超高效液相色譜快速測定飲料中的16種食品添加劑實驗背景隨著食品工業(yè)的快速發(fā)展食品添加劑品種不斷增加目前全世界應用的食品添加劑品種已多達25000余種，我國2007年發(fā)布的GB2760《食品添加劑使用衛(wèi)生標準中，允許使用的22類食品添加劑近2000種。按照現行標準[1-5]的方法進行檢測，必須要用不同的方法對樣品進行多次處理，分別檢測不同的添加劑殘留量，不僅費時費力，而且對于未明確標識的添加劑可能無法進行檢測，本實驗應用超高效液相色譜技術，研究飲料中16種食品添加劑的快速測定方法，可用于各類飲料中食品添加劑的快速篩查，為食品添加劑的安全使用和監(jiān)管提供技術支撐。

材料與試劑材料：碳酸飲料、含乳飲料試劑：苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯、糖精鈉、乙?；前匪徕洝幟庶S、日落黃、胭脂紅、莧菜紅、誘惑紅、亮藍和咖啡因標準儲備溶液(質量濃度均為1mg/mL)；乙腈、甲醇，乙酸銨、超純水、微孔濾膜(有機相，0.2μm)。儀器與設備

?ACQUITY

UPLC型超高效液相色譜儀(配有二極管陣列檢測器及Empower2色譜數據處理系統)美國Waters公司；?XH-C型渦旋混合器江蘇金壇市醫(yī)療儀器廠；

?3-18K型高速離心機(最高轉速10000r/min)德國Sigma公司。標準溶液的制備

將各食品添加劑標準儲備液配制成質量濃度均為50μg/mL的混合標準儲備溶液，此溶液于4℃冰箱中可儲存1個月。將混合標準儲備溶液用甲醇-水(1:9，V/V)依次稀釋成0.1、1.0、5.0、10.0、25.0、50.0μg/mL的系列標準溶液，使用前配制。試樣的處理

稱取1.0g碳酸飲料或含乳飲料試樣于10mL容量瓶中，加入1mL甲醇，混勻，用超純水定容至刻度，搖勻、渦漩混合2min。移取5mL于10mL離心管中，10000r/min離心5min，取上清液經微孔濾膜過濾后備用。超高效液相色譜操作條件

色譜柱：ACQUITYUPLC

BEH

C18柱(50mm×2.1mm，1.7μm)；

流動相：甲醇(A)、20mmol/L乙酸銨溶液(B)，流動相梯度見

表1；

流速：0.6mL/min；

柱溫：50℃；

進樣體積：5μL。

檢測波長掃描范圍：200～500nm。測定步驟

將標準工作溶液按照濃度由低到高的順序進樣測定，按照表2中各組分定量檢測波長提取對應的色譜圖(圖1)，以各色譜圖中對應組分的峰面積對其質量濃度繪制標準曲線。試樣溶液進樣后，以各組分在對應檢測波長色譜圖中的保留時間和相應的光譜圖定性，峰面積定量。

16種食品添加劑色譜圖

結果與分析

為實現多種食品添加劑的快速分析，選擇粒徑1.7μm的BEHC18填料的色譜柱為分離柱，考慮到多種添加劑均為酸性結構，故采用20mmol/L乙酸銨溶液-甲醇體系為流動相，采用梯度洗脫的方式進行分離。經優(yōu)化分離條件后所有16種食品添加劑在5.5min內均可良好分離，一次進樣僅需8min即可完成。

色譜分離條件的選擇

檢測波長的選擇

各組分經液相色譜分離，二極管陣列檢測器掃描檢測，取得各組分紫外光譜圖，根據各組分紫外吸收情況，確定在230nm波長處檢測苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、安賽蜜、脫氫乙酸和咖啡因，在410nm波長處檢測檸檬黃、日落黃、胭脂紅、誘惑紅、莧菜紅、亮藍，在256nm波長處檢測對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯。樣品提取方法的確定飲料中添加的食品添加劑多為水溶性，4種對羥基苯甲酸酯類防腐劑具有一定的脂溶性，但多以鈉鹽的形式使用和存在。在提取時加入體積分數10%的甲醇，可促進對羥基苯甲酸酯類的提取，且有一定的沉淀蛋白質的作用，經高速離心后，即使是含乳飲料也可獲得澄清的上清液，過0.22μm樣品過濾器后進樣測定，不會造成色譜柱堵塞。回收率實驗

在一個不含任何食品添加劑的樣品中，分別添加各組分含量為5、10、20mg/kg的食品添加劑標樣。按照標準規(guī)定的方法測定，結果見表3，加標回收率在91.6%～100.3%之間。精密度實驗

對加標10mg/kg的樣品平行測定5次，結果見表4。RSD為0.66%～2.20%，表明該方法精密度良好。線性范圍和檢出限

將質量濃度分別為0.1、1.0、5.0、10.0、25.0、50.0μg/mL混合標準溶液進樣分析，按照各組分檢測條件測定峰面積，以峰面積對相應質量濃度(ug/mL)進行線性回歸，各組分回歸方程相關系數均優(yōu)于0.999，表明0.1～50.0μg/mL范圍內，各組分線性關系良好。當空白樣品中添加各食品添加劑均為1.0mg/kg時，各組分色譜峰的信噪比均大于20。由于通常飲料中使用的食品添加劑含量不可能很低，低含量起不到預期的防腐、增色、增味的效果，所以本方法沒有去探討如何獲得更低的檢出限，確定各組分1.0mg/kg的檢出限已經可以充分滿足各類