臨床前藥物毒理學(xué)評(píng)價(jià)的內(nèi)容急性毒性作用長期毒性作用局部毒性作用特殊毒性作用一般藥理研究毒理學(xué)研究毒性作用安全性藥理研究副作用急性毒性研究金晶中山大學(xué)藥學(xué)院

全身用藥的毒性研究急性毒性研究長期毒性研究急性毒性實(shí)驗(yàn)研究第一節(jié)相關(guān)概念及目的第二節(jié)急性毒性實(shí)驗(yàn)內(nèi)容第三節(jié)案例分析一、基本概念急性毒性

(acutetoxicity)：

指機(jī)體（人或試驗(yàn)動(dòng)物）一次接觸或24小時(shí)內(nèi)多次接觸化學(xué)物后在短期（最長到14天）內(nèi)所發(fā)生的毒性效應(yīng)，包括一般行為、外觀改變、大體形態(tài)變化以及死亡效應(yīng)。急性毒性實(shí)驗(yàn)(acutetoxicitytest)：

是指研究機(jī)體（實(shí)驗(yàn)動(dòng)物）一次接觸或24小時(shí)內(nèi)多次接觸藥物產(chǎn)生的快速而劇烈的中毒效應(yīng)。一、基本概念1、半數(shù)致死量，LD50，引起死亡劑量的50%

最重要的參數(shù)二、急性毒性作用的有關(guān)參數(shù)化合物經(jīng)口急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)毒性分級(jí)大鼠經(jīng)口LD50(mg/kg)大約相當(dāng)體重70kg人的致死劑量mg/kg6級(jí)，極毒5級(jí)，劇毒

4級(jí)，中等毒3級(jí)，低毒

2級(jí)，實(shí)際無毒1級(jí)，無毒<11-5051-500501-50005001-15000>15000稍嘗500-40004000-3000030000-250000250000-50000>5000002、ED，TD：ED50，TD50二、急性毒性作用的有關(guān)參數(shù)1、測(cè)試和求出化合物的急性毒性參數(shù)，初步估算對(duì)人類毒害的危險(xiǎn)性

通常以半數(shù)致死量（LD50）為最主要的參數(shù)，并根據(jù)LD50值進(jìn)行急性毒性分級(jí)三、急性毒性實(shí)驗(yàn)的目的2、闡明受試化合物急性毒性的中毒特征

通過觀察動(dòng)物中毒表現(xiàn)、毒性作用強(qiáng)度和死亡情況，初步認(rèn)識(shí)中毒情況，為預(yù)防及治療提供依據(jù)3、為長期毒性實(shí)驗(yàn)和其它實(shí)驗(yàn)提供接觸劑量和觀察指標(biāo)的依據(jù)4、為毒理學(xué)機(jī)制研究提供初步線索三、急性毒性實(shí)驗(yàn)的目的急性毒性試驗(yàn)

毒性反應(yīng)類型

定性出現(xiàn)和消失時(shí)間可能的靶器官和死亡原因致死量定量最大給藥量半數(shù)致死量1、半數(shù)致死量法：經(jīng)典方法，設(shè)計(jì)4-6個(gè)劑量，每個(gè)劑量10只動(dòng)物，至少有兩組動(dòng)物產(chǎn)生部分反應(yīng)（死亡率大于0%，小于100%）2、最大給藥量法：低毒受試物采用3、上下法：固定劑量四、急性毒性實(shí)驗(yàn)的常用方法五、急性毒性實(shí)驗(yàn)方法的要點(diǎn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給藥途徑給藥劑量觀察周期觀察指標(biāo)的選擇、計(jì)算方法和評(píng)價(jià)總體原則：急性毒性反應(yīng)與人近似易于飼養(yǎng)、操作方便繁殖力較強(qiáng)，數(shù)量較大價(jià)格較低，易于獲得（一）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇和要求主要原則除特殊需要外，首選哺乳動(dòng)物實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的物種和品系

嚙齒類（rodentspecies）

非嚙齒類（nonrodentspecies）小鼠：昆明種、NIH、ICR大鼠：Sprague-Dawley（SD）、Wistar犬或猴為了有利于預(yù)測(cè)化合物對(duì)人的危害，要求選擇兩種以上的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，最好一種為嚙齒類，一種為非嚙齒類，分別求出其急性毒性參數(shù)。根據(jù)接觸途徑選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物急性經(jīng)口和吸入毒性試驗(yàn)大鼠、小鼠急性經(jīng)皮毒性試驗(yàn)成年大鼠、豚鼠、家兔實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的物種和品系大鼠：180-240g小鼠：18-25g家兔：2-2.5kg實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的年齡和體重剛成年、健康、未曾交配和受孕的動(dòng)物小動(dòng)物根據(jù)體重同一次試驗(yàn)同一批實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重變異范圍不應(yīng)超過平均體重的20%實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的性別雌雄各半如雌、雄動(dòng)物毒效應(yīng)有明顯差異，應(yīng)分別并求出雌性和雄性動(dòng)物的LD50值特殊的試驗(yàn)研究可僅作單一性別的急性毒性試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的預(yù)檢給藥前檢疫觀察大、小鼠、兔、豚鼠1周，犬猴2~3周①適應(yīng)新環(huán)境，減少環(huán)境和生理?xiàng)l件變化可能對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響②篩檢健康狀況不符合試驗(yàn)要求的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的給藥前禁食處理經(jīng)口途徑染毒，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物胃腸道內(nèi)食物存留量對(duì)化學(xué)毒物的毒性可產(chǎn)生較明顯的干擾

大、小鼠隔夜禁食，給藥2h后提供飼料經(jīng)口多次給藥可不禁食（二）受試物及處理理化特性水溶液、混懸液、油溶液水溶性受試物：蒸餾水、去離子水、生理鹽水，保持與體內(nèi)滲透壓一致（注射）水不溶性受試物：溶于或懸浮于適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑中受試物一般應(yīng)臨用前新配受試物成分和配方應(yīng)穩(wěn)定不變(三)給藥方法模擬實(shí)際接觸的途徑和方式有利于不同化學(xué)物之間結(jié)果的比較受試物的性質(zhì)和用途受試物毒性評(píng)價(jià)程序的要求藥品：經(jīng)口、注射、皮膚工業(yè)毒物：經(jīng)呼吸道、皮膚農(nóng)用化學(xué)物：經(jīng)口、皮膚、呼吸道食品：經(jīng)口環(huán)境污染物：經(jīng)口、呼吸道、皮膚給藥途徑給藥方法消化道、呼吸道、皮膚、注射

給藥途徑影響受試物急性毒性

給藥方法不同途徑的吸收量和吸收速率吸收速率：靜脈注射>呼吸道>肌肉注射>腹腔注射>皮下注射>消化道>皮內(nèi)注射>經(jīng)皮同一受試物不同給藥途徑LD50的大小通常符合上述規(guī)律給藥容量常規(guī)給藥容量（單位：mL）i.g.s.c.i.p.i.v.小鼠0.2-0.40.1-0.20.1-0.20.1-0.2大鼠1-1.50.5-10.5-10.5-1（四）劑量選擇參考新化學(xué)物的理化性質(zhì)參考相關(guān)資料先用少量動(dòng)物，以較大的劑量間隔給藥，找出10%-90%（或0%-100%）的致死劑量范圍，然后設(shè)計(jì)正式實(shí)驗(yàn)的劑量和分組根據(jù)試驗(yàn)所選的LD50計(jì)算方法確定劑量組數(shù)預(yù)試一般每組4只動(dòng)物，每次3組，以10倍為組距。根據(jù)第一次預(yù)試結(jié)果判定需要增加還是降低劑量，組距保持不變，直至粗略預(yù)測(cè)到LD100及LD0為止。各組劑量的計(jì)算i=（lgLD90-lgLD10）/（n-1）或i=（lgLD100-lgLD0）/（n-1）

i為組距，n為設(shè)計(jì)的劑量組數(shù)。以最低劑量值（LD0或LD10）的對(duì)數(shù)劑量加上一個(gè)i值，即是第二個(gè)劑量組的對(duì)數(shù)劑量，依次類推直至最高劑量組劑量選擇劑量選擇化學(xué)物L(fēng)D50大于2g/kg或5g/kg，表明毒性不大我國藥品的毒理研究指導(dǎo)原則規(guī)定要以最大容積最高濃度給予動(dòng)物后未見死亡不必計(jì)算LD50全面觀察動(dòng)物的各種反應(yīng)和變化，仔細(xì)分析實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在染毒后出現(xiàn)的中毒表現(xiàn)、劑量效應(yīng)、時(shí)間分布。觀察記錄的內(nèi)容：中毒體征及發(fā)生過程死亡情況和時(shí)間分布體重病理形態(tài)學(xué)變化（五）毒性作用觀察毒性作用觀察中毒體征及發(fā)生過程詳細(xì)觀察和記錄動(dòng)物出現(xiàn)的中毒體征發(fā)生時(shí)間體征發(fā)展的經(jīng)過各個(gè)系統(tǒng)的特征初步確定急性毒性靶器官不同表現(xiàn)提供毒性機(jī)制的信息

續(xù)表

嚙齒類動(dòng)物急性中毒表現(xiàn)

毒性作用觀察死亡情況和時(shí)間分布實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的死亡數(shù)對(duì)LD50值產(chǎn)生明顯影響分析中毒死亡時(shí)間的分布規(guī)律可以提供重要信息：原形，代謝體重毒性作用觀察反映動(dòng)物中毒后綜合性整體變化，比較客觀簡便的量化指標(biāo)應(yīng)定期多次稱量動(dòng)物的體重變化，一般為每周1次或2次對(duì)體重指標(biāo)的變化要仔細(xì)觀察和分析體重變化的原因毒性作用觀察影響食欲或消化系統(tǒng)的功能影響食物的吸收和利用影響水的攝取腎功能急性損傷毒性作用觀察病理檢查死亡動(dòng)物：大體病理變化，如臟器外觀、大小、色澤的變化，有無充血、出血、水腫或其他改變存活動(dòng)物：觀察期結(jié)束時(shí)亦應(yīng)進(jìn)行解剖檢查，必要時(shí)做組織病理學(xué)檢查（六）觀察時(shí)間和周期染毒以后應(yīng)即刻開始觀察動(dòng)物中毒表現(xiàn)和死亡情況給藥當(dāng)天應(yīng)連續(xù)或多次觀察，以后可根據(jù)情況，每天2次或多次觀察直至試驗(yàn)周期結(jié)束觀察周期一般為14天LD50(LC50)計(jì)算時(shí)以觀察周期內(nèi)各組動(dòng)物的總死亡數(shù)為依據(jù)不同化學(xué)物質(zhì)引起動(dòng)物死亡的時(shí)間存在個(gè)體差異速殺型化學(xué)毒物僅計(jì)算24h的死亡率觀察時(shí)間和周期

急性毒性試驗(yàn)求出LD50(LC50)值，通過LD50值進(jìn)行急性毒性分級(jí)(acutetoxicityclassification)，評(píng)價(jià)毒物的急性毒性強(qiáng)弱，比較毒物的急性毒性大小六、急性毒性分級(jí)和評(píng)價(jià)急性毒性分級(jí)和評(píng)價(jià)

急性毒性分級(jí)和評(píng)價(jià)按照急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)毒性大小是相對(duì)粗略的分級(jí)報(bào)告：LD50、急性毒性級(jí)別；中毒體征、出現(xiàn)體征時(shí)間、死亡前征兆、死亡時(shí)間和劑量組間分布、存活動(dòng)物的體重變化和恢復(fù)情況、死亡動(dòng)物的病理變化舉例吳茱萸不同組分對(duì)小鼠急性毒性試驗(yàn)比較研究1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐R床上曾有服用吳茱萸過量致死的不良反應(yīng)報(bào)道，并在血中檢測(cè)出了吳茱萸生物堿。為了全面、客觀、科學(xué)地考察吳茱萸藥材的毒性，初步判斷不同提取方式對(duì)其毒性的影響，為進(jìn)一步深入、系統(tǒng)研究吳茱萸的毒性，本試驗(yàn)對(duì)吳茱萸藥材的不同組分進(jìn)行了急性毒性試驗(yàn)比較研究，以期為臨床安全合理用藥提供試驗(yàn)依據(jù)。2、藥物和材料2、藥物和材料3、方法揮發(fā)油組分的LD50測(cè)定：3、方法每天觀察1次，稱取體重，密切觀察各小鼠的動(dòng)度進(jìn)食、飲水情況及14d內(nèi)可能出現(xiàn)的動(dòng)度、異常肌肉運(yùn)動(dòng)、對(duì)外反應(yīng)、瞳孔改變、異常分泌物、大小便異常、眼球凸出、眼瞼下垂、呼吸異常、皮膚顏色改變等毒性反應(yīng)和死亡情況。若有小鼠死亡，則將死亡小鼠解剖,肉眼觀察臟器的改變，14d觀察期結(jié)束后,將每組存活的小鼠處死進(jìn)行解剖,按照上述同樣方法對(duì)主要臟器大體病理變化進(jìn)行肉眼觀察。4、結(jié)果4、結(jié)果4、結(jié)果4、結(jié)果4、結(jié)果與全組分組，醇提組分組，水提組分組的結(jié)果進(jìn)行比較，詳見文獻(xiàn)，得到以下結(jié)論：急性毒性評(píng)價(jià)外源化學(xué)物急性毒性分級(jí)（WHO）毒性分級(jí)大鼠一次經(jīng)口LD50(mg/kg)6只大鼠吸入4小時(shí)，死亡2~4只的濃度(ppm)兔經(jīng)皮LD50(/mg/kg)對(duì)人可能致死的估計(jì)量g/kg總量(g/60kg)劇毒<1<10<5<0.050.1高毒1~10~5~0.05~3中等毒50~100~44~0.5~30低毒500~1000~350~5~250實(shí)際無毒5000~10000~