微波輔助萃取—氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用

分析石蒜中的加蘭他敏

指導老師：李攻科教授報告人：汪軍霞1.前言

前蘇聯(lián)科學家首次分離出了加蘭他敏。加蘭他敏是一種具有可逆性和選擇性的乙酰膽堿酯酶抑制劑（AChE），可以作為治療AD的藥物。

1.1加蘭他敏及其氫溴酸鹽的化學性質(zhì)和組成分子式：C17H21NO3

分子量：287.36化學名稱：4a,5,9,10,11,12-Hexahydro-3-methoxy-11-methyl-6H-benzofuro[3a,3,2-ef][2]benzazepin-6-ol

1.2.1藥理作用研究概況重癥肌無力脊髓前角灰質(zhì)炎（小兒麻痹癥）后遺癥術后腸肌麻痹尿潴留解箭毒阿爾茨海默病1.2.1.1藥理作用特點具有可逆性和選擇性的乙酰膽堿酯酶抑制劑（AChE）作用時間長無毒性或致癌作用耐受性好

1.2.2加蘭他敏的傳統(tǒng)提取方法概述傳統(tǒng)生產(chǎn)工藝：將石蒜通過乙醇熱提，洗滌，萃取，重結晶，得到氫溴酸加蘭他敏原料藥。缺點：能耗高、原輔料損耗大、生產(chǎn)周期長，而且加蘭他敏提取不完全。

1.3微波輔助萃取技術微波輔助萃取原理微波輔助萃取特點微波輔助萃取系統(tǒng)MAE在植物提取中的應用

1.3.1微波輔助萃取原理

微波加熱有兩種機理：離子傳導和偶極子轉(zhuǎn)動。物質(zhì)吸收微波的程度主要取決于其介電常數(shù)，被萃取物質(zhì)進入介電常數(shù)小，微波吸收能力相對較差的萃取劑中。

1.3.2

微波輔助萃取特點升溫速度快加熱均勻選擇性好萃取效率高伴有生物效應

1.3.4MAE在植物提取中的應用

最早的報道來自1986年，匈牙利學者GanzlerK用微波提取了羽扇豆、玉米等作物中的油脂、棉籽酚等有效成分。國內(nèi)外已有很多將MAE應用于中藥中有效成分提取的文獻報道。本實驗室的研究人員在這方面也做了大量的工作。

2實驗部分儀器及操作條件試劑和樣品樣品處理過程定性和定量2.1儀器及操作條件儀器MarsⅩ型微波爐（CEM，USA）；R201旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海申科機械研究所）；HP-6890GC-5973MSD配G1701B.02.05工作站（Hewlett-Packard，USA）;DB-5MS熔融毛細管柱（J&W，CA）。2.2試劑和樣品氫溴酸加蘭他敏標準品購自Sigma公司。甲醇、乙醇、石油醚（沸程：90～120

℃）、乙醚、丙酮、乙酸乙酯、鹽酸、濃氨水、碳酸鈉（分析純試劑，廣州化學試劑廠）。石蒜：鱗莖棕黑色片狀物，有特殊香味。2.3樣品處理過程前處理：粉碎，過篩，儲存在干燥器中。微波輔助萃?。憾糠Q取樣品放入微波罐中，加入一定體積的萃取溶劑，在一定的控制溫度下萃取一定的時間。取出萃取液，過濾，濾液旋干后甲醇溶解，定容至5mL。乙醇加熱回流萃取：準確稱取1g石蒜樣品，放入圓底燒瓶中，加入一定體積的萃取溶劑，水浴加熱回流2h后，冷卻過濾，再旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，用甲醇定容至5mL，取1μL用GC-MS測定。

圖二石蒜樣品的甲醇溶液色譜圖（標記為1的是加蘭他敏的峰）3結果與討論

微波萃取溶劑的選擇微波條件的優(yōu)化微波輔助萃取方法的線性范圍、檢出限、回收率和精密度和傳統(tǒng)方法的對比3.1微波萃取溶劑的選擇正確選擇萃取溶劑是實現(xiàn)高效率萃取的關鍵步驟。MAE中，所選的溶劑應滿足以下條件：

1具有吸收微波及將微波轉(zhuǎn)化為熱能的能力；

2能夠選擇性的從樣品基體中將待測物分離萃取出來；

3方便于后續(xù)處理過程。

3.2微波條件的優(yōu)化實驗號顆粒度/mesh溶劑體積/ml輻射溫度/C輻射時間/min峰面積相對峰面積120~401065536.8220~4020751566.1320~4030852583.5440~6010752569.9540~6020855100640~6030651597.27>6010851558.48>6020652567.99>603075578.3表2微波萃取條件的正交實驗設計及峰面積結果（OAD9(43)）

表3各因素不同水平對應的峰面積之和及平均值（%）注：Ki—峰面積之和；ki—峰面積平均值。

顆粒度／mesh溶劑體積／mL輻射溫度／℃輻射時間／minK160313023534430216536286769623871K286473924757429756937708371774523K366236929838378807828392671625482k120104341178143402178762223207957k228824641252476582312569423924841k322078976279459602609464223875161

圖三

顆粒度、溶劑體積、控制溫度、輻射時間于萃取效率的影響

3.3微波輔助萃取方法的線性范圍、檢出限、回收率和精密度表5線性范圍、檢出限、回收率和精密度線性方程Y=3.3048E5X－1.2784E7線性相關系數(shù)R0.9996線性范圍10~100mg·L-1檢出限3.42mg·L-1回收率99.3%RSD7.9%(n=6)3.4和傳統(tǒng)方法的對比

表6微波萃取法與乙醇加熱回流萃取法測定加蘭他敏的結果比較

加蘭他敏的含量/mg·L-1

RSD/%(n=6)萃取時間/min微波萃取法96.64.45乙醇加熱回流萃取法99.49.91204.結論

本實驗建立了MAE－GC－MS分析石蒜中加蘭他敏的方法，并且利用正交設計實驗優(yōu)化了微波萃取測定石蒜樣品中加蘭他敏的條件,方法平均回收率99.3%，檢出限3.42mg·L-1，RSD=4.4%，線性范圍10~100mg·L-1。將本方法與乙醇加熱回流提取法相比，結果表明本方法省時、精密度好、操作簡便，適合于石蒜中加蘭他敏的快速測定。

致謝

在本論文的研究工作和寫作過程中，得到了許多人的指導、關心和幫助。首先，要衷心感謝我的導師李攻