中 英 文獻綜第一章腫瘤分子顯像技術(shù)研究進展 第二章腫瘤新生血管顯像研究進展 正引言 第一部分：腫瘤血管靶向多肽RRL作用機制研 第二部分：腫瘤新生血管顯像劑RRL與腫瘤細胞關系研 RRL結(jié) 縮略 附 個人簡 致 核素標記多肽精氨酸-精氨酸-亮氨（RRL）腫瘤分子顯像實驗研博士：盧霞學院：第一醫(yī)院中文獻精氨酸-精氨酸-亮氨酸(RRL)三肽序列能夠特異性的靶向結(jié)合于飾RRL結(jié)構(gòu)使其能夠被放射性核素131I標記，列荷瘤鼠動物模型中對腫瘤組織有很好的顯像效果。本課題期研究結(jié)果的基礎上對RRL特異性RRL多肽顯像劑與腫瘤實131IRRL在不同腫瘤及同一種腫瘤不同時間合成十個氨基酸序列的小分子多肽RRL及對照肽，高效液相色譜(High-performanceliquidchromatography,HPLC和電噴霧質(zhì)譜(electrosprayionization131IRRL與腫瘤來為血管內(nèi)皮生長因子受體-2vascularendothelialgrowthfactor2,VEGFR-2)可能是系，通過PCR技術(shù)檢測受體在mRNA水平的表達量，WesternBlot技術(shù)檢測其在蛋白水平的表達量差異。異硫酸熒光素(fluoresceinisothiocyanate,FITC)記RRL,并與以上不同的細胞系共同孵育結(jié)合，激光共聚焦顯微鏡觀察FITC-RRL(2μg/ml)VEGFR-2RRLVEGFR-224孔板內(nèi)培養(yǎng)正常人腎近曲小管上皮細胞(HK-2)、人(HUVEC)(B16)131I-RRL(37KBq)結(jié)合后，井型γ計數(shù)器測定不同細胞中的放射性計數(shù)差異，確定正常對照組細胞、血管內(nèi)皮細胞及實質(zhì)細胞結(jié)合RRL的不同能力以FITC-RRL(2μg/ml)與以上RRL與不同來源細胞結(jié)合能力的差異。96孔板培養(yǎng)人肝癌細胞，應用不同RRLFITC-RRL131I-RRLCCK-8細胞檢測試劑盒檢測給予不同處理后存活的細胞狀態(tài)及數(shù)量變化，比較不同處理對肝癌細胞作用的差異。BALB/c鼠(2～4周齡)15只，飼養(yǎng)SPF級無菌環(huán)境。培養(yǎng)黑色素瘤細胞（B16(EOMA)、人肝癌細胞(HepG2)、癌細胞(PC3),取對數(shù)生長期細胞，以2×107的密度接種于BALB/c鼠的右側(cè)腋下，腫瘤長至約0.8cm大小，病理切片鑒定腫瘤組織成瘤特性，并進行SPECT顯像，每只顯像鼠尾靜脈注射131I-RRL(7.4MBq)，前列模型鼠對照肽組尾靜脈注射對照肽131I-GGG(7.4MBq)，注射后4、6、12、24、48、72h、10d131I-RRL在黑色素瘤模型鼠體內(nèi)腫瘤組織的131I-RRL24h觀131I-RRL在不同腫瘤中的顯像效果。RRLTry-Cyc-Gly-Gly-Arg-Arg-Leu-Gly-Gly-Cyc,兩個半胱Arg-Arg-Leu(RRL)RRL分子量為和對照肽合成的純度均達到99%。氯胺-T法131I-RRL的標記率達到60%以上，放化純大于95%，在37℃孵育24h，其放化純?nèi)匀淮笥?0%。細胞結(jié)合實驗放射細胞中有大量結(jié)合，在黑色素瘤細胞B16中的結(jié)合量最多。CCK-8細胞檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)PBS對照組和RRL組細胞未見明顯，RRL不同劑量組細胞存活率分別為RRL不同劑量組細胞存活率分別為91%(100μg/ml89%(200μg/ml、56%(300μg/ml)、44%(400μg/ml)，順鉑組不同藥物濃度細胞存活率分別為：SPECT4h131I-RRL的濃聚，在24h72h有明顯的放射性核素的濃聚，顯像效果好，10d時仍有131I-RRL的濃聚，131I-RRL在腫瘤部位的存留時間長。131I-RRL不但能夠列、黑色研究結(jié)論RRL本身并不具有細胞毒性，它不僅能夠與腫瘤來源的內(nèi)皮細胞有大量的結(jié)合而且我們發(fā)現(xiàn)它與多種不同組織來源的實質(zhì)細胞滯留，說明RRL不僅如文獻是新型腫瘤新生血管示蹤劑，而且能夠與多種實質(zhì)細胞特異性結(jié)合是靶向分子示蹤及靶向放射免疫治療具[]：精氨酸-精氨酸-亮氨酸；多肽；腫瘤分子顯像；131I；荷瘤鼠；新生TheapplicationofanovelsmallpeptideRRLastumortargetingtracerinmalignantimagingandradioimmunotherapyPh.DCandidate: XiaLu Pro.RongfuWang PekingUniversityFirstHospitalMajor:ImagingMedicineandNuclearMedicineNumerouspeptideswhichspecificallycombindedtotumorangiogenicendotheliumhavebeenidentified,includingthetripeptidearginine-arginine-leucine(RRL).Radiopeptidesareofincreasinginterestsintumorimagingandtargetedradiotherapyoftumors.TheaimofthisstudyistoinvestigatethefunctionalspecisicityofRRLasatargetingtracerofmalignanttumorangiogenesisandtumorcells.AnimalprotocolswereapprovedbytheInstitutionalAdministrativePanelonLaboratoryAnimalCare.Inthisstudy,asmallpeptideRRLwasdesignedandsynthesizedandaquarterwaslabeledwithfluoresceinisothiocyanate(FITC).TheRRLpeptideandFITC-RRLwassynthesizedusingtheFmocsolidphasemethodandthenidenti?edbyESI-MSysisafterpuri?cationbyHPLC. labeledwithnuclide131I theChloramine-T column.Then,HumanUmbilicalVeinEndothelialCells(HUVEC),B16(Mousemelanomacellline)andHK-2(humankidney2)werecultured,131I-RRLandFITC-RRLwaspreparedtoco-culturewitheachcelllines.BygcountingandFlowCytometry,thedifferentaffinitytoRRLofeachcelllinewasevaluated.Besides,humanhepatocellularlivercarcinomacellline(HepG2)culturedtotestthecytotoxicityofthecompoundsofRRL,FITC-RRLandcistinindifferentcelllines.MicebearingB16tumorsweregiveni.v.injectionsof131I-RRLtoimageinvivolocalizationoftumorvasculatureandtumorcellsfollowingi.v.SPECTrespectively.TheRRL-containingcyclicpeptidecomprisingtheRRLsequencebracketedbyglycinesandterminatedwithcysteineandtyrosineresidues(Tyr-Cys-Gly-Gly-Arg-Arg-Leu-Gly-Gly-Cys-NH2),Reversed-phaseHPLCofthecrudeproductyieldedamainpeakcontaining＞99%oftheabsorbanceat220nm.ESI-MSoftheRRLpeptideshowedthatthemolecularweightwas1040.2beforeoxidationandwas1038.2afteroxidation.InthecontrolpeptideglycinesweresubstitutedfortheRRLsequence(Tyr-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Cys-NH2,GGG),Disul?debondsbetweencysteinesoneachpeptidemaintainsthecyclicstructure.Theradiolabellingefficiencyof131IlabeledRRLpeptidewasabout70%,buttheradiochemicalpuritywasmorethan95%.Uptakeoftargeted131I-RRLandFITC-RRLweresigni?cantlyhigherinB16andHUVECcelllinesthanHK-2cells.Cellcountingkit-8demonstratedthatRRLhasnosignificantCytotoxicitytoHepG2cellscomparedwithPBSgroup.Thelivabilitywas98%(100μg/ml),97%(200μg/ml),95%(300μg/ml),89%(400μg/ml)respectively.ThelivabilityofFITC-RRLwas91%(100μg/ml),89%(200μg/ml),56%(300μg/ml),44%(400μg/ml)andcistinwas(1μg/ml),36%(2μg/ml),34%(3μg/ml),9%(4μg/ml),19%(5μg/ml),respectively.Invivo,SPECTimagingshowedsignificantlyhigherconcentrationsofradioactivityintumortissuewhenusing131I-RRLcomparedwith131I-GGGforMalignantMelanoma.Tumorswereclearlyseenafterinjectionoftracerat24hand72h,anduntil10daysitcanstillbeseeingbySPECT.131I-RRLwasaneffectivemolecularimagingagenttovisualizelivercancerand abesidesprostatecancerandmalignantThesedatesshowedthattumorEC-specificbindingpeptideRRLwasnotonlycan ctwithendothelialcellsbutalsocantargettotumorcellsspecifically.TargetedpeptideRRLmaythusofferanoninvasivetumorvascularandcellsimagingtechniqueforthefunctionaltumorimagingandhasfurtherimplicationsfortherapeutictumor ]Arginine-arginine-leucine;Peptide;Moleculartumorimaging;131I;Nudemicebearingtumor;angiogenesis文獻綜是導致人類的主要原因之一嚴重到人類的生命健康和生都存在極大的。一直以來，各國生命科學家和臨床工作者都致力于利用各種有效對腫瘤進行早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療的“三早”原則更是受到普遍重視。但是目前所應用的大多數(shù)檢測，或缺乏特異性，或靈敏度較低，或在診斷試劑上程序復雜、造價昂貴等，在臨床實際應用中受到一定限制分子影像學是通過現(xiàn)代影像技術(shù)在上對致病分子疾病特征化異常分子、測和研究的技術(shù)。分子影像學包括多種技術(shù)，如分子磁顯像(molecularMRI,mMRI)、磁光譜檢測(magneticresonancespectroscopyoptical)、生物發(fā)光顯像(bioluminescenceimaging)、綠色熒光光學成像技術(shù)(opticalfluorescenceimaging)(targetedultrasound),單光子發(fā)射計算機斷層成像(Single-PhotonEmissionComputedTomography,SPECT)和正電子發(fā)射斷層成像(PositronEmissionTomography,PET)[1],特別是核醫(yī)學顯像技術(shù)PET,通過使用深入疾病分子機制的示蹤劑,如標記寡核苷酸片段、特殊受體蛋白、發(fā)揮生物學活性的酶等,實現(xiàn)了分子生物學和分子醫(yī)學檢測目的,是當前分子影像學的杰出代表。核醫(yī)學可以將任何一項腫瘤分子生物學的成果開發(fā)為相應的腫瘤示蹤劑,完成與臨床的無縫對接,克服了現(xiàn)有分子生物技術(shù)脫離內(nèi)環(huán)境、體內(nèi)復雜信號調(diào)控和不同組織間相互作用的局限性,成為“連接分子生物學和臨床醫(yī)學的橋梁”,無疑在臨床前和臨床研究及應用中具有重要的意義和極大的價值。腫瘤核醫(yī)學(nuclearoncology)是核醫(yī)學最重要的應用領域，是將分子生物學認識腫瘤不同于正常組織細胞代謝的生物學特性,闡明靶或組織的血流情況代謝情況特殊受體密度的變化及與功能的關系癌和抑癌的異常表達、腫瘤組織細胞生物化學代謝的變化與細胞信號傳導機制過程等(如圖1所示),為腫瘤的早期診斷準確分期依據(jù)腫不同的生物學制定化的治療方究之一提供分子水平上的相關有用信息,是世界醫(yī)學領域研究的前沿熱點方向,是現(xiàn)代分子醫(yī)學的追求目標[2]。圖1腫瘤分子功能顯像內(nèi)容。來源于TRENDSinMolecularMedicine,2007,13義寡核苷酸分子探針進行顯像的研究和iR干擾分子顯像的研究腫瘤組織中細胞凋亡顯像研究等領域以及分子靶向放射性核素治療及各種分子探針,即新型放射性藥物的研發(fā)等[3]。人們對的研究曾經(jīng)非常樂觀的態(tài)度甚至將其作為一個計劃制定出在幾十年內(nèi)要攻克這個科學難題但是科學并不以人的意志為微觀方面，包括腫瘤細胞活性改變、細胞受體表達的變化、信號通路的激活與失活等腫瘤生物學性質(zhì)的改變重新認識依據(jù)腫瘤組織不同于正常組子功能影像技術(shù)作為可視化技術(shù)在腫瘤研究過起著制約因素環(huán)節(jié)發(fā)揮非侵入性分子功能影像技術(shù)的歷史可以追溯到1895年WilhelmRoentgen發(fā)現(xiàn)X射線。而現(xiàn)代醫(yī)學的發(fā)展要求在疾病的診斷及治療中綜合應用各種醫(yī)療設備，包括CT、MRI、PET、SPECT、超聲顯像及光學顯像等技術(shù)的融合，實現(xiàn)不同影像技術(shù)之間“取長補短”的目的，為臨床提供有價值的信息。十年前對于腫瘤的研究主要集中于活性改變在發(fā)生發(fā)展過的作用，不斷有新的在腫瘤發(fā)生中的作用得到認識?，F(xiàn)在，研究者逐漸將研究的質(zhì)細胞）特殊的生物學性質(zhì)的改變；細胞外基質(zhì)對腫瘤生長尤其是侵襲力及遠處轉(zhuǎn)移的作用大量的分泌因子和細胞因子等對發(fā)生發(fā)展的進程、期，目前絕大多數(shù)依賴臨床中可用的非侵入性的影像。過去十，腫瘤影年我們的工作重點是將越來越多的研究成果盡快轉(zhuǎn)化為臨床可應用的技 目前腫瘤診斷和治療中遇到導致治療方案[7，8]。正常細胞轉(zhuǎn)化為細胞后最重要的特性就是無限增殖能力及自我更新能力使得幾乎不能治愈并對放化療產(chǎn)生多藥耐[9]早期診斷和早期治療是攻克的三個最重要的分子功能影像技術(shù)在闡明癌前病變細胞惡性轉(zhuǎn)化及最終形成腫瘤的分子機制的過發(fā)揮重要作用[10]的早期診斷無疑是最重要的可以明顯的降低的率[1]。要實現(xiàn)的早期診斷必須要研發(fā)高敏感性和高特異性的分子靶向探針。一、腫瘤分子功能顯腫瘤分子功能顯像是指用影像探測在腫瘤的信號通路調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要顯在內(nèi)示蹤導致發(fā)生的某些腫瘤相關表達活性的變化啟動子的活性以及轉(zhuǎn)錄活性對于腫瘤研究非常重要目前已經(jīng)的顯像包括熒光素酶基因(luciferasegenes)[12]用于生物發(fā)光顯像，熒光蛋白基因(fluorescent-proteingenes)[13]用于熒光顯像(fluorescenceimaging)，單純皰疹胸苷激酶顯像(herpessimplexthymidinekinase，HSVtkgenes)[14]用于核醫(yī)學PET，SPECT顯像，鐵蛋白(ferritingenes)[15]和chemicalexchangesaturationtransfer(CEST)reporters[16]用于MRI顯像。表達顯像有助于了解腫瘤發(fā)生發(fā)展過分子機制以及功能表達的改變，如示蹤重要的癌myc，和抑癌P53改變的顯像[17,18]。表達顯像另一個重要的應用是檢測治療時體內(nèi)載體的分布。癌myc與肝癌的密切。在轉(zhuǎn)小鼠的生物發(fā)光顯像中發(fā)以直接導癥發(fā)生。據(jù)人類50%的均發(fā)生了p53的突變抑癌p53在細胞周期調(diào)節(jié)和凋亡中發(fā)揮重要的生物學功能生物發(fā)光顯像能夠評價p53基[20]。在85%以上的實體腫瘤中，端粒酶活性增強，呈高表達狀態(tài)。端粒酶是非常PET受體顯腫瘤分子顯像示蹤細胞內(nèi)過表達的標志性受體分子用于腫瘤預后的判斷以及靶向治療方案的制定和療效評估。在多種細胞中HER-2/neuHER-2/neuHER-2/neu受體的表達變化[21]。另外一個成功的應用于臨床前及臨床顯像的受體是特異性膜抗原(prostate-specificmembrane實質(zhì)細胞表面過表達的PSMA信息，可以作為癌顯像和治療非常有價值的靶點。在臨，靶向結(jié)合PSMA放射性核素標記的單克隆抗體，如111In標記的CP(Capromabpendetide)已被臨床用于診斷癌但是存在的問題是CPPSMA具有高親和力的配體，放射性核素[11C]CH3I標記的顯像劑用于PET顯像或者[125I]NaI/Iodogen標記用于SPECT顯像的新型顯像劑列動物模型中被廣泛研究[23]。這些小分子顯像劑比PSMA的細胞外活性位點。相比于結(jié)合于PSMA111In-CP更有優(yōu)勢[23]。整合素αvβ3是另外一個被作為抗腫瘤治療靶點的受體，同時也是分子顯像的靶點[24]，在腫瘤新生血管形成過，αvβ3高表達于活化的內(nèi)皮細胞表面[25]。αvβ3的抗體LM609已經(jīng)被用于基于MRI顯像技術(shù)的新生血管分子成像[26]，近期研究證實一種糖基化環(huán)五肽[19F]Galacto-RGD(arginine-glycine-asparticacid),可特異性結(jié)合于αvβ3受體，在腫瘤模型動物中和患者中，利用PET顯像能夠顯示腫瘤新生血管[2425]。[19F]Galacto-RGDPET顯像在探測腫瘤新生血管，制定小分子多肽偶聯(lián)得到特異性示蹤癌模型動物腫瘤新生血管的小分子靶向凋亡顯幾乎所有人類腫瘤都存在凋亡作用減弱的現(xiàn)象[9]，凋亡信號通路是化療的重要靶點，放療及某些化療方法的一個重要的思路就是增強腫瘤細胞的凋亡活性。所以，利用非侵入性的影像學對凋亡過程進行監(jiān)測有重要的臨床意義。放射性核素碘標記的可以特異性的與凋亡細胞表面表達的磷脂酰絲氨酸殘基結(jié)合的膜連蛋白-(nnxin-)是評價瘤細胞凋亡的經(jīng)典顯像劑。膜連蛋白-V的衍生物：[124I]-琥珀酰-3-（[12I]Nuinimidyl3-iodobenoicid，SI）在化療藥物5氟尿嘧啶(5FU)誘導凋亡的細胞中結(jié)合量增加[29]。[24]SInnxinV是值得深入研究的化療誘導凋亡的PET凋亡顯像劑[29]多藥耐藥顯多藥耐藥(Multidrug,MDR)是化療失敗的主要原因之一?？梢酝瑫r對幾種不同的化療藥物產(chǎn)生耐藥抵抗[9]。MDR最主要的機制是由于藥物流出轉(zhuǎn)運p糖蛋白(drug-effluxtransporterP-glycoprotein，Pgp)的過表達，導致核素標記的小分子有機化合物和金屬復合物作為Pgp轉(zhuǎn)運基質(zhì)，通過PET和SPECT顯像，顯示患者組織中Pgp的表達變化[30]。已經(jīng)被批準臨床使用的兩個分子功能顯像劑99mTc-Sestamibi和99mTc-Tetrofosmin,可以在體評價人類腫瘤組織中Pgp介導的藥物轉(zhuǎn)運活性變化[30]，監(jiān)測化療過MDR的發(fā)細胞外基質(zhì)的分子功能顯細胞外基質(zhì)(xtrllularmarixE)在的發(fā)生及進展過發(fā)揮[31[32][33]及侵襲和轉(zhuǎn)移過程34]。腫瘤細胞和細胞外基質(zhì)之間的雙向信號作用使得腫瘤微環(huán)境內(nèi)的化學信號處于動態(tài)變化過通過各種生長因子和酶活性的旁分泌和內(nèi)分泌作用實現(xiàn)對腫瘤多種生物學性質(zhì)的調(diào)節(jié)35]。通過這種雙向作用的研究已經(jīng)鑒蛋白酶顯像測，從而示蹤酶的活性的變化。這種方法已經(jīng)被用于基質(zhì)金屬蛋白酶2(matrixmetlloproteine,P-2)的探測[36]溶酶體有多種蛋白酶的細胞器包括不同類型的組織蛋白酶在的侵襲和轉(zhuǎn)移中同樣發(fā)揮重要作用[37,38]非侵入6葡萄糖胺標記的熒光探針，在動物模型中示蹤溶酶體的表達[38。二、新生血管生成，乏氧及代謝分子功能顯調(diào)血管內(nèi)皮生長因子(vascularendothelialgrowthfactorVEGF)的表達[39]，同時激主要能量代謝方式[41]。的代謝特點還表現(xiàn)為缺氧依賴的糖酵解活性增強有氧代謝的三被抑制[42]腫瘤代謝的另一個特征是總膽堿代謝增加，乏氧分子功能顯[44]。腫瘤乏氧顯像在診斷、預后、治療計劃的制定等方面是非常重要的織乏氧應用的治療方法如高壓氧聯(lián)合放療或者乏氧顯像引導下的調(diào)強放療都受益于乏氧的分子功能顯像[44]18FISO(mioniole)是PET顯像的乏氧顯像劑，在細胞水平，動物水平及內(nèi)，18FISO都可以選擇性的濃聚于缺氧組織區(qū)域內(nèi)。癌動物模型中，采用缺氧反應因子調(diào)控穩(wěn)定表達GFP的細胞，探測其熒光信號，進行腫瘤組織乏氧顯像[5]。多數(shù)研究結(jié)果均證實缺氧信號調(diào)節(jié)VEGF的表達[39]，組織對近紅外光譜(700–1000nm)的吸收也能夠用來在體探測血液中氧氣飽和度[46]，監(jiān)測組織乏氧狀態(tài)。代謝分子功能顯腫瘤組織主要以葡萄糖分解代謝為主的能量利用方式產(chǎn)生了以葡萄糖類似18FD(18Fflurodoxyglucoe)作為PET顯像劑，探測腫瘤組織代謝活性的顯像[47]8FG經(jīng)葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白轉(zhuǎn)運進入腫瘤實質(zhì)細胞內(nèi)磷酸化后滯留18FDG18FDG葡萄糖代謝PET[47]ET/T的數(shù)據(jù)計算SUV值實現(xiàn)間接PET定量。，由于腫瘤組織葡萄糖代謝活性增高，有研究者采用1H標記的磁波譜(magneticresonancespectroscopy，MRS)顯像方法探測乳酸，示蹤腫瘤組織的代謝狀態(tài)。另外，11C-18F-標記的膽堿用于PET顯像，探測內(nèi)生性的總膽堿數(shù)量的變化也是研究的熱點之一。目前膽堿分子功能顯像已經(jīng)作為診斷腦內(nèi)原位癌及的輔助診斷[48]但是18FDGPET顯記的膽堿衍生物探測癌和其他[49]顯示出探測腫瘤臨床應用的優(yōu)，小期生物學特性的分子功能顯像提供了新的視角去探索腫瘤組織重要的分子過程研發(fā)抗癌藥物及治療的緩釋系統(tǒng)，以及影像技術(shù)引導下iNA治療腫瘤的技術(shù)，并實時監(jiān)測療效，從而使治療有的放矢。我們已經(jīng)取得了巨大的研究成果，但是仍然很多的，未來的發(fā)展方向必然是將分子功能顯像推廣為臨床的以示蹤的特殊的生物學性圍，人們發(fā)現(xiàn)距離血管0.2mm之外的腫瘤細胞將不再增殖，而更遠處的腫瘤細胞則會。腫瘤血管新生是腫瘤維持生長不可缺少的必要條件，通過新血管生成在腫瘤的生長、侵襲及演進過起著關鍵性的作用[50]。自1971年Folkman51]首次提出腫瘤依賴血管生成(angiogenesis)理論，血管生成及抗血管生成治療很快成為在分子與水平研究各種腫瘤生物學性質(zhì)及抗腫瘤治療的熱點。Weisseleder[52]于1992首次提出分子影像學(MolecularImaging)的概科的發(fā)展及研究的不斷更新，腫瘤血管生成顯像及影像技術(shù)引導下抗血管治療方法中，針對腫瘤血管生成過某些因子及關鍵步驟進行抑制和干擾的血管生成與腫瘤血管生血管生成現(xiàn)象并非腫瘤生長所特有，它實際上是血管新(neovascularization)的表現(xiàn)形式之一,后者還包括早期胚胎發(fā)育中由內(nèi)皮前體細胞形成原始血(vasculogenesis)與缺血狀態(tài)下心臟側(cè)枝血管形成及改建(arteriogenesis)的過程。因此，血管生成既可見于如傷口愈合、女性生殖周期、懷孕等諸多生理過程，又存在于如腫瘤、類風濕性視網(wǎng)膜病變等許多、理過[53]出芽(sproutin)生長是目前已知最經(jīng)典的腫瘤血管生成方式其過者發(fā)現(xiàn)除了出芽方式，尚有其他機制參與腫瘤血管生成，如套疊式生成(intussusception)[54]、血管生成擬態(tài)(vasculogenicmimicry)[55]、循環(huán)內(nèi)皮前體細胞的作用即(vasculogenesis)[56]和鑲嵌體血管(mosaicbloodvessels)[57]等。的血管生成機制可以單獨或同時出現(xiàn)在某一種類型腫瘤的血管生成過血管內(nèi)皮細胞生長因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)是目前已知促新生血管生成過扮演了的角色因此阻斷二者的作用途徑是抑制腫瘤血管生成的重要策略之一腫瘤新生血管的生物學特由于組織生長速度很快通過彌散作用從周圍血液循環(huán)不能得到足(P)為主的蛋白酶作用下，59]60,61]：3透性比正常毛細血管高10倍，但腫瘤中多數(shù)滲漏似乎是由于腫瘤中VEGF生成纖維細胞生長因子(bFGF)、酸性成纖維細胞生長因子(aFGF)和血管生長素(angiogenin)制因子之間的平衡關系[62]新生血管生成介導腫瘤的侵潤和轉(zhuǎn)輸送途徑并供給新生轉(zhuǎn)移灶生長所需要的營養(yǎng)物質(zhì)[63]。腫瘤新生血管的生成加腫瘤新生血管顯像方法及分子靶向顯像的研發(fā)。分子影像學特異分子探針的基本要求包括：(1)分子探針必須與靶分和真實性。(2)存在各種生理屏障，分子探針必須具備穿越這些屏障到達之一。(3)信號放大系統(tǒng)，核醫(yī)學技術(shù)在臨床應用中有獨特的優(yōu)勢。(4)具有生物相容性和穩(wěn)定性，能參與正常生理代謝過程，安全、無毒副作用等特一、VEGFVEGF受體的成員包括VEGFR-1(Flt-1/FLT-1)、VEGFR-2(Flk-1/KDR)E-3Flt-)nuropilinP1/NP2)F主要結(jié)合在兩類酪氨酸激酶受體上(E-1E-2)66]7EF可以與nuropilin1/NP2)EF-1EF的受體(RTK)型受體，其在血管生成時具有雙重功能，在不同的細胞和不VEGF的正性和負性信號轉(zhuǎn)導[6768]，主要在生理情況下下降，在腫瘤上皮細胞中則不表達或低表達[69]。VEGF/VEGFR呈現(xiàn)過表達狀態(tài)常常是預后不好的分子標志[65]。VEGFR-3VEGF-C、VEGF-D的受體，可引起內(nèi)皮細胞的增值和遷移，調(diào)節(jié)淋巴管和血管內(nèi)皮細胞的生成。NeuropilinNPR1/NPR2)VEGF與其受體結(jié)合的化合物[70],VEGFR-2作用的抗體[71,72]VEGFR-2激酶活性的小分子，從而阻斷級聯(lián)放大信號通路[73-75],是目前抗腫瘤新生血管治療的主要研究方向。人源化的抗-VEGF單克隆抗體貝伐單抗(Avastin;Genentech)已經(jīng)作為治療的一線藥物，這充分肯定了VEGF/VEGFR信號通路在發(fā)生發(fā)展中E/ER信號通路在正常血管形成和多疾病的病理生理過發(fā)揮著中樞的調(diào)節(jié)作用[7980]81]。E顯像最早在SE顯像設備中實現(xiàn)而非PET?？蓱玫姆派湫院怂匕?23,1I,99m,64,nd9Zr。EF11和EF65是包含有不同數(shù)量氨基酸殘基和不同序列的EF-的類似物，其分子量大小、生物學性質(zhì)，特別是與細胞表面糖蛋白的親和力均有一定的差異[65]。為了探討E在癌和轉(zhuǎn)移灶中的成像方法,有究者研究了123IVEG165和12I-VEGF121（humanumbililvinndothelialll,HVE，幾種不同組織來源的腫瘤實質(zhì)細胞，以及不同來源的人原位腫瘤中的結(jié)合特性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)除E外，某些腫瘤實質(zhì)細胞也能表達大量的E受體[82]。隨后研究了13IVEGF15[83]。但是僅僅在一部分患者中123IVEG165顯像能夠區(qū)分病灶和轉(zhuǎn)移病灶。在另外一項包含了9個胰患者的研究中，評價了123IVEF165的生物分布，體內(nèi)應用安全性和輻射吸收劑量[84]。盡管絕大多數(shù)胰灶及轉(zhuǎn)移灶能夠被123I-VEGF165123IVEG165/非靶（T/NT）低，成像效果不理想[85]。近年，15IVEGF11125IVEG165用于生物分布和放射自顯像的研究[86]是123IVEG16現(xiàn)象腫瘤新生血管的主要。有意思的是隨著腫瘤體積的增大，腫瘤組織攝取的125IVEG121的量反而減少，說明VEGF在體積較小的腫瘤組織中比體積較大的腫瘤表達量高。同時發(fā)現(xiàn)在某些中，如腎、心臟和肺臟中，125IVEG165的攝取高于25IVEG121的攝取，但在其他一些中125IVEG165的攝取偏低[86]。具體的機制目前還不清楚。除了被放射性核素碘標記外，VEGF1199mTc標記[87,88]。99mTc-VEGF121已被用于不同方案化療前及化療后，腫瘤血管顯像技[89]。將VEGF165通過柔性多肽鏈(GGGGS)3連接于人轉(zhuǎn)鐵蛋白的氨基末端130kD。111In-hnTf-VEGF能夠顯像U87MG72小時腫瘤組織對顯像劑的攝取率為6.7ID/g。用100倍的VEGF預先飽和受體后，腫瘤組織對111In-hnTf-VEGF的攝取降低[91]。受體顯像為臨床抗血管生成治療方案選擇、治療時機選擇以及更好的監(jiān)測抗血管治療的療效提供重要依據(jù)[93]。VG76e,是一種IgG1單克隆抗體，能特異性的結(jié)合人VEGF激素，被放射性核素124I標記后作為PET顯像劑，在免VEGF單克隆抗體HuMV833,已經(jīng)進入I期臨床試驗[95]。侵襲性實體患劑量的HuMV833處理后，124I-HuMV833PET顯像示蹤其體內(nèi)生物學分布及組織圖1VEGFR表達SPECT顯像。A為胰橫斷面成像(左側(cè)：CT，右側(cè)：SPECT)；B為生物發(fā)光成像（左側(cè)：D熒光素，右側(cè)：99mTc-VEGF121）；C圖為注射111In-hnTf-VEGF48h后89Zr標記，用于SPECT和PET顯像[96].9只SKOV-3人癌移植瘤模型鼠注射89Zr-bevacizumab,111In-bevacizumab89Zr-IgG24h后PET顯像發(fā)現(xiàn)顯像劑被灌注豐富的大量攝取，72h后腫瘤部位圖像清晰可見。(Fig.2).二、整合整合素(integrin)是一類細胞粘附受體蛋白，是由α和β兩個亞基通過非共價鍵結(jié)合而成的異二聚體跨膜糖蛋白[97-99],主要介導細胞與細胞和細胞與細胞外基質(zhì)之間的粘附作用，使細胞彼此之間黏著而形成一個整體。αβ兩個亞基均為I[100]18α8β24種異二聚體整合素蛋白受體(圖3)。整合素表達與內(nèi)皮細胞表面，在腫瘤新生血管形成過調(diào)節(jié)細胞的遷移及粘附但是表達與腫瘤細胞表面的整合素促進向圖3整合素，24種受體亞型。JNuclMed，2008;整合素的配體主要是細胞外基質(zhì)，如纖維連接蛋白(Fibronectin,Fn),層粘連蛋白(Laminin,Ln)，玻璃粘連蛋白(VitronectinVn)等。整合素與配體的結(jié)合是靠識別配基上的一段氨基酸序列實現(xiàn)。整合素αvβ3是所有整合素中研究做多的受體，精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列(RGD)是大多數(shù)整合素結(jié)合配基最常見的αvβ3受體靶向特異結(jié)合[101,102]。大多數(shù)的研究均發(fā)現(xiàn)，整合素αvβ3既表達于腫瘤血管內(nèi)皮細胞的表面也表達于腫瘤實質(zhì)細胞的表面。αvβ3受體表達異?？墒鼓[瘤細胞和內(nèi)皮細胞持續(xù)增生[103]，而在靜息期內(nèi)皮細胞αvβ3整合素受體表達較低。目前，整合素單克隆抗體、RGD環(huán)肽及靶向結(jié)合于整合素αvβ3的多肽顯像劑已經(jīng)被用于腫瘤的抗血管治療方案中[104]。2080DRD肽的結(jié)構(gòu)進行修飾并研究其對整合素受體的生物學作用，經(jīng)過大量的實驗研究發(fā)現(xiàn)Dv3親和力高，具有新生血管生成抑制活性[10516]。隨著研究的深入，D肽的應用逐漸成熟化，用磁性顆粒，放射性核素或熒光標10718]125,99m,1In18F標記結(jié)構(gòu)修飾后肽，在體實驗顯示D標記分子探針具有良好的體內(nèi)穩(wěn)定性和較快的血液清除能力[10910]v3的納米顆粒進行腫瘤分子顯像與傳統(tǒng)的顯像方式相比有更大的優(yōu)勢。1In標記pr?uororbon納米顆粒探測新西蘭大白兔內(nèi)移植x-2肺腫瘤新生血管[1]101In11In原子的納米顆粒腫瘤/肌肉18hv3的納米顆粒的放射性計數(shù)是對照顆粒的4倍多。單壁碳納米管(Singl-llrbonnnotubes)1213]64uSsPET顯像效果及體外拉曼光譜學(manptrosopy)[14]，發(fā)現(xiàn)pgylatdSs有較長的生物半衰期，打幾個小時，網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(rtiuloendothlilytemES)攝取較v3GSs的攝取可以達到(～15%I)是目前的納米粒作為顯像劑的最高攝取率同時也能夠?qū)崿F(xiàn)與D多肽的連接(4)PT4uSs組織攝取有少量顯影[12]。核素標記靶向整合素受體的納米顆粒代表了一個嶄新1516]70kD（納米級的化合物多通過腎臟清除[1718]除放射性核素標記GD外應用于分子磁顯像(mI)d3-連接脂和pr?uororbon的納米顆粒，超小順磁性氧化鐵納米顆粒(ultrmalluprpramagnticironoxide,SI)D肽作為腫瘤新生血管分子顯像劑存在的主要問題是如何提高D肽標記率，延長腫瘤內(nèi)標記肽滯留時間，減少肝、腎放射性等。4靶向結(jié)合整合素αvβ3SWNTs顯像。(A)SWNTs模式圖，藍色片段為結(jié)合于SWNTs壁的磷脂，聚乙二醇（PEG）鏈增加水溶性，DOTA64Cu的螯合劑。(B)PETRGDRGD-SWNTs成像。(C)組織勻漿SWNTs在腫瘤組織中的存在。(DRGDSWNTs體內(nèi)分布。三、新型腫瘤新生血管顯像劑RRL小分子多2000年，Brown等[119]應用他們自己開發(fā)的FliTrx大腸桿菌肽展示文庫尋找(tumorderivedendothelialcell,TDEC)特異性表面標志物5個與TDEC5TDEC(NIH3T3)的體外結(jié)合實驗，NIH3T3作為對照細胞，除了多聚賴氨酸序列外，所有肽顯示出相同的背景結(jié)合(圖2所示)。異硫酸熒光素(fluoresceinisothiocyanate,FITC)標記的精氨酸-精氨酸-亮氨酸(Arg-Arg-Leu,RRL)序列顯示出最強的熒光信號，提RRL與TDEC3所示圖2.不同多肽序列與成纖維細胞(NIH3T3)體外結(jié)合實驗。來源于AnnalsofSurgical圖3.不同多肽序列與腫瘤來源內(nèi)皮細胞(TDEC)體外結(jié)合實驗。來源于AnnalsWeller等[120](MB)RRLTDEC和人冠狀MB-RRL在TDEC3～6倍(P＜0.01)(4)。（P＜0.0165(2):533-5.FITCRRL多肽序列體內(nèi)腫瘤血管結(jié)合情況。箭頭所指為血管腔。CancerResearch,2005,65(2):533-539.RRL通過尾靜脈注射入荷PC3CloneC腫瘤的無胸腺小鼠體CloneCRRL定位于內(nèi)皮層以及其PC3RRL(Tyr-Cys-Gly-Gly-Arg-Arg-Leu-Gly-Gly-Cys,GGG)在任何一種腫瘤內(nèi)無見圖511只荷瘤鼠通過尾靜脈注射MB-RRL及MB連接的對照肽GGG，時控MB-RRL超聲顯像能夠在體顯示腫瘤新生RRL顯像腫瘤新生血管的可行性，并預估了進一步靶向血管治療可能性(見圖6)。圖6.RRL多肽體內(nèi)靶向超聲顯像。來源于CancerResearch,2005,65(2):533-有研究表明，RRL多肽序列特異性的結(jié)合于人癌組織，存在腫瘤顯像的可能性。Alexa680，800是2種近紅外，將RRL多肽序列與Alexa連接，通過靜脈注射入PC3癌鼠模型動物體內(nèi)，可以使腫瘤組織特異性的發(fā)出熒光信號，而其他部位組織未顯像[121]。RRL結(jié)構(gòu)的氨基端添加一個酪氨酸，設計合成能夠被放射性核素標記的RRL,使其結(jié)構(gòu)變?yōu)門yr-Cys-Gly-Gly-Arg-Arg-Leu-Gly-Gly-Cys，此結(jié)構(gòu)已申請專利。RRL99%以上(7)。7.RRL結(jié)構(gòu)及HPLC氯胺-T(CH-T)法碘[131I]標記RRL，在20℃，PH7.4，反應2min條件下可獲得最高標記率，達到60%以上，最佳的RRL多肽/CH-T質(zhì)量比為1：1.80。純化后其放射化學純度大于95%。核素標記的RRL在體內(nèi)外穩(wěn)定性好，在37℃血漿24h90%(8)。圖8.131I-RRL體外穩(wěn)定性結(jié)果。來源于JLabelCompd 2008,51(11):374-378.131I-RRL與131I標記的對照肽GGG分別注射入癌荷瘤鼠體內(nèi)，進顯下降，在24h后，腫瘤組織131I-RRL的攝取為(0.65+0.12%)ID/g(表1)，而對照肽的攝取僅為(0.06+0.04%)ID/g(2)。表1.131I-RRL體內(nèi)生物學分布。引自JLabelCompd 2008,51(11):374-378.表2.131I-GGG體內(nèi)生物學分布。引自JLabelCompd 2008,51(11):374-378.尾靜脈注射131I-RRL和131I-GGG在3h、24h分別進行SPECT動物顯像，24h后腫瘤組織和放射性明顯，其余呈本底放射性分布，而[12]9Yu9.131I-GGG(a)131I-RRL(b)24SPECTJLabelCompdRadiopharm,2008,51(11):374-378.RRL對腫瘤新生血管的顯像效果是肯定的，但是RRL如何示蹤腫瘤新生血管、其與腫瘤新生血管內(nèi)皮細胞特異性結(jié)合的作RRLTDEC結(jié)合的作用機制還屬未知。于是我們進行了RRL顯像機制的預實驗研究，用計算機模擬軟件進行結(jié)構(gòu)對接發(fā)現(xiàn)RRL結(jié)構(gòu)與VFGFR-2的結(jié)構(gòu)可以實現(xiàn)對接。所以我們初步假設小分子肽RRL可能與TDECVEGFR-2受體亞型特異性結(jié)合。小結(jié)與展可以預見，抗腫瘤血管生成的介入治療以及對抗腫瘤血管生成療效的分子MassoudTF,GambhirSS.Molecularimaginginlivingsubjects:seeingfundamentalbiologicalprocessesinanewlight.GenesDev,2003,17:545–580.王榮福.核醫(yī)學[M].:醫(yī)學,2003.1-HargreavesRJ.Theroleofmolecularimagingindrugdiscoveryanddevelopment.ClinPharmacolTher,2008,83(2):349-353.BergersGandBenjaminL.ETumorigenesisandtheangiogenicswitch.Nat.Rev.Cancer2003,3:401–410.WitzIPandLevy-NissenbaumO.ThetumormicroenvironmentinthepostTCancerLett,2006,WeisslederRandMahmoodU.Molecularimaging.Radiology,2001,AllanJMandTravisLB.Mechanismsoftherapy-relatedcarcinogenesis.Nat.Rev.Cancer,2005,5:943–955.SzakacsG.etal.Targetingmultidrug incancer.Nat.Rev.DrugDiscov,2006,HanahanDandWeinbergRA.Thehallmarksofcancer.Cell,2000,100:GuptaPB.etal.Theevolvingportraitofcancermetastasis.ColdSpringHarb.Symp.Biol,2005,AberleDR.etal.Imagingandcancer:researchstrategyoftheAmericanCollegeofRadiologyImagingNetwork.Radiology,2005,235:741–751.Rodriguez,J.F.etal.Expressionofthefireflyluciferasegeneinvaccinia:ahighlysensitivegenemarkertofollowdisseminationintissuesofinfectedanimals.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,1988,85:1667–1671.Shaner,N.C.etal.Improvedmonomericred,orangeandyellowfluorescentproteinsderivedfromDiscosomasp.redfluorescentprotein.Nat.Biotechnol,2004,22:1567–1572.TjuvajevJGetal.Noninvasiveimagingofherpesthymidinekinasegenetransferandexpression:apotentialmethodformonitoringclinicalgenetherapy.CancerRes,1996,56:CohenBetal.FerritinasanendogenousMRIreporterfornoninvasiveimagingofgeneexpressioninC6gliomatumors.Neosia,2005,7:109–117.GiladAAetal.ArtificialreportergeneprovidingMRIcontrastbasedonprotonNat.Biotechnol,2007,HamstraDA.etal.Real-timeevaluationofp53oscillatorybehaviorinvivousingbioluminescentimaging.CancerRes,2006,66:7482–7489.WangWetal.Small-moleculemodulatorsofp53familysignalingandantitumoreffectsinp53-deficienthumancolontumorxenografts.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,2006,ShachafCMetal.MYCinactivationuncoverspluripotentdifferentiationandtumourdormancyinhepatocellularcancer.Nature,2004,431:1112–1117.Groot-WassinkTetal.Noninvasiveimagingofthetranscriptionalactivitiesofhumanomerasepromoterfragmentsinmice.CancerRes,2004,64:4906–4911.ArtemovDetal.MagneticresonancemolecularimagingoftheHER-2/neureceptor.CancerRes.2003,63:2723–2727.PonskyLE.etal.EvaluationofpreoperativeProstaScintscansinthepredictionofnodaldisease.ProstateCancerProstaticDis,2002,5:132–135.FossCAetal.Radiolabeledsmall-moleculeligandsforprostate-specificmembraneantigen:invivomaginginexperimentalmodelsofprostatecancer.Clin.CancerRes,2005,11:4022–BeerAJetal.Positronemissiontomographyusing[18F]Galacto-RGDidentifiesthelevelofintegrinalpha(v)beta3expressioninman.Clin.CancerRes,2006,12:3942–3949.Haubner,R.etal.Noninvasivevisualizationoftheactivatedalphavbeta3integrinincancerpatientsbypositronemissiontomographyand[18F]Galacto-RGD.PLoSMed,2005,2:e70.SipkinsDAetal.DetectionoftumorangiogenesisinvivobyalphaVbeta3-targetedmagneticresonanceimaging.Nat.Med,1998,4:623–626.StewartVRandSidhuPS.Newdirectionsinultrasound:microbubblecontrast.Br.J.Radiol,2006,79:188–194.WellerGEetal.Ultrasonicimagingoftumorangiogenesisusingcontrastmicrobubblestargetedviathetumor-bindingpeptidearginine-arginine-leucine.CancerRes,2005,65:533–CollingridgeDRetal.Invitroselectivity,invivobiodistributionandtumouruptakeannexinVradiolabelledwithapositronemittingradioisotope.Br.J.Cancer,2003,89:1327–SharmaVetal.Characterizationofa67Ga/68GaradiopharmaceuticalforSPECTandPETofMDR1P-glycoproteintransportactivityinvivo:validationinmultidrug-resistanttumorsandattheblood-brainbarrier.J.Nucl.Med,2005,46:354–364.SundMetal.Thecontributionofvascularbasementmembranesandextracellularmatrixtothemechanicsoftumorangiogenesis.APMIS,2004,112:450–462.LiWPandAndersonCJ.Imagingmatrixmetalloproteinaseexpressionintumors.Q.J.Med,2003,PollardJW.Tumour-educatedmacrophagespromotetumourprogressionandmetastasis.Rev.Cancer,2004,WernertN.Themultiplerolesoftumourstroma.VirchowsArch,1997,430:MuellerMMandFusenigNE.Friendsorfoes-bipolareffectsofthetumourstromaincancer.Nat.Rev.Cancer,2004,4:839–849.BremerCetal.Opticalimagingofmatrixmetalloproteinase-2activityintumors:feasibilitystudyinamousemodel.Radiology,2001,221:523–529.GlundeKetal.Extracellularacidificationalterslysosomaltraffickinginhumanbreastcancercells.Neosia,2003,5:533–545.GlundeKetal.Synthesisof6’-O-lissamine-rhodamineBglucosamineasanovelprobeforfluorescenceimagingoflysosomesinbreasttumors.Bioconjug.Chem,2005,16:843–851.HaubnerRandWesterHJ.Radiolabeledtracersforimagingoftumorangiogenesisandevaluationofanti-angiogenictherapies.Curr.Pharm.Des,2004,10:1439–1455.JainRK.Normalizationoftumorvasculature:anemergingconceptinantiangiogenicScience,2005,GatenbyRAandGilliesRJ.Whydocancershavehighaerobicglycolysis?Nat.Rev.Cancer,2004,4:891–899.KimJWetal.HIF-1-mediatedexpressionofpyruvatedehydrogenasekinase:ametabolicswitchrequiredforcellularadaptationtohypoxia.CellMetab,2006,3:177–185.AckerstaffEetal.Cholinephospholipidmetabolism:atargetincancercells?J.Biochem,2003CzerninJetal.Molecularimaginginthedevelopmentofcancertherapeutics.Annu.Med,2006,RamanVetal.Characterizingvascularparametersinhypoxicregions:acombinedmagneticresonanceandopticalimagingstudyofahumanprostatecancermodel.CancerRes,2006,66:SrinivasanSetal.Interpretinghemoglobinandwaterconcentration,oxygensaturation,andscatteringmeasuredinvivobynear-infraredbreasttomography.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,2003,100:12349–12354.PhelpsME.PET:themergingofbiologyandimagingintomolecularimaging.J.Nucl.Med,2000,41:661–681.GlundeKetal.Cholinemetabolismincancer:implicationsfordiagnosisandtherapy.ExpertRev.Mol.Diagn,2006,6:821–829.GambhirSS.Molecularimagingofcancerwithpositronemissiontomography.Nat.Cancer,2002,[50].WeinbergR.A.TheBiologyofCancer.科學(第一版).2009,526-FolkmanJ.Tumorangiogenesis:therapeuticimplications.NEnglJMed,1971,WeisslederR.Molecularimaging:exploringthenextfrontier.Radiology,1992,212(3):FolkmanJ.Whatistheevidencethattumorsareangiogenesisdependent?.NatlCancerInst,1990,82(1):4-6.PatanS,MunnLL,JainRK.Intussusceptivemicrovasculaxgrowthinahumancolonadenocarcinomaxenograft:anovelmechanismoftumorangiogenesis.MicrovascRes,1996,ManiotisAJ,FolbergR,HessA,etal.Vascularchannelformaionbyhumanmelanomacellsinvivoandinvitro:vasculogenicmimicry.AmJPathol,1999,155(3):739-752.RafiiS.Circulatingendothelialprecursors:mystery,reality,andpromise.JClinInvest,2000,ChangYS,diTomasoE,McDonaldDM,etal.Mosaicbloodvesselsintumors:frequencyofcancercellsincontactwithflowingblood.ProcNatlAcadSciUSA,2000,97(26):14608-ZhangQX,Ma ernCJ,MackCA,etal.Vascularendothelialgrowthfactoristhemajorangiogenicfactorinementum:mechanismoftheomentummediatedangiogenesis.JSurgRes,1997,67(2):147-154.FolkmanJ.Tumorangiogenesis.AdvCancerRes,1974,19(0):331-DGrimm,JBauer,andJSchoenberger.Blockadeofneoangiogenesis,anewandpromisingtechniquetocontrolthegrowthofmalignanttumorsandtheirmetastases.CurrVascPharmacol,2009;7(3):347-57.MFuruya,YYonemitsu,andIAoki.Angiogenesis:complexityoftumorvasculatureandmicroenvironment.CurrPharmDes,2009;15(16):1854-67.MoreiraIS,FernandesPA,RamosMJ.Vascularendothelialgrowthfactorinhibitionacriticalreview.AnticancerAgentsMedChem,2007,7(2):223-245.AMazzoccaandVCarloni.Themetastaticprocess:methodologicaladvancesandpharmacologicalchallenges.CurrMedChem,2009,16(14):1704-1717.CaiW,ChenX.Multimodalityimagingofvascularendothelialgrowthfactorandvascularendothelialgrowthfactorreceptorexpression.FrontBiosci,2007,12:4267–4279.FerraraN.Vascularendothelialgrowthfactor:basicscienceandclinicalprogress.Rev,2004,HicklinDJ,EllisLM.Roleofthevascularendothelialgrowthfactorpathwayintumorgrowthandangiogenesis.JClinOncol,2005,23:1011–1027.MShibuya.Structureanddualfunctionofvascularendothelialgrowthfactorreceptor-1(Flt-1).IntJBiochemCellBiol,2001,33(4):409-420.NapoleoneFerrara.VascularEndothelialGrowthFactor:BasicScienceandClinicalProgress.Endocr.Rev.,2004,25:581-611.SunJ,WangDA,JainRK,etal.InhibitingangiogenesisandtumorigenesisbyasyntheticmoleculethatblocksbindingofbothVEGFandPDGFtotheirreceptors.Oncogene,2005,SunJ,WangDA,JainRK,etal.InhibitingangiogenesisandtumorigenesisbyasyntheticmoleculethatblocksbindingofbothVEGFandPDGFtotheirreceptors.Oncogene,2005,WatanabeH,MamelakAJ,WangB,etal.Anti-vascularendothelialgrowthfactorreceptor-2(Flk-1/KDR)antibodysuppressescontacthypersensitivity.ExpDermatol.2004,13:671–681.PrewettM,HuberJ,LiY,etal.Antivascularendothelialgrowthfactorreceptor(fetalliverkinase1)monoclonalantibodyinhibitstumorangiogenesisandgrowthofseveralmouseandhumantumors.CancerRes,1999,59:5209–5218.CiardielloF,CaputoR,DamianoV,etal.AntitumoreffectsofZD6474,asmallmoleculevascularendothelialgrowthfactorreceptortyrosinekinaseinhibitor,withadditionalactivityagainstepidermalgrowthfactorreceptortyrosinekinase.ClinCancerRes,2003,9:1546–WedgeSR,OgilvieDJ,DukesM,etal.ZD4190:anorallyactiveinhibitorofvascularendothelialgrowthfactorsignalingwithbroad-spectrumantitumorefficacy.CancerRes,2000,60:970–975.WoodJM,BoldG,BuchdungerE,etal.PTK787/ZK222584,anovelandpotentinhibitorofvascularendothelialgrowthfactorreceptortyrosinekinases,impairsvascularendothelialgrowthfactor-inducedresponsesandtumorgrowthafteroraladministration.CancerRes,2000,60:2178–2189.[76].MiddletonG,LapkaDV.Bevacizumab(Avastin).ClinJOncolNurs,2004,EskensFA.Angiogenesisinhibitorsinclinicaldevelopm