第六章自由基清除劑及其加工技術(shù)詳解演示文稿當(dāng)前1頁(yè)，總共134頁(yè)。優(yōu)選第六章自由基清除劑及其加工技術(shù)當(dāng)前2頁(yè)，總共134頁(yè)。當(dāng)前3頁(yè)，總共134頁(yè)。當(dāng)前4頁(yè)，總共134頁(yè)。第一節(jié)自由基清除劑種類(lèi)和作用機(jī)理

一、自由基的概念及其對(duì)人體的影響1定義-自由基是指任何包含一個(gè)或多個(gè)未成對(duì)電子并能獨(dú)立存在的原子或基團(tuán)。1832年德國(guó)化學(xué)家Baron和Friedrich發(fā)現(xiàn)化學(xué)反應(yīng)中有一小群原子，并未把自己的單個(gè)原子放出去，而是與別的分子結(jié)合。當(dāng)時(shí)化學(xué)家把這種原子叫做“radicals”，源于拉丁文“radix”,意思是“aroot”,表示他們根植在其他分子中。當(dāng)前5頁(yè)，總共134頁(yè)。2種類(lèi)-包括氫自由基（H·）、超氧陰離子自由基（O2

-·）、羥自由基（·OH）、烷氧基（R·）、氫過(guò)氧基（HO2-）、單線態(tài)氧（1O2，屬于活性氧，是普通氧3O2的激發(fā)態(tài)）。過(guò)氧化氫（H2O2

）是活性氧，有高反應(yīng)性，可促進(jìn)自由基生成，稱自由基關(guān)聯(lián)物質(zhì)。當(dāng)前6頁(yè)，總共134頁(yè)。超氧陰離子自由基（O2

-·）當(dāng)前7頁(yè)，總共134頁(yè)。羥自由基（·OH）當(dāng)前8頁(yè)，總共134頁(yè)。3氧的損傷氧分子軌道有兩個(gè)未成對(duì)電子，很易轉(zhuǎn)變?yōu)樽杂苫蚧钚匝??；钚匝踝杂苫窟^(guò)多，可能產(chǎn)生毒性。4氧化應(yīng)激生物體內(nèi)氧化與抗氧化失去平衡。氧化應(yīng)激原因

A營(yíng)養(yǎng)不良造成膳食抗氧化劑耗竭；

B活性氧自由基產(chǎn)生過(guò)多。

在大多數(shù)疾病中，氧化應(yīng)激是一種續(xù)發(fā)性原因，所以抗氧化預(yù)防顯得十分重要。

當(dāng)前9頁(yè)，總共134頁(yè)。羥基和超氧自由基當(dāng)前10頁(yè)，總共134頁(yè)。5自由基的利弊利：體內(nèi)物質(zhì)和能量的轉(zhuǎn)化都必須有自由基的參與。如，氨基酸的氧化；前列腺素的合成；線粒體內(nèi)營(yíng)養(yǎng)成分的氧化磷酸化；吞噬細(xì)胞殺滅細(xì)菌。自由基處于產(chǎn)生與清除的動(dòng)態(tài)平衡弊：破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)；引發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化；干擾人體正常代謝活動(dòng)；引發(fā)疾??；加速人體衰老。當(dāng)前11頁(yè)，總共134頁(yè)。當(dāng)前12頁(yè)，總共134頁(yè)。DNA受到自由基損傷當(dāng)前13頁(yè)，總共134頁(yè)。蛋白質(zhì)受到自由基氧化當(dāng)前14頁(yè)，總共134頁(yè)。6自由基的來(lái)源（1）環(huán)境污染水、空氣、農(nóng)藥殘留（2）化學(xué)物質(zhì)抽煙、食物添加劑、亞硝胺、化妝品（3）體內(nèi)自行產(chǎn)生運(yùn)動(dòng)、暴飲暴食、喝酒（4）烹飪過(guò)程（5）紫外線（6）X光當(dāng)前15頁(yè)，總共134頁(yè)。7自由基引起的疾?。ㄅe例）心臟病老年癡呆癥帕金森病腫瘤當(dāng)前16頁(yè)，總共134頁(yè)。心臟病心臟病（heartdisease）是心臟疾病的總稱，包括風(fēng)濕性心臟病、先天性心臟病、高血壓性心臟病、冠心病、心肌炎等各種心臟病。

加拿大研究人員20日發(fā)表報(bào)告說(shuō)，全球大約35%的心臟病發(fā)作與油炸食品、鹽漬零食和肉類(lèi)有關(guān)。這再次表明，食用垃圾食品和動(dòng)物脂肪能誘發(fā)心臟病。當(dāng)前17頁(yè)，總共134頁(yè)。老年癡呆癥老年癡呆癥(Alzheimer‘sdisease,AD)是發(fā)生在老年期及老年前期的一種原發(fā)性退行性腦病，指的是一種持續(xù)性高級(jí)神經(jīng)功能活動(dòng)障礙，即在沒(méi)有意識(shí)障礙的狀態(tài)下，記憶、思維、分析判斷、視空間辨認(rèn)、情緒等方面的障礙。、生活方式是導(dǎo)致該病的原因之一。如吸煙酗酒、不合理飲食、缺乏鍛煉、與社會(huì)交流少。當(dāng)前18頁(yè)，總共134頁(yè)。帕金森病帕金森?。≒arkinson'sdisease）又稱"震顫麻痹"，巴金森氏癥或柏金遜癥。該病是一種常見(jiàn)于中老年的神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，多在60歲以后發(fā)病。主要表現(xiàn)為患者動(dòng)作緩慢，手腳或身體的其它部分的震顫，身體失去了柔軟性，變得僵硬。最早系統(tǒng)描述該病的是英國(guó)的內(nèi)科醫(yī)生詹母·帕金森，當(dāng)時(shí)還不知道該病應(yīng)該歸入哪一類(lèi)疾病，稱該病為“震顫麻痹”。當(dāng)前19頁(yè)，總共134頁(yè)。二、自由基清除劑的種類(lèi)和作用機(jī)理1自由基清除劑：能清除體內(nèi)自由基或能阻斷自由基參與氧化反應(yīng)的物質(zhì)。當(dāng)前20頁(yè)，總共134頁(yè)。2自由基清除劑的分類(lèi)非酶類(lèi)清除劑抗氧化劑（VE、VC、胡蘿卜素、還原型谷胱甘肽）。酶類(lèi)清除劑抗氧化酶（超氧化物歧化酶、過(guò)氧化氫酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶）。當(dāng)前21頁(yè)，總共134頁(yè)。（一）抗氧化酶能清除活性氧的酶統(tǒng)稱為抗氧化酶。如超氧化物歧化酶、過(guò)氧化氫酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶等。

O2

-·→O2H2

O2-→H2O2過(guò)氧化脂

LOOH→LOH醇當(dāng)前22頁(yè)，總共134頁(yè)。（二）非酶類(lèi)清除劑

1

抗氧化劑：食品和藥物中的抗氧化成分；

2

自由基清除劑：能清除自由基實(shí)現(xiàn)抗氧化作用的物質(zhì)；

3

抗氧化劑作用機(jī)理：一是降低活潑自由基中間體的濃度，從而降低自由基鏈反應(yīng)傳播階段的速率；二是抑制自由基引發(fā)劑的產(chǎn)生，從而達(dá)到清除自由基的作用。當(dāng)前23頁(yè)，總共134頁(yè)。4自由基清除劑與抗氧化劑的三種關(guān)系（1）抗氧化劑即為自由基清除劑氧化變質(zhì)包括自由基連鎖反應(yīng)的各個(gè)階段（2）抗氧化劑不一定是自由基清除劑有些抗氧化劑通過(guò)抑制自由基引發(fā)劑（如某些金屬元素）的產(chǎn)生起作用（3）自由基清除劑不一定是抗氧化劑有些系統(tǒng)可能并未進(jìn)行氧化作用當(dāng)前24頁(yè)，總共134頁(yè)。5自由基清除劑應(yīng)用注意事項(xiàng)（1）自由基清除劑只有在足夠濃度時(shí)才起作用；（2）清除劑只有在產(chǎn)生自由基的位置附近才能起作用；（3）清除劑與自由基反應(yīng)后本身會(huì)成為新自由基，這個(gè)新自由基的毒性應(yīng)小于原來(lái)的才能起防護(hù)作用。當(dāng)前25頁(yè)，總共134頁(yè)。第二節(jié)黃酮類(lèi)化合物黃酮類(lèi)化合物是優(yōu)良的活性氧清除劑和脂質(zhì)抗氧化劑，它是廣泛存在于自然界的一大類(lèi)化合物，多具有艷麗的色澤，是許多中草藥中主要活性成分之一。當(dāng)前26頁(yè)，總共134頁(yè)。一、黃酮類(lèi)化合物的結(jié)構(gòu)及生理功能（一）黃酮類(lèi)化合物的結(jié)構(gòu)基本母核：2-苯基色原酮類(lèi)化合物；黃酮、黃酮醇，人體每天從食物中攝取可達(dá)1g；二氫黃酮、二氫黃酮醇類(lèi)、異黃酮、二氫異黃酮、雙黃酮類(lèi)、查爾酮類(lèi)、橙酮類(lèi)、黃烷醇類(lèi)、花青素、新黃酮類(lèi)。當(dāng)前27頁(yè)，總共134頁(yè)。當(dāng)前28頁(yè)，總共134頁(yè)。（二）黃酮類(lèi)化合物的生理功能1清除自由基機(jī)理：與超氧陰離子反應(yīng)阻止自由基反應(yīng)的引發(fā)，與鐵離子絡(luò)合阻止羥基自由基的生成，與脂質(zhì)過(guò)氧化基反應(yīng)阻止脂質(zhì)過(guò)氧化過(guò)程。當(dāng)前29頁(yè)，總共134頁(yè)。2調(diào)節(jié)免疫功能增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬能力和自然殺傷細(xì)胞活性；增加抗體產(chǎn)量，調(diào)節(jié)體液免疫功能和細(xì)胞免疫功能；通過(guò)血腦屏障吸收活性自由基，起抗衰老作用。當(dāng)前30頁(yè)，總共134頁(yè)。3保護(hù)心血管系統(tǒng)能影響血管的脆性和滲透性，改善血液循環(huán)狀態(tài)，增加冠脈流量；選擇性地與血管壁上的血栓結(jié)合，起抗血栓形成作用；防治血管老化和腦血管供血不足作用；當(dāng)前31頁(yè)，總共134頁(yè)。4抗癌作用致癌物(苯、苯并芘、亞硝基化合物)，是由惰性物經(jīng)生物轉(zhuǎn)化成的高活性物質(zhì)，能破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，引發(fā)疾病，轉(zhuǎn)化中產(chǎn)生一些自由基中間物，進(jìn)一步形成活性很強(qiáng)的羥基自由基和單線態(tài)氧，引發(fā)癌癥。黃酮類(lèi)化合物可以作為尋找有效抗癌活性物質(zhì)。當(dāng)前32頁(yè)，總共134頁(yè)。5抗炎作用黃酮類(lèi)化合物具有抗病原微生物、抗炎癥、抗感染作用。據(jù)研究，黃酮類(lèi)化合物的抗炎作用可能與前列腺素生物合成過(guò)程中的脂氧化酶受到抑制有關(guān)。當(dāng)前33頁(yè)，總共134頁(yè)。6保護(hù)肝臟作用能促進(jìn)組織再生，修復(fù)內(nèi)臟器官的病變組損傷。臨床上用以治療急、慢性肝炎，肝硬化以及多種肝損傷等。當(dāng)前34頁(yè)，總共134頁(yè)。7調(diào)節(jié)內(nèi)分泌功能

國(guó)外流行病因?qū)W研究證明，東方人的乳腺癌、結(jié)腸癌和大腸癌的發(fā)病率遠(yuǎn)低于西方人，其重要原因是東方人的食物中含有大量的植物雌激素。當(dāng)前35頁(yè)，總共134頁(yè)。植物雌激素植物雌激素主要有3類(lèi)：異黃酮類(lèi)、木酚素類(lèi)和香豆素類(lèi)，均含在植物及其種籽里。植物雌激素的分子結(jié)構(gòu)與哺乳動(dòng)物雌激素結(jié)構(gòu)相似，是一類(lèi)具有類(lèi)似動(dòng)物雌激素生物活性的植物成分，可以起到模擬、干擾、雙向調(diào)節(jié)內(nèi)分泌水平的生理化作用。它們對(duì)激素相關(guān)疾病有廣泛作用，尤其對(duì)乳腺癌、前列腺癌、絕經(jīng)期綜合征、心血管病和骨質(zhì)疏松有一定的預(yù)防作用。當(dāng)前36頁(yè)，總共134頁(yè)。8抗菌及抗病毒作用木犀草素、黃芩甘、黃芩素均有一定程度的抗菌作用。當(dāng)前37頁(yè)，總共134頁(yè)。9解痙作用解除平滑肌痙攣（抽搐）作用，如異甘草素、黃豆苷原。當(dāng)前38頁(yè)，總共134頁(yè)。10其他作用緩解高血壓患者的頭痛-大豆苷、葛根素；止咳、祛痰；抑制酪氨酸酶活性，減少皮膚黑色素生；成，吸收紫外線，消除黃褐斑。當(dāng)前39頁(yè)，總共134頁(yè)。二、黃酮類(lèi)化合物的制備工藝黃酮類(lèi)在植物中以游離黃酮和黃酮苷兩種形式存在，溶解度差別較大，提取溶劑不同有水提法、醇提法、混合溶液提法、堿提酸沉淀法、超聲提取法、超臨界萃取法等。其分離的方法有沉淀法、層析法等。

當(dāng)前40頁(yè)，總共134頁(yè)。（一）原料

1豆類(lèi)：大豆等;2水果類(lèi)：山楂、葡萄柚、薔薇果、柑桔、檸檬、紅桔、櫻桃、李;

葡萄柚薔薇果當(dāng)前41頁(yè)，總共134頁(yè)。3蔬菜類(lèi)：花莖甘藍(lán)、洋蔥、番茄;

甘藍(lán)當(dāng)前42頁(yè)，總共134頁(yè)。4中草藥類(lèi)：杜仲、黃芩、紅花、金銀花、菊花、甘草、陳皮、射干、地錦、淫羊藿、蒲黃等;杜仲黃芩當(dāng)前43頁(yè)，總共134頁(yè)。金銀花甘草當(dāng)前44頁(yè)，總共134頁(yè)。射干射干地錦當(dāng)前45頁(yè)，總共134頁(yè)。淫羊藿蒲黃當(dāng)前46頁(yè)，總共134頁(yè)。

5其他：沙棘、茶葉、葡萄酒、蜂蜜、啤酒、咖啡等。沙棘當(dāng)前47頁(yè)，總共134頁(yè)。（二）減壓蒸餾法黃酮類(lèi)化合物在水中有一定溶解度，易溶于甲醇、乙醇、醋酸乙酯等有機(jī)溶劑。用熱水浸提出多糖、脂類(lèi)及黃酮類(lèi)化合物等可溶性成分，再用有機(jī)物溶劑進(jìn)一步提純。當(dāng)前48頁(yè)，總共134頁(yè)。減壓蒸餾法制備黃酮類(lèi)化合物工藝流程原料→破碎→熱水提取→過(guò)濾→收集濾液

→醇提→靜置棄沉淀→減壓濃縮→浸膏NaOH水溶液淀粉、果膠、蛋白質(zhì)

當(dāng)前49頁(yè)，總共134頁(yè)。（三）樹(shù)脂柱純化法離子交換樹(shù)脂是一種不溶性高分子物質(zhì)，對(duì)溶液中的離子具有選擇吸附能力;選擇適宜的樹(shù)脂，極性相近的黃酮類(lèi)被吸附在樹(shù)脂柱內(nèi)，得到富集、純化，然后用洗脫劑洗脫出來(lái)。

當(dāng)前50頁(yè)，總共134頁(yè)。樹(shù)脂柱純化法制備黃酮類(lèi)化合物工藝原料→破碎→石油醚回流提取→過(guò)濾→

水浸泡濾渣→過(guò)濾→乙醇提取→過(guò)濾→濾液

→回收乙醇→黃酮粗提液→上樹(shù)脂柱→水洗→乙醇洗脫→減壓濃縮→黃酮精制液→噴霧干燥→成品？脫脂？去除色素等水溶性成份當(dāng)前51頁(yè)，總共134頁(yè)。大孔樹(shù)脂吸附法大孔樹(shù)脂吸附分離技術(shù)是以采用特殊的吸附劑從混合液中有選擇地吸附其中的有效成分，除去無(wú)效成分的一種提取精制的新工藝。近年來(lái)，大孔吸附樹(shù)脂法已廣泛地應(yīng)用于中藥有效成分的分離與精制。有報(bào)道研究發(fā)現(xiàn)，用大孔樹(shù)脂吸附法可分離黃酮，其中HZ-841大孔吸附樹(shù)脂是一種大孔弱極性吸附劑，其應(yīng)用是借助范德華力，從極性溶劑中吸附非極性的有機(jī)物。目前，該技術(shù)已在國(guó)內(nèi)廣泛用于純化苷類(lèi)、黃酮類(lèi)、生物堿類(lèi)成分。當(dāng)前52頁(yè)，總共134頁(yè)。噴霧干燥應(yīng)用于物料干燥的一種方法。于干燥室中將稀料經(jīng)霧化后，在與熱空氣的接觸中，水分迅速汽化，即得到干燥產(chǎn)品。該法能直接使溶液、乳濁液干燥成粉狀或顆粒狀制品，可省去蒸發(fā)、粉碎等工序。

當(dāng)前53頁(yè)，總共134頁(yè)。（四）堿提取酸沉淀法黃酮苷類(lèi)不溶于酸性水，易溶于堿性水;采用堿液提取，再在提取液中加酸，黃酮苷類(lèi)即可沉淀析出。簡(jiǎn)便易行，如蘆丁、橙皮苷、黃芩苷的提取。當(dāng)前54頁(yè)，總共134頁(yè)。堿提取酸沉淀法原料→混勻煮沸→調(diào)酸度→抽濾→取殘?jiān)濉闉V→合并濾液→調(diào)酸度→抽濾→水洗→干燥→重結(jié)晶→成品堿液提取堿提物、水提物使黃酮苷沉淀Ca(OH)2水提取HCl當(dāng)前55頁(yè)，總共134頁(yè)。（五）超聲波提取破壞植物細(xì)胞壁，使細(xì)胞內(nèi)有效成分大量溶于有機(jī)溶劑，提高提取效率。

當(dāng)前56頁(yè)，總共134頁(yè)。超聲波提取原理在容器中加入提取溶媒（水、乙醇或其他有機(jī)溶劑等），將原料根據(jù)需要粉碎或切成顆粒狀，放入提取溶媒中；容器的外壁連接換能器振子或?qū)⒄褡用芊庥诓讳P鋼盒中投入容器中；開(kāi)啟超聲波發(fā)生器，振子向提取溶媒中發(fā)出超聲波，超聲波在提取溶媒中產(chǎn)生的‘空化效應(yīng)’和機(jī)械作用一方面可有效地破碎原料的細(xì)胞壁，使有效成分呈游離狀態(tài)并溶入提取溶媒中，另一方面可加速提取溶媒的分子運(yùn)動(dòng)，使得提取溶媒和藥材中的有效成分快速接觸，相互溶合、混合。

當(dāng)前57頁(yè)，總共134頁(yè)。（六）超臨界CO2提取在超臨界狀態(tài)下，將超臨界流體與待分離的物質(zhì)接觸，使其有選擇性地把極性大小、沸點(diǎn)高低和分子量大小的成分依次萃取出來(lái)。當(dāng)然，對(duì)應(yīng)各壓力范圍所得到的萃取物不可能是單一的，但可以控制條件得到最佳比例的混合成分，然后借助減壓、升溫的方法使超臨界流體變成普通氣體，被萃取物質(zhì)則完全或基本析出，從而達(dá)到分離提純的目的，所以超臨界流體萃取過(guò)程是由萃取和分離組合而成的。

當(dāng)前58頁(yè)，總共134頁(yè)。研究酶法與溶劑提取相結(jié)合提取羅漢果中黃酮類(lèi)化合物的工藝條件；通過(guò)正交試驗(yàn)找出纖維素酶法及溶劑提取的最佳工藝條件。

例

酶解-溶劑法提取羅漢果中黃酮類(lèi)物質(zhì)當(dāng)前59頁(yè)，總共134頁(yè)。羅漢果的果實(shí)和葉含有羅漢果三萜皂苷，還含有大量的果糖、黃酮類(lèi)化合物、十多種人體必需氨基酸、脂肪酸、維生素C、微量元素等。

酶法提?。焊鶕?jù)植物藥材細(xì)胞壁的構(gòu)成，利用酶反應(yīng)所具有的高度專(zhuān)一性等特點(diǎn)，選擇相應(yīng)的酶，將細(xì)胞壁的組成成分水解或降解，破壞細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)，使有效成分充分暴露出來(lái)，溶解、混懸或膠溶于溶劑中，達(dá)到提取細(xì)胞內(nèi)有效成分的目的的提取方法。

當(dāng)前60頁(yè)，總共134頁(yè)。提取工藝流程羅漢果→粉碎、過(guò)目→一定量的原料加溶劑酶解→過(guò)濾→一次提取物→濃縮→乙醇沉淀→石油醚萃取→乙酸乙酯萃取→羅漢果黃酮類(lèi)物質(zhì)

除去多糖、蛋白質(zhì)等除去脂溶性色素等當(dāng)前61頁(yè)，總共134頁(yè)。對(duì)酶解溫度、酶解時(shí)間、酶的濃度及pH等影響因素進(jìn)行四因素三水平的正交試驗(yàn)。當(dāng)前62頁(yè)，總共134頁(yè)。纖維酶酶解條件的正交因素表水平ABCD酶解溫度/℃酶濃度/(U/mL)pH值酶解時(shí)間/min165304.950270505.280375705.5110當(dāng)前63頁(yè)，總共134頁(yè)。編號(hào)ABCD得率g.100g-1)111112.010212223.610313331.942421231.323522311.470623121.148731321.207832130.769933211.129K12.5213.6002.8893.680K24.5643.7974.0433.929K33.5933.2833.7483.071極差1.4860.5430.7110.644當(dāng)前64頁(yè)，總共134頁(yè)。酶解溫度影響最大。

各影響因素的作用強(qiáng)度依次為：A>C>D>B。即酶解溫度>pH>酶解時(shí)間>酶的濃度當(dāng)前65頁(yè)，總共134頁(yè)。提取物的紫外光譜分析

當(dāng)前66頁(yè)，總共134頁(yè)。在250nm、320nm處均有吸收峰，在黃酮類(lèi)化合物紫外吸收范圍內(nèi)，所得的產(chǎn)物為羅漢果黃酮類(lèi)化合物。該方法的提取率要比一般的提取方法的提取率高。當(dāng)前67頁(yè)，總共134頁(yè)。傳統(tǒng)的提取方法，溫度高，收率低，成本高，消耗大量的溶劑，會(huì)造成對(duì)環(huán)境的污染。酶制劑具有專(zhuān)一性、特異性，在常溫、常壓條件下就能起催化作用，能有效地提高植物藥中的有效成分的含量，減少污染物的排放，能真正實(shí)現(xiàn)“綠色中藥工業(yè)”。

當(dāng)前68頁(yè)，總共134頁(yè)。三、黃酮類(lèi)化合物的應(yīng)用黃酮類(lèi)化合物的兩種利用方式

1植物提取液直接制取功能食品。

2提取液經(jīng)濃縮、分離純化、干燥，制取高純度的黃酮化合物，用于食品抗氧化劑和制造功能食品。

當(dāng)前69頁(yè)，總共134頁(yè)。（一）在飲料中的應(yīng)用1水提取的黃酮類(lèi)化合物葛根黃酮功能飲料、桑葉汁飲料等。2黃酮的植物提取液經(jīng)精制后的產(chǎn)品，添加入果汁中，再調(diào)配。3黃酮的植物提取液與奶粉混合，接種發(fā)酵當(dāng)前70頁(yè)，總共134頁(yè)。（二）在焙烤食品中的應(yīng)用面包、桃酥等。當(dāng)前71頁(yè)，總共134頁(yè)。（三）在小吃食品中的應(yīng)用冰淇淋、綠豆羹、黑米粉、營(yíng)養(yǎng)糊等。當(dāng)前72頁(yè)，總共134頁(yè)。（四）在其他食品中的應(yīng)用奶粉、水果和蔬菜、堅(jiān)果、土豆粉和土豆片、飲料、風(fēng)味物質(zhì)、糖果制品、豬油、植物油等。當(dāng)前73頁(yè)，總共134頁(yè)。第三節(jié)茶多酚茶多酚是茶葉中酚類(lèi)及其衍生物的總稱，又稱茶鞣質(zhì)、茶單寧。茶多酚在茶鮮葉中含量一般為干物質(zhì)的10~20%。當(dāng)前74頁(yè)，總共134頁(yè)。一、茶多酚的結(jié)構(gòu)及其生理功能（一）茶多酚的結(jié)構(gòu)兒茶素類(lèi)、黃酮、黃酮醇、花青素、酚酸、縮酚酸。兒茶素類(lèi)化合物，占茶多酚總量70%。當(dāng)前75頁(yè)，總共134頁(yè)。（二）茶多酚的生理功能1清除自由基、增強(qiáng)機(jī)體免疫力

茶多酚可廣泛地消除體內(nèi)的自由基，且所具有的羥基越多，抗氧化能力越大。當(dāng)L-表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯濃度為0.006mg/ml，對(duì)超氧陰離子消除率達(dá)98%；當(dāng)濃度為0.1mg/ml，對(duì)羥自由基消除率達(dá)99.9%。

當(dāng)前76頁(yè)，總共134頁(yè)。2抗衰老作用茶多酚能提高GSH-Px和SOD活性，減低細(xì)胞的脂質(zhì)過(guò)氧化物，延緩肌脂褐素形成，起抗衰老延壽作用。當(dāng)前77頁(yè)，總共134頁(yè)。3抗輻射作用茶多酚具有抗放射性損傷的效果。當(dāng)前78頁(yè)，總共134頁(yè)。4抗癌作用茶多酚能抑制致癌基因和人體DNA的共價(jià)結(jié)合，從而降低了誘變和致癌活性。當(dāng)前79頁(yè)，總共134頁(yè)。5消炎、抑菌及抗病毒作用

沒(méi)食子兒茶素和沒(méi)食子酸酯有抑制傷寒、副傷寒、霍亂和痢疾的作用，只要濃度達(dá)到5~10mg/mL，就有抑菌作用。當(dāng)前80頁(yè)，總共134頁(yè)。6維持正常血管功能茶多酚能保持人體微血管的正常堅(jiān)韌性和通透性，對(duì)于微血管脆弱的糖尿病患者，可以恢復(fù)其正常生理功能，有利于糖尿病的治療。當(dāng)前81頁(yè)，總共134頁(yè)。7防齲齒作用茶多酚具有殺死齲齒細(xì)菌，抑制葡聚糖聚合酶活性的作用，使葡萄糖不能在牙表明聚合，病原菌便無(wú)法在牙表明著床，齲齒形成便中斷。當(dāng)前82頁(yè)，總共134頁(yè)。茶多酚是茶葉中酚類(lèi)及其衍生物的總稱。從茶葉中提取茶多酚，并加以純化，可廣泛用于醫(yī)療、保健、日用化工及食品等領(lǐng)域。二、茶多酚的制備工藝當(dāng)前83頁(yè)，總共134頁(yè)。（一）沉淀萃取法提取水溶液將茶多酚浸提出來(lái)；利用茶多酚能與Bi2+、Ca2+、Hg2+、Sb3+等金屬離子產(chǎn)生絡(luò)合沉淀，將茶多酚從含茶多酚的水浸提液中分離出來(lái)；用酸轉(zhuǎn)溶，最后用乙酸乙酯抽提。當(dāng)前84頁(yè)，總共134頁(yè)。沉淀萃取法提取茶多酚工藝流程原料預(yù)處理→浸提→壓濾→沉淀→轉(zhuǎn)溶→萃取→有機(jī)相濃縮干燥→成品沸水沖泡Ca2+沉淀稀鹽酸或磷酸乙酸乙酯提高浸出率當(dāng)前85頁(yè)，總共134頁(yè)。（二）溶劑萃取法利用茶多酚及其雜質(zhì)在不同溶劑中溶解度的不同，分別用溶劑去雜或抽提而得到茶多酚粗制品。當(dāng)前86頁(yè)，總共134頁(yè)。溶劑萃取法

提取茶多酚工藝流程原料預(yù)處理→浸提→壓濾→濃縮→轉(zhuǎn)溶→萃取→真空干燥→成品乙醇氯仿萃取，除去色素、咖啡堿等雜質(zhì)水相，用乙酸乙酯萃取當(dāng)前87頁(yè)，總共134頁(yè)。（三）粗制品的純化將茶多酚粗制品溶于水，用乙醚萃取，乙醚層減壓回收，干燥即得較純茶多酚；水層用乙酸乙酯反復(fù)萃取，除去水層，收集乙酸乙酯層；將乙酸乙酯溶液層減壓低溫濃縮，干燥，得茶多酚初級(jí)氧化聚合物。

當(dāng)前88頁(yè)，總共134頁(yè)。茶多酚的純化工藝流程茶多酚粗制品→溶于水→乙醚萃取→乙醚層水層減壓回收乙酸乙酯萃取干燥減壓低溫濃縮茶多酚真空干燥茶多酚初級(jí)氧化聚合物當(dāng)前89頁(yè)，總共134頁(yè)。（一）在飲料中的應(yīng)用茶葉軟飲料、發(fā)酵酒飲料等。

茶葉軟飲料是一種以茶葉為主要原料，不含酒精的飲料，茶葉經(jīng)沸水萃取后，可不加調(diào)料，直接過(guò)濾殺菌后制成罐裝茶水，或分別加入香精、CO2、中草藥制成多味飲料、碳酸飲料、保健型飲料等。茶多酚添加量為250mg/mL。三、茶多酚在功能食品中的應(yīng)用當(dāng)前90頁(yè)，總共134頁(yè)。（二）在小吃食品中的應(yīng)用冷凍制品（雪糕、冰淇淋）；糖果（硬糖、奶糖、水果糖、口香糖）。當(dāng)前91頁(yè)，總共134頁(yè)。（三）在糕點(diǎn)食品中的應(yīng)用

用于糕點(diǎn)，如月餅、餅干、蛋糕等，加入茶多酚不僅可保持其原有的風(fēng)味，防腐敗，延長(zhǎng)保鮮期，防止食品退色，抑制和殺滅細(xì)菌，提高食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，延長(zhǎng)食品的銷(xiāo)售壽命。另外，還可使甜味“酸尾”消失，味感甘爽。

添加量：茶多酚150~200mg/mg食品。當(dāng)前92頁(yè)，總共134頁(yè)。（四）在茶膳中的應(yīng)用

以茶當(dāng)菜-龍井蝦仁、毛峰熏鴨、綠雪鳊魚(yú)、雞絲碧螺春。茶葉食品-茶葉掛面、茶葉湯面、茶葉饅頭、茶葉紫菜澆飯、芥末海鮮湯、茶末烤馬鈴薯、茶末豆腐、茶末肉制品。當(dāng)前93頁(yè)，總共134頁(yè)。四、茶多酚的使用限量根據(jù)我國(guó)《食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB2760-2011）規(guī)定，用于復(fù)合調(diào)味料和植物蛋白飲料時(shí)最大使用限量為0.1g/kg；用于油炸面制品、即食谷物、方便米面制品時(shí)最大使用限量為0.2g/kg用于肉制品(除腌臘肉制品)、水產(chǎn)品時(shí)最大使用限量為0.3g/kg；用于基本不含水的脂肪和油時(shí)最大使用限量為0.4g/kg；用于蛋白型固體飲料時(shí)最大使用限量為0.8g/kg。[備注]

以油脂中兒茶素計(jì)當(dāng)前94頁(yè)，總共134頁(yè)。第四節(jié)超氧化物歧化酶

1969年Mccord和Fridivich首次從牛血紅細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)并分離出超氧化物歧化酶。超氧化物歧化酶可以專(zhuān)一清除超氧自由基（O2

-·）。當(dāng)前95頁(yè)，總共134頁(yè)。超氧物歧化酶(SuperoxideDismutase簡(jiǎn)稱SOD)是一種新型酶制劑,它在生物界的分布極廣,幾乎從人到細(xì)胞,從動(dòng)物到植物,都有它的存在。醫(yī)學(xué)界研究發(fā)現(xiàn)，SOD對(duì)各種疾病均有一定的療效,尤其治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、紅斑痕瘡,皮肌炎等均有明顯效果。此外,在防輻射,防衰老,抗腫瘤等方面也已進(jìn)入臨床。

當(dāng)前96頁(yè)，總共134頁(yè)。一、超氧化物歧化酶的基本特性及生理功能（一）超氧化物歧化酶的組成、分類(lèi)和性質(zhì)1超氧化物歧化酶的組成和分類(lèi)Cu,Zn-SOD，綠色；Mn-SOD，紫色；Fe-SOD，黃褐色。當(dāng)前97頁(yè)，總共134頁(yè)。2超氧化物歧化酶的主要理化特性等電點(diǎn)pH4~6，偏酸性，酸性蛋白；對(duì)熱、pH和蛋白水解酶的穩(wěn)定性好。當(dāng)前98頁(yè)，總共134頁(yè)。（二）超氧化物歧化酶的物化特性和生理功能1延緩由于自由基侵害引起的衰老現(xiàn)象人之所以會(huì)衰老，老化跡象一點(diǎn)一滴出觀，如色素沉淀、體力衰退、是因?yàn)轶w內(nèi)產(chǎn)生氧化作用，所謂[氧化作用]就類(lèi)似于[生銹反應(yīng)]，抗氧化劑的補(bǔ)充有助于降低氧化的速度，減慢衰老的腳步。

自由基引起機(jī)體衰老的機(jī)制：生物大分子的交聯(lián)聚合和脂褐素積累；器官組織細(xì)胞的死亡和癌變；免疫力降低。當(dāng)前99頁(yè)，總共134頁(yè)。2治療由自由基損傷而誘發(fā)的疾病SOD已被用于治療因O2

-·所引起的各種疾病，如關(guān)節(jié)炎和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、自身免疫性疾病（如進(jìn)行性硬結(jié)、紅斑狼瘡）、組織缺血重灌流損傷、老年退化性疾病等。當(dāng)前100頁(yè)，總共134頁(yè)。3消除肌肉疲勞過(guò)多的自由基在體內(nèi)殘存，就猶如毒素蓄積體內(nèi)一樣，會(huì)讓人：容易疲勞、厭倦、注意力不集中、常?；杌璩脸?、打哈欠。

在軍事、體育和救災(zāi)等超負(fù)荷大運(yùn)動(dòng)量過(guò)程中，機(jī)體中部分組織細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)暫時(shí)性缺血及重灌流現(xiàn)象，引起缺血后重灌流損傷，加上大量乳酸的作用，導(dǎo)致了肌肉的疲勞與損傷。肌肉注射SOD可有效地解除疲勞與損傷。當(dāng)前101頁(yè)，總共134頁(yè)。4提高人體的抵抗力提高人體對(duì)自由基侵害而誘發(fā)疾病的抵抗力。提高人體對(duì)自由基誘發(fā)因子損害的抵抗力。當(dāng)前102頁(yè)，總共134頁(yè)。（一）原料

1動(dòng)物：牛血、豬血、馬血、兔血、蛋黃、鴨血、豬肝、牛乳等；

二、超氧化物歧化酶的制備工藝當(dāng)前103頁(yè)，總共134頁(yè)。2植物：刺梨、大蒜、小白菜、飯豆等；

刺梨飯豆當(dāng)前104頁(yè)，總共134頁(yè)。3微生物：酵母菌。當(dāng)前105頁(yè)，總共134頁(yè)。（二）沉淀法制備超氧化物歧化酶原理1SOD熱穩(wěn)定性好，溫度低于80℃，短時(shí)間熱處理酶活力損失不大，一般雜蛋白在高于55℃易變性沉淀。2酶蛋白在等電點(diǎn)時(shí)，溶液中的靜電荷為零，酶蛋白的溶解度最小而沉淀下來(lái)。當(dāng)前106頁(yè)，總共134頁(yè)。3在超氧化物歧化酶粗酶溶液中加入一些弱極性有機(jī)溶劑（丙酮），改變?nèi)芤旱慕殡姵?shù)，使不同種類(lèi)的蛋白質(zhì)的溶解度產(chǎn)生不同程度的下降，把超氧化物歧化酶和其他的雜蛋白分開(kāi)。當(dāng)前107頁(yè)，總共134頁(yè)。沉淀法制備超氧化物歧化酶工藝流程原料→清洗→破碎→浸提→熱變性→高速冷凍離心→調(diào)整pH→高速冷凍離心→加丙酮沉淀

→高速冷凍離心→溶解沉淀→透析→冷凍干燥→成品SOD熱穩(wěn)定性好，使雜蛋白沉淀去掉熱不穩(wěn)定的雜質(zhì)蛋白pH3.5沉淀雜蛋白；SOD等電點(diǎn)4~6沉淀為部分雜質(zhì)蛋白1%丙酮使雜蛋白沉淀；上清液中加入丙酮使SOD沉淀

透析（dialysis）：通過(guò)小分子經(jīng)過(guò)半透膜擴(kuò)散到水（或緩沖液）的原理，將小分子與生物大分子分開(kāi)的一種分離純化技術(shù)。

當(dāng)前108頁(yè)，總共134頁(yè)。（三）離子交換層析法離子交換劑為固定相，液體為流動(dòng)相的系統(tǒng)中進(jìn)行。SOD等電點(diǎn)在4~6之間，pH>7.0時(shí)帶負(fù)電，能被陰離子交換劑吸附，根據(jù)離子交換劑對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)合力差異，用具有一定離子強(qiáng)度流動(dòng)相進(jìn)行洗脫，就可和其他雜蛋白分開(kāi)。經(jīng)透析，冷凍干燥。當(dāng)前109頁(yè)，總共134頁(yè)。離子交換層析法制備SOD采取血清→加入抗凝劑→低溫離心→除血紅蛋白

→丙酮沉淀SOD→透析→纖維素柱→上DEAE→洗脫→收集活性部分→透析→冷凍干燥→成品檸檬酸鈉分離出紅細(xì)胞乙醇-氯仿使之沉淀當(dāng)前110頁(yè)，總共134頁(yè)。（四）鹽析法和金屬螯合親和層析法鹽析（鹽溶）鹽的濃度增高到一定數(shù)值時(shí)，水活度降低；蛋白質(zhì)分子表面電荷逐漸被中和，水化膜逐漸被破壞；引起蛋白質(zhì)分子間相互聚集從溶液中析出。一定濃度范圍的鹽濃度(如1%~25%飽和度硫酸銨)，使部分雜質(zhì)呈“鹽析”(沉淀)狀態(tài)。有效成分呈“鹽溶”(溶解)狀態(tài)。離心分離得上清液，選擇一定濃度范圍的鹽濃度(如25%~60%飽和度的鹽溶液)，使SOD呈鹽析狀態(tài)，另一部分雜質(zhì)呈鹽溶狀態(tài)，離心收集的沉淀為初步分離制備的SOD。當(dāng)前111頁(yè)，總共134頁(yè)。親和層析把對(duì)SOD具有識(shí)別能力的配體Cu2+以共價(jià)鍵的方式固化到含有活化基團(tuán)基質(zhì)如殼聚糖上，然后裝入層析柱。SOD粗酶液通過(guò)該柱量，由于靜電引力，結(jié)構(gòu)互補(bǔ)效應(yīng)等作用使其被吸附，而無(wú)親和力或非特異吸附的物質(zhì)被起始緩沖液洗滌出來(lái)。當(dāng)前112頁(yè)，總共134頁(yè)。當(dāng)前113頁(yè)，總共134頁(yè)。鹽析法和金屬螯合親和層析法制備SOD原料→清洗→破碎→浸提→第一次鹽析

→離心→第二次鹽析→離心→透析→上柱

→洗脫→透析→冷凍干燥→成品SOD鹽溶；雜蛋白鹽析55%飽和度的硫酸銨上清液為SODSOD鹽析；雜蛋白鹽溶95%飽和度的硫酸銨沉淀為SOD當(dāng)前114頁(yè)，總共134頁(yè)。（五）酵母發(fā)酵法將酵母菌種進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)，離心收集菌體，懸浮于磷酸鉀緩沖液中，超聲波破壁，離心除去殘?jiān)么置柑崛∫?，?jīng)鹽析和柱層析得酵母SOD。當(dāng)前115頁(yè)，總共134頁(yè)。酵母發(fā)酵法

制備SOD菌體培養(yǎng)→超聲波破壁→離心→鹽析→透析→上柱→洗脫→濃縮→冷凍干燥→成品二次鹽析酵母菌除去殘?jiān)?dāng)前116頁(yè)，總共134頁(yè)。三、超氧化物歧化酶的修修飾工藝

為了提高SOD的穩(wěn)定性，有必要對(duì)SOD分子進(jìn)行修飾改造。途徑有

1對(duì)SOD氨基酸殘基進(jìn)行化學(xué)修飾

2用水溶性大分子對(duì)SOD氨基酸殘基進(jìn)行共價(jià)修飾

3對(duì)SOD進(jìn)行酶切修飾當(dāng)前117頁(yè)，總共134頁(yè)。（一）硬脂酸修飾法將硬脂酸活化成硬脂酰氯，在一定條件下對(duì)SOD分子中的賴氨酸ε–氨基進(jìn)行修飾，提高了其穩(wěn)定性。當(dāng)前118頁(yè)，總共134頁(yè)。硬脂酸修飾法工藝流程

SOD的制備硬脂酸活化→SOD修飾反應(yīng)→加入丙酮沉淀

→離心→洗滌→冷凍干燥→硬脂酰-SOD成品當(dāng)前119頁(yè)，總共134頁(yè)。（二）糖酯修飾法一定條件下，將葡萄糖酸內(nèi)酯與超氧化物歧化酶上賴氨酸的ε–氨基結(jié)合，提高其穩(wěn)定性。當(dāng)前120頁(yè)，總共134頁(yè)。糖酯修飾法工藝流程

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