《分解纖維素的微生物的分離》素材一、課題目標簡述纖維素酶的種類及作用，從土壤中分離出分解纖維素的微生物，討論這類微生物的應(yīng)用價值。二、課題重點與難點課題重點：從土壤中分離分解纖維素的微生物。課題難點：從土壤中分離分解纖維素的微生物。三、課題背景分析教材首先說明了纖維素的化學(xué)組成以及纖維素在生物圈的廣泛分布，由此轉(zhuǎn)入到如何對纖維素進行有效利用的問題。接著，教材介紹了產(chǎn)纖維素酶的微生物能夠分解纖維素，因此，對纖維素的利用離不開對分解纖維素的微生物的研究。最后，教材點明了本課題的研究主題，即從土壤中分離能夠分解纖維素的微生物。四、基礎(chǔ)知識分析與教學(xué)建議（一）纖維素與纖維素酶知識要點：1.纖維素在生物圈的分布；2.纖維素酶的作用。教學(xué)建議：有關(guān)纖維素的知識，教師可以聯(lián)系必修模塊《分子與細胞》中多糖的知識并安排學(xué)生通過閱讀進行自學(xué)，學(xué)生自學(xué)后應(yīng)該能夠說出纖維素的化學(xué)組成以及在生物圈中的分布狀況。關(guān)于纖維素酶的作用，教師可以參照課本的楷體字部分做演示實驗。該實驗的現(xiàn)象明顯，能使學(xué)生對纖維素酶的作用留下深刻的印象。如果不做實驗，也可以參照課本中圖2-12來了解纖維素酶的作用。（二）纖維素分解菌的篩選知識要點：1.剛果紅染色法；2.剛果紅染色法的原理。教學(xué)建議：教材在介紹剛果紅染色法之前，首先用“篩子篩沙”這一形象的比喻來說明篩選微生物的基本思想方法。教師還可以結(jié)合本專題課題2介紹選擇培養(yǎng)基的有關(guān)內(nèi)容，進一步引導(dǎo)學(xué)生深入認識分離微生物的基本思想。剛果紅染色法的知識難度并不大，學(xué)生通過自學(xué)就能夠理解。五、實驗案例土壤中纖維素分解菌的分離實驗的具體操作步驟如下。1.土樣采集

土樣采集的方法與本專題課題2類似。土樣的采集要選擇富含纖維素的環(huán)境，這是因為在纖維素含量豐富的環(huán)境，通常會聚集較多的分解纖維素的微生物。如果找不到合適的環(huán)境，可以將濾紙埋在土壤中，過一個月左右也會有能分解纖維素的微生物生長。2.選擇培養(yǎng)

選擇培養(yǎng)需要的儀器有：250mL錐形瓶、無菌稱量瓶、藥匙、1mL和10mL的移液管、天平、搖床、溫度計等。培養(yǎng)基的制備參照課本旁欄中的比例配制。在250mL錐形瓶中裝入30mL培養(yǎng)基，用8層紗布做成瓶塞，將瓶口塞緊，再在瓶塞外包裹兩層包裝紙（或報紙），用線繩扎緊，在121℃下高壓蒸汽滅菌20min。選擇培養(yǎng)的操作：稱取土樣20g，在無菌條件下加入裝有30mL培養(yǎng)基的搖瓶中。將搖瓶置于搖床上，在30℃下振蕩培養(yǎng)1～2d，至培養(yǎng)基變混濁。此時可以吸取mL培養(yǎng)液進行梯度稀釋和涂布平板，也可以按課本中所述，重復(fù)選擇培養(yǎng)的步驟一次，然后再進行梯度稀釋和涂布平板。3.剛果紅染色法分離

纖維素分解菌這一步所需要的儀器有：無菌培養(yǎng)皿、涂布器、1mL移液管，裝有9mL無菌水的20mL大試管，溫箱等。培養(yǎng)基的制備參照課本旁欄中的比例配制。在500mL三角瓶中裝入200mL培養(yǎng)基，在121℃下高壓蒸汽滅菌20min。倒平板操作：將滅菌后的固體培養(yǎng)基熔化，按無菌操作的要求，在無菌的培養(yǎng)皿中倒入15～20mL培養(yǎng)基，凝固后待用。制備菌懸液：按照本專題課題1的稀釋操作方法，將選擇培養(yǎng)后的培養(yǎng)基進行等比稀釋，稀釋最大倍數(shù)至106。涂布平板：將稀釋度為104～106的菌懸液各取mL，滴加在平板培養(yǎng)基上，用涂布器將菌液涂布均勻，在30℃倒置培養(yǎng)，至菌落長出。每個稀釋度下需涂布3個平板，并注意設(shè)置對照。剛果紅染色的具體操作步驟參照課本［資料三］。六、課題成果評價（一）培養(yǎng)基的制作是否合格以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落：對照的培養(yǎng)基在培養(yǎng)過程中沒有菌落生長則說明培養(yǎng)基制作合格。如果觀察到產(chǎn)生透明圈的菌落，則說明可能獲得了分解纖維素的微生物。（二）分離的結(jié)果是否一致：由于在土壤中細菌的數(shù)量遠遠高于真菌和放線菌的數(shù)量，因此最容易分離得到的是細菌。但由于所取土樣的環(huán)境不同，學(xué)生也可能得到真菌和放線菌等不同的分離結(jié)果。七、答案和提示（一）旁欄思考題1.本實驗的流程與課題2中的實驗流程有哪些異同？答：本實驗流程與課題2的流程的區(qū)別如下。課題2是將土樣制成的菌懸液直接涂布在以尿素為惟一氮源的選擇性培養(yǎng)基上，直接分離得到菌落。本課題通過選擇培養(yǎng)，使纖維素分解菌得到增殖后，再將菌液涂布在選擇培養(yǎng)基上。其他步驟基本一致。2.為什么要在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌？答：由于生物與環(huán)境的相互依存關(guān)系，在富含纖維素的環(huán)境中，纖維素分解菌的含量相對提高，因此從這種土樣中獲得目的微生物的幾率要高于普通環(huán)境。3.將濾紙埋在土壤中有什么作用？你認為濾紙應(yīng)該埋進土壤多深？答：將濾紙埋在土壤中能使纖維素分解菌相對聚集，實際上是人工設(shè)置纖維素分解菌生存的適宜環(huán)境。一般應(yīng)將紙埋于深約10cm左右腐殖土壤中。4.想一想，這兩種方法各有哪些優(yōu)點與不足？你打算選用哪一種方法？提示：參看本課題參考資料的內(nèi)容。5.為什么選擇培養(yǎng)能夠“濃縮”所需的微生物？答：在選擇培養(yǎng)的條件下，可以使那些能夠適應(yīng)這種營養(yǎng)條件的微生物得到迅速繁殖，而那些不適應(yīng)這種營養(yǎng)條件的微生物的