疑難血型鑒定和臨床輸血紅細(xì)胞血型ISBT分類血型系統(tǒng)：由單一基因位點(diǎn)、或兩個(gè)或多個(gè)相鄰但相互之間極少重組同源基因所編碼的一個(gè)或多個(gè)抗原組成。（30個(gè)）血型集合：在血清學(xué)、生物化學(xué)或遺傳學(xué)上有相關(guān)性、目前不能進(jìn)一步證明其為一個(gè)血型系統(tǒng)的一組抗原。（5個(gè)）血型系列：目前不能歸類于血型系統(tǒng)和血型集合的血型抗原。低頻率抗原：抗原頻率在人群中小于１%。（700系列，22個(gè)抗原）高頻率抗原：抗原頻率在人群中大于99%。（901系列，11個(gè)抗原）2疑難血型鑒定和臨床輸血血型系統(tǒng)目前為止發(fā)現(xiàn)30個(gè)血型系統(tǒng)。臨床輸血最重要的兩個(gè)血型系統(tǒng)：ABO、Rh系統(tǒng)?！杜R床輸血技術(shù)規(guī)范》第十五條

輸血科（血庫(kù)）要逐項(xiàng)核對(duì)輸血申請(qǐng)單、受血者和供血者血樣，復(fù)查受血者和供血者ABO血型（正、反定型），并常規(guī)檢查患者Rh（D）血型（急診搶救患者緊急輸血時(shí)Rh（D）檢查可除外），正確無(wú)誤時(shí)可進(jìn)行交叉配血。

3疑難血型鑒定和臨床輸血一、ABO血型ABO血型鑒定是輸血前最重要的血清學(xué)檢測(cè)，必須保證ABO血型鑒定系統(tǒng)的安全性和敏感性。應(yīng)盡可能運(yùn)用全自動(dòng)檢測(cè)系統(tǒng)，以減少結(jié)果解釋和抄錄錯(cuò)誤的風(fēng)險(xiǎn)。4疑難血型鑒定和臨床輸血ABO血型ABO血型定型的方法正反定型不符的原因解決正反定型不符的程序ABO亞型ABO血型定型常見(jiàn)問(wèn)題的解決方法ABO血型與臨床輸血5疑難血型鑒定和臨床輸血ABO血型的分型原則6疑難血型鑒定和臨床輸血ABO血型的定型

ABO定型必須包括正定型和反定型，正反定型一致才能確定血型。正定型

使用單克隆抗-A和單克隆抗-B試劑檢測(cè)

紅細(xì)胞抗原。反定型使用A1和B型試劑紅細(xì)胞檢測(cè)血清中的抗體。7疑難血型鑒定和臨床輸血ABO血型定型方法獻(xiàn)血者：微量板法、微柱凝集法、紙片

（玻片）法、試管法。受血者：微柱凝集法、微量板法、試管法。不推薦使用紙片（玻片）法

紙片（玻片）法定型的缺點(diǎn)

1、必須在2-3分鐘內(nèi)看結(jié)果，時(shí)間略長(zhǎng)，標(biāo)本干燥，

易將紅細(xì)胞聚集誤判為凝集。

2、無(wú)法檢出弱抗原、抗體。

3、無(wú)法觀察紅細(xì)胞的混合外觀現(xiàn)象。

4、無(wú)法觀察紅細(xì)胞的溶血現(xiàn)象。8疑難血型鑒定和臨床輸血ABO血型檢測(cè)：正反定型不符

ABO正反定型相符：正定型反應(yīng)強(qiáng)度4+；反定型反應(yīng)強(qiáng)度≥2+。ABO正反定型不符的定義和范圍ABO正反定型不符（多或少抗原、抗體）。ABO正反定型相符，但弱反應(yīng)，正定型反應(yīng)強(qiáng)度＜4+，反定型反應(yīng)強(qiáng)度＜2+。ABO正反定型相符，但反定型反應(yīng)強(qiáng)度差別＞2+以上。9疑難血型鑒定和臨床輸血正反定型不符的原因?qū)嶒?yàn)技術(shù)及管理原因生理性因素疾病影響臨床治療的影響10疑難血型鑒定和臨床輸血正反定型不符：1、實(shí)驗(yàn)技術(shù)及管理原因試劑質(zhì)量問(wèn)題：過(guò)期失效、被污染及使用未經(jīng)確認(rèn)的試劑等。儀器設(shè)備問(wèn)題：設(shè)備故障及使用未經(jīng)確認(rèn)的設(shè)備等。試驗(yàn)技術(shù)人員的操作問(wèn)題：技術(shù)錯(cuò)誤、判讀錯(cuò)誤（溶血、弱凝集、混合外觀）、記錄錯(cuò)誤等。標(biāo)本問(wèn)題：采樣不規(guī)范（靜脈輸液處采樣、非抗凝管）、標(biāo)本接收不規(guī)范（溶血、乳糜、變質(zhì)標(biāo)本）等。11疑難血型鑒定和臨床輸血正反定型不符：2、生理性因素年齡：老年人（抗體減弱）、4個(gè)月前的嬰兒（抗原或抗體不成熟）。ABO亞型：抗原減弱或血清中出現(xiàn)意外抗體（抗-A1、抗-B）。意外抗體：受檢者血清中存在室溫反應(yīng)性IgM類同種抗體（MN、Lewis、P血型系統(tǒng)同種抗體）、冷凝集素，這些意外抗體能與試劑紅細(xì)胞發(fā)生凝集，造成反定型異常。“先天性”無(wú)ABO抗體前帶現(xiàn)象12疑難血型鑒定和臨床輸血正反定型不符：生理性因素嵌合體血型（卡米拉，chimerism）：這種血型者體內(nèi)有兩類血型紅細(xì)胞群體，正定型時(shí)可出現(xiàn)“混合外觀”凝集現(xiàn)象。個(gè)體特異性：個(gè)別人血清中ABO血型物質(zhì)過(guò)高，可干擾正定型。紅細(xì)胞多凝集現(xiàn)象：紅細(xì)胞因遺傳的表面異常，發(fā)生多凝集現(xiàn)象。試劑紅細(xì)胞保護(hù)劑因素：患者體內(nèi)可能含有針對(duì)試劑紅細(xì)胞保護(hù)劑成分相應(yīng)的抗體，導(dǎo)致反定型發(fā)生與ABO血型抗體無(wú)關(guān)的紅細(xì)胞凝集反應(yīng)。13疑難血型鑒定和臨床輸血正反定型不符：3、疾病的影響白血病或其它造血系統(tǒng)惡性疾?。涸斐葾BO（或RhD）抗原減弱甚至消失、ABO抗體減弱。低丙種球蛋白血癥：因免疫球蛋白水平下降而使反定型時(shí)不凝集或弱凝集。肝臟疾病、結(jié)核病等：導(dǎo)致血漿白蛋白/球蛋白比例倒置，干擾反定型。真性紅細(xì)胞增多癥、多發(fā)性骨髓瘤等：紅細(xì)胞呈錢串狀干擾正定型，多發(fā)性骨髓瘤患者血漿中的M蛋白會(huì)干擾反定型。14疑難血型鑒定和臨床輸血正反定型不符：疾病的影響自身抗體：自身免疫性溶血性貧血、淋巴瘤、膠原疾?。t斑狼瘡）等患者的自身抗體會(huì)干擾反定型。紅細(xì)胞自身凝集：患者體內(nèi)存在高效價(jià)冷凝集素使紅細(xì)胞發(fā)生自發(fā)的凝集現(xiàn)象。感染：G-菌感染可導(dǎo)致類B、全凝集或多凝集，干擾正定型。紅細(xì)胞致敏：受免疫球蛋白致敏的紅細(xì)胞，在含高蛋白介質(zhì)的試劑中可發(fā)生凝集。15疑難血型鑒定和臨床輸血正反定型不符：疾病的影響急性大量失血：外周血網(wǎng)織紅細(xì)胞增多，并出現(xiàn)有核紅細(xì)胞，使正定型減弱。血型型物質(zhì)過(guò)高：某些疾病（如腹腔癌）導(dǎo)致血漿中存在大量的型物質(zhì)，中和抗-A或抗-B抗體，引起正定型為假陰性或弱陽(yáng)性。16疑難血型鑒定和臨床輸血正反定型不符：4、臨床治療影響近期輸血：患者近期輸入異型紅細(xì)胞，使正定型時(shí)顯示“混合外觀”現(xiàn)象，輸入異型的血漿會(huì)干擾反定型。造血干細(xì)胞移植：ABO不同型造血干細(xì)胞移植，可影響正、反定型。單采血漿或血漿置換治療：血漿稀釋會(huì)造成反定型減弱，如果使用大量的非同型的血漿做置換治療，標(biāo)本中血漿為輸入的，可能造成反定型異常。17疑難血型鑒定和臨床輸血正反定型不符：臨床治療影響免疫抑制治療：可能會(huì)導(dǎo)致抗體減弱。大量輸液：抗體被稀釋，反定型減弱。靜脈輸入高分子藥物：如甘露醇、右旋糖苷、羥乙基淀粉等會(huì)干擾正反定型。18疑難血型鑒定和臨床輸血正反定型不符結(jié)果分類：紅細(xì)胞ABO亞型血液病致抗原減弱血型型物質(zhì)過(guò)高急性大量失血4個(gè)月內(nèi)嬰兒近期輸（異型）血造血干細(xì)胞移植（異型）紅細(xì)胞自身凝集直抗強(qiáng)陽(yáng)性紅細(xì)胞獲得性B、多凝集紅細(xì)胞紅細(xì)胞血型嵌合體等19疑難血型鑒定和臨床輸血正反定型不符結(jié)果分類：血漿年齡（4個(gè)月內(nèi)嬰兒、老年人）。白血病、淋巴瘤及使用免疫抑制劑的患者、先天丙種球蛋白缺乏的患者、免疫缺陷的患者抗體減弱。先天無(wú)ABO抗體。前帶現(xiàn)象。單采血漿或血漿置換治療。大量輸液。意外抗體。ABO不同型造血干細(xì)胞移植患者。近期輸入異型血漿。緡錢狀紅細(xì)胞非特異性凝集等。20疑難血型鑒定和臨床輸血正反定型不符處理的程序排除人為因素及操作失誤。查閱、詢問(wèn)臨床資料，設(shè)計(jì)針對(duì)性試驗(yàn)。選擇試管法做正反定型。ABO血型鑒定的特殊技術(shù)。21疑難血型鑒定和臨床輸血

一、詢問(wèn)、查閱臨床資料

（臨床輸血申請(qǐng)單）

患者的年齡患者的臨床診斷患者的近期輸血史患者的近期用藥史、治療史患者是否進(jìn)行了造血干細(xì)胞移植患者以前的血型22疑難血型鑒定和臨床輸血

二、試管法

試管法定型的優(yōu)點(diǎn)可以反復(fù)離心看結(jié)果?？梢噪S意延長(zhǎng)抗原抗體反應(yīng)時(shí)間，可以改變反應(yīng)溫度（4℃、37℃孵育），有利于弱抗原、抗體的檢出或排除冷凝集素的干擾?？梢杂^察紅細(xì)胞混合外觀現(xiàn)象。可以觀察紅細(xì)胞溶血現(xiàn)象。23疑難血型鑒定和臨床輸血試管法正反定型24疑難血型鑒定和臨床輸血ABO正定型中各種試劑用途抗-A、抗-B抗-AB

確認(rèn)弱A、B抗原，與弱A、B抗原親和力強(qiáng),會(huì)產(chǎn)生較強(qiáng)反應(yīng)，主要用于鑒定Ax和Bx?？?H

用于檢查ABO亞型及孟買及類孟買型?？?A1

用于A亞型檢測(cè)。25疑難血型鑒定和臨床輸血ABO反定型中各種試劑用途A1、B細(xì)胞O細(xì)胞檢查是否存在ABO系統(tǒng)以外室溫反應(yīng)性抗體干擾ABO反定型。自身對(duì)照用于確認(rèn)正反定型結(jié)果的有效性,排除自身抗體對(duì)定型的干擾(如冷凝集等)。A2細(xì)胞用于A亞型的鑒定（A亞型產(chǎn)生抗-A1抗體）。26疑難血型鑒定和臨床輸血三、ABO血型鑒定的特殊技術(shù)吸收放散試驗(yàn)唾液型物質(zhì)檢測(cè)毛細(xì)管離心分離自身和輸入紅細(xì)胞DTT處理自身凝集紅細(xì)胞分子生物學(xué)檢測(cè)（血型基因）27疑難血型鑒定和臨床輸血吸收放散試驗(yàn)

表達(dá)弱A和弱B抗原的紅細(xì)胞與相應(yīng)抗體反應(yīng)不出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，但可以吸收相應(yīng)的抗體，并且可以將其放散出來(lái)，通過(guò)檢測(cè)放散出來(lái)的抗體，可以證明弱A或弱B抗原的存在。吸收用RBC：鹽水洗滌3次的待檢壓積RBC1ml。吸收用的標(biāo)準(zhǔn)血清：人源或可用于吸收放散的單克隆抗-A、抗-B。將壓積RBC和標(biāo)清按等體積比例混合，在4℃孵育至少1小時(shí)，期間每隔15分鐘混勻一次。用冷鹽水洗滌孵育后的細(xì)胞4-6次，得到壓積RBC，加入等量鹽水。56℃水浴震蕩10分鐘，離心獲得上清即為放散液。用標(biāo)準(zhǔn)試劑紅細(xì)胞檢測(cè)放散液。28疑難血型鑒定和臨床輸血唾液型物質(zhì)檢測(cè)

大約78%的個(gè)體具有Se基因，它控制著產(chǎn)生水溶性的ABH抗原的分泌。通過(guò)檢測(cè)分泌型人唾液中的ABH物質(zhì)可作血型鑒定。用于：ABO亞型、近期輸血史等型物質(zhì)準(zhǔn)備：1-2ml唾液，沸水煮10分鐘，離心后得到的上清。標(biāo)清的修正：標(biāo)清用鹽水稀釋至與相應(yīng)紅細(xì)胞產(chǎn)生4+的最高稀釋度。中和：將上清與修正的標(biāo)清等體積混合,室溫放置30分鐘。檢測(cè)：用Ac檢測(cè)中和后的抗-A,Bc檢測(cè)中和后的抗-B，Oc檢測(cè)中和后的抗-H。結(jié)果判斷：通過(guò)ABH抗血清的抑制試驗(yàn)證明ABH抗原存在于唾液中。29疑難血型鑒定和臨床輸血毛細(xì)管離心分離自身和輸入紅細(xì)胞

新生成的自體紅細(xì)胞比輸入的舊紅細(xì)胞密度小，可以通過(guò)離心方法與輸入的紅細(xì)胞分離開(kāi)。用鹽水洗滌紅細(xì)胞3次，在保留白膜層的情況下盡可能去掉上清，混勻。在微量紅細(xì)胞比積管中加入洗滌紅細(xì)胞，封死管底。用專用離心機(jī)離心15min。在距紅細(xì)胞柱頂上5mm處切開(kāi)微量紅細(xì)胞比積管，用注射器將管中的紅細(xì)胞沖到試管中。將分離出的紅細(xì)胞洗滌，用鹽水配成2-4%紅細(xì)胞懸液備用。30疑難血型鑒定和臨床輸血巰基試劑消除自身凝集紅細(xì)胞巰基試劑：DTT、2-Me巰基試劑可以裂解IgM抗體單體間的二硫鍵，用以消除冷自身抗體造成的紅細(xì)胞的自發(fā)凝集，為血型檢測(cè)提供不凝集的紅細(xì)胞。用鹽水洗滌紅細(xì)胞3遍并配成50%的懸液，加入等量的0.01M的DTT，37℃孵育30分鐘，將細(xì)胞洗滌3遍后配成2-4%的懸液備用。31疑難血型鑒定和臨床輸血32疑難血型鑒定和臨床輸血分子生物學(xué)檢測(cè)血型應(yīng)用試劑盒通過(guò)PCR-SSP方法檢測(cè)ABO單體型。通過(guò)測(cè)序參照已知單體型進(jìn)行分析。33疑難血型鑒定和臨床輸血ABO亞型ABO亞型是指在常見(jiàn)的A、B、AB、O

4種血型之下進(jìn)一步細(xì)分的ABO血型。亞型必須具有遺傳基礎(chǔ)，有明確的血清學(xué)特點(diǎn)。因年齡、疾病等不可遺傳的因素造成的血型改變不是亞型。雖然有基因改變，但不影響血清學(xué)特點(diǎn)的ABO血型不是亞型。34疑難血型鑒定和臨床輸血ABO亞型A亞型：A2、A3、Aint、Ax、Am、Ay、Aend、Ael等。B亞型：B3、Bx、Bm、Bend、Bel等。A亞B、AB亞

Aw、BwB（A）、A（B）cisAB孟買、類孟買（Hh血型系統(tǒng)）35疑難血型鑒定和臨床輸血ABO亞型ABO亞型的發(fā)現(xiàn)—正反定型不符成人、未患使抗原、抗體減弱的疾病正定凝集強(qiáng)度應(yīng)4+，反定凝集強(qiáng)度>

2+。正定凝集強(qiáng)度弱于4+提示可能是亞型。

注意：凝集強(qiáng)度和凝集狀態(tài)（正常凝集、混合外觀）反定凝集強(qiáng)度<2+，或僅存在冷反應(yīng)性不規(guī)則抗-A、抗-B提示可能是亞型。

注意：靠反定預(yù)測(cè)亞型不如正定可靠！36疑難血型鑒定和臨床輸血舉例37疑難血型鑒定和臨床輸血ABO定型常見(jiàn)問(wèn)題的解決方法

ABO亞型正定：抗-A、抗-B、抗-AB、抗-A1、抗-H反定：A1c、A2c、Bc、Oc、自身對(duì)照吸收放散試驗(yàn)唾液型物質(zhì)檢測(cè)血型基因檢測(cè)有條件者可作家系調(diào)查38疑難血型鑒定和臨床輸血ABO定型常見(jiàn)問(wèn)題的解決方法

A、B抗原減弱延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間、4℃孵育吸收放散唾液型物質(zhì)檢測(cè)既往血型調(diào)查血型基因檢測(cè)臨床追蹤：一般病情緩解后血型抗原恢復(fù)39疑難血型鑒定和臨床輸血ABO定型常見(jiàn)問(wèn)題的解決方法抗體減弱延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間、4℃孵育酶處理試劑紅細(xì)胞既往血型調(diào)查40疑難血型鑒定和臨床輸血ABO定型常見(jiàn)問(wèn)題的解決方法

冷自身抗體用37℃溫鹽水洗滌紅細(xì)胞、45℃熱放散3分鐘。巰基試劑(DTT)處理紅細(xì)胞。將血漿和紅細(xì)胞分別在37℃孵育后再混合。自身吸收、O型紅細(xì)胞吸收、兔紅細(xì)胞基質(zhì)吸收去除血清中的冷自身抗體。41疑難血型鑒定和臨床輸血ABO定型常見(jiàn)問(wèn)題的解決方法室溫反應(yīng)的同種抗體用譜細(xì)胞做抗體鑒定。選擇沒(méi)有相應(yīng)抗原的A、B細(xì)胞做反定型。常見(jiàn)抗體：MN、Lewis、P血型系統(tǒng)抗體。42疑難血型鑒定和臨床輸血ABO定型常見(jiàn)問(wèn)題的解決方法混合視野凝集ABO亞型。血液病致抗原減弱。ABO不同型輸血（非O型人近期輸入O型血)：詢問(wèn)近期輸血史、毛細(xì)管離心分離自身紅細(xì)胞等。ABO不同型干細(xì)胞移植。嵌合體血型43疑難血型鑒定和臨床輸血ABO定型常見(jiàn)問(wèn)題的解決方法緡錢狀凝集：鹽水替代試驗(yàn)前帶現(xiàn)象：稀釋血清抗體包被紅細(xì)胞：放散試驗(yàn)（磷酸氯喹放散法）44疑難血型鑒定和臨床輸血ABO血型與臨床輸血紅細(xì)胞血漿血小板45疑難血型鑒定和臨床輸血ABO血型與紅細(xì)胞輸注《成分輸血指南》要求：紅細(xì)胞懸液、少白紅細(xì)胞、洗滌紅細(xì)胞、濃縮紅細(xì)胞、冰凍紅細(xì)胞要ABO、RhD同型、交叉配血相合。46疑難血型鑒定和臨床輸血ABO血型與血漿輸注《成分輸血指南》要求：新鮮冰凍血漿（FFP）、普通冰凍血漿（FP）、新鮮液體血漿（FLP）要求與受血者ABO血型相同或相容。47疑難血型鑒定和臨床輸血ABO血型與血小板輸注《成分輸血指南》、《臨床輸血技術(shù)規(guī)范》要求：手工分離濃縮血小板：ABO、RhD同型、交叉配血試驗(yàn)相合。機(jī)器單采濃縮血小板：ABO血型同型輸注。

48疑難血型鑒定和臨床輸血二、RhD血型RhD陽(yáng)性：紅細(xì)胞上有D抗原RhD陰性：紅細(xì)胞上無(wú)D抗原50疑難血型鑒定和臨床輸血RhD抗原分類D抗原的分類：根據(jù)D抗原的數(shù)量和質(zhì)量不同，將D抗原分為以下3類：正常的D：與IgM抗-D≥3+反應(yīng)強(qiáng)度。D變異型：與IgM抗-D弱反應(yīng)或陰性，需IgG抗-D

IAT才能檢出。1、弱D（weakD）：只是D抗原量少，抗原表位無(wú)變化。過(guò)去稱為Du，現(xiàn)已不用。2、表位不完全型D（partialＤ）：Ｄ抗原數(shù)目基本正常，但缺失正常Ｄ抗原上部分抗原表位。3、表位不完全型弱D：缺失部分Ｄ抗原表位同時(shí)Ｄ抗原數(shù)目也減少。DEL型：只有吸收放散才能檢出D。51疑難血型鑒定和臨床輸血D變異型52疑難血型鑒定和臨床輸血RhD血型檢測(cè)微柱凝集法微量板法試管法玻片或紙片法（不推薦）53疑難血型鑒定和臨床輸血Ｄ變異型受血者

Ｄ變異型受血者應(yīng)當(dāng)做ＲhD陰性以往觀點(diǎn)認(rèn)為弱D患者不產(chǎn)生抗-D，可以被視為D陽(yáng)性，而部分D能產(chǎn)生針對(duì)其表位缺失的抗-D而被視為D陰性?，F(xiàn)在分子生物學(xué)和越來(lái)越多的單克隆抗體檢測(cè)證據(jù)表明并不一定是這樣的情況，一些人歸類為弱D但產(chǎn)生抗-D。弱D與部分D之間的區(qū)別不再是簡(jiǎn)單的區(qū)分。D變異型受血者都當(dāng)作RhD陰性，并輸注RhD陰性血。54疑難血型鑒定和臨床輸血受血者RhD定型使用IgM單克隆抗-D試劑。以輸血為目的常規(guī)檢測(cè)沒(méi)有必要使用IgM+IgG單克隆抗-D試劑檢測(cè)弱D、部分D及對(duì)D陰性的標(biāo)本進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)，否則有不必要的風(fēng)險(xiǎn)。55疑難血型鑒定和臨床輸血Ｄ變異型獻(xiàn)血者Ｄ變異型獻(xiàn)血者應(yīng)當(dāng)作為ＲhD陽(yáng)性D變異型紅細(xì)胞有免疫原性，若將之輸給RhD陰性受血者，有可能免疫受血者，使之產(chǎn)生抗-D。D變異型紅細(xì)胞輸入已有抗-D的受血者，輸入紅細(xì)胞會(huì)被加速破壞，從而引起溶血性輸血反應(yīng)對(duì)于IgM抗-D初篩為陰性的獻(xiàn)血者，要用IgG抗-D試劑用間接抗人球法進(jìn)行RhD陰性確認(rèn)。56疑難血型鑒定和臨床輸血RhD血型檢測(cè)可能出現(xiàn)的問(wèn)題患者紅細(xì)胞與IgM抗-D反應(yīng)強(qiáng)度≦2+D變異型血液病致D抗原減弱：既往血型記錄、血型基因檢測(cè)自身凝集紅細(xì)胞：DTT處理紅細(xì)胞直接抗人球蛋白陽(yáng)性紅細(xì)胞：氯喹放散試驗(yàn)抗-D引起的新生兒溶血病57疑難血型鑒定和臨床輸血RhD陰性患者的輸血《臨床輸血技術(shù)規(guī)范》第十條：對(duì)于RhD陰性和其他稀有血型患者，應(yīng)采用自身輸血、同型輸血或配合型輸血。注意:三種方式輸血都符合法規(guī),沒(méi)有規(guī)定