注射劑的無菌保證和工藝研究藥品管理法與藥品生產(chǎn)2001年2月28日修訂的《藥品管理法》第十條，經(jīng)修訂后明確要求：“藥品必須按照（原法規(guī)：工藝規(guī)程）國家藥品標(biāo)準(zhǔn)和國務(wù)院藥品監(jiān)督管理部門批準(zhǔn)的生產(chǎn)工藝進(jìn)行生產(chǎn)，…。改變影響藥品質(zhì)量的生產(chǎn)工藝的，必須報(bào)原批準(zhǔn)部門審核批準(zhǔn)?！鄙a(chǎn)工藝的源頭：藥品研發(fā)中經(jīng)工藝研究與驗(yàn)證獲得的申報(bào)工藝2注射劑的無菌保證和工藝研究目錄一、注射劑的特點(diǎn)二、注射劑的無菌三、相關(guān)知識(shí)簡(jiǎn)介四、注射劑的無菌保證工藝研究五、總結(jié)3注射劑的無菌保證和工藝研究一、注射劑的特點(diǎn)不通過人體固有的保護(hù)屏障，直接進(jìn)入血液起效快、安全性要求高。無菌嚴(yán)格控制熱原及雜質(zhì)4注射劑的無菌保證和工藝研究二、注射劑的無菌歷史的教訓(xùn)：1970-1975年，美國因輸液污染導(dǎo)致敗血癥400多起，但問題產(chǎn)品全部通過了無菌檢查。2006年，安徽華源的“欣氟”事件：滅菌工藝與無菌檢查5注射劑的無菌保證和工藝研究方法本身是否經(jīng)過充分驗(yàn)證——05版藥典的新要求。檢測(cè)結(jié)果有無代表性。抽檢，樣本數(shù)一般為20/批。樣本數(shù)、污染率及通過無菌檢查（取不到污染樣）的概率遵循二項(xiàng)式定律（泊松分布）通過無菌檢查的概率P=(1-q)n式中：q為批產(chǎn)品污染率

n為樣本數(shù)無菌檢查的局限性6注射劑的無菌保證和工藝研究計(jì)算實(shí)例假設(shè)當(dāng)某批藥品的實(shí)際染菌率為5%時(shí)，如果根據(jù)通常取樣的數(shù)量為20支，則該批藥品通過無菌檢查的概率P=(1-q)n=（1-0.05）20=0.359

即有35.9%的可能性，該批藥品將會(huì)被判定為無菌。

7注射劑的無菌保證和工藝研究無菌檢查特性數(shù)據(jù)表編號(hào)污染率通過無菌檢查的概率n=1n=2n=4n=10n=15n=20n=30001595908160463621090816635211231585725220944208064411141577.6422.36560.1%5%中國藥典現(xiàn)取樣數(shù)為：20，如污染率為5%，從曲線得，檢出概率為64%。8注射劑的無菌保證和工藝研究如何保證注射劑無菌合格呢？9注射劑的無菌保證和工藝研究質(zhì)量控制的三種模式檢驗(yàn)控制質(zhì)量（QualitybyTest）不夠全面生產(chǎn)控制質(zhì)量（QualitybyManufacture）將質(zhì)控延伸到生產(chǎn)環(huán)節(jié)設(shè)計(jì)控制質(zhì)量（QualitybyDesign，QbD）

全方位的控制、發(fā)展的方向三者互為補(bǔ)充，后者包括前者

10注射劑的無菌保證和工藝研究保證注射劑無菌的措施研究階段研究設(shè)計(jì)出符合無菌要求的產(chǎn)品（包括合適的劑型、滅菌工藝、包裝材料）——前提與源頭生產(chǎn)階段批產(chǎn)后應(yīng)嚴(yán)格按照研究驗(yàn)證后的工藝進(jìn)行生產(chǎn)11注射劑的無菌保證和工藝研究三、相關(guān)知識(shí)簡(jiǎn)介D值（微生物的耐熱參數(shù)）：在一定溫度下，將微生物殺滅90%所需的時(shí)間，以分鐘為單位。一般小于1分鐘。F0值：產(chǎn)品在121℃下的標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間。滅菌率L：某溫度下滅菌1分鐘所對(duì)應(yīng)的F0值。12注射劑的無菌保證和工藝研究Z=10℃時(shí)，不同溫度下的滅菌率和所相當(dāng)?shù)臏缇鷷r(shí)間溫度（℃）滅菌率L滅菌時(shí)間（分鐘）1211.001.001200.7941.2591150.2513.9841100.07912.6001050.02540.0001000.008125.0013注射劑的無菌保證和工藝研究濕熱滅菌法：將物品置于滅菌柜內(nèi)利用高壓飽和蒸汽、過熱水噴淋等手段使微生物菌體中的蛋白質(zhì)、核酸發(fā)生變性而殺滅微生物的方法。濕熱滅菌法通常分為過度殺滅法和殘存概率法兩種。14注射劑的無菌保證和工藝研究過度殺滅法F0不低于12適用于熱穩(wěn)定性好的產(chǎn)品以徹底殺滅任何污染的微生物為實(shí)現(xiàn)無菌的手段無菌保證值不小于615注射劑的無菌保證和工藝研究殘存概率法滅菌過程8≤F0<12分鐘適用于熱穩(wěn)定性不很好的產(chǎn)品通過控制工藝過程的微生物污染和滅菌工藝參數(shù)使產(chǎn)品無菌無菌保證值不小于616注射劑的無菌保證和工藝研究其它濕熱滅菌工藝F0值低于8的滅菌工藝熱穩(wěn)定性很差的產(chǎn)品以無菌生產(chǎn)工藝為基礎(chǔ)，滅菌是提高無菌保證水平的輔助手段不計(jì)算F0值，污染概率不大于0.1%除血液制品外，發(fā)達(dá)國家的大容量注射劑很少采用此類工藝小容量注射劑也較少采用17注射劑的無菌保證和工藝研究SAL

（無菌保證水平）：產(chǎn)品經(jīng)滅菌后微生物殘存概率的負(fù)對(duì)數(shù)。國際上規(guī)定，濕熱滅菌法的SAL不得低于6。SAL＝F0/D121–lgN0N0：滅菌前的染菌量

SAL除了和F0有關(guān)，還與染菌量（N0）及所染菌的耐熱參數(shù)（D121）有關(guān)。18注射劑的無菌保證和工藝研究F0和SAL的關(guān)系：

F0=8N0=100SAL＝8/1–lg100

=6D121=1時(shí)注意：污染菌在不同的產(chǎn)品中的耐熱性可能不同，故驗(yàn)證時(shí)應(yīng)采用實(shí)際的藥液。

eg:嗜熱脂肪芽孢桿菌（常規(guī)D值在1.5-3.0分鐘）在復(fù)方氨基酸注射液中的D值為0.8分鐘左右，在30％的葡萄糖溶液中的D值為2.2分鐘。19注射劑的無菌保證和工藝研究無菌保證水平應(yīng)用實(shí)例1假定N0為100cfu/瓶，D值為1分鐘，要達(dá)到SAL不小于6，滅菌F0值應(yīng)達(dá)到多少？相當(dāng)于115℃下滅菌多少分鐘？F0=（SAL＋lgN0）×D=（6+lg100）×1=8分鐘。換算成115℃下的F0/L115=8/0.25=32分鐘。殘存概率法有效的基礎(chǔ)：N0≤100，D≤1。20注射劑的無菌保證和工藝研究某輸液采用110℃，30分鐘的滅菌程序，起始污染微生物仍為100cfu/瓶，D值為0.5分鐘，經(jīng)計(jì)算此時(shí)的無菌保證值和殘存微生物污染的概率為：SAL=F0/D-lgN0=L110×t/D-lg100=0.08×30/0.5-2=2.8殘存微生物的概率為10-2.8＝0.158％通過無菌檢查的概率為(1-0.158％)20=96.9%。無菌檢查的結(jié)果不能保證產(chǎn)品的SAL符合要求（

≤6）。無菌保證水平應(yīng)用實(shí)例221注射劑的無菌保證和工藝研究四、注射劑的無菌保證工藝研究無菌保證理化指標(biāo)滅菌和化學(xué)指標(biāo)的平衡點(diǎn)？22注射劑的無菌保證和工藝研究國食藥監(jiān)注[2008]7號(hào)通知

08年1月10日國家局發(fā)布了化學(xué)藥品注射劑基本技術(shù)要求。國家局已受理但尚未批準(zhǔn)注冊(cè)的化學(xué)藥品注射劑應(yīng)參照《技術(shù)要求》進(jìn)行研究。已經(jīng)批準(zhǔn)注冊(cè)的化學(xué)藥品注射劑也應(yīng)參照《技術(shù)要求》進(jìn)行相關(guān)研究（完善滅菌工藝等），并在申報(bào)再注冊(cè)時(shí)提供相關(guān)研究資料。24注射劑的無菌保證和工藝研究劑型選擇的合理性要權(quán)衡考慮各劑型的無菌保證水平、雜質(zhì)的控制水平、工藝的可行性、臨床使用的方便等。首先要考慮被選劑型可采用的滅菌工藝的無菌保證水平的高低。原則上首選劑型應(yīng)能采用終端滅菌工藝，并保證SAL不小于6。對(duì)于有充分的依據(jù)證明不適宜采用終端滅菌工藝且臨床必需注射給藥的品種，可考慮選擇采用無菌生產(chǎn)工藝的劑型。通常無菌生產(chǎn)工藝僅限于粉針劑或部分小容量注射劑。

25注射劑的無菌保證和工藝研究輸液產(chǎn)品滅菌工藝的選擇原則

應(yīng)采取終端滅菌工藝，建議首選過度殺滅法（F0≥12）。例如：氯化鈉大輸液。如產(chǎn)品不能耐受，可采用殘存概率法(8≤F0<12)，但均應(yīng)保證產(chǎn)品滅菌后的SAL不小于6。采用其它F0值小于8的終端滅菌條件的工藝，原則上不予認(rèn)可。如產(chǎn)品不能耐受終端滅菌工藝條件，應(yīng)盡量?jī)?yōu)化處方工藝，以改善制劑的耐熱性。如確實(shí)無法耐受，則應(yīng)考慮選擇其他劑型，而非大容量注射劑。

26注射劑的無菌保證和工藝研究工藝驗(yàn)證要求主要包括以下試驗(yàn)：滅菌前微生物污染水平測(cè)定，包括滅菌前產(chǎn)品中的污染菌及其耐熱性；熱穿透試驗(yàn)；微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)：生物指示劑的耐熱性及數(shù)量應(yīng)對(duì)滅菌工藝構(gòu)成必要的挑戰(zhàn)。過度殺滅法（F0≥12）不要求此項(xiàng)驗(yàn)證

27注射劑的無菌保證和工藝研究粉針劑的工藝與驗(yàn)證粉針劑的無菌保證水平應(yīng)能保證SAL不大于10-3。常規(guī)的工藝驗(yàn)證試驗(yàn)包括：培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)：至少在線灌裝三批，每批的批量詳見附表，每瓶產(chǎn)品均應(yīng)進(jìn)行無菌檢查。除菌過濾系統(tǒng)適應(yīng)性驗(yàn)證：包括過濾系統(tǒng)相容性測(cè)試、過濾前后濾膜完整性測(cè)試，必要時(shí)尚需進(jìn)行濾膜的微生物截留量測(cè)試。

28注射劑的無菌保證和工藝研究附表：培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)的批量與判斷合格的標(biāo)準(zhǔn)批量（瓶）3000475063007760允許染菌的數(shù)量（瓶）012329注射劑的無菌保證和工藝研究小容量注射劑的工藝與驗(yàn)證應(yīng)首選終端滅菌工藝，相關(guān)技術(shù)要求同大容量注射劑。如有充分的依據(jù)證明不能采用終端滅菌工藝，且為臨床必需注射給藥的品種，可考慮采用無菌生產(chǎn)工藝，相關(guān)技術(shù)要求同凍干粉針劑。

30注射劑的無菌保證和工藝研究歐盟1999年8月正式開始執(zhí)行滅菌方法選擇的決策樹決策樹的作用是在考慮各種復(fù)雜因素的情況下，輔助選擇最佳的滅菌方法歐盟滅菌方法選擇的決策樹31注射劑的無菌保證和工藝研究32注射劑的無菌保證和工藝研究決策樹越往下，風(fēng)險(xiǎn)越大需要提供的研究與驗(yàn)證的證據(jù)也越多33注射劑的無菌保證和工藝研究工藝選擇的基本原則:無菌產(chǎn)品應(yīng)在灌裝到最終容器后進(jìn)行最終滅菌（首選）如因產(chǎn)品對(duì)熱不穩(wěn)定不能進(jìn)行