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細(xì)胞實(shí)驗(yàn)復(fù)習(xí)細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)及核酸成分的測(cè)定細(xì)胞組織化學(xué)法:在保持細(xì)胞結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上,利用某些化學(xué)試劑與細(xì)胞內(nèi)的一些物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng),從而在細(xì)胞局部形成有色沉淀在通過(guò)顯微鏡對(duì)細(xì)胞內(nèi)的化學(xué)成分進(jìn)行定位定性的檢測(cè)方法。三氯醋酸的作用:抽提DNA、RNA,使蛋白質(zhì)與DNA、RNA分開(kāi)。固定:將細(xì)胞殺死,使其仍然保持原來(lái)的結(jié)構(gòu)和形態(tài)。甲基綠-哌羅寧染色原理:核酸是強(qiáng)性酸,甲基綠-哌羅寧是堿性染料,具有親和力,這兩種堿性染料有選擇的特異染色,甲基綠把DNA染成綠色,哌羅寧把RNA染成紅色。血涂片方法。觀察細(xì)胞的生理活動(dòng)淀粉肉湯:刺激腹腔聚集大量巨噬細(xì)胞,臺(tái)酚藍(lán)起標(biāo)記巨噬細(xì)胞的作用。滲透現(xiàn)象質(zhì)壁分離的原理同種細(xì)胞融合細(xì)胞融合:在自然條件下或人工的方法將兩個(gè)或兩個(gè)以上的細(xì)胞合并成一個(gè)雙核或多核細(xì)胞的過(guò)程。PEG的作用原理:PEG具有強(qiáng)烈的吸水性以及凝聚和沉淀蛋白質(zhì)的作用,高濃度聚乙二醇會(huì)破壞相互接觸的細(xì)胞膜的磷脂雙分子層,改變細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和表面電荷特性。在不同種類(lèi)的動(dòng)物細(xì)胞混合液中加入聚乙二醇,膜脂分子排列發(fā)生改變,細(xì)胞發(fā)生凝集;在稀釋和除去聚乙二醇時(shí),質(zhì)膜恢復(fù)原有的有序結(jié)構(gòu),在恢復(fù)過(guò)程中即可誘導(dǎo)相接觸的細(xì)胞發(fā)生融合。融合率的計(jì)算公式。融合率=融合細(xì)胞的全部核數(shù)/全部細(xì)胞核數(shù)×100%細(xì)胞組分的分級(jí)分離實(shí)驗(yàn)方法:勻漿、差速離心、分析。勻漿:在低溫條件下,在等滲介質(zhì)中,破碎細(xì)胞,制成各種細(xì)胞器和細(xì)胞內(nèi)含物的混合液。差速離心:在均一介質(zhì)中由低速到高速逐級(jí)離心,使被離心物按其比重大小逐漸沉降下來(lái)的方法。分析:用細(xì)胞化學(xué)和生物化學(xué)方法進(jìn)行定量和定性檢測(cè)。細(xì)胞的活體染色活體染色定義:能使生活的細(xì)胞或組織特異性著色,但對(duì)活樣品又沒(méi)有毒害作用的一種染色方法,其目的是顯示生活細(xì)胞內(nèi)的某些結(jié)構(gòu),而不影響細(xì)胞的生命活動(dòng),也不產(chǎn)生任何物理、化學(xué)變化,不會(huì)引起細(xì)胞死亡。詹納斯綠和中性紅染色原理:是活體染色劑中最重要的染料,對(duì)于線粒體和液泡系的染色分別具有專(zhuān)一性。詹納斯綠B可將線粒體染色綠色,中性紅只將液泡系染成紅色,在細(xì)胞處于生活狀態(tài)時(shí),細(xì)胞質(zhì)及核不被染色。
微絲的染色與觀察實(shí)驗(yàn)原理:微絲普遍存在于多種細(xì)胞中,功能是維持細(xì)胞的形態(tài),參與細(xì)胞的移動(dòng)和細(xì)胞質(zhì)流動(dòng)。細(xì)胞中的微絲可通過(guò)考馬斯亮藍(lán)染色得到觀察。當(dāng)在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中加入細(xì)胞松馳素B時(shí),由于細(xì)胞松馳素B可與微絲中的肌動(dòng)蛋白相結(jié)合,破壞了微絲的結(jié)構(gòu),使微絲斷裂,細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變。
線粒體正常情況下一般呈圓形,饑餓時(shí),缺乏供能營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),線粒體會(huì)數(shù)目減少,大量的嵴會(huì)消失,會(huì)使線粒體形狀變得細(xì)長(zhǎng),因而易于觀察。線粒體含量較多;長(zhǎng)度適合觀察,約5μm;肝臟較軟,易于破碎,并且適于快速提取,因而利于保持線粒體活性。細(xì)胞器沉降先后順序先后是細(xì)胞核、線粒體、溶酶體和其他微體、核糖體和大分子。詹納斯綠B可專(zhuān)一性地對(duì)線粒體進(jìn)行超活染色,這是由于線粒體內(nèi)的細(xì)胞色素氧化酶系的作用,使詹納斯綠B染料始終保持氧化狀態(tài)(即有色狀態(tài))呈藍(lán)綠色;而線粒體周?chē)募?xì)胞質(zhì)中詹納斯綠B被還原成無(wú)色的化合物。1、為什么要饑餓小鼠?2、為什么使用肝細(xì)胞?3、細(xì)胞器沉降順序?4、詹納斯綠B染色原理?觀察細(xì)胞的有絲分裂植物細(xì)胞的有絲分裂與動(dòng)物細(xì)胞的有絲分裂的區(qū)別植物細(xì)胞有細(xì)胞壁,動(dòng)物細(xì)胞沒(méi)有細(xì)胞壁。動(dòng)物細(xì)胞可見(jiàn)中心粒,植物細(xì)胞不可見(jiàn)中心粒。有絲分裂各期的特點(diǎn)前期:染色質(zhì)凝集成染色體;核仁,核膜消失;分裂極確定和紡錘體形成中期:染色體排列在細(xì)胞的赤道面上后期:姐妹染色單體分開(kāi),向細(xì)胞兩極遷移,同時(shí)發(fā)生細(xì)胞兩極的遠(yuǎn)離運(yùn)動(dòng)末期:染色體解螺旋;核膜出現(xiàn);核仁形成;紡錘體消失;胞質(zhì)分裂精子細(xì)胞學(xué)分析低滲膨脹實(shí)驗(yàn)的原理:正常精子細(xì)胞在低滲環(huán)境中,水分子會(huì)從外部滲透進(jìn)入精子細(xì)胞內(nèi),使精子細(xì)胞尾部發(fā)生膨脹。精子尾部腫脹率(%)
=(尾部腫脹精子數(shù)/計(jì)數(shù)精子數(shù))×100%精子存活率檢測(cè)
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