帕金森病模型定稿帕金森病又稱震顫麻痹，是一種由于腦內(nèi)黑質(zhì)紋狀體通路多巴胺缺乏所致的，在老年人中常見的進(jìn)展性中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。此病主要病理特征為黑質(zhì)多巴胺()能神經(jīng)元缺失及胞質(zhì)內(nèi)包涵體路易小體()出現(xiàn)主要病癥靜止性震顫肌強(qiáng)直運動緩慢體位不平衡、步態(tài)紊亂焦慮、睡眠障礙等非運動病癥脊髓前角運動神經(jīng)元調(diào)節(jié)運動功能黑質(zhì)紋狀體作用過程正常帕金森病多巴胺多巴胺乙酰膽堿乙酰膽堿首先在1817年對帕金森病的臨床表現(xiàn)進(jìn)展了描述。當(dāng)時，對的發(fā)病機(jī)制幾乎一無所知。直到20世紀(jì)50年代等對嚙齒類動物注射利血平后，使動物產(chǎn)生類似樣病癥，這是最早建立的動物模型。

動物模型的開展隨著對兒茶酚胺特異性神經(jīng)毒素六羥基多巴胺(6，6)的認(rèn)識，在1968年等人成功地建立6動物模型。之后，于1983年等報道了利用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6四氫吡啶()制作小鼠和猴的動物模型。在國內(nèi)，周厚廣等用兩點注射法將6注入大鼠一側(cè)的黑質(zhì)及內(nèi)側(cè)前腦束，成功率高達(dá)71.1%，電鏡觀察可見中腦黑質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞普遍存在變性壞死及不同階段的凋亡改變，可以較快地建立穩(wěn)定地成功率較高的類似于人類中晚期帕金森病行為和病理的大鼠模型。隨著研究的深入，相繼出現(xiàn)了、3+及機(jī)械損傷的動物模型，根據(jù)研究目的的不同，選擇不同的動物模型。帕金森病動物模型的制備為模擬人類，理想的動物模型應(yīng)具備以下一些特點：〔1〕多巴胺能神經(jīng)元在出生時數(shù)量及形態(tài)正常，青年時期開場逐漸選擇性地減少，減少量超過50％，且容易通過神經(jīng)化學(xué)和神經(jīng)生理學(xué)的方法檢測到；〔2〕模型應(yīng)能容易檢測其運動功能的損傷，包括運動緩慢、肌僵直和靜止性震顫等的主要病癥；

〔3〕模型應(yīng)能顯示出路易小體的形成；〔4〕如果模型是遺傳性的，應(yīng)基于單一突變而使突變模型有著強(qiáng)大的傳播能力；〔5〕模型應(yīng)有相對較短的疾病周期〔如數(shù)月〕，以使藥物篩選得以經(jīng)濟(jì)、快速地進(jìn)展。

①通過在大鼠的黑質(zhì)或內(nèi)側(cè)前腦束注射6羥多巴胺〔6〕②通過對模型動物(如:猴、小鼠、豬等)進(jìn)展1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氫吡啶〔〕的管飼法和立體定位注射等方法國際通用國內(nèi)應(yīng)用較多是兩種方法：模型制備方法前者是較精典的模型制備的方法，也是在國內(nèi)較早開展的，但是由于神經(jīng)元的毀損出現(xiàn)的較早，這與臨床病人的中腦黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元的漸進(jìn)性死亡不同；近距離的毀損很難把握毀損的程度，這使得采用這種方法獲取局部損毀的模型的成功率很低；存在的問題較之前者采用管飼法和立體定位注射方法，在國內(nèi)最近幾年才運用到帕金森動物模型的制備，國外已經(jīng)利用在猴和小鼠身上建立了較為理想的模型，制備通常采用皮下、靜脈、腹腔注射和肌肉給藥，具有方法可靠且重復(fù)性較好。但是其危險性較高，對于試驗人員和試驗條件有著嚴(yán)格的要求模型制備應(yīng)用6制備偏側(cè)鼠模型應(yīng)用制備動物模型其它建模方法應(yīng)用6制備偏側(cè)鼠模型1〕雄性大鼠，體重230～250g2〕戊巴比妥鈉(30)麻醉后，固定于立體定向儀3〕參照大鼠腦立體定位圖譜,取兩個靶點，將12μg6-立體定向注射于右側(cè)黑質(zhì)a、b兩個靶點(每點注射量6μg，濃度2μg／μl，溶解于含0.1%抗壞血酸的生理鹽水中)。注射速度0.3μl／．注畢留針15。應(yīng)用制備動物模型靈長類模型恒河猴戊巴比妥腹腔麻醉下，切開頸部皮膚，暴露一側(cè)頸總動脈。將新鮮配制的按1.0～1.5／體重溶于2生理鹽水中，逆血流方向緩慢注入血管中。假設(shè)動物在第1次手術(shù)后病癥不明顯，分別在每隔5d后又給予第2～4次注射，直至病癥出現(xiàn)。小鼠模型小鼠對的敏感性存在種系和年齡的差異。一般選10~12周齡，體重25~30g成年C57褐鼠，按體重30~40／腹腔注射，連續(xù)7d。于第6~7次注射后出現(xiàn)暫時性(2~3h)軀干震額、豎毛、尾巴過伸、動作減少及爬桿試驗障礙利血平主要可以通過抑制去甲腎上腺素能神經(jīng)元末梢的再攝取功能，使囊泡內(nèi)貯存的多巴胺()及其他的兒茶酚胺類遞質(zhì)耗竭。將雄性大鼠(體重280—300g)腹腔內(nèi)注射一定劑量的利血平后可使其出現(xiàn)骨傷肌慢硬、震顫、身體屈曲、運動過少以及其他的一些運動病癥。神經(jīng)化學(xué)分析發(fā)現(xiàn)大鼠紋狀體內(nèi)和其他單胺類遞質(zhì)的含量明顯減少利血平模型其它建模方法它存在明顯的缺乏：一是藥物注射造成的運動障礙在不同時間和不同個體之間變異性較大；二是利血乎同時引起了多種遞質(zhì)釋放并且無法造成類似的病理改變。因此該模型的應(yīng)用只局限于探索藥物影響肌僵狀態(tài)的實驗中，對其他的運動病癥的研究現(xiàn)已很少應(yīng)用1991年在雄性大鼠(250~300g)單側(cè)黑質(zhì)內(nèi)注射3+三周后可使其出現(xiàn)明顯的運動行為改變，表現(xiàn)為在新環(huán)境中自主運動減少，短暫的僵直病癥及自發(fā)的同測旋轉(zhuǎn)行為。3+模型研究發(fā)現(xiàn)機(jī)械損傷內(nèi)側(cè)前肋束(可以造成黑質(zhì)內(nèi)的能神經(jīng)元進(jìn)展性死亡。已經(jīng)建立的造模方法有獨突切斷術(shù)和中腦半切術(shù)，尤以前者應(yīng)用較多。機(jī)械損傷模型用該方法造模有如下優(yōu)點：①成功率高，較為經(jīng)濟(jì)。②黑質(zhì)能神經(jīng)元呈現(xiàn)漸進(jìn)性死亡，可以模擬病理變化的全過程，對于研究神經(jīng)元的再生和的預(yù)防有一定的意義。缺點是切斷術(shù)后短時間內(nèi)，損傷的程度不穩(wěn)定。6大鼠模型：在注射6后連續(xù)6周進(jìn)展行為學(xué)檢測，用阿樸嗎啡腹腔注射，1～5分鐘后出現(xiàn)旋轉(zhuǎn),旋轉(zhuǎn)時以健側(cè)后肢為支點,身體向健側(cè)彎曲,首尾相接,原地轉(zhuǎn)動。有的甚至出現(xiàn)翻轉(zhuǎn),有的呈小環(huán)行旋轉(zhuǎn)，速度>7視為成功模型。通過旋轉(zhuǎn)記錄儀計算一定時間內(nèi)旋轉(zhuǎn)的總次數(shù)，可以粗略估計大鼠腦內(nèi)能神經(jīng)元的死亡程度。動物模型的評價行為學(xué)測試致靈長類模型：腹腔注射或靜脈注射第2天，動物即出現(xiàn)自發(fā)性運動減少，呈進(jìn)展性加重，以至于運動不能，弓背姿勢，四肢緊張性彎曲，肌強(qiáng)直伴震顫，吞咽困難，不能進(jìn)食及發(fā)音減弱。小鼠模型：爬桿實驗：將一直徑為25的軟木小球固定于一根長50、粗1的木桿頂部,木桿上纏上紗布以防打滑，然后將被測小鼠放到小球上，并記錄以下時間：小鼠從小球上下來所需的時間，小鼠爬完稈子的上半部和下半部所需的時間。游泳實驗：將受試小鼠放入一個20×30×20的水箱中，水溫為22℃～25℃。假設(shè)在受試時間內(nèi)能連續(xù)不斷的游泳者記3分，大局部時間游泳僅偶爾漂浮者記2.5分，漂浮時間占整個受試時間50%以上者記2.0分，偶爾游泳者記0.5分，偶爾用后肢游動并漂浮在一起者記1.0分。以正常小鼠作為對照，最后計算得分情況，并作統(tǒng)計學(xué)分析。將動物麻醉后，用0.9%鹽水和4%多聚甲醛灌注固定，連續(xù)冰凍切片，行酪氨酸羥化酶免疫組織化學(xué)染色。毀損一側(cè)黑質(zhì)和腹側(cè)背蓋區(qū)的陽性神經(jīng)元明顯消失，而同一腦片健側(cè)可見大量陽性神經(jīng)元。形態(tài)學(xué)評價

利用高效液相2電化學(xué)法測定模型黑質(zhì)及紋狀體中多巴胺及其代謝產(chǎn)物高香草酸()含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)各種動物模型毀損側(cè)黑質(zhì)、紋狀體內(nèi)、含量均顯著降低。神經(jīng)生化改變

治療金剛烷胺左旋多巴抗膽堿能藥物多巴胺受體沖動劑抗膽堿能藥物藥物：東莨菪堿、鹽酸苯海索作用：1、能維持紋狀體的遞質(zhì)平衡2、對震顫和肌強(qiáng)直有效金剛烷胺1、促進(jìn)神經(jīng)末梢釋放多巴胺，并阻止其再攝??；2、能改善震顫、肌強(qiáng)直和運動緩慢等病癥。左旋多巴制劑左旋多巴合并多巴脫羧酶抑制劑是目前最有效的藥物。對各期病人都有效，但一般主張病人出現(xiàn)姿勢平衡障礙或工作受到影響時使用，它對運動緩慢和肌強(qiáng)直療效好，對震顫亦有效。多巴胺受體沖動劑1、早期：可延緩多巴胺代替藥物的使用；2、中晚期：改善病癥，并減少替代藥物的用量。隨著對的發(fā)病機(jī)制研究的不斷深入，目前，已有學(xué)者應(yīng)用患者血清、脂多糖()、鐵離子(3+)、32氮基酪氨酸注射于單側(cè)黑質(zhì)來建立偏側(cè)大鼠模型。等已成功地制備了α轉(zhuǎn)基因小鼠和轉(zhuǎn)基因果蠅，高表達(dá)人類α的轉(zhuǎn)基因小鼠具有的局部特征?？傊壳敖⒌膭游锬Ｐ投际鞘箘游镌诙虝r間內(nèi)出現(xiàn)帕金森病的病癥或病理變化，很難模仿帕金森病這一神經(jīng)系統(tǒng)的慢性疾病的自然進(jìn)程。因此，獲得一種更為理想的帕金森病動物模型，將更有利于對帕金森病的發(fā)病機(jī)制及實驗治療進(jìn)展深入研究。機(jī)遇與挑戰(zhàn)

除上述模型，等還建立了動物模型。為一種蛋白酶體抑制劑，此模型為研究人類相關(guān)的運動障礙和病理病因?qū)W提供了一個很有價值的平臺。目前，在常染色體顯性家族患者腦內(nèi)發(fā)現(xiàn)的高表達(dá)突變的亮氨酸豐富區(qū)重復(fù)激酶2(22，2)在發(fā)病過程中可能具重要作用，為建立新的基因模型提供了理論根底。此外，采用細(xì)菌人工染色體(，)技術(shù)介導(dǎo)α轉(zhuǎn)基因鼠模型也將成為今后研究致病機(jī)制的有力工具。

盡管目前尚無完全理想的模型,但隨著分子發(fā)病機(jī)制研究的逐步深入，相信動物模型的建立將更日臻完善。參考文獻(xiàn)1、王彥永，顧平.建立帕金森病動物模型的研究進(jìn)展，中風(fēng)與