抗生素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研究與建立成雙紅

中國藥品生物制品檢定所抗生素標(biāo)準(zhǔn)品的建立、制備原則1、溯源性

可溯源性是抗生素效價(jià)及含量測(cè)定用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的基本要求?？股匦r(jià)單位一但確定，就將一直延續(xù)下去。通常溯源性和測(cè)量的可靠性有關(guān)，即與效價(jià)單位確定及量值傳遞的準(zhǔn)確性和精密度有關(guān)。故在建立抗生素原始基準(zhǔn)品時(shí)，當(dāng)定義了效價(jià)單位后，通常需要用多種方法分析原始基準(zhǔn)品的純度，進(jìn)而確定其效價(jià)，保證原始基準(zhǔn)品定值的準(zhǔn)確性；在標(biāo)定各級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)時(shí)，通常要采用協(xié)作標(biāo)定的方法，已保證獲得準(zhǔn)確量值傳遞結(jié)果。2、同質(zhì)性

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)或組成通常要求和待測(cè)定物質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)或組成完全相同。標(biāo)準(zhǔn)品與待標(biāo)樣品量反應(yīng)“作用性質(zhì)”的一致。判斷同質(zhì)性的關(guān)鍵并非其化學(xué)結(jié)構(gòu)是否相同，而是其量反應(yīng)曲線是否平行

3、連續(xù)性抗生素的臨床應(yīng)用劑量均以抗生素的效價(jià)單位為基礎(chǔ)，且在抗生素開發(fā)的前期依據(jù)其當(dāng)時(shí)測(cè)定的效價(jià)結(jié)果而制定。故抗生素的效價(jià)單位一經(jīng)確定，將一直延續(xù)下去，不得改動(dòng)仿制品種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的效價(jià)單位應(yīng)與該品種原始發(fā)明國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的效價(jià)單位一致?？股貥?biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在改變測(cè)定方法時(shí)，如四霉素、金霉素標(biāo)準(zhǔn)品在轉(zhuǎn)為含量測(cè)定用對(duì)照品時(shí)，不該動(dòng)原以鹽酸四環(huán)素，鹽酸金霉素重量計(jì)量的效價(jià)單位。4、穩(wěn)定性

在保證其“同質(zhì)作用”的前提下，選用具有穩(wěn)定固態(tài)結(jié)構(gòu)的物質(zhì)作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)原料。根據(jù)此原則，對(duì)氨基糖甙類抗生素，通常選用其硫酸鹽而不直接選用其堿作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)原料；對(duì)－內(nèi)酰胺抗生素，如選用頭孢唑林酸而不用頭孢唑林鈉制備頭孢唑林對(duì)照品；用阿莫西林三水物制備阿莫西林對(duì)照品而不用阿莫西林一水物或阿莫西林鈉制備其對(duì)照品?？股卦蓟鶞?zhǔn)品的建立：確定抗生素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)名稱、效價(jià)單位和表示方法選取原料：盡可能純化基準(zhǔn)品原料原料組成分析（如：水分、揮發(fā)性物質(zhì)、無機(jī)雜質(zhì)殘留溶劑等）及測(cè)定基準(zhǔn)品的純度分析確定基準(zhǔn)品的含量。驗(yàn)證抗生素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)命名原則1、基本原則絕大部分抗生素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)不考慮其原料結(jié)構(gòu)中的無機(jī)鹽離子、結(jié)晶水、酸根等，而是以其在臨床應(yīng)用中起作用的活性結(jié)構(gòu)命名。2、酯類抗生素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)原料結(jié)構(gòu)英文名原料結(jié)構(gòu)英文名頭孢呋辛酯CefuroximeAxetil頭孢妥侖匹酯Cefditorenpivoxil紅霉素碳酸酯Erythromycincyclic11,12-carbonate頭孢他美匹酯Cefetametpivoxil司丙紅霉素ErythromycinStinopratc頭孢特侖新戊酯CefteramPivoxil舒巴坦異戊酯Sulbactampivoxil克林霉素磷酸酯ClindamycinPhosphate丙酸交沙霉素Josamycinpropionate乙酰麥迪霉素Acythylmidecamycin頭孢泊肟酯Cefpodiximeproxetil乙酰螺旋霉素Acetylspiramycin3、多種名稱的命名現(xiàn)用名曾用名現(xiàn)用名曾用名青霉素芐基青霉素、青霉素G頭孢曲松頭孢三嗪苯唑西林苯唑青霉素氯唑西林鄰氯青霉素多西環(huán)素強(qiáng)力霉素鹽酸阿霉素鹽酸多柔比星阿米卡星丁胺卡那霉素氯唑西林鄰氯青霉素磺芐西林磺芐青霉素鈉美他環(huán)素甲烯土霉素阿莫西林羥氨芐青霉素克林霉素氯潔霉素奈替米星乙基西梭霉素林可霉素潔霉素依替米星愛大霉素博萊霉素爭(zhēng)光霉素4、特例根據(jù)專有用途進(jìn)行命名：如加替沙星對(duì)照品和加替沙星·3/2H2O對(duì)照品，前者為加替沙星鑒別及含量測(cè)定用對(duì)照品，后者為供含3/2H2O結(jié)晶水的加替沙星原料的紅外鑒別用對(duì)照品。在首次研發(fā)時(shí)，以臨床研究中起活性作用的計(jì)量結(jié)構(gòu)命名。如鹽酸四環(huán)素，鹽酸金霉素，鹽酸阿霉素等?？股匦r(jià)單位的確定及問題1、單組分抗生素：（1）以活性成分的重量計(jì)量效價(jià)單位例如：硫酸鏈霉素，其活性成為為鏈霉素堿，鏈霉素的效價(jià)單位為鏈霉素堿1g＝1單位，硫酸鏈霉素效價(jià)的理論值為：（2）以純抗生素制品鹽的重量計(jì)量效價(jià)單位此效價(jià)單位中包括了無效鹽的成分，從理論上講是不合理的，但對(duì)一些早期的抗生素品種，由于多年來已經(jīng)習(xí)慣于此，如改變?cè)灾破符}重量計(jì)量效價(jià)單位，則對(duì)臨床用藥的影響較大，故仍沿用。目前常用的抗生素品種中僅有四環(huán)素、金霉素二個(gè)品種的效價(jià)單位采用這種效價(jià)單位計(jì)量方法。例如：鹽酸四環(huán)素的效價(jià)單位（C22H24O8N2·HCl）1g＝1四環(huán)素單位；鹽酸金霉素的效價(jià)單位為（C22H23O8N2·HCl）1g＝1金霉素單位。但對(duì)蒽環(huán)類抗腫瘤抗生素，如鹽酸阿霉素（C27H29NO11·HCl）、鹽酸依達(dá)吡星等，其效價(jià)單位也是以其鹽酸鹽的重量計(jì)量效價(jià)單位的。（3）特定效價(jià)單位對(duì)一些早期開發(fā)的組分較為復(fù)雜的抗生素，在開始生產(chǎn)及臨床使用時(shí)，由于研究手段、生產(chǎn)條件等的限制，無法獲得其準(zhǔn)確的結(jié)構(gòu)及組成，或無法得到其純品，還不能用重量單位來計(jì)量其效價(jià)單位，只能人為指定效價(jià)單位。如青霉素單位也稱牛津單位（Oxfordunit）的最初定義是“50ml肉湯培養(yǎng)基中，能抑制標(biāo)準(zhǔn)金葡菌生長(zhǎng)的最少青霉素量為1個(gè)青霉素單位”。在獲得青霉素G純品后，證明青霉素G鈉（C16H17N2NaO4S）0.5988g＝1青霉素單位。目前使用特定效價(jià)單位的抗生素品種還有制霉菌素、桿菌肽、多粘菌素等。2、多組分抗生素效價(jià)單位的確定

（1）以其中單一組分的活性成分的重量確定效價(jià)單位。如慶大霉素含有C1、C1a、C2a、C2等多個(gè)組分，慶大霉素的效價(jià)單位以C1（C21H43O7N5）來計(jì)量，1g的C1＝1慶大霉素單位。采用這種方法確定效價(jià)單位在“溯源性”方面較為明確，且便于建立原始基準(zhǔn)品，并可保證標(biāo)定中標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)于和待標(biāo)樣品不存在非“同質(zhì)”問題，這是目前鼓勵(lì)采用的方法。（2）將多個(gè)抗生素組分按一定比例混合，以混合組分活性成分的重量確定效價(jià)單位。如螺旋霉素主要為含I、II、III三個(gè)組分的混合物，其效價(jià)單位定義為1g混合物50％的組分I（C43H74N2O14）、25％的組分II（C45H76N2O14）和25％的組分III（C46H78N2O14）＝1螺旋霉素單位。采用這種方法的缺點(diǎn)在于建立原始基準(zhǔn)品比較麻煩。（3）多個(gè)抗生素組分不定比例的混合物，以混合組分活性成分的重量確定效價(jià)單位。如吉它霉素為含有A1、A3、A4、A5、A6、A7等的多組分抗生素，其效價(jià)單位定義為1g吉它霉素混合物（C37－42H61－69NO14－15）＝1吉它霉素單位。此效價(jià)單位類似于特定效價(jià)單位，其“溯源性”較模糊，目前新藥開發(fā)中不鼓勵(lì)使用。1、有明確溯源

—多為進(jìn)口藥品檢驗(yàn)用國家原始基準(zhǔn)品的建立

名稱英文名名稱英文名氯碳頭孢Loracarbef地貝卡星SterileDibekacinSulfate左旋氧氟沙星Levofloxacin頭孢米諾Cefminox頭孢地尼Cefdinir鹽酸阿霉素DoxorubicinHydrochloride頭孢克肟Cefixime交沙霉素Josamycin頭孢唑肟Ceftizoxime頭孢替唑Ceftezole頭孢匹胺CEfpiramide萬古霉素Vancomycin美洛培南Meropenem頭孢妥侖匹酯Cefditorenpivoxil氨曲南AztreonamSterile米諾環(huán)素Minocycline基準(zhǔn)品建立的類型2、無明確溯源的

—如：新藥注冊(cè)中的仿制藥：地紅霉素、司丙紅霉素、頭孢吡肟等。（1）、根據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）基準(zhǔn)品建立的指導(dǎo)原則，采用多種測(cè)試分析方法，分析確定原料的純度和雜質(zhì)的含量。以扣除法確定原料的含量。（2）、在可以得到企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品或原始發(fā)明廠的標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品的情況下：a、以企業(yè)的標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品為對(duì)照，進(jìn)行標(biāo)定。驗(yàn)證方法（1）的結(jié)果。b、原始發(fā)明廠的標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品或以有明確溯源的標(biāo)準(zhǔn)品為基準(zhǔn)進(jìn)行協(xié)作標(biāo)定。（3）在確定首批標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品的量值中，一般采用將方法（1）的結(jié)果與標(biāo)定結(jié)果合并計(jì)算，作為首批標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品的含量?；蛞苑椒ǎ?）結(jié)果核對(duì)或校正方法（1）結(jié)果，即可驗(yàn)證方法（1）結(jié)果的準(zhǔn)確性，又不侵犯知識(shí)產(chǎn)權(quán)。3、無量值溯源

—新藥注冊(cè)中的國家一類新藥，如頭孢硫脒頭孢硫瞇是我國自主研制的國家一類新藥。在世界衛(wèi)生組織（WHO）基準(zhǔn)品建立的指導(dǎo)下，結(jié)合我室多年來根據(jù)建立首批標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品的經(jīng)驗(yàn)，按照“基準(zhǔn)品效價(jià)定義→組成分析→純度分析→含量確定→結(jié)果驗(yàn)證”的基本步驟，研制建立國首批基準(zhǔn)品。如：力達(dá)霉素、安妥沙星、卡德沙星等基準(zhǔn)品。1、命名及效價(jià)單位確定2、組成分析理論值分析元素測(cè)定根據(jù)已知分子式計(jì)算理論含量根據(jù)N,S元素測(cè)定結(jié)果，推測(cè)純度有機(jī)成分無機(jī)成分揮發(fā)性物質(zhì)無機(jī)雜質(zhì)鹽、酸根的量費(fèi)休氏法，干燥失重，TGA熾灼殘?jiān)?，TGA離子電位滴定法3、純度分析直接測(cè)定法間接測(cè)定法DSC、NMR、HPLC－ELSD歸一化法、HPLC－IR歸一化法有機(jī)雜質(zhì)的分析與測(cè)定純度的測(cè)定TLC、HPLC－不同的檢測(cè)器聯(lián)用、HPCEHPLC－ELSD自身對(duì)照法4、含量確定直接扣除法

效價(jià)（u/mg）＝(1－水分或揮發(fā)性物質(zhì)％－殘留溶劑％－殘?jiān)?純度％1000(u/mg)含量（％）=(1－水分或揮發(fā)性物質(zhì)％－殘留溶劑％－殘?jiān)?純度％HPLC－ELSD隨行曲線法外標(biāo)法抗生素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的標(biāo)定原則1、確保量值傳遞的連續(xù)性國家標(biāo)準(zhǔn)收載的大部分抗生素或?yàn)榉轮破?，或由國外進(jìn)口。換批制備以中檢所提供保存標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)為基準(zhǔn)；定期以國際通用藥典標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或國際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)核對(duì)校驗(yàn)。2、確保量值傳遞的準(zhǔn)確性采用現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中收載的方法。采用合理的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)減少實(shí)驗(yàn)偏差。采用加權(quán)平均的原理進(jìn)行合并計(jì)算。標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)定結(jié)果除應(yīng)求出其標(biāo)示效價(jià)或含量結(jié)果外，還應(yīng)以95％的置信限表征其誤差范圍。對(duì)純度較高的樣品可由化學(xué)法直接標(biāo)定

3、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)量值傳遞的質(zhì)量保證－協(xié)作標(biāo)定方式

中檢所職責(zé)協(xié)作標(biāo)定單位之一對(duì)標(biāo)定的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)從原材料選擇、制備方法、標(biāo)定方案及分裝與包裝條件等進(jìn)行全面技術(shù)工作和資料審核對(duì)各協(xié)作單位上報(bào)的標(biāo)定結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析及定值。同時(shí)對(duì)定值準(zhǔn)確性、量值溯源及標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的穩(wěn)定性作出全面的評(píng)價(jià)。對(duì)可否作為國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的結(jié)論。將國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制備報(bào)告報(bào)送室、所級(jí)技術(shù)負(fù)責(zé)人審核或標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)專家委員會(huì)（首批基準(zhǔn)品）審核。將協(xié)作標(biāo)定結(jié)果及統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果以公文的形式反饋給協(xié)作單位。負(fù)責(zé)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的保存、發(fā)放及管理。協(xié)作單位職責(zé)具備相當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)設(shè)備及符合要求的實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員。參加協(xié)作標(biāo)定人員：應(yīng)按協(xié)作標(biāo)定技術(shù)要求和sop操作，獨(dú)立完成協(xié)作標(biāo)定工作。提供符合協(xié)作技術(shù)要求的測(cè)定結(jié)果和原始數(shù)據(jù)。寫出協(xié)作標(biāo)定報(bào)告并對(duì)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。協(xié)作人員在無任何確定的試驗(yàn)失誤情況下不得隨意剔出測(cè)定結(jié)果。項(xiàng)目負(fù)責(zé)人：組織并按時(shí)完成協(xié)作標(biāo)定工作。對(duì)本協(xié)作單位的試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，寫出協(xié)作標(biāo)定報(bào)告。將協(xié)作標(biāo)定結(jié)果和全部原始資料或復(fù)印件以公文和公文附件形式報(bào)送中檢所。協(xié)作單位不得以任何形式泄露協(xié)作結(jié)果，或與其他同品種的協(xié)作單位核對(duì)數(shù)據(jù)。ABCD均值上限929.15944.96930.46941.24942.59均值938.11950.49939.94952.5946.54下限947.15956.06949.51963.89950.52N912121245羅紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品協(xié)作標(biāo)定頭孢氨芐對(duì)照品協(xié)作標(biāo)定含量％SxNA94.700.1130B94.020.1530C94.410.1130D93.550.1120加權(quán)均值％94.190.06110抗生素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的使用

抗生素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可分為生物標(biāo)準(zhǔn)品和化學(xué)對(duì)藥品。生物標(biāo)準(zhǔn)品主要用于抗生素微生物效價(jià)測(cè)定，而化學(xué)對(duì)照品則主要用于