熒光法測定乙酰水楊酸和水楊酸

實驗化學3-2（儀器分析實驗）2023/1/121、實驗?zāi)康模?）掌握熒光法測定藥物中乙酰水楊酸的方法（2）了解CaryEclipse型熒光光譜儀的基本操作（3）強化稱量、移液、配溶液等基本操作2023/1/12實驗原理

電子處于激發(fā)態(tài)是不穩(wěn)定狀態(tài)，返回基態(tài)時，通過輻射躍遷(發(fā)光)和無輻射躍遷等方式失去能量；傳遞途徑輻射躍遷熒光延遲熒光磷光內(nèi)轉(zhuǎn)移外轉(zhuǎn)移系間跨越振動弛預無輻射躍遷

激發(fā)態(tài)停留時間短、返回速度快的途徑，發(fā)生的幾率大，發(fā)光強度相對大；熒光：10-7～10-9

s,第一激發(fā)單重態(tài)的最低振動能級→基態(tài)；磷光：10-3～10s；第一激發(fā)三重態(tài)的最低振動能級→基態(tài)；2023/1/12S2S1S0T1吸收發(fā)射熒光發(fā)射磷光系間跨越內(nèi)轉(zhuǎn)換振動弛豫能量l2l1l

3

外轉(zhuǎn)換l

2T2內(nèi)轉(zhuǎn)換振動弛豫2023/1/12輻射能量傳遞過程

熒光發(fā)射：電子由第一激發(fā)單重態(tài)的最低振動能級→基態(tài)（多為S1→S0躍遷），發(fā)射波長為‘2的熒光；10-7～10-9

s。

由圖可見，發(fā)射熒光的能量比分子吸收的能量小，波長長；‘2>2>1；磷光發(fā)射：電子由第一激發(fā)三重態(tài)的最低振動能級→基態(tài)（T1→S0躍遷）；電子由S0進入T1的可能過程：（S0→T1禁阻躍遷）

S0→激發(fā)→振動弛豫→內(nèi)轉(zhuǎn)移→系間跨越→振動弛豫→T1發(fā)光速度很慢：10-3～10s。

光照停止后，可持續(xù)一段時間。2023/1/12溶液濃度與熒光強度的關(guān)系有線性關(guān)系：熒光強度

If正比于吸收的光量Ia和熒光量子效率：

If=Ia由朗-比耳定律：Ia=I0(1-10-lc)If=I0(1-10-lc)=I0(1-e-2.3lc)濃度很低時，將括號項近似處理后：

If

=2.3I0lc

=Kc2023/1/12分子產(chǎn)生熒光必須具備的條件1）具有合適的結(jié)構(gòu)；2）具有一定的熒光量子產(chǎn)率。熒光量子產(chǎn)率（）：熒光量子產(chǎn)率與激發(fā)態(tài)能量釋放各過程的速率常數(shù)有關(guān)，如外轉(zhuǎn)換過程速度快，不出現(xiàn)熒光發(fā)射；2023/1/12儀器結(jié)構(gòu)流程

測量熒光的儀器主要由四個部分組成：激發(fā)光源、樣品池、雙單色器系統(tǒng)、檢測器。

特殊點：有兩個單色器，光源與檢測器通常成直角?；玖鞒倘鐖D：單色器：選擇激發(fā)光波長的第一單色器和選擇發(fā)射光(測量)波長的第二單色器；光源：燈和高壓汞燈，染料激光器(可見與紫外區(qū))檢測器：光電倍增管。2023/1/12熒光分析方法特點1）靈敏度高比紫外-可見分光光度法高2～4個數(shù)量級；為什么？檢測下限：0.1～0.1g/cm-3相對靈敏度：0.05mol/L奎寧硫酸氫鹽的硫酸溶液。2）選擇性強既可依據(jù)特征發(fā)射光譜，又可根據(jù)特征吸收光譜；3）試樣量少

缺點：應(yīng)用范圍小。2023/1/12儀器與試劑儀器：CaryEclipse熒光光譜儀，石英比色皿，容量瓶，移液管，玻璃注射器，漏斗，量筒，濾紙。試劑：乙酰水楊酸，水楊酸，乙醇，阿司匹林藥片。2023/1/12實驗步驟1、ASA和SA貯備溶液的配制（1）ASA貯備液的配制：稱取0.4000g乙酰水楊酸溶于1％醋酸-氯仿溶液中，用1％醋酸—氯仿溶液定容于1000mL容量瓶中，搖勻，備用；（2）SA貯備液的配制：稱取0.750g水楊酸溶于1％醋酸—氯仿溶液中，用1％醋酸—氯仿溶液定容于1000mL容量瓶中，搖勻，備用。2、ASA和SA激發(fā)光譜和熒光光譜的繪制將ASA和SA貯備液分別稀釋100倍(分二次完成，每次稀釋10倍)。用得到的溶液分別掃描ASA和SA的激發(fā)光譜和熒光光譜曲線，并分別確定它們的最大激發(fā)波長和最大發(fā)射波長。3、標準曲線的制作(1)ASA標準曲線的制作用移液管分別準確移取濃度為4.00μg·mL-1的ASA溶液2、4、6、8、10mL至5只50mL容量瓶中，用1％醋酸—氯仿溶液稀至刻度，搖勻。分別測量它們的熒光強度.(2)SA標準曲線的制作用移液管分別準確移取濃度為7.5μg·mL-1的SA溶液2、4、6、8、l0mL至5只50mL容量瓶中，用1％醋酸—氯仿溶液稀釋至刻度，搖勻。分別測量它們的熒光強度．2023/1/124、阿斯匹林藥片中乙酰水楊酸和水楊酸的測定取5片阿司匹林藥片磨成粉末，準確稱取0.40mg用1％醋酸—氯仿溶液溶解，全部轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用1％醋酸—氯仿溶液稀釋至刻度。迅速通過定量濾紙干過濾，用該濾液在與標準溶液同樣的測定條件下測量SA熒光強度。將上述濾液稀釋1000倍(用三次稀釋來完成)，在與標準溶液同樣的測定條件下測量ASA熒光強度。數(shù)據(jù)處理

1、從繪制的ASA和SA激發(fā)光譜和熒光光譜曲線上，確定它們的最大激發(fā)波長和最大發(fā)射波長。2、分別繪制ASA和SA的標準曲線，從標準曲線上確定試樣溶液中ASA和SA的濃度，并計算每片阿斯匹林藥片中ASA和SA的含量(mg)，將ASA測定值與說明書上的值比較。2023/1/12實驗指導1、溶劑用量控制在600mL，要求提高清洗效率，減少移取溶劑時的損失，以節(jié)約試劑，同時保護健康和環(huán)境。2、用加