DB130865.020.20DB1308B05承 德 市 地 方 標(biāo) 準(zhǔn)DB1308/T316—2022香菇固體轉(zhuǎn)液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程2022-10-31發(fā)布 2022-11-01實(shí)施承德市市場(chǎng)監(jiān)督管理局 發(fā)布DB1308/T316DB1308/T316—2022前 言本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由承德市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局歸口。本文件起草單位：平泉市希才應(yīng)用菌科技發(fā)展有限公司。I香菇固體轉(zhuǎn)液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程范圍本文件規(guī)定了香菇固體轉(zhuǎn)液體菌種生產(chǎn)的前期準(zhǔn)備、操作流程以及各步驟的操作方法指示。本文件適用于香菇固體轉(zhuǎn)液體菌種生產(chǎn)過(guò)程管理。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。本文件沒(méi)有規(guī)范性引用文件。術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。前期準(zhǔn)備培養(yǎng)基小米谷粒、0.5%食品級(jí)甘油、葡萄糖粉、食品級(jí)酵母粉、100目豆粕粉、100目玉米粉等。儀器設(shè)備高壓滅菌鍋、超凈工作臺(tái)、液體發(fā)酵罐、生化培養(yǎng)箱、搖床、pH酸度計(jì)、比重計(jì)、打漿機(jī)、液體0.950750mlPDA操作流程谷粒選擇→谷粒浸泡→濾水→添加石膏→裝瓶→滅菌→接菌→菌絲培養(yǎng)→搖瓶→后續(xù)養(yǎng)菌→低溫處理→谷粒菌種懸浮液制備→懸浮液過(guò)濾→轉(zhuǎn)罐擴(kuò)大培養(yǎng)→檢驗(yàn)→備用。操作方法谷粒選擇選擇帶皮小米谷粒，籽粒飽滿(mǎn)、無(wú)雜質(zhì)、直徑為0.1cm～0.15cm，破碎率控制在2%以?xún)?nèi)。谷粒浸泡使用塑料桶或箱作為容器，將谷粒倒入容器中，加水浸泡，水與谷粒的體積比為2:1。環(huán)境溫度20℃１415101024h濾水浸泡完成后濾水，將谷粒置于50目篩子上進(jìn)行濾水；以篩底沒(méi)有水滴滴下，且手抓谷粒不粘手為宜。添加石膏按照谷粒干重的1%比例添加石膏，攪拌均勻。裝瓶750ml1.3kg～1.4kg。使用無(wú)棉蓋體扣蓋封口，作為培養(yǎng)基。滅菌裝瓶后的培養(yǎng)基在4h121℃時(shí)保持4h，確保滅菌徹底。接菌2520mm×200mm的斜面試管PDA培養(yǎng)基母種轉(zhuǎn)接4瓶培養(yǎng)基。菌絲培養(yǎng)接菌完成后，在培養(yǎng)溫度為22℃，空氣相對(duì)濕度為60%，二氧化碳濃度不超過(guò)0.2%的條件下進(jìn)行培養(yǎng)。搖瓶當(dāng)菌絲長(zhǎng)到培養(yǎng)基1/4后續(xù)養(yǎng)菌待培養(yǎng)基中長(zhǎng)滿(mǎn)菌絲后，繼續(xù)培養(yǎng)10d～12d，令菌絲長(zhǎng)入培養(yǎng)基內(nèi)部，充分分解谷粒培養(yǎng)基，使谷粒充分軟化，培養(yǎng)成為谷粒原種。該階段的管理要加強(qiáng)通風(fēng)換氣，二氧化碳濃度不要高于0.15%。低溫處理將長(zhǎng)好菌絲的谷粒菌種在4℃環(huán)境下放置6h。谷粒菌種懸浮液制備在無(wú)菌的條件下，使用打漿機(jī)對(duì)低溫處理的谷粒菌種進(jìn)行充分破碎，在破碎過(guò)程中加入溫度為4℃的0.5%的無(wú)菌甘油溶液，使破碎后的谷粒菌種變成懸浮漿液，其中谷粒菌種與甘油溶液的體積比為1:1。打漿機(jī)對(duì)谷粒菌種進(jìn)行破碎時(shí)采用間歇模式，每旋轉(zhuǎn)30s停頓10s，以旋轉(zhuǎn)10次為限，防止打漿過(guò)程中溫度升高。２懸浮液過(guò)濾三角瓶消毒，安裝消毒后的50目篩片，打漿結(jié)束后倒入三角瓶中過(guò)濾。轉(zhuǎn)罐擴(kuò)大培養(yǎng)在無(wú)菌條件下，將過(guò)濾后的谷粒菌種懸浮液轉(zhuǎn)入到盛裝培養(yǎng)液的液體發(fā)酵罐中進(jìn)行液體發(fā)酵培養(yǎng)，懸浮漿液與培養(yǎng)液的體積比為1:1200。發(fā)酵罐培養(yǎng)液成分按質(zhì)量配比為：玉米粉2%、豆粕粉2%、葡萄糖1.5%、酵母粉0.5%和94%的無(wú)菌水。發(fā)酵罐內(nèi)培養(yǎng)條件為溫度25℃，罐內(nèi)壓力0.01兆帕，培養(yǎng)6d。檢驗(yàn)取樣在擴(kuò)大培養(yǎng)即將結(jié)束時(shí)檢驗(yàn)一次即可，即在培養(yǎng)6d取樣檢驗(yàn)。感官檢查看旋5min不沉淀，表明菌種生長(zhǎng)力強(qiáng)；反之，如果菌絲極易沉淀，說(shuō)明菌絲已老化或死亡。嗅理化試驗(yàn)菌絲干重量取液體菌種10ml，用水分測(cè)試儀烘干至含水量18%，然后稱(chēng)量，菌絲干重≥2g為合格。液體粘稠度將液體菌種置于量筒中，使用比重計(jì)進(jìn)行粘稠度測(cè)量，比重超過(guò)1.2為合格。pH將液體菌種取出后，使用pH值酸度計(jì)進(jìn)行精準(zhǔn)