關于細菌室日常工作第1頁，共19頁，2023年，2月20日，星期五細菌室日常工作一、接收，接種細菌室標本二、培養(yǎng)，分析，鑒定病原菌（致病菌）三、抗酸桿菌工作（略）四、培養(yǎng)基制備五、醫(yī)院感染，質量控制

第2頁，共19頁，2023年，2月20日，星期五接收，接種標本細菌室常見標本：痰標本、尿標本、血培養(yǎng)標本、糞便、咽拭子、胸腹水標本、纖支刷片（抗酸）、腦脊液、分泌物、支原體藥敏第3頁，共19頁，2023年，2月20日，星期五注意事項標本拒收的原則錯誤標簽標本泄露，標本明顯被污染拭子上的標簽干掉或者標本量不夠標本不適合所要求的試驗運送標本的時間過長或所用運送培養(yǎng)基不合適第4頁，共19頁，2023年，2月20日，星期五目前細菌室標本質量問題中段尿，痰污染問題標本放置時間過長問題（血培養(yǎng)）無價值的糞便、痰標本第5頁，共19頁，2023年，2月20日，星期五標本污染（尿液）盡量避免或減少尿道口正常菌群干擾。清潔中段尿、導尿導管尿、經恥骨上皮膚穿刺采集膀胱內尿液，送檢標本以晨起第一次尿液為佳尿量不宜太多，試管塞子與尿液不應直接接觸留取導尿管尿要排空導尿管內陳舊尿液，倘留置尿管超過三天應避免采用。標本采集后立即送檢，不能立即送檢者，可暫存4℃冰箱，但保存不超過8h第6頁，共19頁，2023年，2月20日，星期五血培養(yǎng)瓶放置時間過長的影響

全自動血液細菌培養(yǎng)儀檢測原理：全自動連續(xù)檢測培養(yǎng)瓶內微生物代謝引起的CO2濃度變化，而CO2濃度的改變可直接激活培養(yǎng)瓶底部包埋的對CO2濃度變化高度敏感的熒光物質，在二極管的激發(fā)下熒光物質釋放熒光，熒光強度變化可直接反應培養(yǎng)瓶內CO2濃度變化。以判定是否有微生物生長繁殖，儀器每十分鐘自動進行質控校正，由電腦分析判斷細菌培養(yǎng)陰陽性，陽性者發(fā)出警報。培養(yǎng)瓶有標準及含樹脂（有吸附抗生素作用）的需氧、厭氧瓶、兒童瓶。

簡單點來說就是培養(yǎng)瓶底部的熒光傳感器受細菌產生的代謝物質激發(fā)產生熒光，熒光強度隨著細菌數量的增加而不斷增強。系統根據熒光變化趨勢判斷有無微生物生長。第7頁，共19頁，2023年，2月20日，星期五血培養(yǎng)瓶放置時間過長的影響細菌生長曲線（Bacterialgrowthcurve）是專指單細胞微生物的。它是將少量的單細胞微生物接種純種到一定容積的液體培養(yǎng)基后，在適宜的條件下培養(yǎng)，定時取樣測定細胞數量。以細胞增長數目的對數做縱坐標，以培養(yǎng)時間做橫坐標，繪制一條如圖所示的曲線，我們稱這條曲線為細菌的生長曲線第8頁，共19頁，2023年，2月20日，星期五血培養(yǎng)瓶放置時間過長的影響如圖，細菌在穩(wěn)定期和衰亡期細菌的數目增長減慢趨于平緩甚至在衰亡期時反而會降低，此時培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)儀會出現假陰性！第9頁，共19頁，2023年，2月20日，星期五無價值的糞便、痰標本應在發(fā)病早期并且盡量在用抗生素治療前采集，稀便不少于1ml，固體便不少于1克，無便患者可用直腸拭子采集標本。要挑取含膿、黏液、血等病理改變或水樣糞便送檢。直腸拭子采樣量要足夠，拭子上肉眼應可見糞便。注意事項：（1）雖然糞便標本本身含很多細菌但也要用無菌容器。（2）注意挑取膿血便或粘液便做培養(yǎng)（3）要進行分區(qū)劃線。外觀為膿痰、粘液、血，涂片鏡檢<10個上皮細胞/LP、>25個WBC/LP為合格標本。第10頁，共19頁，2023年，2月20日，星期五常用的培養(yǎng)基種類和用途血平板—普通細菌用巧克力平板—含V、X因子，主要培養(yǎng)嗜血桿菌、腦膜炎球菌和淋球菌用麥康凱平板—G-桿菌用沙保羅平板—真菌培養(yǎng)用SS平板—沙門氏菌和志賀氏菌用M-H平板—細菌藥敏用TCBS平板—弧菌科細菌用真菌顯色平板—真菌培養(yǎng)用羅氏培養(yǎng)基—分枝桿菌用第11頁，共19頁，2023年，2月20日，星期五標本接種以及相應平板標本類型培養(yǎng)基

痰血平板、麥康凱平板、沙保羅平板中段尿血平板、麥康凱平板腦脊液血平板、巧克力平板、麥康凱平板穿刺液血平板、麥康凱平板、巧克力平板咽拭子血平板、巧克力平板、麥康凱平板血培養(yǎng)陽性血平板、麥康凱平板糞便標本SS平板、血平板病灶分泌物血平板、巧克力平板、麥康凱平板第12頁，共19頁，2023年，2月20日，星期五注意事項接種環(huán)使用前后均應滅菌，以免造成環(huán)境污染及交叉污染。生理鹽水和棉簽均應滅菌處理防止污染標本。接種標本時應待接種環(huán)冷卻后進行，以免將細菌燙死從而造成假陰性結果。四區(qū)劃線時應輕柔，不破壞平板；線條應疏密合適，從而更好分離出單個菌落?；驹瓌t：無菌操作和盡量減少中間環(huán)節(jié)。、第13頁，共19頁，2023年，2月20日，星期五細菌鑒定的基本步驟標本的分離培養(yǎng)（這關系到整個結果的可靠性）培養(yǎng)結果的觀察（致病菌的選擇）細菌的分純、鑒定（MicroScan自動微生物鑒定及藥敏分析系統）第14頁，共19頁，2023年，2月20日，星期五細菌鑒定的基本步驟觀察培養(yǎng)基中生長的菌落特點：

菌落的大小，是否光滑，菌落邊緣是否整齊，菌落的顏色——如無色似水滴狀、白色、灰色、黃色、以及色澤的深淺，是否透光及透光的強弱，菌落產生光澤，等等；菌落產生的溶血環(huán)的情況——α溶血、β溶血、水溶性溶血、脂溶性溶血和其他的溶血特點；細菌產生的氣味——如銅綠假單胞菌的“生姜”味，酵母菌的酵母味，芳香黃桿菌的水果糖芳香味等等。第15頁，共19頁，2023年，2月20日，星期五細菌鑒定的基本步驟培養(yǎng)結果的觀察（致病菌的選擇）觀察培養(yǎng)基上是否有細菌生長觀察生長情況（是單一種細菌還是多種細菌）觀察生長的細菌是否具有某些典型特征排除污染細菌對于無菌部位所采集的標本（CSF、胸水、腹水、關節(jié)液、血液、骨髓、各器官穿刺液等等），只要培養(yǎng)出細菌（排除污染）一律都視為致病菌。對于有菌部位或易被正常菌群污染的標本，培養(yǎng)出細菌后，要根據標本的不同，排除正常菌群后，再挑選致病菌第16頁，共19頁，2023年，2月20日，星期五細菌鑒定的基本步驟涂片染色(革蘭染色）革蘭染色：革蘭染色可以反映微生物種類和類別，方便描述物種的形態(tài)或結構。用此染色法可將絕大部分細菌分為兩大類,這樣可將致病菌的范圍縮小,然后再進一步鑒定。如:

金黃色葡萄球菌、綠色溶血性鏈球菌、肺炎球菌、白喉桿菌、炭疽桿菌等屬革蘭氏染色陽性菌。

百日咳桿菌、大腸桿菌、傷寒桿菌、痢疾桿菌、霍亂弧菌、流行性腦膜炎雙球菌、淋病雙球菌等屬革蘭氏陰性。第17頁，共19頁，2023年，2月20日，