課題1DNA的粗提取與鑒定目的要求1、了解從細(xì)胞中提取DNA的基本原理。2、初步掌握DNA的粗提取和鑒定的方法。3、觀察提取出來的DNA。實驗思路1、DNA從哪提?。?、怎樣將DNA與細(xì)胞中的其他物質(zhì)分離？3、怎樣鑒定我們提取的DNA？實驗原理DNA在NaCl溶液中的溶解度，是隨著NaCl的濃度的變化而改變的（如圖5-1）。當(dāng)NaCl的物質(zhì)的量濃度為0.14mol／L時,DNA的溶解度最低。利用這一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。2.DNA不溶于酒精溶液，但是細(xì)胞中的某些物質(zhì)則可以溶于酒精溶液。利用這一原理，可以進(jìn)一步提取出含雜質(zhì)較少的DNA。3.蛋白酶能水解蛋白質(zhì)，但是對DNA沒有影響。4.大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受60－80°C的高溫，而DNA在80°C以上才會變性。5.洗滌劑可以瓦解細(xì)胞膜，但對DNA沒有影響。6.DNA遇二苯胺（沸水?。境伤{(lán)色，因此，二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑。實驗原理二、DNA的粗提取與鑒定的實驗設(shè)計（一）實驗材料的選取材料：注意：

本實驗中，要往雞血中加入抗凝劑（檸檬酸鈉溶液）原則上只要含DNA的生物材料都可以，但是選取DNA含量相對較高的生物組織，成功率更大。?新鮮的雞血雞血為實驗材料進(jìn)行DNA的粗提取②雞血細(xì)胞極易吸水脹破，而用動物肝臟細(xì)胞作實驗材料常常需要勻漿和離心，對設(shè)備要求較高，操作繁瑣，歷時較長雞血細(xì)胞做實驗材料的原因？①、雞血細(xì)胞核的DNA含量豐富，材料易得(1)先將新鮮的雞血離心，獲得雞血細(xì)胞(2)在雞血細(xì)胞中加入一定量的蒸餾水，同時用玻璃棒攪拌，過濾后收集濾液即可。（二）破碎細(xì)胞，獲取含DNA的濾液1、破碎細(xì)胞1、動物細(xì)胞答：蒸餾水對于雞血細(xì)胞來說是一種低滲液體，水分可以大量進(jìn)入血細(xì)胞內(nèi)，使血細(xì)胞脹裂，再加上攪拌的機(jī)械作用，可使雞血細(xì)胞破裂，從而釋放出DNA。為什么加入蒸餾水能使雞血細(xì)胞破裂？利用了什么原理？①植物細(xì)胞需要先用一定的洗滌劑和食鹽溶解細(xì)胞膜.2、植物細(xì)胞討論：加入洗滌劑和食鹽的作用分別是什么？答：洗滌劑是一些離子去污劑，能溶解細(xì)胞膜，有利于DNA的釋放；食鹽的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解.②實例：提取洋蔥DNA時，在切碎的洋蔥中加入一定的洗滌劑和食鹽，進(jìn)行從分的攪拌和研磨，過濾后收集研磨液.2、植物細(xì)胞討論：如果研磨不充分，會對實驗結(jié)果產(chǎn)生怎樣的影響？答：研磨不充分會使細(xì)胞核內(nèi)的DNA釋放不完全，提取的DNA量變少，影響實驗結(jié)果，導(dǎo)致看不到絲狀沉淀物、用二苯胺鑒定不顯示藍(lán)色等。為了純化提取的DNA需要將濾液作進(jìn)一步處理。討論：此步驟獲得的濾液中可能含有哪些細(xì)胞成分？答：可能含有核蛋白和RNA等雜質(zhì)（三）過濾得濾液討論：為什么反復(fù)地溶解與析出DNA，能夠去除雜質(zhì)？答：用高鹽濃度的溶液溶解DNA，能除去在高鹽中不能溶解的雜質(zhì)；用低鹽濃度使DNA析出，能除去溶解在低鹽溶液中的雜質(zhì)。因此，通過反復(fù)溶解與析出DNA，就能夠除去與DNA溶解度不同的多種雜質(zhì)討論：方案二與方案三的原理有什么不同？答：方案二是利用蛋白酶分解雜質(zhì)蛋白，從而使提取的DNA與蛋白質(zhì)分開；方案三利用的是DNA和蛋白質(zhì)對高溫耐受性的不同，從而使蛋白質(zhì)變性，與DNA分離。

方案二利用了酶的專一性；方案三利用了DNA的穩(wěn)定性。（四）DNA的析出與鑒定DNA的析出用的是與濾液體積相等的冷卻的酒精溶液（體積分?jǐn)?shù)為95％），靜置2-3min，溶液中會出現(xiàn)白色絲狀物，這就是粗提取DNA。用玻璃棒沿一個方向攪拌，卷起絲狀物，并用濾紙吸取上面的水。1、DNA的析出2、DNA的鑒定鑒定DNA時在試管中先加入物質(zhì)的量的濃度為2mol/L的NaCl溶液5ml于兩只試管中，其中一只加入DNA絲狀物，各加入二苯胺試劑4ml

。混合均勻后，將試管置于沸水中加熱5min,待試管冷卻后，比較兩只試管中溶液顏色的變化，看看溶解有DNA的溶液是否有藍(lán)色。方法步驟

加入物質(zhì)

目的

1.制備雞血細(xì)胞液

檸檬酸鈉溶液

①

2.提取雞血細(xì)胞細(xì)胞核物質(zhì)

20m1蒸餾水

②

3.溶解細(xì)胞核內(nèi)的DNA

2m1／L的NaCI溶液40mL

③

4.析出含DNA的黏稠物

蒸餾水

④

5.濾取含DNA的黏稠物

⑤

6.將DNA的黏稠物再溶解

2mol／L的NaCl溶液20mL

⑥

7.過濾含DNA的NaCl溶液

⑦

8.提取含有雜質(zhì)較少的DNA

冷卻的95％的酒精50mL

⑧

A:(1)向試管中加入0.015mol／L的NaCl溶液5mL

(2)加入DNA

(3)4mL二苯胺試劑

9.DNA的鑒定

B:(1)向試管中加入0.015mol／L

的NaCl溶液5mL

(2)4mL二苯胺試劑

⑨

①加入檸檬酸鈉溶液的目的是防止血凝固②加速血細(xì)胞破裂

③溶解DNA

④使2mol/L的NaCl溶液稀釋至0.14mol/L使得DNA最大限度地釋出

⑤使含DNA的黏稠物被留在紗布上⑥使含DNA的黏稠物盡可能多的溶解于溶液中⑦除去含DNA的濾液中的雜質(zhì)⑧提取DNA⑨A出現(xiàn)藍(lán)色B無變化目的實驗操作小結(jié)制備雞血細(xì)胞液…………加檸檬酸鈉，靜置或離心↓破碎細(xì)胞，釋放DNA…加蒸餾水，同一方向快速通方向攪拌↓→過濾，除去細(xì)胞壁、細(xì)胞膜等。溶解核內(nèi)DNA…………加入NaCl至2mol/L，同一方向緩慢攪拌↓DNA析出………………加蒸餾水至0.14mol/L，過濾，再溶解到2mol/L溶液中↓→除去細(xì)胞質(zhì)中的大部分物質(zhì)。DNA初步純化…………與等體積95％冷卻酒精混合，析出白色絲狀物↓→除去核蛋白、RNA、多糖等。DNA鑒定………………二苯胺，沸水浴，呈現(xiàn)藍(lán)色觀察你提取的DNA顏色，如果不是白色絲狀物，說明DNA中的雜質(zhì)較多；二苯胺鑒定出現(xiàn)藍(lán)色說明實驗基本成功，如果不呈現(xiàn)藍(lán)色，可能所提取的DNA含量低，或是實驗操作中出現(xiàn)錯誤，需要重新制備四、課題成果評價（一）是否提取出了DNA本實驗提取的DNA粗制品有可能仍然含有核蛋白、多糖等雜質(zhì)（二）分析DNA中的雜質(zhì)（三）不同實驗方法的比較對于不同的實驗方法，本課題可以采用分組的方法進(jìn)行研究。首先選取不同的實驗材料，其次同種材料還可以采用不同方法，從多方面比較實驗結(jié)果，如DNA的純度、DNA的顏色、二苯胺顯色的深淺等，看看哪種實驗材料、哪種提取方法的效果更好1、在制備雞血細(xì)胞液的過程中，加入檸檬酸鈉的目的是（）

A.防止凝血B.加快DNA析出

C.加快DNA溶解D.加速凝血練一練A2、DNA的溶解度最低時，NaCl的物質(zhì)的量濃度為（）

A2mol/lB0.1mol/lC0.14mol/lD0.015mol/lC3、向溶有DNA的2mol/L的NaCl溶液中不斷加入蒸餾水,在這個過程中DNA的溶解度變化情況分別是A減小;減小B增大;增大C先減小后增大D增大;減小4、欲使溶有DNA的2mol/L的NaCl溶液中的DNA析出，最有效的辦法是A加蒸餾水B加礦泉水C加清水D加生理鹽水練一練5、與析出DNA粘稠物有關(guān)的敘述，不正確的是A操作時緩慢滴加蒸餾水，降低DNA的溶解度B操作時用玻棒輕緩攪拌以保證DNA分子的完整C加