診療臨床病原體檢查標本的采集、運送和檢查方法一．標本的采集和運送所有采集標本均置于無菌或清潔容器中，不能接觸消毒劑和抗菌藥物。血液：一般在發(fā)熱初期和高峰期采集，如已用抗生素，則在下次用藥之前采集。成人采血量為每次10-20毫升，兒童和嬰兒為1.5-5毫升。專用血培養(yǎng)瓶。血標本采集次數(shù)根據(jù)研究，僅采血一次分離率約占80%，培養(yǎng)2次分離率約占90%，而培養(yǎng)三次的分離率約占99%。2診療臨床病原體檢查多瓶接種

①厭氧菌菌血癥占菌血癥5-15%,②有10%菌血癥不是單一微生物引起,③長期使用抗生素患者可呈現(xiàn)L型菌.④免疫低下患者易發(fā)生真菌感染；根據(jù)情況做二種血培養(yǎng)瓶的培養(yǎng),需氧和厭氧或需氧和L型培養(yǎng)。標本采集操作應注意嚴格無菌操作，避免污染雜菌。標本送檢接種血液樣本的培養(yǎng)瓶應立即送檢，如因某種原因不能立即送檢時，勿放冰箱存放。3診療臨床病原體檢查尿液常用清潔中段尿。對于厭氧菌采用膀胱穿刺法收集、無菌厭氧小瓶運送。糞便取膿、血、粘液送檢，排便困難及嬰幼兒可用直腸拭子采集，根據(jù)檢驗目的選用不同的運送培養(yǎng)基及分離培養(yǎng)基提高檢出率。呼吸道標本鼻咽拭子、痰、纖支鏡采集物，經(jīng)氣管采集分泌物可避免正常菌群污染，是確定下呼吸道感染的理想標本。4診療臨床病原體檢查腦脊液及其它體液對于腦脊液常見病原菌如腦膜炎奈瑟菌、肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌，抵抗力弱，采集后應立即接種。對于胸、腹水和心包積液由于含菌量少宜接種量大或按血培養(yǎng)處理。眼、耳標本用無菌拭子采樣，可用角膜刮屑。泌尿生殖道標本可用尿道口分泌物、外陰糜爛面分泌物、宮頸口分泌物和前列腺液等。創(chuàng)傷、組織和膿腫標本首先清創(chuàng)，用無菌拭子取材。5診療臨床病原體檢查二.檢查方法１.顯微鏡檢查懸滴法用于病原體的動力觀察，暗視野或相差顯微鏡用于病原體的生長、形態(tài)、運動方式。染色檢查：革蘭氏染色用于細菌和真菌的檢查；抗酸染色用于結(jié)核菌及放線菌的檢查；墨汁染色用于新型隱球菌的檢查。6診療臨床病原體檢查2.病原體特異性抗原檢測主要用于不易培養(yǎng)的微生物的快速診斷，用已知抗體，利用免疫熒光、酶聯(lián)免疫技術等檢測標本中的抗原。3.病原體核酸的檢測主要是PCR和DNA探針雜交檢測標本中的病原體。4.病原體分離培養(yǎng)和鑒定細菌培養(yǎng)，將標本接種相應的培養(yǎng)基上，根據(jù)菌落形態(tài)、生化反應鑒定細菌；不易培養(yǎng)的微生物進行細胞培養(yǎng)。5.血清學檢測檢測病原體刺激機體產(chǎn)生的抗體，IgM型抗體檢出為新近感染指標。7診療臨床病原體檢查細菌耐藥性檢查抗菌藥物的作用機制干擾細菌細胞壁的合成，使細菌不能生長繁殖。影響細菌細胞蛋白質(zhì)的合成，使細菌喪失生長繁殖的物質(zhì)基礎。破壞核酸的代謝，阻礙遺傳信息的復制。8診療臨床病原體檢查抗生素的廣泛使用所造成的抗生素的選擇性壓力使醫(yī)院感染控制面臨嚴峻挑戰(zhàn)，因此對細菌耐藥性的發(fā)生機制和耐藥監(jiān)測便成為臨床微生物檢測中的一項重要工作。9診療臨床病原體檢查抗菌藥物的選擇性壓力耐藥菌株極少xx耐藥菌株為主抗生素暴露xxxxxxxxxx10診療臨床病原體檢查細菌的耐藥性及其發(fā)生機制1.遺傳學機制染色體介導的耐藥為細菌本身所固有的耐藥，一般具有種屬特異性,如腸球菌耐頭孢菌素，一些革蘭陰性桿菌耐萬古霉素等。質(zhì)粒介導的耐藥耐藥基因易于傳播,目前該類耐藥在臨床上占有重要地位。如由質(zhì)粒介導的產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBL）的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌。11診療臨床病原體檢查2.生物化學機制產(chǎn)生滅活酶或鈍化酶這些酶可使抗生素失活。如產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶、氨基糖苷類鈍化酶、氯霉素乙?；D(zhuǎn)移酶等。作用靶位的改變作用靶位改變后使抗生素失去作用位點。如甲氧西林耐藥的葡萄球菌可以產(chǎn)生一種新的青霉素結(jié)合蛋白，使細菌與β-內(nèi)酰胺類抗生素的親和力降低而導致耐藥。主動外排機制如銅綠假單胞菌對多種常用的抗生素耐藥,主要是由于其外膜存在著獨特的藥物泵出系統(tǒng)。12診療臨床病原體檢查藥物敏感試驗1.紙片擴散法（K-B法）菌液濃度：0.5麥氏濁度（1.5×108CFU/mL）瓊脂平板厚度：4mm（9cm，25ml；15cm，60ml)抗生素紙片：9cm，6-7張（4張左右）；15cm，12張培養(yǎng)溫度、時間：35℃，18-20小時判斷標準：NCCLS當年版13診療臨床病原體檢查“敏感”即表示測試菌可被測定藥物常規(guī)劑量給藥后在體內(nèi)達到的血藥濃度所抑制；“耐藥”即表示測試菌不能被在體內(nèi)感染部位可能達到的抗菌藥物濃度所抑制，臨床治療無效?！爸薪椤闭咛崾驹摷毦鷮ΤＲ?guī)用量體液或組織中的藥物濃度的反應性低，使用高于正常給藥量有療效。14診療臨床病原體檢查2.液體稀釋法104

cfu/ml4210.50.250.1250mg/ml15診療臨床病原體檢查耐藥菌監(jiān)測試驗1.耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)檢測包括耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶陰性葡萄球菌(MRSCoN)。不能使用青霉素和頭孢菌素類抗生素治療。16診療臨床病原體檢查2.青霉素耐藥的肺炎鏈球菌（PRSP）青霉素是治療肺炎鏈球菌的首選藥物，耐藥菌株對青霉素治療無效。應用苯唑西林紙片檢測。17診療臨床病原體檢查3.超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBL）的檢測主要由革蘭陰性桿菌產(chǎn)生，質(zhì)粒介導的對青霉素和三代頭孢菌素以下類抗生素廣泛耐藥。產(chǎn)酶株不能單獨采用青霉素類和三代頭孢治療。18診療臨床病原體檢查細菌感染細菌培養(yǎng)是最重要的確診方法病毒感染細胞培養(yǎng)是最常用的病毒分離方法，抗原和血清學檢測臨床應用最廣泛真菌感染真菌培養(yǎng)和形態(tài)學檢測最常用寄生蟲感染從病人血液、體液、排泄物中檢查出寄生蟲的某一發(fā)育蟲期，是目前最可靠的診斷方法20診療臨床病原體檢查細菌感染免疫檢測1.血清鏈球菌溶血素“O”試驗溶血素“O”是一種A群鏈球菌的毒素，屬于菌體蛋白，能溶解紅細胞。溶血素“O”具有抗原性，可使人產(chǎn)生相應抗體，稱抗鏈球菌溶血素“O”（anti-streptolysin“O”test，ASO）。A群鏈球菌感染2-3周后，血清中可出現(xiàn)抗溶血素“O”的抗體。滴度升高表明近期有A群鏈球菌感染，常見于活動性風濕熱、風濕關節(jié)炎、急性腎小球腎炎等。21診療臨床病原體檢查2．肥達反應（widalreactionWR）傷寒沙門菌的菌體O抗原和鞭毛H抗原均可刺激機體產(chǎn)生相應抗體，O抗原刺激機體產(chǎn)生的是IgM，出現(xiàn)較早，H抗原產(chǎn)生的是IgG，出現(xiàn)較晚，持續(xù)時間較長。WR利用傷寒和副傷寒沙門氏菌菌液為抗原，檢測病人血清有無相應抗體的一種凝集試驗。O抗體>1:80，H抗體>1:160

A、B、C抗體>1:80O升高H不高可能是感染早期或其他沙門菌H升高O不高可能是既往感染或預防接種22診療臨床病原體檢查性傳播性疾病的實驗室檢查性傳播性疾?。╯exualtransmitteddiseaseSTD）是一組主要通過性行為為傳播途徑的侵犯皮膚、性器官和全身多臟器損害的疾病。病原學和臨床類型細菌-淋病奈瑟菌，杜克雷嗜血桿菌螺旋體-梅毒螺旋體病毒-HIV、HSV、HPV支原體、衣原體真菌、原蟲23診療臨床病原體檢查1.AIDS檢測分為HIV-1和HIV-2兩型，主要通過檢測血液中相應抗體診斷，ELISA用于篩選，WesternBlot用于確診。HIV感染后數(shù)日或數(shù)周內(nèi)常不能檢出抗體，稱窗口期，95%的受染者在3個月內(nèi)可測出抗體。24診療臨床病原體檢查2.梅毒的檢測暗視野顯微鏡檢查：在皮損處，用玻片刮取組織滲出液或淋巴結(jié)穿刺液，見有活動的梅毒螺旋體。主要依靠血清學試驗，根據(jù)所用抗原不同，梅毒血清試驗分為以下兩大類：非梅毒螺旋體抗原血清試驗用心磷脂作抗原，測定血清中抗心磷脂抗體，亦稱反應素。本試驗敏感性高而特異性較低，目前一般作為梅毒的篩選試驗。25診療臨床病原體檢查性病研究實驗室試驗（VenerealDiseaseResearchLaboratorytest，VDRL）用心磷脂、卵磷脂及膽固醇為抗原，需用顯微鏡讀取結(jié)果。不加熱血清反應素試驗（UnheatedSerumReaginUSR）也是VDRL抗原的改良，敏感性及特異性與VDRL相似?？焖傺獫{反應素試驗（RapidPlasmareagintest，RPR）：是VDRL抗原的改良，優(yōu)點是肉眼可讀出結(jié)果。26診療臨床病原體檢查梅毒螺旋體抗原血清試驗用梅毒螺旋體或其成分來作抗原，測定抗梅毒螺旋體IgG抗體。梅毒螺旋體血凝試驗（TPHA）敏感性和特異性均高，常作為梅毒感染的確證試驗。27診療臨床病原體檢查3.淋病檢測涂片檢查取患者尿道分泌物或?qū)m頸分泌物，革蘭氏染色，在多形核白細胞內(nèi)找到革蘭氏陰性雙球菌。涂片對男性急性淋病，陽性率在95%左右，可初步診斷。女性宮頸分泌物中雜菌多，敏感性和特異性較差，陽性率僅為50-60%，且有假陽性，應以培養(yǎng)為主。28診療臨床病原體檢查培養(yǎng)檢查培養(yǎng)法對癥狀很輕或無癥狀的男性、女性患者或慢性患者都是較敏感的方法，培養(yǎng)后需進行菌落形態(tài)，革蘭染色，氧化酶試驗和糖發(fā)酵試驗。淋病的確診試驗。29診療臨床病原體檢查醫(yī)院感染常見病原體檢查醫(yī)院感染（nosocomialinfection）是指患者在入院時既不存在，亦不處于潛伏期，而在醫(yī)院內(nèi)發(fā)生的感染，包括醫(yī)院內(nèi)獲得而在出院后發(fā)病的感染。侵入性診療技術的廣泛應用，人口的老齡化和慢性病患者增多，細菌耐藥情況的日趨嚴重使醫(yī)院感染日益受到重視。30診療臨床病原體檢查一.流行病學感染源病原體來源于住院病人.醫(yī)務人員、探視者、醫(yī)院環(huán)境及未徹底消毒的醫(yī)療器械、血液制品等。感染途徑內(nèi)窺鏡、插管、介入療法使感染機會增加。易感人群免疫力低下的住院患者是主要的高危人群。31診療臨床病原體檢查二.臨床類型下呼吸道感染為我國最常見的醫(yī)院感染類型尿路感染主要為侵入性操作所引起手術切口感染胃腸道感染血液感染