ICS65.020.30B44中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T14926.52-2001實(shí)驗(yàn)動(dòng)物免疫熒光試驗(yàn)Laboratoryanimal2001-08-29發(fā)布2002-05-01實(shí)施華中：民：共和發(fā)布國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局

GB/T14926.52-2001前本標(biāo)準(zhǔn)修訂了GB/T14926.18—1994《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒檢測(cè)方法》中的免疫熒光試驗(yàn)方法，將其作為一個(gè)獨(dú)立標(biāo)準(zhǔn)列出。本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)科學(xué)技術(shù)部提出并歸口本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)會(huì)。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：賀爭(zhēng)鳴。

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)免疫熒光試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物GB/T14926.52—2001Laboratoryanimal-mmunofluorescenceassay(IFA)范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了免疫熒光試驗(yàn)(IFA)所用試劑、器材和操作步驛等。本標(biāo)準(zhǔn)適用于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物病毒抗體的檢測(cè)2原理含有病毒抗原的細(xì)胞(組織培養(yǎng)細(xì)胞或動(dòng)物組織細(xì)胞)固定于玻片上.遇相應(yīng)抗體形成抗原抗體復(fù)合物。此抗原抗體復(fù)合物仍保持其抗原活性·可與相應(yīng)的第二抗體熒光素結(jié)合物結(jié)合。熒光素在紫外光或藍(lán)紫光的照射下，可激發(fā)出可見的熒光。因此，在熒光顯微鏡下以熒光的有無(wú)和強(qiáng)弱判定結(jié)果。主要試劑與器材3.1試劑3.1.1抗原片的制備將病毒接種于敏感細(xì)胞上（見表1）.待細(xì)胞出現(xiàn)病變或確知細(xì)胞內(nèi)含有豐富的病毒抗原后，用胰酶消化下細(xì)胞,PBS洗滌三次·用適量PBS懸浮細(xì)胞,將細(xì)胞懸液滴于玻片孔中。同時(shí)消化未感染病毒的同批細(xì)胞.滴加同一玻片另一孔內(nèi).作為正常細(xì)胞對(duì)照?？變?nèi)滴加的細(xì)胞以細(xì)胞鋪開、不重疊為宜。室溫干燥后.冷丙酮(4C)固定10min。PBS漂洗后.充分干燥，置于－20℃?zhèn)溆?。在?0C條件下可保存一年。3.1.2羊或兔抗小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、兔、犬或猴1gG異硫氰酸熒光素結(jié)合物，使用時(shí)用含0.01%～0.02%伊文思藍(lán)PBS稀釋至適當(dāng)濃度3.1.3陽(yáng)性血清用用病毒抗原免疫清潔或SPF小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠或普通級(jí)免、犬、猴所獲得的抗血清;或自然感染恢復(fù)后的犬、猴血清。3.1.4陰性血清清潔或SPF小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠血清;或確認(rèn)無(wú)相應(yīng)病毒感染的免、犬、猴血清3.1.5PBS(O.01mol/L,pH7.4)氯化鈉88氯化鉀0.28磷酸二氫鉀0.28磷酸氫二鈉(Na.HPO，·12H.O)2.838蒸水加至1000mL3.1.650%甘油PBS甘油5mLPBS(O.01mol/