出來并加以分離，就可以得到_________、甚至是________的蛋白質(zhì)。目前常用的蛋白質(zhì)分離提純技術(shù)，包括_____技術(shù)、_____技術(shù)和_____技術(shù)等。其中，_____技術(shù)最為快捷靈敏、簡便易行。提取和分離蛋白質(zhì)的方法原理1．提取和分離蛋白質(zhì)的方法高純度的單一種類離心層析電泳電泳提取和分離蛋白質(zhì)的方法原理1．提取和分離蛋白質(zhì)的方法高純度的(1)概念蛋白質(zhì)含有游離的_____和_____，是_____電解質(zhì)，在一定___條件下帶有電荷，在電場中可以向與其自身所帶電荷_____的電極方向移動，這就是電泳現(xiàn)象。(2)原理蛋白質(zhì)所帶的電荷數(shù)_____，移動_____；電荷數(shù)相同時，相對分子質(zhì)量_____，移動_____。(3)結(jié)果不同蛋白質(zhì)的混合溶液，經(jīng)___________電泳后，會在_____上形成不同的_____。2．電泳技術(shù)氨基羧基兩性pH相反越多越快越小越快同一個電場凝膠帶紋2．電泳技術(shù)氨基羧基兩性pH相反越多越快越小越快同一個電場凝 洗脫法分離蛋白質(zhì)利用的原理是什么？它與電泳技術(shù)的原理有何不同？提示洗脫法是依據(jù)蛋白質(zhì)分子質(zhì)量大小，利用凝膠色譜柱使大分子蛋白質(zhì)優(yōu)先洗脫出來，而小分子蛋白質(zhì)后分離出來，稱為凝膠色譜法。而電泳法技術(shù)則是依據(jù)各種分子帶電性質(zhì)的差異，以及分子本身的大小、形狀不同，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而實現(xiàn)在電場中將各種分子分離。[思維激活1] 洗脫法分離蛋白質(zhì)利用的原理是什么？它與電泳技術(shù)的(1)蛋白質(zhì)的性質(zhì)蛋白質(zhì)含有游離的氨基和羧基，是兩性電解質(zhì)，在一定pH條件下帶有電荷。(2)電泳現(xiàn)象作為帶電粒子，蛋白質(zhì)在電場中可以向與其自身所帶電荷相反的電極方向移動，這就是電泳現(xiàn)象。(3)電泳原理蛋白質(zhì)所帶的電荷數(shù)越多，移動得越快；電荷數(shù)相同時，相對分子質(zhì)量越小，則移動越快。1．電泳技術(shù)分離蛋白質(zhì)的原理1．電泳技術(shù)分離蛋白質(zhì)的原理(1)聚丙烯酰胺凝膠電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳是以聚丙烯酰胺凝膠為載體的一種區(qū)帶電泳。該凝膠由丙烯酰胺(Acr)和交聯(lián)劑N，N′—甲基雙丙烯聚酰胺(Bis)聚合而成。Acr和Bis單獨存在或混合在一起時是穩(wěn)定的，且具有神經(jīng)毒性，操作時應(yīng)戴手套，避免接觸皮膚，但在具有自由基團體系時就能聚合。引發(fā)自由基團的方法有化學(xué)法和光化學(xué)法兩種。采用不同濃度的Acr、Bis、Ap、TEMED使之聚合，產(chǎn)生不同孔徑的凝膠。因此，可按分離物質(zhì)的大小、形狀來選擇凝膠濃度。(2)電泳結(jié)果2．聚丙烯酰胺凝膠電泳的結(jié)果及其鑒定2．聚丙烯酰胺凝膠電泳的結(jié)果及其鑒定不同的蛋白質(zhì)的混合溶液，在經(jīng)過同一個電場電泳后，會在凝膠上形成不同的帶紋。每一種帶紋可能就是一種蛋白質(zhì)。(3)結(jié)果鑒定將帶紋一個一個地剪下來，分別予以洗脫，然后對洗脫液中蛋白質(zhì)做進一步的分離。如果不能再分離，則這個帶紋中很可能含有一種單純蛋白質(zhì)；如果還能再分離，則這個帶紋中含有多種蛋白質(zhì)，需要作進一步分離，直至提純。不同的蛋白質(zhì)的混合溶液，在經(jīng)過同一個電場電泳后，會在凝膠上形 電泳是指帶電粒子在電場的作用下向著與其所帶電荷________方向的電極移動 ()。A．相同 B．相反 C．相對 D．相向解析在一定pH作用下，生物大分子中有某些可解離的基團，這些基團會帶上正電荷或負(fù)電荷，在電場作用下，這些帶電分子會向著與其所帶電荷相反的電極移動。答案B【鞏固1】 電泳是指帶電粒子在電場的作用下向著與其所帶電荷______(1)點樣：樣品的成分包括_________5μL、與質(zhì)量濃度為0.4g/mL的_____溶液及質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的_______指示劑_______混勻后，用___________吸取樣品加到電泳樣品槽的_____上。(2)電泳：打開電源，將電流調(diào)節(jié)至___mA，待樣品進入分離膠后，改為________mA。當(dāng)溴酚藍前沿距離硅膠框下緣_____時，將電流調(diào)回零，關(guān)閉電源。提取和分離蛋白質(zhì)的過程1．血清蛋白的提取和分離新制血清蔗糖溴酚藍等體積微量加樣器膠面1020～301cm提取和分離蛋白質(zhì)的過程1．血清蛋白的提取和分離新制血清蔗糖溴(3)染色：將凝膠放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為______________________染色液中染色___min。(4)脫色：用體積分?jǐn)?shù)為__________溶液浸泡漂洗數(shù)次，每隔_____h更換一次脫色液。(5)制干膠板：可獲得血清蛋白的__________。(1)加拿大科學(xué)家班廷等人發(fā)現(xiàn)和提純了_______，救助了數(shù)千萬的糖尿病患者。(2)在癌變檢測中，現(xiàn)在只需從早期患者的_____、_____或___________中提取少量蛋白質(zhì)樣品，采用_______________技術(shù)，就可以更加快速、簡便、準(zhǔn)確地對_________作出診斷。能夠提前3～5年發(fā)現(xiàn)一些_________，從而為患者做出及時的腫瘤預(yù)警，爭得更多寶貴的治療時間。2．蛋白質(zhì)提取與分離的實踐意義0.05%的考馬斯亮藍R250307%的醋酸1～2電泳譜帶胰島素尿液血液細(xì)胞裂解液蛋白質(zhì)指紋圖譜細(xì)胞癌變變異基因(3)染色：將凝膠放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為______________ 除了上述分離方法，你還知道哪種方法可以分離蛋白質(zhì)？它依據(jù)的原理是什么？提示透析法。依據(jù)的原理是半透膜只允許小分子透過，不允許大分子透過。[思維激活2] 除了上述分離方法，你還知道哪種方法可以分離血清蛋白的提取與分離(1)點樣：取新制血清5μL、與質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.4g/mL蔗糖溶液及質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的溴酚藍指示劑等體積混合均勻后，用微量加樣器取5μL樣品，小心地將樣品加到樣品糟的膠面上(如下圖所示)。血清蛋白的提取與分離(2)電泳：將直流穩(wěn)壓電泳儀的正極與下槽連接，負(fù)極與上槽連接(方向切勿接錯)；接通冷卻水，打開電泳儀開關(guān)。開始時將電流調(diào)至10mA，待樣品進入分離膠時，將電流調(diào)至20～30mA。當(dāng)藍色染料遷移至距離橡膠框下緣1cm時，將電流調(diào)回到零，關(guān)閉電源。(3)染色：將凝膠放入0.05%考馬斯亮藍R250染色液中，使染色液沒過膠板，染色30min左右。(4)脫色：用7%醋酸浸泡漂洗數(shù)次，直至背景藍色褪去。如用50℃水浴或脫色搖床，則可縮短脫色時間。(5)制干膠板：將已脫色的凝膠板放在保存液中浸泡3～4h，然后將凝膠板放在兩層透氣玻璃紙中間，自然干燥即可獲得血清蛋白的電泳圖譜，如下圖所示。(2)電泳：將直流穩(wěn)壓電泳儀的正極與下槽連接，負(fù)極與上槽連接特別提醒分離膠和濃縮膠單獨存在時具有神經(jīng)毒性，應(yīng)避免接觸皮膚。特別提醒分離膠和濃縮膠單獨存在時具有神經(jīng)毒性，應(yīng)避免接觸皮 下列關(guān)于點樣的敘述正確的是 ()。A．點樣液是血清和溴酚藍指示劑等體積混合液B．點樣需用微量加樣器C．點樣液是指新鮮血清D．點樣液可在市場上購買答案B【鞏固2】 下列關(guān)于點樣的敘述正確的是 ()?！眷柟?】下列各項中，除哪項外均為電泳使樣品中各分子分離的原因 ()。A．分子帶電性質(zhì)的差異 B．分子的大小C．分子的形狀 D．分子的變性溫度思維導(dǎo)圖：【例1】示例一提取和分離蛋白質(zhì)的原理下列各項中，除哪項外均為電泳使樣品中各分子分離的深度剖析電泳是指帶電粒子在電場作用下發(fā)生遷移的過程，樣品分子的帶電性質(zhì)不同、分子的大小和形狀不同都會影響帶電粒子在電場中的遷移速度，與分子的變性溫度無關(guān)，故正確答案選D項。答案D深度剖析電泳是指帶電粒子在電場作用下發(fā)生遷移的過程，樣品分歸納提升蛋白質(zhì)的分離方法及相關(guān)原理比較：方法原理凝膠色譜法根據(jù)相對分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)電泳法根據(jù)各種分子帶電性質(zhì)的差異以及分子本身大小、形狀的不同進行分離歸納提升蛋白質(zhì)的分離方法及相關(guān)原理比較：方法原理凝膠色譜法用聚丙烯酰胺凝膠電泳法分離和提取血清蛋白的實驗操作中，錯誤的是 ()。A．點樣時將樣品小心加到電泳樣品槽的膠面上B．電泳時，將穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀的電流穩(wěn)定在10mAC．染色時用0.05%考馬斯亮藍P250染色液D．脫色用7%醋酸浸泡漂洗數(shù)次，直至背景藍色褪去思維導(dǎo)圖：【例2】示例二提取和分離蛋白質(zhì)的過程用聚丙烯酰胺凝膠電泳法分離和提取血清蛋白的實驗深度剖析用聚丙烯酰胺凝膠電泳法提取分離蛋白質(zhì)的操作順序為：點樣→電泳→染色→脫色→制干膠板。點樣用微量加樣器取5μL樣品，加到樣品槽的膠面上。電泳時，打開電泳儀開關(guān)將電流調(diào)至10mA，待樣品進入分離膠時，將電流調(diào)至20～30mA。當(dāng)藍色染料遷移至距離橡膠框下緣1cm時，將電流調(diào)回到零，關(guān)閉電源。答案B深度剖析用聚丙烯酰胺凝膠電泳法提取分離蛋白質(zhì)的操作順序為：凝膠色譜法的原理———利用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)———技法必備蛋白質(zhì)的分離原理根據(jù)蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量的大小，利用具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠的分子篩作用來進行分離蛋白質(zhì)分子運動情況類型相對分子質(zhì)量大相對分子質(zhì)量小大小直徑較大直徑較小方向垂直向下運動無規(guī)則擴散速度較快較慢路徑較短較長洗脫次序先流出后流出凝膠色譜法的原理———利用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)———技法必備下圖是凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)的原理示意圖，據(jù)圖回答下列問題：能力展示下圖是凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)的原理示意圖，據(jù)圖回答下列問題：能(1)圖中A表示的含義是：相對分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)____；相對分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)__________________________。(2)圖中B表示的凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)的過程，指出圖中①②③④⑤各自的含義：①________________________________________________；②________________________________________