高效液相色譜基線的各種問(wèn)題L、基線漂移原因解決方法1、柱溫波動(dòng)?！布词故呛苄〉臏囟茸兓紩?huì)引起基線的波動(dòng)。通常影響示差檢測(cè)器、電導(dǎo)檢測(cè)器、較低靈敏度的紫外檢測(cè)器或其它光電類檢測(cè)器?！?、控制好柱子和流動(dòng)相的溫度，在檢測(cè)器之前使用熱交換器圖2、流動(dòng)相不均勻?！擦鲃?dòng)相條件變化引起的基線漂移大于溫度導(dǎo)致的漂移?！?、使用HPLC級(jí)的溶劑，高純度的鹽和添加劑。流動(dòng)相在使用前進(jìn)行脫氣，使用中使用氦氣。3、流通池被污染或有氣體3、用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸?！膊灰名}酸〕4、檢測(cè)器出口阻塞。〔高壓造成流通池窗口破裂，產(chǎn)生噪音基線〕4、取出阻塞物或更換管子。參考檢測(cè)器手冊(cè)更換流通池窗。5、流動(dòng)相配比不當(dāng)或流速變化5、更改配比或流速。為防止這個(gè)問(wèn)題可定期檢查流動(dòng)相組成及流速。6、柱平衡慢，特別是流動(dòng)相發(fā)生變化時(shí)6、用中等強(qiáng)度的溶劑進(jìn)行沖洗，更改流動(dòng)相時(shí)，在分析前用10-20倍體積的新流動(dòng)相對(duì)柱子進(jìn)行沖洗。7、流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成7、檢查流動(dòng)相的組成。使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級(jí)的溶劑8、樣品中有強(qiáng)保存的物質(zhì)〔高K值〕以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個(gè)逐步升高的基線。8、使用保護(hù)柱，如有必要，在進(jìn)樣之間或在分析過(guò)程中，定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。9、使用循環(huán)溶劑，但檢測(cè)器未調(diào)整。9、重新設(shè)定基線。當(dāng)檢測(cè)器動(dòng)力學(xué)范圍發(fā)生變化時(shí)，使用新的流動(dòng)相。

10、檢測(cè)器沒有設(shè)定在最大吸收波長(zhǎng)處。10、將波長(zhǎng)調(diào)整至最大吸收波長(zhǎng)處M、基線噪音〔規(guī)那么的〕原因解決方法1、在流動(dòng)相、檢測(cè)器或泵中有空氣1、流動(dòng)相脫氣。沖洗系統(tǒng)以除去檢測(cè)器或泵中的空氣。2、漏液圖2、見第三局部。檢查管路接頭是否松動(dòng)，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換泵密封。3、流動(dòng)相混合不完全3、用手搖動(dòng)使混合均勻或使用低粘度的溶劑4、溫度影響〔柱溫過(guò)高，檢測(cè)器未加熱〕4、減少差異或加上熱交換器5、在同一條線上有其他電子設(shè)備5、斷開LC、檢測(cè)器和記錄儀，檢查干擾是否來(lái)自于外部，加以更正。6、泵振動(dòng)6、在系統(tǒng)中參加脈沖阻尼器N、基線噪音〔不規(guī)那么的〕原因解決方法1、漏液圖1、見第三局部。檢查接頭是否松動(dòng)，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換密封。檢查流通池是否漏液。2、流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成2、檢查流動(dòng)相的組成。3、流動(dòng)相各溶劑不相溶3、選擇互溶的流動(dòng)相4、檢測(cè)器/記錄儀電子元件的問(wèn)題4、斷開檢測(cè)器和記錄儀的電源，檢查并更正。

5、系統(tǒng)內(nèi)有氣泡5、用強(qiáng)極性溶液清洗系統(tǒng)6、檢測(cè)器內(nèi)有氣泡6、清洗檢測(cè)器，在檢測(cè)器后面安裝背景壓力調(diào)節(jié)器7、流通池污染〔即使是極少的污染物也會(huì)產(chǎn)生噪音。7、用1N的硝酸〔不能用磷酸〕清洗流通池8、檢測(cè)器燈能量缺乏8、更換燈9、色譜柱填料流失或阻塞9、更換色譜柱10、流動(dòng)相混合不均勻或混合器工作不正常10、維修或更換混合器，在流動(dòng)相不走梯度時(shí)，建議不使用泵的混合裝置0、寬峰原因解決方法1、流動(dòng)相組成變化1、重新制備新的流動(dòng)相2、流動(dòng)相流速太低2、調(diào)節(jié)流速3、漏液〔特別是在柱子和檢測(cè)器之間〕3、見section3。檢查接頭是否松動(dòng)、泵是否漏液、是否有鹽析出以及不正常的噪音。如果必要更換密封。4、檢測(cè)器設(shè)定不正確4、調(diào)整設(shè)定5、柱外效應(yīng)影響a、柱子過(guò)載b、檢測(cè)器對(duì)反響時(shí)間或池體積響應(yīng)過(guò)大c、柱子與檢測(cè)器之間的管路太長(zhǎng)或管路內(nèi)徑太大d、記錄儀響應(yīng)時(shí)間太長(zhǎng)5、a、小體積進(jìn)樣〔例如：10ul而不是100ul〕以1：10或1：100的比例稀釋樣品b、減少響應(yīng)時(shí)間或使用更小的流通池c、使用內(nèi)徑為0.007-0.01的短管路d、減少響應(yīng)時(shí)間6、緩沖液濃度太低6、增加濃度7、保護(hù)柱污染或失效7、更換保護(hù)柱8、更換同樣類型的色譜柱。如果新柱子可以提供對(duì)稱的色譜峰，那么用強(qiáng)溶劑沖洗舊柱子。9、柱入口塌陷9、翻開柱入口，填補(bǔ)塌陷或更換柱子10、呈現(xiàn)兩個(gè)或多個(gè)未被完全別離的物質(zhì)的峰10、選擇其它類型的色譜柱以改善別離效果11、柱溫過(guò)低11、提高柱溫。除非特殊情況，溫度不宜超過(guò)75°C12、檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)太大12、使用較小的時(shí)間常數(shù)P、別離度降低原因解決方法1、流動(dòng)相污染或變質(zhì)〔引起保存時(shí)間變化〕1、重新配置流動(dòng)相2、保護(hù)柱或分析柱阻塞圖2、去掉保護(hù)柱進(jìn)行分析。如果必要那么更換保護(hù)柱。如果分析柱阻塞，可進(jìn)行反沖。如果問(wèn)題仍然存在色譜柱可能被強(qiáng)保存的污染物損壞，建議使用恰當(dāng)?shù)脑偕绦?。如果?wèn)題仍然存在，進(jìn)口可能阻塞了，更換入口處的篩板或更換色譜柱。Q、所有的峰面積都太小原因解決方法1、檢測(cè)器衰減設(shè)定過(guò)高1、減少衰減的設(shè)定2、檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)設(shè)定太大2、設(shè)定較小的時(shí)間常數(shù)3、進(jìn)樣量太少3、增大進(jìn)樣量4、記錄儀連接不當(dāng)4、使用正確的連接R、所有的峰面積都太大原因解決方法1、檢測(cè)器衰減設(shè)定過(guò)低1、采取較大的衰減2、進(jìn)樣過(guò)多2、減少進(jìn)樣量3、記錄儀連接不正確3、正確連接記錄儀HPLC日常維護(hù)方法之四：進(jìn)樣閥的問(wèn)題以下問(wèn)題在使用進(jìn)樣閥過(guò)程中有可能發(fā)生。A、手動(dòng)進(jìn)樣閥，轉(zhuǎn)動(dòng)不靈原因解決方法1、轉(zhuǎn)子密封損壞1、更換或調(diào)整轉(zhuǎn)子密封2、轉(zhuǎn)子太緊2、調(diào)整轉(zhuǎn)子的松緊度B、手動(dòng)進(jìn)樣閥，載樣困難原因解決方法1、進(jìn)樣閥安裝不當(dāng)1、重新安裝2、定量環(huán)阻塞2、清洗或更換定量環(huán)3、進(jìn)樣器污染3、清洗或更換進(jìn)樣器4、管路阻塞4、清洗或更換管路C、自動(dòng)進(jìn)樣閥，不能轉(zhuǎn)動(dòng)原因解決方法1、無(wú)壓力〔或電源〕1、提供恰當(dāng)?shù)膲毫Α搽娫础?、轉(zhuǎn)子太緊2、調(diào)整轉(zhuǎn)子的松緊度3、進(jìn)樣閥安裝不當(dāng)3、重新安裝D、自動(dòng)進(jìn)樣閥，其它問(wèn)題原因解決方法1、阻塞1、清洗或更換阻塞部件2、機(jī)械故障2、見隨機(jī)維修手冊(cè)3、控制器故障3、維修或更換控制器液相色譜基線有很多的毛刺，但總體上還是水平的，問(wèn)這是什么原因?qū)е碌?懸賞分：5-解決時(shí)間：2006-7-2021:14]液相色譜基線有很多的毛刺，但總體上還是水平的，問(wèn)這是什么原因?qū)е碌?問(wèn)題補(bǔ)充：我所用的是液相色譜，配紫外檢測(cè)器，色譜柱是新的，儀器也沒有振動(dòng)。毛刺是因信號(hào)頻率的波動(dòng)而引起，是比色譜峰的有效值頻率更高的基線擾動(dòng)。毛刺的存在并不影響色譜峰的分辨，但對(duì)檢測(cè)限有一定影響。規(guī)那么的毛刺還算是正常你把基線放寬，就相當(dāng)于靈敏度變高。先給儀器充分的穩(wěn)定時(shí)間再看看。如果真的是色譜系統(tǒng)出了問(wèn)題，一般是這幾個(gè)方面的〔不管是氣相還是液相都有用〕氫氣，空氣，載氣純度不高會(huì)影響。2■玻璃襯管是否臟3■色譜柱是否臟，處理一下或換一個(gè)新的試一試檢測(cè)器清洗一下，可能有未燃燒完的雜質(zhì)是否漏氣6?進(jìn)樣口是否該換一個(gè)墊子7.儀器是否產(chǎn)生較大振動(dòng)8■信號(hào)接收器是否已懷或者接觸不良甚至還有過(guò)因?yàn)楣ぷ髡境鰡?wèn)題導(dǎo)致的毛刺……

小弟初次使用液相色譜，基線波動(dòng)非常厲害怎么回事小弟科室一臺(tái)電化學(xué)液相色譜閑置兩年沒人用過(guò)，今天小弟初次使用時(shí)調(diào)節(jié)流速為0.5mL?min工作電壓設(shè)為+700mV，濾波0。1Hz，增益5nA發(fā)現(xiàn)基線抖得很厲害，很有規(guī)律，就是每當(dāng)泵“篤〃一聲時(shí)就出現(xiàn)一個(gè)波峰，大概0.8nA高，也不出現(xiàn)基線向上向下漂移，很影響測(cè)量，請(qǐng)問(wèn)是怎么回事，謝謝八八八__/\___/\___/\___可能是色譜柱進(jìn)了氣泡，又或者色譜柱還未被流動(dòng)相跑平衡〔如果是柱子進(jìn)氣泡的話，會(huì)出現(xiàn)一組很有規(guī)律的峰〕其實(shí)基線的波動(dòng)是難免的，只要波動(dòng)在允許的范圍之內(nèi)的話，就不會(huì)影響測(cè)量你問(wèn)題說(shuō)的很詳細(xì)，但是你還是沒說(shuō)：你的柱子有沒有恒溫箱。首先我疑心柱溫波動(dòng)。〔即使是很小的溫度變化都會(huì)引起基線的波動(dòng)。通常影響示差檢測(cè)器、電導(dǎo)檢測(cè)器、較低靈敏度的紫外檢測(cè)器或其它光電類檢測(cè)器?！辰鉀Q方法：控制好柱子和流動(dòng)相的溫度。其次，我疑心是流動(dòng)相，流動(dòng)相有氣泡。流動(dòng)相條件變化引起的基線波動(dòng)大于溫度導(dǎo)致的波動(dòng)。解決方法：使用HPLC級(jí)的溶劑流動(dòng)相在使用前進(jìn)行脫氣，有條件可以在線脫氣。如果你的泵壓也波動(dòng)的話，檢查系統(tǒng)是否漏液，如果不漏液，就根本上是確定是有氣泡了。其他原因解決方法1、在流動(dòng)相、檢測(cè)器或泵中有空氣1、流動(dòng)相脫氣。沖洗系統(tǒng)以除去檢測(cè)器或泵中的空氣。2、漏液圖2、檢查管路接頭是否松動(dòng)，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換泵密封。3、流動(dòng)相混合不完全3、用手搖動(dòng)使混合均勻或使用低粘度的溶劑4、溫度影響〔柱溫過(guò)高，檢測(cè)器未加熱〕4、減少差異或加上熱交換器5、在同一條線上有其他電子設(shè)備5、斷開LC、檢測(cè)器和記錄儀，檢查干擾是否來(lái)自于外部，加以更正。6、泵振動(dòng)6、在系統(tǒng)中參加脈沖阻尼器最近在論壇里發(fā)現(xiàn)很多蟲友在HPLC試驗(yàn)中經(jīng)常受到基線波動(dòng)或基線漂移的困擾，下面就我本人在實(shí)驗(yàn)中積累的或從別處了解到的一些經(jīng)驗(yàn)總結(jié)如下，歡送大家指正。1■液相系統(tǒng)沒有平衡好，柱子里的流動(dòng)相一直在變化，在檢測(cè)器里面的吸收就會(huì)一直變

化，導(dǎo)致基線波動(dòng)的發(fā)生；梯度時(shí)如果其實(shí)比例的流動(dòng)相平衡時(shí)間過(guò)短也會(huì)造成基線波動(dòng)；實(shí)驗(yàn)室環(huán)境不穩(wěn)定〔比方溫度忽高忽低，氣流不斷變化等〕這對(duì)于沒有柱溫箱或只有單向溫度變化的HPLC儀器的影響尤其明顯；即使有比擬好的柱溫箱時(shí)，也要注意別讓空調(diào)的出風(fēng)口一直對(duì)照儀器吹，那樣基線也可能會(huì)波動(dòng)；此外實(shí)驗(yàn)室有電磁干擾時(shí)，也有可能會(huì)導(dǎo)致此問(wèn)題的發(fā)生；3■檢測(cè)器的流通池被污染，造成吸收的不恒定，此時(shí)需要清洗流通池；4■檢測(cè)器燈能量缺乏時(shí)，吸收會(huì)變得不穩(wěn)定，這時(shí)基線一般也不穩(wěn)定，特別是在低波長(zhǎng)處尤為明顯；5■當(dāng)使用低波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，有時(shí)流動(dòng)相會(huì)使用兩相或以上的等度，這時(shí)混合器的很小的混合比例的誤差都會(huì)被放大，很有可能會(huì)使基線發(fā)生波動(dòng)，這時(shí)將流動(dòng)相按比例混合到一個(gè)通道里時(shí)，一般都會(huì)使情況改善很多；流動(dòng)相里的有機(jī)相的截止波長(zhǎng)最好要大于檢測(cè)波長(zhǎng)20nm以上，這一點(diǎn)切記，比方甲醇的截止波長(zhǎng)是210nm,乙腈是190nm。當(dāng)使用230nm以下的檢測(cè)波長(zhǎng)時(shí)，如果條件允許，最好使用乙腈，可以防止基線波動(dòng)，其余類推；儀器出現(xiàn)問(wèn)題也會(huì)造成基線波動(dòng)，比方⑴流動(dòng)相過(guò)濾頭堵塞、入口主動(dòng)閥濾芯污染、單向閥被污染物堵塞、泵頭有氣泡、比例閥出故障、系統(tǒng)流路漏液，比方管路裂開、peek接頭沒完全連上色譜柱而導(dǎo)致的泄露等；8?沒有脫氣機(jī)的儀器，當(dāng)流動(dòng)相未脫氣或脫氣未徹底時(shí)，基線也會(huì)波動(dòng)；有脫氣機(jī)的每次使用前都要檢查一下是否正常工作；9?當(dāng)大家使用梯度作為組分洗脫方式的時(shí)候，有條件的最好使用超純水，磷酸鹽、三乙胺等固體液體參加試劑也最好使用HPLC級(jí)別的，因?yàn)樵谔荻戎须S著有機(jī)相〔洗脫力較強(qiáng)〕的不斷增加，流動(dòng)相系統(tǒng)里的雜質(zhì)會(huì)在基線上反映出來(lái)，導(dǎo)致出現(xiàn)鬼峰或基線波動(dòng)；流動(dòng)相中的有機(jī)相和緩沖液的比例一定要注意調(diào)配好，緩沖液的比例不能過(guò)大，要不然會(huì)出現(xiàn)緩沖鹽在柱子里析出的情況，這樣不但會(huì)造成基線波動(dòng)的發(fā)生，甚至?xí)斐缮V柱毀壞；當(dāng)色譜柱被污染時(shí)，也會(huì)造成基線波動(dòng)，這里尤其要注意的是大家在做合成中控實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，最好不要用合成的原始反響液直接進(jìn)樣，因?yàn)樵豪锩嬗泻芏喾菢O性或極性很小的化合物，一旦進(jìn)入到反相色譜柱里和非極性的C18發(fā)生相互作用，很可能就洗脫不下來(lái)使色譜柱變性或者慢慢的被洗脫下來(lái)，造成以后的分析出現(xiàn)不穩(wěn)定的鬼峰或者基線波動(dòng)；一些比擬老的液相儀對(duì)電壓要求很高，電壓有點(diǎn)起伏檢測(cè)器就會(huì)反映教明顯，比方老的惠普和島津等儀器，這時(shí)需要配一個(gè)穩(wěn)壓電源來(lái)解決此問(wèn)題；此外儀器和電腦之間連接的數(shù)據(jù)線出問(wèn)題或老化也可能會(huì)使基線波動(dòng)。當(dāng)然上面說(shuō)了這么多的原因，個(gè)人認(rèn)為還不是很全面，有些沒考慮到得地方還請(qǐng)大家不吝補(bǔ)充，以致共同進(jìn)步，謝謝！高效液相色譜儀〔HPLC〕現(xiàn)已成為有機(jī)化學(xué)分析的重要手段之一。同樣，在食品分析中，無(wú)論是殘留分析還是成分分析，HPLC也已成為不可或缺的分析儀器。和其它分析儀器一樣,你假設(shè)想讓HPLC很好地為你工作、得到可靠的數(shù)據(jù)，首先你要保養(yǎng)好它，使它處于一個(gè)良好的待機(jī)狀態(tài)，這樣你操作它進(jìn)行分析時(shí)就可以比擬順利地獲得理想的結(jié)果。而且良好標(biāo)準(zhǔn)的操作習(xí)慣可以延長(zhǎng)儀器使用壽命。大家在學(xué)?；蚪邮軆x器公司培訓(xùn)的時(shí)候，老師或工程師會(huì)提出很多的操作考前須知。但要是總結(jié)歸納一下，最重要的有三點(diǎn)：脫氣、過(guò)濾和沖洗。本文圍繞這三點(diǎn)進(jìn)行討論，給新從事HPLC分析的工作者一點(diǎn)操作建議，希望能對(duì)正確的操作儀器有一點(diǎn)幫助。更歡送有經(jīng)驗(yàn)的專家介紹使用經(jīng)驗(yàn)，提出好建議。

一、脫氣流動(dòng)相脫氣對(duì)于防止HPLC系統(tǒng)出問(wèn)題，順利得到一個(gè)理想的數(shù)據(jù)是一個(gè)很有效的措施。HPLC系統(tǒng)內(nèi)是不希望有氣泡存在的。HPLC泵在輸送液體時(shí)要產(chǎn)生很大的力量，由于氣體的壓縮比與液體相比大的多，因而當(dāng)氣泡存在時(shí)，你將觀察到瞬間的流速降低和系統(tǒng)壓力下降。如果這個(gè)氣泡足夠大，液相泵將不能輸送任何溶劑，而且如果壓力低于預(yù)先設(shè)定的壓力低限，泵將停止工作。有些泵設(shè)計(jì)可以很好地排除氣泡，而也有一些泵設(shè)計(jì)當(dāng)氣泡存在時(shí)將停止運(yùn)轉(zhuǎn)。當(dāng)一個(gè)氣泡通過(guò)輸液泵時(shí)，由于系統(tǒng)壓力大，氣泡通常會(huì)溶解在流動(dòng)相溶液中,隨流動(dòng)相通過(guò)柱子。但是到達(dá)檢測(cè)器流通池時(shí)系統(tǒng)壓力又恢復(fù)到了大氣壓，因而氣泡可能在檢測(cè)器流通池中又顯現(xiàn)，在色譜圖上會(huì)出現(xiàn)不規(guī)律的毛刺。為解決這個(gè)問(wèn)題，有些儀器公司設(shè)計(jì)一個(gè)反壓控制器，這樣可以在檢測(cè)器出口提供足夠的壓力保持氣泡始終溶解在流動(dòng)相中直到它們流出檢測(cè)器。當(dāng)然，這個(gè)壓力不能超過(guò)流通池所能承受的壓力極限，否那么可能損壞檢測(cè)器。紫外/可見光〔UV/VIS〕檢測(cè)器的液相色譜圖中的噪音毛刺通常是氣泡進(jìn)入并通過(guò)流通池的征兆。有些檢測(cè)器對(duì)空氣的存在也非常敏感，但表現(xiàn)出的征兆與UV/VIS不同，例如有報(bào)導(dǎo)說(shuō)，當(dāng)使用熒光FL〕檢測(cè)器時(shí)，流動(dòng)相中溶解氧的存在可能會(huì)使一些化合物失去熒光性。此外，對(duì)于利用待測(cè)物質(zhì)在電極外表發(fā)生氧化復(fù)原反響引起電流變化而進(jìn)行檢測(cè)的電化學(xué)〔EC〕檢測(cè)器，對(duì)流動(dòng)相中的溶解氧的存在也非常靈敏。此外，氣泡的存在有時(shí)還會(huì)導(dǎo)致保存時(shí)間不重現(xiàn)。所以，必須注意消除流動(dòng)相中的空氣，并且還應(yīng)防止空氣由管路〔如PTFE管〕滲透進(jìn)流動(dòng)相中。如果適當(dāng)?shù)仃P(guān)注在使用之前脫去流動(dòng)相中溶解進(jìn)的空氣，上述這些問(wèn)題均能防止,或把影響降至最低。常用的脫氣方法有如下幾種：吹氦脫氣法。利用氦氣在液體中溶解度比空氣低的特性，在O.IMPa壓力下，以約60mL/min流速通入流動(dòng)相儲(chǔ)液容器中10?15min,可以很有效地從流動(dòng)相中排除溶解的空氣，能排除接近80%的氧氣。采用一個(gè)高效分布式噴射流裝置，一體積的氦氣可從流動(dòng)相中將等體積的幾乎全部氣體排除。這意味著1L氦氣通過(guò)1L流動(dòng)相就可完成排氣這個(gè)工作。這種脫氣方法雖然好,但我們國(guó)內(nèi)氦氣價(jià)格較高，很少有實(shí)驗(yàn)室采用此方法。加熱回流法。此法的脫氣效果較好。在操作時(shí)要注意冷凝塔的冷卻效率，否那么溶劑會(huì)喪失，混合流動(dòng)相的比例會(huì)有變化。抽真空脫氣法。此法可使用真空泵，降壓至0.05?0.07MPa即可除去溶解的氣體。但是由于真空脫氣會(huì)使混合溶劑組成發(fā)生變化，從而影響到實(shí)驗(yàn)的重現(xiàn)性，因此多用于單溶劑體系的簡(jiǎn)單分析。超聲波脫氣法。將欲脫氣的流動(dòng)相置于超聲波清洗器中，用超聲波震蕩10?20min。此法的脫氣效果最差。在線脫氣法?，F(xiàn)在商品的HPLC儀器，均可配在線脫氣機(jī)。在線脫氣使用簡(jiǎn)單，低故障，有效。建議購(gòu)置儀器時(shí)一定要購(gòu)置，有的公司是作為選購(gòu)件，所以與儀器公司談配置時(shí)應(yīng)與公司確認(rèn)。二、過(guò)濾任何顆粒物進(jìn)入HPLC系統(tǒng)后都會(huì)在柱子入口端被篩板擋住，最后的結(jié)果是將柱子堵塞，表現(xiàn)出的特征是系統(tǒng)壓力增加并使色譜峰變形。因此，要采取各種預(yù)防措施，包括操作步驟和商品儀器自身的各種過(guò)濾設(shè)計(jì)，努力防止或減少顆粒物進(jìn)入HPLC系統(tǒng)中，從而延長(zhǎng)儀器和色譜柱的使用壽命，并提高數(shù)據(jù)的可靠性。在HPLC系統(tǒng)中，顆粒物的主要來(lái)源有三個(gè)途徑：流動(dòng)相、被測(cè)樣品和儀器系統(tǒng)部件的磨損物。1、流動(dòng)相

如果流動(dòng)相均由高效液相色譜級(jí)溶劑組成，流動(dòng)相沒有必要過(guò)濾。這是因?yàn)楦咝б合嗌V級(jí)的有機(jī)溶劑，例如乙腈、甲醇等，在制造的工藝過(guò)程中都已經(jīng)過(guò)了0.2um微孔濾膜過(guò)濾。同樣的，無(wú)論你是買的HPLC級(jí)的水還是在實(shí)驗(yàn)室使用超純水凈化系統(tǒng)制備的水，最后一步也是通過(guò)0.2um微孔濾膜。然而，如果有任何一種緩沖液中參加了固體物，例如磷酸鹽，流動(dòng)相過(guò)濾將是必要的一個(gè)步驟。雖然緩沖鹽可能是可溶解的、高純的，但它還是可能含有顆粒物質(zhì)，例如在蓋試劑瓶的塑料內(nèi)蓋時(shí)，塑料瓶蓋子與瓶口邊緣擠壓就會(huì)產(chǎn)生塑料顆粒。在這種情況下，添加的一種固體物可能完全溶解了，但是少量雜質(zhì)顆粒存在于流動(dòng)相中成為殘?jiān)?。流?dòng)相通過(guò)0.45um微孔濾膜過(guò)濾對(duì)于從流動(dòng)相中除去所有顆粒物是一個(gè)有效方法。0.2um微孔濾膜也可以用，但是它們就這個(gè)應(yīng)用而言并不比0.45um微孔濾膜更有效，而且它的過(guò)濾速度會(huì)更慢，特別是當(dāng)實(shí)驗(yàn)室使用的試劑和水的質(zhì)量不太好時(shí)。建議實(shí)驗(yàn)室在編寫制定他們流動(dòng)相制備標(biāo)準(zhǔn)操作程序〔SOPs〕時(shí)規(guī)定，可以借鑒國(guó)際上同類實(shí)驗(yàn)室的規(guī)定，即：流動(dòng)相制備僅采用HPLC級(jí)液體時(shí)不需要過(guò)濾，反之所有流動(dòng)相組成在使用前必須過(guò)濾。在連接儲(chǔ)液瓶和泵的輸液管的末端入口采用下沉式過(guò)濾器〔常見材質(zhì)有熔融玻璃砂芯濾板和微孔金屬的兩種〕也是很重要的。這個(gè)過(guò)濾器的規(guī)格為羽0um的微孔物質(zhì)，所以它不能取代流動(dòng)相過(guò)濾步驟，但是它能除去系統(tǒng)中的塵土并保證儲(chǔ)液瓶、輸液管使用的可靠性。2、被測(cè)樣品液相系統(tǒng)中的第二個(gè)顆粒物來(lái)源是被測(cè)樣品。一些實(shí)驗(yàn)室在將他們的樣品放置在自動(dòng)進(jìn)樣器盤〔或手動(dòng)進(jìn)樣〕以前，所有樣品都先通過(guò)一個(gè)0.45um針筒式過(guò)濾器過(guò)濾。這是一個(gè)有效除去被測(cè)樣品中顆粒物的方法。但是這個(gè)過(guò)程也有一點(diǎn)需要關(guān)注：你使用了針筒式過(guò)濾器就不可能100%得到通過(guò)過(guò)濾器的被測(cè)樣品，總會(huì)有或多或少的喪失。喪失來(lái)自這樣幾方面：過(guò)濾器濾膜的吸附、過(guò)濾器濾出的顆粒物上的吸附、針筒式濾膜過(guò)濾器與針筒連接處的滲漏等。如果有喪失，過(guò)濾后液體中被測(cè)物的含量或濃度與原根本樣液的含量或濃度還相同嗎？這個(gè)問(wèn)題一般需要通過(guò)實(shí)驗(yàn)確認(rèn)。確認(rèn)這步是要增加工作量和費(fèi)用的。過(guò)濾器的使用是一種消耗，每個(gè)過(guò)濾器的價(jià)格從幾元到十幾元。但在做食品中殘留物分析時(shí)，由于基質(zhì)大多比擬復(fù)雜，所以過(guò)濾這步已成為不可或缺的一步。在實(shí)際分析工作中，一般檢測(cè)每一組樣品會(huì)帶一個(gè)外標(biāo)、一個(gè)添加回收或是質(zhì)控樣品，所以，只要最終檢測(cè)時(shí)得到的信噪比能滿足檢出限要求，可將這步視為系統(tǒng)誤差而忽略。3、儀器系統(tǒng)部件的磨損物最后，在HPLC系統(tǒng)中顆粒物的另一個(gè)主要來(lái)源是輸液泵密封墊和進(jìn)樣閥旋轉(zhuǎn)軸的磨損。關(guān)于輸液泵密封墊的磨損更換有兩種不同建議。第一種建議認(rèn)為，在一般實(shí)驗(yàn)室中輸液泵密封墊通常使用壽命為六個(gè)月到一年，因此建議半年或一年更換這些密封墊，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)基于上述觀點(diǎn)制定定期預(yù)防性維護(hù)方案。該觀點(diǎn)認(rèn)為：與輸液泵密封墊顆粒堵塞柱子而更換新柱子的費(fèi)用相比，更換密封墊的費(fèi)用低些。一些輸液泵有玻璃砂芯或篩網(wǎng)，可在流路中濾掉從泵密封墊磨損下來(lái)的顆粒物，防止這些顆粒物隨流動(dòng)相流至柱頭。假設(shè)有這種裝置應(yīng)查閱輸液泵操作手冊(cè)，查看推薦的這種過(guò)濾器清洗或更換的間隔。另一種建議那么認(rèn)為，原裝密封墊的密封效果最好，更換以后容易引起流動(dòng)相滲漏。所以，只要不漏液就不要輕易更換密封墊。兩種說(shuō)法都有其道理，具體如何操作，建議與儀器公司工程師溝通，各公司的儀器還是有些不同的。自動(dòng)進(jìn)樣器旋轉(zhuǎn)軸的密封隨著使用時(shí)間也會(huì)磨損，但是在我的經(jīng)驗(yàn)中，即便是高負(fù)荷的運(yùn)轉(zhuǎn)旋轉(zhuǎn)軸密封墊也可以使用幾年。如果你的自動(dòng)進(jìn)樣器系統(tǒng)有計(jì)數(shù)進(jìn)樣閥轉(zhuǎn)動(dòng)次數(shù)的功能，你可以設(shè)定一個(gè)警鈴當(dāng)預(yù)設(shè)閥轉(zhuǎn)動(dòng)次數(shù)已到達(dá)時(shí)提醒你。曾有一種說(shuō)法，進(jìn)樣器最多轉(zhuǎn)動(dòng)20,000次,這僅僅是進(jìn)樣10000個(gè)；但這似乎不是實(shí)驗(yàn)室涉及的常規(guī)樣品分析使用壽命，它們的實(shí)際使用壽命會(huì)更長(zhǎng)。旋轉(zhuǎn)軸密封磨損后會(huì)滲液，比擬明顯的特征是同一樣品屢次進(jìn)

樣后，峰面積值差異比擬大〔RSD>5%〕。當(dāng)然，輸液泵的密封墊和旋轉(zhuǎn)軸的密封墊磨損將增加更多研磨物在流動(dòng)相中，加速對(duì)這些部件的損傷。此外，如果你日常運(yùn)行的流動(dòng)相有緩沖鹽，如磷酸緩沖鹽，密封墊的磨損會(huì)更快。無(wú)論顆粒物源于何物，實(shí)驗(yàn)時(shí)都要將其除去。推薦在HPLC系統(tǒng)中采用一個(gè)0.45或0.5um的在線多孔過(guò)濾器，接在自動(dòng)進(jìn)樣器和柱子之間，即使已使用了保護(hù)柱。這個(gè)在線過(guò)濾器將成為擋板代替柱頭的濾板，而且如采用一個(gè)玻璃砂芯濾板，既廉價(jià)，更換又方便〔幾分鐘就可更換〕。假設(shè)采用在線過(guò)濾，HPLC系統(tǒng)檢測(cè)每批樣品開始前記錄下壓力值，當(dāng)壓力上升一定值，例如25%或增加500psi,應(yīng)該更換玻璃砂芯濾板了，更換以后沖洗幾分鐘系統(tǒng)將恢復(fù)到原來(lái)的壓力值。三、沖洗使HPLC系統(tǒng)良好運(yùn)行的第三個(gè)要點(diǎn)是保持系統(tǒng)的清潔。你需要關(guān)注流動(dòng)相流經(jīng)該系統(tǒng)的所有地方，對(duì)于這些地方經(jīng)常性的沖洗，將使你的系統(tǒng)保持在“Ready"狀態(tài)。1、流動(dòng)相儲(chǔ)液瓶首先要經(jīng)常清洗流動(dòng)相儲(chǔ)液瓶，或者每做一批新樣品更換一次流動(dòng)相。一個(gè)臟的儲(chǔ)液瓶將會(huì)污染注入的流動(dòng)相。建議儲(chǔ)液瓶中緩沖液使用時(shí)間不要超過(guò)一周，而有機(jī)溶劑使用時(shí)間不要超過(guò)一個(gè)月。也有人建議儲(chǔ)液瓶中保持用溶劑充滿，直到更換分析方法儲(chǔ)液瓶需更換新溶劑〔流動(dòng)相組成發(fā)生變化〕時(shí)，將舊溶劑倒掉更換新溶劑，這樣勝于將溶劑用完。但這對(duì)于分析樣品量少的實(shí)驗(yàn)室而言似乎有些浪費(fèi)。儀器公司的工程師建議儲(chǔ)水瓶的水要天天換，每周瓶子還應(yīng)該用異丙醇清洗一次。有的實(shí)驗(yàn)室那么在水里參加0.1?1mM的甲酸抑制微生物的生長(zhǎng)。這些做法看起來(lái)有些繁瑣，但卻能起到“磨刀不誤砍柴工〃作用。2、泵接下來(lái)要沖洗的是泵。千萬(wàn)不要一分析完沖幾分鐘后就停泵，特別是當(dāng)流動(dòng)相中含有難揮發(fā)的緩沖液〔如磷酸鹽〕時(shí)。如果儀器不是連續(xù)使用，當(dāng)流動(dòng)相蒸發(fā)時(shí)，難揮發(fā)物就會(huì)粘在活塞密封墊的外表，難揮發(fā)物將形成固形物沉淀。這是泵密封墊磨損和單向閥滲漏的主要原因之一。所以，無(wú)論使用長(zhǎng)短，在停泵以前一定要用非緩沖液流動(dòng)相沖洗泵在半個(gè)小時(shí)以上，要是流動(dòng)相中有難揮發(fā)緩沖鹽那么建議沖洗的時(shí)間應(yīng)該更長(zhǎng)些。3、自動(dòng)進(jìn)樣器自動(dòng)進(jìn)樣器也要按規(guī)定清洗?，F(xiàn)在的儀器多配有自動(dòng)進(jìn)樣器的沖洗液瓶，通常只要注意及時(shí)更換、補(bǔ)充沖洗液即可。自動(dòng)進(jìn)樣器用的洗滌液也要采用與流動(dòng)相相同的方式處理，并根據(jù)溶劑的有效期和規(guī)定，清洗儲(chǔ)液瓶或更換洗滌液。現(xiàn)在的自動(dòng)進(jìn)樣器設(shè)置、操作都很簡(jiǎn)單，如果時(shí)間允許〔特別是利用夜間運(yùn)行〕，每次分析完后設(shè)置進(jìn)1、2針純?nèi)軇踩缂状肌⒁译妗?，也是一個(gè)好做法。4、色譜柱對(duì)柱子的污染是隨使用時(shí)間而增加。通常表現(xiàn)是：運(yùn)行走基線時(shí)在記錄的色譜圖中基線噪音增加，泵壓也增加。解決這個(gè)問(wèn)題的最有效方法就是在每一批樣品分析結(jié)束后或準(zhǔn)備卸下柱子時(shí)用大量的流動(dòng)相沖洗柱子〔例如，甲醇、乙腈和水〕。用梯度沖洗效果更好，具體的比例要根據(jù)柱子的說(shuō)明書和性質(zhì)而定。5、檢測(cè)器如果是正常使用，檢測(cè)器將依據(jù)其性質(zhì)并按照說(shuō)明書規(guī)定進(jìn)行洗。例如UV/VIS檢測(cè)器或FL檢測(cè)器，在對(duì)柱子和系統(tǒng)進(jìn)行沖洗時(shí)也就一同對(duì)檢測(cè)器流通池中污染物進(jìn)行了清洗。但是蒸發(fā)光檢測(cè)器或質(zhì)譜儀那么需要按照說(shuō)明書進(jìn)行定期清洗。這些檢測(cè)器在使用時(shí)會(huì)有難揮發(fā)污染物沉積，如質(zhì)譜儀離子源的噴針、毛細(xì)管、錐孔板、預(yù)四極等部件，因而需要定期清洗。而且對(duì)聯(lián)有這些檢測(cè)器的系統(tǒng)沖洗時(shí)，最好與這些檢測(cè)器斷開，以減少對(duì)檢測(cè)器的污染?？傊?，實(shí)驗(yàn)室日常使用的液相色譜儀要是能認(rèn)真做好這三項(xiàng)工作一一脫氣、過(guò)濾和沖洗，你的儀器可以得到良好的預(yù)防性維護(hù)，使用時(shí)就會(huì)感到比擬順手。當(dāng)然，在實(shí)際操作時(shí)遇到的

問(wèn)題并沒有這么簡(jiǎn)單，但這三個(gè)良好習(xí)慣將是正確操作、使用HPLC系統(tǒng)的根底。感謝各位的關(guān)注，好的資料大家一起分享如果流動(dòng)相均由高效液相色譜級(jí)溶劑組成，流動(dòng)相沒有必要過(guò)濾。這是因?yàn)楦咝б合嗌V級(jí)的有機(jī)溶劑，例如乙腈、甲醇等，在制造的工藝過(guò)程中都已經(jīng)過(guò)了0.2um微孔濾膜過(guò)濾。同樣的，無(wú)論你是買的HPLC級(jí)的水還是在實(shí)驗(yàn)室使用超純水凈化系統(tǒng)制備的水，最后一步也是通過(guò)0.2um微孔濾膜。我感覺還是要過(guò)濾的，進(jìn)口的甲醇，乙腈真的可以不要過(guò)濾了，國(guó)產(chǎn)的就得過(guò)濾啊，里面螞蟻都有哦OOOO液相色譜常見問(wèn)題及處理方法HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決方法1、樣品量缺乏，解決方法為增加樣品量2、樣品未從柱子中流出?？筛鶕?jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)改變流動(dòng)相或柱子3、樣品與檢測(cè)器不匹配。根據(jù)樣品化學(xué)性質(zhì)調(diào)整波長(zhǎng)或改換檢測(cè)器4、檢測(cè)器衰減太多。調(diào)整衰減即可。5、檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)太大。解決方法為降低時(shí)間參數(shù)6、檢測(cè)器池窗污染。解決方法為清洗池窗。7、檢測(cè)池中有氣泡。解決方法為排氣。8、記錄儀測(cè)壓范圍不當(dāng)。調(diào)整電壓范圍即可。9、流動(dòng)相流量不適宜。調(diào)整流速即可。10、檢測(cè)器與記錄儀超出校正曲線。解決方法為檢查記錄儀與檢測(cè)器，重作校正曲線。為什么HPLC柱柱壓過(guò)高柱壓過(guò)高是HPLC柱用戶最常碰到的問(wèn)題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問(wèn)題，您可按下面步驟檢查問(wèn)題的起因。1、拆去保護(hù)預(yù)柱，看柱壓是否還高，否那么是保護(hù)柱的問(wèn)題，假設(shè)柱壓仍高，再檢查；2、把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否那么是管路堵塞，需清洗，假設(shè)壓力下降,再檢查；3、將柱子的進(jìn)出口反過(guò)來(lái)接在儀器上，用10倍柱體積的流動(dòng)相沖洗柱子，〔此時(shí)不要連接檢測(cè)器，以防固體顆粒進(jìn)入流動(dòng)池〕這時(shí)，如果柱壓仍不下降，再檢查；4、更換柱子入口篩板，假設(shè)柱壓下降，說(shuō)明您的溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì)，正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升。假設(shè)柱壓還高，請(qǐng)與廠商聯(lián)系。一般情況下，在進(jìn)樣器與保護(hù)柱之間接一個(gè)在線過(guò)濾器便可防止柱壓過(guò)高的問(wèn)題，SGE提供的Rheodyne7315型過(guò)濾器就是解決這一問(wèn)題的最正確選擇。液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么？1、篩板堵塞或柱失效，解決方法是反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子。2、存在干擾峰，解決方法為使用較長(zhǎng)的柱子，改換流動(dòng)相或更換選擇性好的柱子如何解決HPLC進(jìn)行分析時(shí)保存時(shí)間發(fā)生漂移或急速變化漂移現(xiàn)象1、溫度控制不好，解決方法是采用恒溫裝置，保持柱溫恒定2、流動(dòng)相發(fā)生變化，解決方法是防止流動(dòng)相發(fā)生蒸發(fā)、反響等

3、柱子未平衡好，需對(duì)柱子進(jìn)行更長(zhǎng)時(shí)間的平衡快速變化現(xiàn)象1、流速發(fā)生變化，解決方法是重新設(shè)定流速，使之保持穩(wěn)定2、泵中有氣泡，可通過(guò)排氣等操作將氣泡趕出。3、流動(dòng)相不適宜，解決方法為改換流動(dòng)相或使流動(dòng)相在控制室內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)混合HPLC儀器問(wèn)題1、我的HPLC泵壓明顯的偏高，請(qǐng)問(wèn)可能的原因？答：流速設(shè)定過(guò)高；流動(dòng)相或進(jìn)樣中有機(jī)械雜質(zhì)，造成保護(hù)柱、柱前篩板或在線過(guò)濾器阻塞；流動(dòng)相粘度過(guò)大；柱溫過(guò)低；緩沖鹽結(jié)晶；壓力傳感器故障。2、基線不穩(wěn)，上下波動(dòng)或漂移的原因是什么，如何解決？答：a.流動(dòng)相有溶解氣體；用超聲波脫氣15-30分鐘或用充氦氣脫氣單向閥堵塞；取下單向閥，用超聲波在純水中超20分鐘左右，去處堵塞物泵密封損壞，造成壓力波動(dòng)；更換泵密封系統(tǒng)存在漏液點(diǎn)；確定漏液位置并維修f■柱后產(chǎn)生氣泡；流通池出液口加負(fù)壓調(diào)整器g■檢測(cè)器沒有設(shè)定在最大吸收波長(zhǎng)處；將波長(zhǎng)調(diào)整至最大吸收波長(zhǎng)處h?柱平衡慢，特別是流動(dòng)相發(fā)生變化時(shí)；用中等強(qiáng)度的溶劑進(jìn)行沖洗，更改流動(dòng)相時(shí)，在分析前用10-20倍體積的新流動(dòng)相對(duì)柱子進(jìn)行沖洗。3、接頭處為何經(jīng)常漏液，如何處理？答：接頭沒有擰緊；擰松后再緊，手緊接頭以手勁為限，不要使用工具，不銹鋼接頭先用手?jǐn)Q緊，再用專用扳手緊1/4-1/2圈，注意接頭中的管路一定要通到底，否那么會(huì)留下死體積。接頭被污染或磨損；建議更換接頭。接頭不匹配，建議使用同一品牌的配件。4、進(jìn)樣閥漏液是如何造成的？答：a■轉(zhuǎn)子密封損壞；更換轉(zhuǎn)子密封定量環(huán)阻塞；清洗或更換定量環(huán)c?進(jìn)樣口密封松動(dòng)；調(diào)整松緊度進(jìn)樣針頭尺寸不適宜，一般是過(guò)短；使用恰當(dāng)?shù)倪M(jìn)樣針〔注意針頭形狀〕廢液管中產(chǎn)生虹吸；清空廢液管譜圖問(wèn)題1、問(wèn)：造成峰拖尾的原因是什么，如何消除？答：a■篩板阻塞；反沖色譜柱、更換進(jìn)口篩板色譜柱塌陷；填充色譜柱有干擾物質(zhì)的存在；使用更長(zhǎng)的色譜柱、改變流動(dòng)相或更換色譜柱e.流動(dòng)相PH值不適宜；調(diào)整PH值，對(duì)于堿性化合物，低PH值更有利于得到對(duì)稱峰f■樣品與填料外表的溶化點(diǎn)發(fā)生反響；參加離子對(duì)試劑或堿性揮發(fā)性修飾劑或更改色譜柱2、問(wèn)：造成峰分叉的原因是什么，如何消除？答：保護(hù)柱或分析柱污染；取下保護(hù)柱再進(jìn)行分析。如果必要更換保護(hù)柱。如果分析柱阻塞，拆下來(lái)清洗。如果問(wèn)題仍然存在，可能是柱子被強(qiáng)保存物質(zhì)污染,運(yùn)用適當(dāng)?shù)脑偕胧?。如果?wèn)題仍然存在，入口可能被阻塞，更換篩板或更換色譜柱。樣品溶劑不溶于流動(dòng)相；改變樣品溶劑，如果可能采取流動(dòng)相作為樣品溶劑。3、問(wèn)：K值增加時(shí)，拖尾更嚴(yán)重，這是為什么？答：反相模式，二級(jí)保存效應(yīng)；a.參加三乙胺〔或堿性樣品〕

b.參加乙酸〔或酸性樣品〕c■參加鹽或緩沖劑〔或離子化樣品〕更換一支柱子4、問(wèn)：保存時(shí)間的波動(dòng)有幾種可能的原因？答：溫控不當(dāng)；調(diào)節(jié)好柱溫。流動(dòng)相組分變化；防止流動(dòng)相蒸發(fā)、反響等，做梯度時(shí)尤其要注意流動(dòng)相混合的均勻。色譜柱沒有平衡；在每一次運(yùn)行之前給予足夠的時(shí)間平衡色譜柱。液相色譜常用符號(hào)與術(shù)語(yǔ)表ACN乙腈AcetonitrileAUFS滿量程的吸光度單位Absorbaneeunits,fullscaleAs峰不對(duì)稱因子B二元流動(dòng)相中的強(qiáng)溶劑；例如：反相HPLC的甲醇/水混合液中的甲醇BSA牛血清白蛋白〔一種蛋白質(zhì)〕BovineserumalbuminCAF咖啡因〔中性溶質(zhì)〕CaffeineCRF色譜響應(yīng)因子Chromatographicresponsefunction；色譜圖總別離度的定量指標(biāo)dc色譜柱內(nèi)徑〔cm〕DMOA二甲基辛胺DimethyloctylamineDNB2,4-二硝基甲酰〔基〕2，4-Dinitrobenzoyldp色譜柱填料的粒度〔cm〕DRYLAB液相資源公司〔LCResourcesINC.)的計(jì)算機(jī)模擬軟件。DRYLABI用于等度預(yù)測(cè)，DRYLABG用于梯度預(yù)測(cè)F流動(dòng)相的流速〔ml/min〕FC-1131，1，2-三氟-1,2，2-三氯乙烷GPC凝膠滲透色譜法Gel-permeationchromatographyHA酸性溶質(zhì)，能電離出A-Hex己烷HexaneHr二相鄰譜帶之間的谷高HVA高香草酸Homovanillicacidh'峰高h(yuǎn)1,h2相鄰譜峰1和譜峰2的峰高IEC離子交換色譜法Ion-exchangechromatographyIP離子對(duì)Ion-pairIPC離子對(duì)色譜法Ion-pairchromatographyJ色譜峰強(qiáng)度參數(shù)K'所給譜峰的容量因子，k'=(tR-tO)/tO=tR'/tO,tR=tO(1+k')k梯度洗脫過(guò)程中，某溶質(zhì)的k'的平均值或有效值kw以水做流動(dòng)相k'的外推值k1,k2相鄰譜峰1和譜峰2的容量因子L色譜柱長(zhǎng)度〔cm〕Lc檢測(cè)器流動(dòng)池光路的長(zhǎng)度〔cm〕M溶質(zhì)的分子量MC二氯甲烷MethylenechlorideMDST混合設(shè)計(jì)統(tǒng)計(jì)技術(shù)Mixture-designstatisticaltechnique；—種優(yōu)化流動(dòng)相的軟件MeOH甲醇MethanolMTBE甲基叔丁醚Methyl-t-butylether

MW溶質(zhì)的分子量N色譜柱塔板數(shù)NAPAN-乙酰普魯卡因胺N-Acetylprocainamide〔堿性溶質(zhì)〕NO檢測(cè)器的基線噪音ODS十八烷基硅烷OctadecylsilylP色譜柱的壓力降［通常以巴〔bar〕表示，也用psi；另外，也用作柱極性參數(shù)PA普魯卡因胺Procainamide〔堿性物質(zhì)〕PAH聚芳香烴PolyaromaticHydrocarbonPESOS優(yōu)化流動(dòng)相的計(jì)算機(jī)軟件〔美國(guó)Perkin-Elmer產(chǎn)品〕pKa溶質(zhì)酸性常數(shù)的負(fù)對(duì)數(shù)；當(dāng)pH=pKa時(shí)，溶質(zhì)中有一半是電離的Rk保存值范圍，Rk=〔最末譜峰k'〕/〔最初譜峰k'〕RRM相對(duì)別離度圖〔通常N=10000〕Rs相鄰二譜峰的別離度S當(dāng)流動(dòng)相中的％B改變時(shí)，測(cè)量溶質(zhì)保存值的變化速率的參數(shù)SAL水楊酸SalicylicAcidSEC尺寸排阻色譜法Size-exclusionchromatographyS/N信噪比Signaltonoiseratiot別離時(shí)間〔min〕〔樣品進(jìn)樣時(shí)t=0〕tp梯度系統(tǒng)的滯后時(shí)間〔min〕TBA四丁基銨離子TetrabutylammoniumionTEA三乙胺TriethylamineTHF四氫咲喃Tetrahydrofurantk在用于校正等度洗脫溶劑強(qiáng)度的流動(dòng)相離開梯度混合器時(shí)，梯度洗脫的時(shí)間TLC薄層色譜法Thin-layerchromatographyTMA四甲基銨Tetramethylammonium〔鹽〕TMS三甲基硅烷TrimethylsilyltO色譜柱的死時(shí)間〔min〕tR溶質(zhì)的保存時(shí)間〔min〕tG梯度時(shí)間〔min〕，即梯度開始至結(jié)束的時(shí)間t1,t2相鄰譜峰1和譜峰2的保存時(shí)間〔min〕ti色譜圖中第一峰的保存時(shí)間〔min〕tf色譜圖中最末峰的保存時(shí)間〔min〕△tgtf-titx(tf-ti)/2UV紫外光Vm色譜柱的死體積〔mL〕，Vm=t0FVMA香草扁桃酸Vanillymandelicacidwm化合物的進(jìn)樣量w1,w2相鄰譜峰1和譜峰2于半峰高處〔W1/2〕的寬度〔min〕W1,W2相鄰譜峰1和譜峰2的基線寬度〔min〕W1/2半峰高處的譜帶寬度xd,xe,xn溶劑選擇參數(shù)，分別用于測(cè)定溶劑的酸度、堿度和偶極性的程度?別離因子，?=k2/k1△?梯度洗脫期間流動(dòng)相成分的變化

?o溶劑強(qiáng)度參數(shù)?化合物的克分子吸收系數(shù)?流動(dòng)相的粘度〔Pa?s)?流動(dòng)相中強(qiáng)溶劑的體積份數(shù)%B二元流動(dòng)相中強(qiáng)溶劑的體積百分比〔％v〕液相色譜法簡(jiǎn)介氣相色譜不能由色譜圖直接給出未知物的定性結(jié)果，而必須由標(biāo)準(zhǔn)作對(duì)照定性。當(dāng)無(wú)純物質(zhì)對(duì)照時(shí)，定性鑒定就很困難，這時(shí)需借助質(zhì)譜、紅外和化學(xué)法等配合。另外大多數(shù)金屬鹽類和熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)還不能分析。此缺點(diǎn)可高效液相色譜法來(lái)克服。在經(jīng)典液相色譜的根底上，引入了氣相色譜的理論與技術(shù)，在70年代初建立了高效液相色譜分析法〔以HPLC表示〕。在常壓下操作的液相色譜，別離一個(gè)樣品往往長(zhǎng)達(dá)幾小時(shí)至幾十小時(shí)，因此工作效率很低。人們?cè)鴮?duì)這種經(jīng)典液相色譜法試用了柱前加壓或柱后減壓的方法來(lái)提高流速，以縮短別離時(shí)間，但是結(jié)果失敗了。根據(jù)液相色譜理論，因?yàn)殡S著載液〔流動(dòng)相〕流速的提高，板高那么增大，所以柱效會(huì)顯著降低。隨著生產(chǎn)技術(shù)的提高，人們制成了細(xì)小〔＜10?m〕而高效的填充物，從而使柱效大大提高。但是隨著填充物粒度的減小，柱壓降顯著增大，為了得到合理的載液流速，使用了高壓；輸液泵，使流速到^L~10mL/min。從而使分析一個(gè)多組分樣品只需幾分鐘到幾十分鐘時(shí)間。隨著高效固定相、高壓泵和高靈敏度檢測(cè)器以及電子技術(shù)和計(jì)算機(jī)技術(shù)的應(yīng)用，70年代以業(yè)逐步實(shí)現(xiàn)了液相色譜分析的高效、高速、高靈敏和自動(dòng)化操作。因此人們常稱它為高效液相色譜或現(xiàn)代液相色譜，以區(qū)別于經(jīng)典液相色譜。高效液相色譜法的分類與經(jīng)典液相色譜法一致。按固定相的聚集狀態(tài)不同分為液固色譜法和液液色譜法。按別離原理不同分為吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜和凝膠色譜法四類。高效液相色譜所用根本概念：保存值等色譜分析有關(guān)術(shù)語(yǔ)，以及分配系數(shù)、分配比、塔板高度、別離度、選擇性等方面均與氣相色譜相一致；高效液相色譜所用根本理論：塔板理論與速率理論也與氣相色譜一致。因液相色譜以液體代替氣相色譜中的氣體作流動(dòng)相，那么速率議程H=A+B/?+C?。式中：縱向擴(kuò)散項(xiàng)〔分子擴(kuò)散項(xiàng)〕B/?對(duì)板高的影響與氣相色譜不同，由于液相色譜中組分分子在流動(dòng)相中的擴(kuò)散系數(shù)Dm僅為氣相色譜中的萬(wàn)分之一，因此縱向擴(kuò)散項(xiàng)對(duì)板高的影響可以忽略不計(jì)。于是影響液相色譜的主要因素是傳質(zhì)項(xiàng)Cu。由圖14—可知，氣相色譜GC〕的流動(dòng)相流速u增大時(shí)，板高H顯著增大〔即柱效顯著降低〕，而液相色譜〔LC〕的流速增大時(shí)，板高增大不顯著〔即柱效降低不顯著〕。這說(shuō)明高效液相色譜也有很高的別離效能，此外，氣相色譜的載氣權(quán)數(shù)種，其性質(zhì)差異也不大，對(duì)別離效果影響也不大。而液相色譜的載液種類多，性質(zhì)差異也大，對(duì)別離效果影響顯著。因此流動(dòng)相的選擇很重要，并且在選擇流動(dòng)相對(duì)應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：流動(dòng)相對(duì)樣品有適當(dāng)?shù)娜芙舛龋慌c樣品發(fā)生化學(xué)反響，也不與固定液互溶；流動(dòng)相的純度要高〔至少分析純〕、粘度要小，以免帶進(jìn)雜質(zhì)和組分在流動(dòng)相中擴(kuò)散系數(shù)下降；流動(dòng)相應(yīng)與所用檢測(cè)器相匹配，不應(yīng)對(duì)組分檢測(cè)產(chǎn)生干擾作用。高效液相色譜不但具有高效、高速、高靈敏度的特點(diǎn)，還由于它的流動(dòng)相〔載液、種類比氣相色譜的流動(dòng)相〔載氣、多，因此可選用兩種或多種不同比例的液體作流動(dòng)相，從機(jī)時(shí)可提高選擇性。此外，液相色譜的餾分比氣相色譜易于收集。便于為紅外、核磁等方法確定化合物結(jié)構(gòu)提供純樣品。由于高效液相色譜法具有以上特點(diǎn)，它適于別離、分析沸點(diǎn)高、熱穩(wěn)定性差、分子量大〔大于400、的氣相色譜法不能或不易分析的許多有機(jī)物和一些無(wú)機(jī)物，而這些物質(zhì)占化合物總數(shù)的75~80%。因此它已廣泛用于核酸、蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素、糖類、脂類、甾類化合物、激素、生物堿、稠環(huán)芳烴、高聚物、金屬